Введение к работе
Актуальность темы. Гемофилезная плевропневмония —
вдфекционна^^олезнь свиней, получившая __ широкое рас-
пространение во многих странах в связи с изменением технологии ведения свиноводства. Болезнь наносит значительный экономический ущерб, являясь серьезной угрозой промышленному свиноводству.
Отход среди заболевших поросят после отъема иногда достигает 100% В хозяйствах России возбудитель гемофи-лезной плевропневмонии впервые выделен от больных пневмонией свиней в 1980 году М.А.Сидоровым и Д.И.Скоро-думовым.
В последние годы предприняты интенсивные исследования биологии, экологии возбудителя, разработки методов диагностики и мер борьбы с болезнью ( Naka і et a 1., 1983, Ro-sendal S. et al.,1988, Сидоров, Д.И.СкородумовН.И.Лаврен-тьев, 1984).
Возбудитель гемофилезной плевропневмонии, по данным серологических реакций, имеет 12 серологических вариантов (типов) по капсульному антигену. Точная серологическая идентификация выделенных культур гемофильных бактерий одно из условий достоверной диагностики и эффективной специфической профилактики гемофилезов. Поэтому эффективность лабораторных исследований зависит прежде всего от качества применяемых диагностических препаратов. В этой связи очевидно, что совершенствование методики их приготовления и выбор оптимальной схемы использования представляют интерес для практики борьбы с гемофилезной плевропневмонией свиней.
В последнее время было уделено внимание при диаго-стике многих бактериальных инфекций реакции коагглютинации. Принцип реакции коагглютинации основан на способности белка А, компонента наружного слоя клеточной стенки Staphylococcus aureus избирательно взаимодействовать с Fc-фрагментами IgG человека и ряда млекопитающих, что обеспечивает однотипную ориентацию Fab-фрагментов и способствует оптимальному соединению антигена с антителом.
Реакция коагглютинации предложена в 1973 г. Кгоп-va11 для постановки диагноза пневмококковой инфекцга и в настоящее время успешно используется для: типиро-вания гонококков (Lemis et al, 1980), менингококко] Н.Н.Костюкова и др. 1981), стрептококков ( Lei and 0., Lachape11 R., 1978, А.Н.Панин, 1990), серогруппировки эн теробактерий: эшерихий(Л.Б.Хазенсон, Т.Я.Геннадьева и др., 1969; Л.Б Хазенсон и соавт. 1980; Gorzynaki et a1., 1980), шигелл (E.Edwards et al, 1976 ), сальмонелл (Edwards et a1 1976), идентификация холерных вибронов (Andrade Maceda, 1979 ) і а также для обнаружения некоторых токсинов (К.В. Бунин и соавт., 1982). Оказалось, что реакция коагглютинации специфична и более чувствительна, чем РДП. Кроме того, ее преимуществами является возможность исследования культур, проявляющих в РА склонность к самоагглютинации.
Цели и задачи исследований. В связи с изложенным и учитывая актуальность этих вопросов, перед нами были поставлены следующие задачи:
определить условия получения активной по белку А и стабильной взвеси тест-штамма стафилококка;
выяснить оптимальные параметры приготовления коагглютинирующих реагентов для постановки реакции коагглютинации для серологической идентификации Н. pleuropneumonias.
получить кроличьи гипериммунные сыворотки к референтным штаммам Н. pleuropneumoniae,
приготовить антительные диагностикумы для разных сероваров Н. pleuropneumoniae, определить их активность, специфичность, изучить возможность их применения для серологической идентификации штаммов Н. pleuropneumoniae и для индикации возбудителя в патологическом материале.
Научная новизна. Отработаны оптимальные параметры культивирования стафилококка в лабораторном ферментере позволяющие получить богатые белком А бактериальные клетки, а также схема изготовления специфических гипериммунных сывороток против 10 сероваров Н. pleuropneumoniae, на основании чего научно обоснована методика полу-
гения коагглютинирующих антительных диагностикумов і их использования для идентификации серовариантов и гадикации возбудителя в патологическом материале.
Впервые определена чувствительность реакции коаг-
"лютйнации относительно выявления антигенов Н. pleurop-leumoniae.
Практическая ценность работы. На основании резуль-атов исследований предложены антительные диагностикумы уія практического применения в ветеринарной практике как ікспресс-метода обнаружения и идентификации в реакции <оагглютинации Н. pleuropneumoniae.
Апробация работы. Результаты исследований доложены і& заседаниях Ученого совета ветеринарно-санитарного факу-іьтета МГАПБ в 1990,1991 и 1992 г.г.
Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые для защиты. Экспериментальное обоснование методики приготовления антительного коагглютинирующего диаг-тостикума и его применение для серотипирования Н. р1еи-opneumoniae и обнаружения возбудителя непосредственно з патологическом материале.
Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений.
Работа иллюстрирована 33 таблицами и 2 рисунками. Список литературы включает 206 наименований работ, из них 151 иностранных
