Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 9
1.1 Характеристика возбудителя лептоспироза 9
1.2 Видовые особенности проявления лептоспироза у животных 15
1.3 Особенности проявления лептоспироза у кошек 28
1.4 Заключение по обзору литературы 32
Собственные исследования 35
2 Материалы и методы 35
3 Результаты исследований 42
3.1 Эпизоотологическое обследование кошек на лептоспироз в г. Барнауле 42
3.2 Возрастная динамика некоторых морфобиохимических показателей крови, сыворотки и мочи у здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза кошек 48
3.2.1 . Морфобиохимические показатели крови, сыворотки и мочи у здоровых животных 49
3.2.2 Морфобиохимические показатели крови, сыворотки и мочи у животных, инфицированных возбудителем лептоспироза 52
3.3 Макромикроморфологические исследования почек кошек 54
3.3.1 Возрастные особенности макромикроморфологии почек здоровых животных 55
3.3.2 Макромикроморфологические изменения почек кошек, инфицированных возбудителем лептоспироза 63
3.4 Экспериментальное заражение кошек возбудителем лептоспироза... 67
3.5 Совершенствование лабораторной диагностики лептоспироза у кошек 72
3.5.1 Реакция агглютинации 72
3.5.2 Полимеразная цепная реакция 74
3.6 Изучение устойчивости лептоспир в моче кошек 78
3.7 Профилактика лептоспироза у кошек 80
Обсуждение результатов исследования 82
Выводы 90
Практические предложения 93
Библиография 94
Приложения 106
- Характеристика возбудителя лептоспироза
- Материалы и методы
- Эпизоотологическое обследование кошек на лептоспироз в г. Барнауле
Введение к работе
Актуальность проблемы. Лептоспироз - природноочаговое инфекционное заболевание, общее для человека и животных. По материалам секретариата ФАО лептоспироз крупного рогатого скота, собак и свиней зарегистрирован на всех континентах и во многих странах. Козы, овцы, лошади и дикие животные болеют лептоспирозом редко. К настоящему времени вопросы природной очаговости, этиологии, эпизоотологии, диагностики и профилактики лептоспиро- за у сельскохозяйственных животных изучены достаточно полно (Авроров А.А., Земсков М.В., 1937; Амосенкова Н.И., 1954; Ананьин В.В., Карасева Е.В., 1955;'Коковин И.Л., Свешникова Н.П. и др., 1959; Каримова З.Х., 1971; Берна- совская Е.П., Угрюмов Б.Л. и др., 1989; Малахов Ю.А., 1992).
Среди домашних животных, имеющих тесный контакт с человеком, одно из первых мест занимают кошки (Felis domestica). Работ по выявлению зараженности их лептоспирами в литературе немного (Любашенко С .Я., 1948; Ананьин В.В., 1971, Малафеева Л.С. и др., 1971; Киктенко В.С. и др., 1985; Малахов Ю.А., 1992).
Первое сообщение пришло с о. Ява, когда в 1937 г. Martens W. выделил L. interrogans, серогруппа icterohaemorrhagiae, от умирающей взрослой кошки. В Батавии и окрестностях Esseveld Н. и Collier W.A. (1938) выделили восемь штаммов bataviae и шесть штаммов javanica от кошек массой свыше 1,5 кг. Ни у одной из 517 обследованных кошек различного возраста не было признаков желтухи или других симптомов тяжелой формы лептоспироза.
В 1949 г. в Дании Оттосену удалось серологически диагностировать лептоспироз у кошки, погибшей при явлениях желтухи и легочных кровоизлияний. Сыворотка крови агглютинировала L. icterohaemorrhagiae в разведении 1:1000, вырастить лептоспир в культуре не удалось.
При исследовании в Ленинграде 358 кошек (из них 3 16 - бродячих) сыворотки трех животных дали положительную реакцию агглютинации и лизиса со штаммами L. icterohaemorrhagiae в разведениях от 1:100 до 1:500 (Амосенко- ва Н.И., 1954). Позднее в Санкт-Петербурге при анализе данных патолого- анатомических исследований кошек за период с 1975 по 1995 г. Кудряшо- вым A.A. (1996) установлено, что в 2,4 % случаев падеж был обусловлен лептос- пирозом.
Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Резникова М.Ф. (1999) указывают, что за последние 10 лет на Северном Кавказе количество положительных серологических реакций на лептоспироз у кошек увеличилось с 25 % в 1978 - 1987 г. до 27,4 % в 1988 — 1997 г. В этиологической структуре резко возросло число реакций с лептоспирами серогрупп Icterohaemorrhagiae (46,2 %) и Canicola (39,2 %), практически отсутствовали антитела к лептоспирам Hebdomadis и Sejroe. Количество изолятов лептоспир достигло 12,5 %.
При этом одни исследователи данный вид животных обычно не рассматривают в качестве потенциального источника инфекции (Токаревич К.Н., 1957; Ананьин В.В., 1971; Малахов Ю.А., 1992), другие - менее категоричны (Малафеева Л.С., Румянцева Е.В., Абрамсон Л.А., 1971; Дранкин Д.И., Годлевская М.В., 1989). Однако комплексных исследований в этом направлении никто не проводил. Все это позволяет считать роль кошек в эпизоотическом процессе при лептоспирозе мало изученной, и поэтому наши исследования были посвящены более детальному изучению течения болезни у данного вида животных.
Цель и задачи исследований.
Целью настоящей работы явилось комплексное изучение особенностей эпизоотологии и патогенеза, усовершенствование диагностики и разработка на этой основе профилактических мероприятий при лептоспирозе кошек. Соответственно, были поставлены следующие задачи:
изучить распространение лептоспироза посредством РМА, микроскопии мочи с использованием темнопольного метода в зависимости от пола, возраста и условий содержания кошек;
провести анализ этиологической структуры лептоспироза;
определить устойчивость возбудителя в моче кошек;
изучить возможность использования РА, ПЦР для диагностики лептоспироза у кошек в сравнении с РМА и темнопольной микроскопией мочи;
, провести морфобиохимические исследования крови, сыворотки и мочи у здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза животных в естественных и экспериментальных условиях;
изучить морфологию почек у здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза животных в естественных и экспериментальных условиях;
разработать профилактические мероприятия при лептоспирозе кошек.
Научная новизна работы. Впервые в условиях Алтайского края определена инфицированность кошек возбудителем лептоспироза, представлен анализ этиологической структуры болезни и установлена продолжительность выживания возбудителя лептоспироза в моче данного вида животных.
Проведено макромикроморфологическое исследование ночек и морфобиохимические исследования крови, сыворотки и мочи у здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза животных в зависимости от возраста.
Показана возможность использования РА (с использованием Лепто БАСА) и ПЦР для диагностики лептоспироза у кошек.
Для биохимического исследования мочи впервые были применены полоски пента PHAN (фирма Lachema, Чехия).
Практическое значение работы. Результаты проведенных исследований включены в:
научно-технические разработки, рекомендуемые к внедрению в производство, Барнаул, 2002;
, рекомендации "Особенности эпизоотологии и профилактика леп- тоспироза кошек", Барнаул, 2003;
план противоэпнзоотических мероприятий по Центральной ветеринарной лечебнице г. Барнаула на 2002 - 2003 г.;
работу Барнаульской городской общественной организации "Клуб любителей кошек Аэлита";
учебный процесс для подготовки ветеринарных специалистов в Институте ветеринарной медицины АГАУ и
работу частной ветеринарной клиники "Айболит".
Основные положения, выносимые на защиту:
эпизоотологическое обследование на лептоспироз кошек и изучение выживания лептоспир в моче;
морфобиохимические показатели крови, сыворотки и мочи здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза кошек в естественных и экспериментальных условиях;
макромикроморфологические исследования почек здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза кошек в естественных и экспериментальных условиях;
результаты использования дополнительных методов диагностики при лептоспирозе кошек;
профилактика лептоспироза у кошек.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции "Этика и профессиональное мастерство в образовании и ветеринарии" (Барнаул,2000); на выставке, посвященной 270-летию г.Барнаула (Барнаул,2000); на научной конференции "Ветеринарная наука на рубеже нового тысячелетия" (Барнаул,2001); Международной научной конференции "Достижения ветеринарной медицины - XXI веку" (Барнаул,2002); на городской научно-практической конференции "Социально-экологические и зооветеринарные проблемы содержания собак и кошек в г. Барнауле" (Барнаул,2002); на III региональной научно- практической конференции по болезням мелких домашних животных (Новосибирск, 2003).
Публикации. По теме диссертации опубликовано девять научных работ.
Внедрение результатов исследования. Методические рекомендации "Особенности эпизоотологии и профилактика лептоспироза кошек", рассмотрены на научно-методическом совете Института ветеринарной медицины АГАУ, утверждены директором, используются в работе ветеринарных клиник города Барнаула и учебном процессе при подготовке ветеринарных специалистов.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 107 страницах и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, библиографию и приложение. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 11 рисунками. Список литературы содержит 148 источников, из них 57 - зарубежных авторов.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика возбудителя лептоспироза
В настоящее время вид патогенных лептоспир представлен 202 серова- рами, которые по степени антигенного родства объединены в 23 серологические группы.
По данным многих авторов (В.И. Терских с соавт., 1964; И.А. Коковин, 1965; В.В. Ананьин, 1971; B.C. Киктенко, 1985; Ю.А. Малахов, 1992, и др.) все лептоспиры при рассмотрении в темном поле микроскопа представляют собой спиралеподобные тонкие серебристые нити, концы которых, оба или один, загнуты и булавовидно утолщены. Встречаются и бескрючковые формы лептоспир. Диаметр клетки 0,06-0,15 мкм, длина - 6-12 мкм и более. Лептоспиры не имеют жгутиков, но обладают активной подвижностью. Постоянное движение является характерной особенностью представителей рода Leptospira.
Обычными формами движения в жидких средах являются: вращательное ротационное движение на месте, прямолинейное поступательное движение с одновременным вращением вокруг собственной оси, круговые движения. Одна и та же особь может совершать и вращательное, и поступательное движение. Движение лептоспир прекращается после их гибели.
Лептоспиры плохо окрашиваются анилиновыми красителями, и в процессе окрашивания их морфология изменяется. Окраска по Граму - отрицательная. Тело лептоспиры имеет коэффициент преломления, близкий к таковому стекла, поэтому они невидимы при обычной микроскопии.
Морфология и характер движения лептоспир настолько типичны, что позволяют распознавать их в патологическом материале. Лептоспиры в темном поле микроскопа в отличие от других микроорганизмов не отражают и не преломляют свет, и поэтому наблюдатель видит их матовыми, а не блестящими.
Субмикроскопическое строение лептоспир можно представить еле- дующим образом. Покров окружает осевую нить и цитоплазматический цилиндр. Он имеет трехслойное или более сложное строение, хорошо выявляемое лишь на ультратонких срезах, образует цистоподобные вздутия, полые и концевые вздутия к концевым придаткам. Осевая нить имеет двунитчатое строение и прикрепляется к цитоплазматическому цилиндру лишь одним концом с помощью гранулы - блефаропласта внутри терминального органа. В каждой клетке есть две независимые нити, прикрепленные на противоположных концах клетки и направленные навстречу друг другу, а средняя часть клетки не содержит осевой нити. На поперечных срезах осевая нить представлена двумя группами микрофибрилл, по 6 - 7 в каждой группе. Обе группы по размерам соответствуют дву- нитчатому аксистилю. Цитоплазматический цилиндр содержит ядерный материал, внутрицитоплазматические мембранные структуры, включения, проницаемые для электронов, неизвестной природы, а также электронно-плотные включения двух типов: состоящие из ДНК и полифосфатов или имеющие по- лисахаридную природу (В.В. Ананьин с соавт., 1961).
Лептоспиры — строгие аэробы. Оптимальный рН среды для их культивирования - 7,0 - 7,4, температура - 38 - 40 С, т.е. температура тела животных и человека (Берджи, 1983). Однако в лабораторных условиях их культивируют при температуре 28 - 30 С, ниже 13 С патогенные лептоспиры обычно не растут.
Лептоспиры размножаются путем поперечного деления клетки. Продолжительность одной генерации у лептоспир значительно больше, чем у бактерий многих видов и составляет 6-16 часов (B.C. Киктенко, 1955, Faine S., 1957).
Динамика размножения лептоспир в питательных средах подчиняется закономерностям, общим для большинства видов бактерий. Культура развивается в виде определенных последовательных фаз, характер которых зависит от состояния клеток, питательной среды и других внешних факторов. Требования лептоспир к составу питательной среды относительно просты, но весьма разнообразны.
Необходимыми органическими соединениями для лептоспир являются длинные цепи жирных кислот (15 атомов углерода и более) и витамины: тиамин (В,), цианкобаламин (В12).
Inada R., Ido Y., Hoki R. et al. (1916) впервые выделили лептоспиры на среде Noguchi (питательный агар - 1 часть, раствор Рингера - 3, сыворотка кролика - 1 и цитратная плазма кролика - 0,5 части). Uhlenhuth Р., Fromme W. (1916) вырастили лептоспиры, независимо от японских исследователей, на инактивированной кроличьей сыворотке, разбавленной в 10 и 20 раз холодной водой. Кроличья сыворотка, добавляемая в пропорциях от 5 до 30 %, стала одним из основных компонентов, входящих в состав питательных сред для культивирования лептоспир (Vervoort Н., 1923; В.И. Терских, 1933; М.В. Зем- сков, A.A. Авроров, 1941 и др.).
Полужидкие сывороточные среды с агаром предложили Fletcher W. (1928), Wiesmann Е. (1952), B.C. Киктенко (1954). Добавление агара задерживает высыхание среды и способствует сохранению культуры более длительные сроки без пересевов.
Fukushima В. (1927) первый получил колонии лептоспир на плотной среде, состоящей из плазмы крови лошади, различных солей и агара. В Советском Союзе плотные питательные среды для культивирования лептоспир предложили З.Х. Каримова (1971), С.К. Канарейкина (1973), Г.Л. Соболева (1979) и др.
В последующие годы предложен ряд полусинтетических бессывороточных сред с бычьим и овечьим альбумином (Ellis W.A. et al., 1986). Синтетическую безбелковую среду предложили Staneck J., Henneberry J., Cox R. (1973).
В настоящее время широко применяются жидкие среды Ферворт-Вольфа, Терских, Кортгофа и др.
При росте в жидкой питательной среде лептоспиры не образуют поверхностной пленки, осадка, пристеночного кольца. На сывороточных средах при просмотре в проходящем свете в культурах лептоспир видно слабое помутнение, при встряхивании переливающееся в виде муаровых волн; на твин- альбуминовых и синтетических средах - обильное помутнение среды. На жидких питательных средах лептоспиры различных серологических групп и сероваров имеют одинаковые признаки роста (Ю.А. Малахов и др., 2000).
На плотной питательной среде Armstrong J.С., Goldberg Н. (1960) наблюдали колонии: мелкие компактные непрозрачные и крупные вуалеподобные с хорошо выраженным тонким краем; пуговчатые, червеобразные, астероидные.
Патогенные и сапрофитные лептоспиры могут существовать в природе только в воде или влажной почве. Они малоустойчивы и при высыхании среды гибнут в течение короткого времени. Выживаемость лептоспир в воде различных водоемов зависит от pH, химического состава, температуры, инсоляции, а также от характера и степени бактериальной загрязненности. Оптимум pH среды для размножения лептоспир - 7,0 - 7,4. В кислой и щелочной среде лептоспиры быстро погибают. В 1961 г. Шульц сообщил о выживаемости лептоспир в нестерильной воде 1 нед., в стерильной - 83, 93, 268 дней. При pH 4,0 — 5,0 они выживали менее суток. Срок переживания иктерогеморрагических лептоспир в воде открытых водоемов, согласно данным К.Н. Токаревича (1957) - от 2 до 5 дней. Другие авторы наблюдали в речной воде сохранение жизнеспособности патогенных лептоспир до 17 дней, в водопроводной - до 9 дней. По материалам В.В. Ананьина и Е.В. Карасевой (1961) срок выживаемости патогенных лептоспир в речной и озерной воде составляет 5-10 дней при pH 7,5 - 8,25, в болотной воде - 3 - 5 дней при pH 6,7 - 7,0. В загрязненной воде срок выживаемости лептоспир меньше, чем в чистых поверхностных водах.
Для выживаемости лептоспир в почве имеет значение степень ее влажности. W. Okazaki, L. Ringen (1957) нашли, что в высушенной почве лептоспиры уже через 35 минут не выявляются под микроскопом. В насыщенной влагой почве лептоспиры на протяжении 133 дней активно двигались и 183 дня были способны к размножению. Е.В. Карасева и соавт. (1962) пришли к заключению, что в сырой почве (69 - 70 % влажности) в естественных условиях лептоспиры выживают с сохранением патогенности до 279 дней, в сухой (влажность 5-14 %) - до 3 суток.
Прямые солнечные лучи, по данным Н.И. Ходукина и др. (1947), убивают лептоспир через 2 часа. И.И. Григорьев (1952) наблюдал гибель лептоспир под действием прямого солнечного света через 1,5 - 16 часов, а под действием рассеянного света - на 8 - 20-й день. Гамма-излучение в дозе свыше 70 тыс. R способствует потере вирулентности и способности к размножению.
При нагревании до 55 С лептоспиры погибают через 25 - 30 мин, а при температуре 76 - 96 С - мгновенно. Низкие температуры способствуют более длительному их сохранению. Установлено, что при замораживании (минус 70 С) сохранялась жизнеспособность лептоспир в течение нескольких лет. Лептоспиры способны выдерживать шестикратное замораживание и оттаивание, а культура лептоспир в пробирке с жидкой средой может сохраняться около 6 лет (B.C. Киктенко, 1954).
Лептоспиры чрезвычайно чувствительны к целому ряду химических веществ. Из многочисленных литературных данных следует, что целый ряд кислот, таких как соляная, серная, уксусная, муравьиная, в разведении 1:1000 убивают лептоспир в течение 10 минут. Применяемые обычно дезинфицирующие растворы - сулема, лизол, хлорамин, 10 % раствор карболовой кислоты - обладают лептоспироцидным действием в течение нескольких минут (А.И. Федоринин, 1946; Н.И. Ходукин и др., 1947; B.C. Киктенко, 1954). Губительно действуют на лептоспиры хлор и йод (В.И. Терских, И.И. Тищенко, 1936; А.Л. Сегельман, 1951).
Специальные исследования проведены по определению времени выживаемости лептоспир в продуктах питания. B.C. Киктенко (1945) наблюдал мгновенную гибель лептоспир на поверхности сахара, в то время как на хлебе и печенье они сохранялись до 1 часа, а на сливочном масле - до 20 ч. Длительность выживания их в молоке зависит от его кислотности и условий хранения. Так, Н. Bernkopf et al. (1948) наблюдали сохранение патогенных лептоспир в молоке в рефрижераторе до 30 дней. В свежем молоке лептоспиры выживают в течение 24 часов, а в пастеризованном - 24 - 48 часов (И.И. Григорьев, 1952). По данным Е.Б. Митрофановой-Перфильевой (1951) гибель лептоспир в кислом молоке наступала через 10 минут. JI.A. Абрамсон и др. (1979) в сыром и кипяченом молоке выявили выживаемость патогенных лептоспир от 1 до 2 суток. На поверхности сырых продуктов сроки выживаемости патогенных лептоспир колеблются от 30 минут до 13 суток, в картофельном супе и пшеничной каше - от 5 до 30 суток, в хлебе, колбасе, сыре и вареном мясе - от 30 минут до 48 часов (Е.Б. Митрофанова-Перфильева, 1951). 10 % желчь и 50 % желудочный сок вызывают их моментальную гибель (В.И. Терских, 1945; В.И. Терских и др., 1946).
По сведениям Davidson et al. (1936) в моче человека с кислой реакцией лептоспиры сохраняют свою жизнеспособность в течение 1-6 часов, в моче крупного рогатого скота при температуре 2 - 5 С - 24 - 72 часа, при температуре 18 - 22 С - 4 - 72 часа (В.В. Ананьин, 1954), в моче свиней - от 6 часов до 6-7 дней (Г.Г. Юрков и др., 1968; Н.И. Лаврентьев, 1972).
Сроки выживания лептоспир в сточных водах непродолжительны (1 - 3 дня), но, если сточные воды в необезвреженном виде сбрасываются в водоем, то данный водоем, как правило, является источником возбудителя инфекции для людей и животных.
Таким образом, возбудитель лептоспироза обладает активной подвижностью, определенными физиологическими, морфологическими, культуральны- ми и выраженными антигенными свойствами. В природе он может длительное время существовать в воде или влажной почве, при высыхании среды гибнет в течение короткого времени, чувствителен к высоким температурам, прямым солнечным лучам, но к воздействию низких температур довольно устойчив. Дезинфицирующие вещества оказывают быстрое губительное действие на возбудителя даже при высоких разведениях.
1.2. Видовые особенности проявления лептоспироза у животных
Сельскохозяйственные животные чаще всего инфицируются в местах водопоя, купания или выпаса в переувлажненных угодьях, населенных зараженными грызунами. Рядом авторов (В.В. Ананьин, 1954, 1955; С.Я. Любашенко, 1954; И.С. Безденежных, Н.И. Кошанова, 1956, и др.) мелкие млекопитающие рассматриваются как первичные источники инфицирования животных.
Лептоспироз (иктерогемоглобинурия) крупного рогатого скота впервые описан в 1935 г. С.Н. Никольским, Ф.М. Десятовым, Г.Ф. Марченко на Северном Кавказе.
В.И. Терских (1939) подтвердил лептоспирозную этиологию иктерогемог- лобинурии крупного рогатого скота выделением от теленка культуры лептоспир, которая была идентифицирована как Grippotyphosa. Затем лептоспироз диагностировали в США, Италии - Babudieri В. (1949), Швейцарии - Gsell О. (1952), Японии - Jamamoto S. (1958) и т.д.
В 1949 г. Sutherland A.K. et al. в Австралии выделил от крупного рогатого скота Pomona, а Wellington А. (1955) - Tarassovi. К 1954 г. Pomona была обнаружена как возбудитель лептоспироза в 40 штатах США.
Наиболее частыми возбудителями лептоспироза в России являются лептос- пиры серологических групп: Sejroe, Hebdomadis, Grippotyphosa, Tarassovi. В единичных случаях выделены: Canicola, Icterohaemorrhagiae, а за рубежом, кроме того, Australis и Autumnalis (Япония, 1953, 1960), Bataviae (Китай, 1960; Куба, 1978), Pyrogenes (Австралия, 1966). Серовар hardjo серогруппы Sejroe выделен во многих странах.
Болеют лептоспирозом животные всех возрастных групп, но чаще и более тяжело — молодняк. Болезнь обычно проявляется в пастбищный период после поения животных из открытых водоемов со стоячей водой или выпасания на заболоченных участках пастбищ.
Инкубационный период, в среднем, продолжается у крупного рогатого скота от 3 до 14 дней: по К.П. Андрееву (1937) - 10 - 12, по И.А. Дукалову (1944, 1947) - от 5 - 6 дней до 2 - 3 недель, по Hanson L.E. (1982) -5-7 дней. Клинические признаки проявляются обычно у молодняка. Наиболее тяжелое течение леп- тоспироза вызывают лептоспиры серовара Pomona, Grippotyphosa, Icterohaemor- rhagiae, Canicola. Количество лептоспироносителей при инфицировании этими лептоспирами составляет обычно 1 - 7 %, а в южных районах достигает 10-50 % и более.
Болезнь может возникать внезапно, развиваться постепенно или протекать без клинических проявлений. Бактериемия выявляется через 4-10 дней после заражения и продолжается от нескольких часов до 7 дней. При остром течении температура поднимается на 1 - 2,5 С выше нормы и остается на таком уровне до 4 - 5 дней. Лихорадка сопровождается депрессией, нарушением приема корма, слабостью, конъюнктивитом, анемией и, довольно часто, диареей. В более тяжелых случаях развивается гемоглобинурия. Моча приобретает цвет от бледно-розового до темно-красного и темно-бурого. Появляется желтушное окрашивание слизистых и кожи (Ю.А. Малахов, А.Н. Панин, Г.Л. Соболева, 2000).
При исследовании крови больных количество эритроцитов уменьшается до 1 — 3 миллионов, а гемоглобина - до 10 - 30 %. Почти всегда отмечается лейкоцитоз (13000 - 15000). Количество билирубина в крови резко увеличивается, а сахара - падает в 3 - 4 раза по сравнению с нормой.
Острое течение болезни длится от 3 до 10 дней. Летальность может достигнуть 50 %. У лактирующих животных наступает агалактия. Лактация у большинства коров восстанавливается через 2-3 недели.
У взрослых животных заболевание протекает легко и остается незамеченным. Отмечается небольшое и кратковременное повышение температуры тела, легкое угнетение, иногда незначительная желтушность и окрашивание мочи в бледно-розовый цвет. Все эти симптомы болезни исчезают через несколько дней, и животные выздоравливают, однако и при таком течении часто имеют место аборты и агалактия.
Клинические признаки нефрита отмечают как при остром, так и при хроническом течении болезни, уменьшается плотность мочи, и она неотличима по внешнему виду от чистой воды, лейкоциты постоянно содержатся в моче.
Лептоспиры обнаруживаются в почках с наибольшим постоянством при па- тологоанатомических изменениях, характерных для зернисто-жировой дистрофии, хронического интерстициального нефрита или острого паренхиматозного нефрита (И.З. Солошенко, 1971).
В литературе имеются многочисленные данные, свидетельствующие о широком распространении гинекологической патологии, вызванной лептоспирозной инфекцией. Аборты при вспышке лептоспироза описали Рассказчиков (1938) у 20 % животных, A.A. Черноштанов и А.П. Шатров (1975) - у 26 %, Morse E.V. и другие (1955, США) - 20 - 50 %, Stoenner H.G. et al. (1956) - 40 %, Wiesmann E. (1952, Швейцария) - 15 % у стельных коров.
Кроме абортов, в неблагополучных по лептоспирозу стадах отмечали мер- творождаемость (Г.М. Бутузов и И.Е. Троп, 1964), эндометриты, задержание последа, яловость (до 35 - 50 %) и гнойно-катаральные маститы (Stoenner H.G. et al., 1956).
Иногда аборты бывают единственным клиническим признаком инфекции (А.Г. Малявин и др., 1965 и др.).
Данные последних лет свидетельствуют о том, что экономические потери от Hardjo могут быть значительными. На счет лептоспироза можно отнести до 10 % всех абортов. Кроме того, коровы-лептоспироносители являются постоянным источником инфицирования внешней среды.
В Советском Союзе в 1935 г. С.Н. Никольский, Ф.М. Десятое и Г.Ф. Марченко наблюдали в неблагополучных по иктерогемоглобинурии крупного рогатого скота хозяйствах аналогичное заболевание поросят.
Бактериологическое подтверждение лептоспирозной этиологии болезни у свиней произошло в 1937 г., когда KlarenbeckA. и Winsser J. в Нидерландах
выделили Icterohaemorrhagiae от поросенка, страдавшего желтухой.
В.И. Терских обнаружил в крови свиней и людей, ухаживающих за этими животными, антитела к Pomona, а в 1940 г. выделил из почек поросенка культуру, идентичную штамму Tarassovi. В 1939 г. Johnson D.W. в Австралии выделил также из почки свиньи лептоспир Pomona.
В последующие годы лептоспиры серогруппы Pomona были выделены в крови свиней в Северной Америке (Gochenour W.S. et al., 1952), Аргентине (Sav- ino E. и Bennella E., 1944), Франции (Kolochine-Erber B. et al., 1962) и т.д.
Лептоспиры серогруппы Canicola выделены от свиней в Израиле (Hoeden J.,
, в Советском Союзе (И.С. Безденежных, 1954), США (Williams R.V. et al.,
, Чехословакии (Kmety E. et al., 1956).
Лептоспиры серовара balcanica изолировали от свиней И.З. Солошенко и Л.П. Семенова (1956) на Северном Кавказе, А.Т. Кофейников (1963) в Белоруссии, A.A. Матвеева (1973) в Молдавской ССР. В Советском Союзе от свиней получено более 30 изолятов Hebdomadis, оставшихся неидентифицированными до серовара.
Данные о клиническом проявлении лептоспироза у свиней остаются до настоящего времени противоречивыми. Продолжительность инкубационного периода, по мнению большинства исследователей (Н.И. Горбань, E.V. Morse) колеблется от 3 - 5 до 14 дней (при экспериментальном заражении - от 2 до 14), а леп- тоспироемия - до 14 дней после заражения. Сложность определения продолжительности инкубационного периода обусловлена отсутствием клинических проявлений болезни. О развитии инкубационного процесса приходится судить по выделению лептоспир с мочой, которое начинается в 1 - 3 декаде после заражения.
Лихорадка при лептоспирозе свиней бывает кратковременной: от нескольких часов до 1 - 3 суток - и не коррелирует с продолжительностью бактериемии (P.A. Рая, 1961; А.Т. Кофейников, 1963; Г.Г. Юрков, 1968; В.В. Шорохов, 1971, и др.). Температура поднимается до 40,5 - 41,5 С. В ряде случаев при однократной термометрии в течение суток подъем температуры может остаться незамеченным.
Желтуху и гемоглобинурию первые исследователи считали основным симптомом лептоспироза у свиней. О желтушном окрашивании тканей сообщал Н.И. Горбань (1951) у 30 % животных.
Однако, по данным Ю.А. Малахова и др. (2000) установлено, что желтушное окрашивание тканей - признак, нехарактерный для лептоспироза свиней, хотя у свиней-лептоспироносителей, так же, как и у любого другого животного, развивается желтуха разной этиологии.
Гемоглобинурию в качестве одного из симптомов лептоспироза у свиней описали И.С. Безденежных и Н.И. Кашанова (1956). Однако эти сообщения не получили подтверждения. Исследования Ю.А. Малахова и др. (2000) показали, что гемоглобинурия не характерна для лептоспироза свиней.
Свиньи всех возрастных групп восприимчивы к лептоспирозу. Характер клинических проявлений зависит, помимо вирулентности, от серовариантной принадлежности лептоспир и возраста животного. Между возрастом животного и остротой проявления инфекционного процесса существует обратная зависимость. Чем моложе животное, тем острее протекает инфекционный процесс.
Материалы Эллиса (1986) о выделении hardjo из плода подтвердили сообщение Hataway S.C. (1983), который вызвал у свиней рождение мертвых поросят после экспериментального заражения этим штаммом.
При внутриутробном заражении поросят лептоспирозом возможен аборт или рождение нежизнеспособного потомства. Доказана абортогенная роль лептоспир серологических групп Pomona, Tarassovi, Canicola. Менее изучена, но не исключена роль Sejroe, Icterohaemorrhagiae, Austral is. Плоды поражаются (Keme- nes F., 1967), начиная со второй половины беременности, абортируют матки любой породы и возраста.
Поросята, родившиеся без значительных поражений, могут не погибнуть от лептоспироза, так как получают с молоком достаточное количество специфических иммуноглобулинов, но остаются носителями лептоспир.
Из проведенных Ю.А. Малаховым (1992) исследований контакт с возбудителем у свиней заканчивается образованием специфических антител и леп- тоспироносительством.
У многих свиней-лептоспироносителей возбудитель локализуется не только в почках, но и в других паренхиматозных органах. Установлено, что лептоспиры заселяют весь урогенитальный тракт (B.C. Киктенко и др., 1985).
Патологоморфологические изменения у свиней при бессимптомном течении лептоспироза изучены недостаточно. Исследователями установлено, что при спонтанном и экспериментальном лептоспирозе морфологические изменения идентичны и не являются патогномоничными только для лептоспироза. Они характеризуются: интерстициальным нефритом и гепатитом; дегенератив- но-некробиотическими изменениями почек, печени и миокарда; атрофическими и пролиферативными процессами в селезенке; гиперпластическими (реже - атрофическими), пролиферативными явлениями и выраженной инфильтрацией лимфатических узлов эозинофилами.
Болезнь лошадей, напоминающую иктерогемоглобинурию крупного рогатого скота, описали Рассказчиков (1938), С.Н. Никольский и др. (1939), A.B. Синев и А.И. Растегаева (1939). Культуру лептоспир от больных лошадей выделила JI.C. Новикова в 1947 г.
В Эстонии Г.М. Мединским (1959) в сыворотке 54 % обследованных лошадей были выделены антитела к Pomona, Grippotyphosa и Icterohaemorrhagiae. И.Н. Камынин и др. (1963) описали лептоспироз жеребят в Челябинской области с кровавой мочой, потерей зрения и гибелью части животных. В.В. Мефодь- ев (1966) наблюдал в Западной Сибири вспышку лептоспироза Pomona у лошадей, характеризующуюся лихорадкой, истощением и кровавой мочой.
Многими авторами антитела к патогенным лептоспирам обнаруживались у клинически здоровых лошадей. Наиболее часто отмечались положительные реакции с лептоспирами Pomona и Grippotyphosa, реже с представителями се- рогрупп
Hebdomadis, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi, Ballum. Положительные реакции агглютинации лизиса лишь в немногих случаях сопровождались лептоспироносительством (В.В. Ананьин, 1971).
В США (Кентукки) наибольшее количество положительных реакций приходится на лептоспиры Australis (49,1 %) и Icterohaemorrhagiae (20,1 %), в Бразилии - Icterohaemorrhagiae (84 %) и Mini (79,2 %).
Большинство инфицированных животных переболевает бессимптомно. При тяжелом течении болезнь сопровождается конъюнктивитом, петехиями на слизистых, геморрагиями, желтухой, мышечной слабостью, депрессией. Болезнь продолжается 5-18 дней. При остром течении плод погибает, и болезнь сопровождается абортом.
В США Donahue J.M. et al. (1995) изучали частоту абортов или мертворо- ждений, вызванных лептоспирами, и за три года подтвердили различными методами 74 случая (3,3 %) абортов/мертворождений лептоспирозной этиологии у кобыл.
Одним из абортогенных факторов у лошадей являются лептоспиры серо- вара Pomona типа kennewicki, при этом других клинических проявлений не отмечено. Роль лептоспир других серогрупп в возникновении абортов не ясна.
Как одно из осложнений лептоспироза у лошадей описывают периодическую офтальмию (иридоциклит, периодическое воспаление глаз).
Лептоспироз у скаковых лошадей может сопровождаться метритом, который передается половым путем и сопровождается бесплодием. Иногда наблюдаются положительные реакции при исследовании клинически здоровых лошадей перед племпродажей или отправкой на соревнования. Считается, что реакции - это результат прошлого инфицирования и бессимптомного переболева- ния. Такие лошади не представляют какой-либо опасности, если они не остались лептоспироносителями. В целях профилактики необходимо проводить микроскопию мочи и обработку животных стрептомицином, после чего они без ограничений могут участвовать в соревнованиях или экспонироваться на выставках.
Лептоспироз овец и коз впервые описан в Советском Союзе A.A. Авроро- вым и М.В. Земсковым (1937) на фермах, неблагополучных по иктерогемогло- бинурии крупного рогатого скота. Лептоспирозная этиология болезни подтверждена выделением лептоспир от овцы (В.И. Терских, 1945).
По данным Н.Д. Худайбердиева (1952) овцы восприимчивы к лептоспи- розу так же, как и крупный рогатый скот. Инфекция протекает сверхостро, остро, хронически и бессимптомно. Острое течение, по данным K.M. Сафарова (1956), встречается в 90 - 95 % случаев; Webster W. (1955) - 18 % от числа заболевших животных. Взрослые овцы, по наблюдениям Webster W., болеют бессимптомно. Однако Alston J. и Broom J. (1958) отмечают, что овцы довольно резистентны к лептоспирозу.
Smith R. и Armstrong L. (1975) в США наблюдали вспышку лептоспироза, обусловленную Pomona. Hoeden J. (1953) в Израиле обнаружил у овец и коз антитела к Grippotyphosa, но отметил, что клинически выраженных случаев болезни наблюдается мало, лептоспироз протекает атипично и завершается ранним выздоровлением. От одной козы была выделена Grippotyphosa. Mochmann Н. (1955) в Германии выявил антитела к лептоспирам серогруппы Canicola только у одной овцы из 220 обследованных.
Основные возбудители лептоспироза овец и коз - это лептоспиры серог- рупп Grippotyphosa, Pomona, Tarassovi, Sejroe, Hebdomadis.
Острое течение болезни встречается редко. Оно сопровождается повышением температуры, желтухой, гемоглобинурией, анемией, бесплодием, абортами, рождением мертвых или быстро погибающих ягнят. Температура тела на 4 - 6 день после заражения поднимается на 0,5 - 2 С и удерживается 3-5 дней. Лептоспироемия продолжается 5-8 дней, максимальное разрушение эритроцитов происходит в течение 7-12 дней после заражения, моча может приобретать цвет красного вина, выражена желтушность склеры, видимых слизистых оболочек, подкожного жира. Кровь может быть водянистой, почки - отечными.
У суягных овец могут быть аборты. Лептоспироурия у переболевших животных проявляется через 12-16 дней и продолжается до 6 - 9 недель, а у некоторых животных - до 6 (K.M. Сафаров, 1956) и 9 месяцев (Webster W., 1955).
Подавляющее большинство инфицированных лептоспирам и животных переболевает бессимптомно. Распространенность лептоспироносительства среди овец и коз нуждается в дополнительном изучении.
У мелких домашних животных лептоспироз наиболее широкое распространение приобрел среди собак. В США было установлено, что число серопо- зитивных животных колеблется от 19 до 60 %, наиболее часто в сыворотке собак обнаруживаются антитела к L. canicola и несколько реже - к L. icterohaem- orrhagiae и pomona (K.F. Meyer et al., 1938).
Согласно ряду исследований (F. Azevedo, 1943; A. Pumarola, 1951; J.C. Broom, 1951, и др.), собаки Дании, Португалии, Испании, Англии, Австрии и Италии также наиболее часто оказывались пораженными L. canicola. Число се- роположительных животных в различных странах Европы достигало 20 - 50 %. После L. canicola сыворотки собак наиболее часто реагировали с иктерогемор- рагическими лептоспирами. Выделенный в 1957 в Чехословакии штамм также оказался L. icterohaemorrhagiae. Реже встречались антитела к лептоспирам се- рогрупп Grippotyphosa, Pomona и Hebdomadis.
В Австралии все выделенные от собак культуры были отнесены к L. icterohaemorrhagiae (R.D. Boon, 1952).
Этиология лептоспироза среди собак в Азии отличается большим разнообразием по сравнению с другими частями света. В Индонезии от собак изолированы лептоспиры групп Bataviae, Pomona (A. Mochtar, 1943) и Hebdomadis (J.W. Wolff et al., 1954). В Японии от собак изолированы возбудители групп Аи- tumnalis, Hebdomadis и Australis (S. Jamamoto, 1958), в Китае - Pomona.
В СССР К.Н. Токаревич и В.З. Черняк (1947), наблюдая вспышку заболевания среди щенков в одном из питомников Ленинграда, с помощью реакции агглютинации и лизиса (РАЛ) показали, что возбудителями были L. ictero- haemorrhagiae. Впервые L. icterohaemorrhagiae от собак в СССР были изолированы в Ленинграде Н.И. Амосенковой и Е.М. Поповой (1954). И.С. Безденежных и Д.А. Шаферштейну (1954) удалось выделить L. canicola от собак на острове Сахалин. В дальнейшем возбудители группы Canicola были изолированы от собак Н.М. Благовещенской с сотр. (1956) в Ростовской области, И.З. Соло- шенко, Г.В. Хорава (1960) - в Абхазской АССР, E.H. Горшановой и М.Г. Знаменским (1964) - в Дагестанской АССР. Среди городских собак наиболее часто отмечаются антитела к L. canicola и L. icterohaemorrhagiae (Н.И. Амосенкова и др., 1954; И.З. Солошенко, Г.В. Хорава, 1960; В.Н. Кондратенко, Е.П. Бернасов- ская, 1965, и др.).
Источником лептоспироза Canicola служат больные или переболевшие собаки. Иктерогеморрагический лептоспироз возникает у собак при контакте с инфицированными крысами Rattus norvegicus.
У собак из сельской местности наряду с антителами к L. canicola в равной или превосходящей степени обнаруживаются агглютинины к лептоспирам групп Pomona, Grippotyphosa, Hebdomadis, Tarassovi (В.Н. Кондратенко, Е.П. Бернасовская, 1965; И.З. Солошенко и др., 1968).
В Алтайском крае Ю.В. Саенко и А.Н. Моисеев (2000) провели обследование на лептоспироносительство 107 собак, принадлежащих жителям г. Барнаула. Количество сероположительных реакций составило 18,7 %. Этиологическая структура у обследованного поголовья представлена десятью серогруппа- ми: Canicola, Icterohaemorrhagiae, Pomona, Sejroe, Grippotyphosa, Pyrogenes, Hebdomadis, Cynopteri, Javanica. Методом темнопольной микроскопии было исследовано 27 проб мочи. В одном случае обнаружены подвижные лептоспиры, более десяти в поле зрения, данное животное прореагировало в РМА с серо- группой Canicola в титре 1:20. Штамм лептоспир изолировать не удалось.
Наибольшее значение как носители лептоспир имеют взрослые животные в 3 - 6-летнем возрасте. У собак в возрасте до 1 года и старше 6 лет лептоспиры обнаруживаются в редких случаях (A.D. Alexander et al., 1957, P. Uhlenhuth et а!., 1959; и др.). Большинство авторов отмечают, что лептоспирозом чаще поражены кобели. Заболевание собак не определяется их породами и регистрируется во все сезоны года.
В острых случаях болезнь начинается высокой температурой, отказом от корма, резкой жаждой, кровавым поносом или запором. Зловонный запах изо рта, желтуха отсутствуют. При хроническом процессе болезнь протекает при нормальной температуре и тех же симптомах. На 3 - 5-й день обычно развиваются характерные поражения слизистой оболочки ротовой полости: на деснах, языке и губах появляются бледно-желтые или грязно-серые струпья, на месте которых затем возникают язвы. Живот болезненный. Иногда тонические судороги на почве уремии, продолжительность болезни 8-10 дней. Летальность достигает 80 %.
На вскрытии слизистая оболочка желудка и кишечника гиперемированы, с многочисленными кровоизлияниями. Селезенка, печень и лимфатические узлы резко увеличены. В почках изменения, характерные для интерстициального нефрита.
Переболевание у собак сопровождается лептоспироносительством, которое может продолжаться до трех лет (Ю.А. Малахов, 1992). При этом они представляют опасный источник возбудителя инфекции как для животных различных видов, так и для человека.
Диагноз на лептоспироз у животных всех видов устанавливают на основании эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоана- томических данных с обязательным подтверждением диагноза лабораторными исследованиями. Среди последних распространение получили бактериологический и серологический методы.
Бактериологический метод позволяет обнаружить лептоспир в исследуемом материале путем микроскопии в темном поле микроскопа, иммунофлуо- ресцентным методом, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), выделением культур лептоспир в специальных средах, постановки биологических проб на лабораторных животных, идентификации и дифференциации выделенных культур.
Препараты для микроскопических исследований готовят в виде раздавленной капли. На одном предметном стекле готовят две-три раздавленные капли. Мочу исследуют непосредственно после взятия или после центрифугирования. При бессимптомном течении лептоспироза суспензию ткани готовят из кусочков коркового слоя почки, а при остром течении, кроме того, из печени и других органов. У абортированного плода микроскопируют содержимое желудка и полостные жидкости тела и готовят суспензию из всех органов. При проведении микроскопических исследований материала используют увеличение 40x7x10 или 20x1,5x7, а для более детального рассмотрения препарата - увеличение 40x10x15 или 40x1,5x10. В каждой капле просматривают не менее 50 полей зрения.
В кислой моче с pH 5,0 - 6,0 лептоспиры быстро утрачивают подвижность и погибают. Некоторые мертвые клетки сохраняют форму, типичную для леп- тоспир, но у них по всей длине бывает видна зернистость, концевые крючки довольно часто распрямлены.
Лептоспиры дифференцируют от нитей фибрина, обломков хвостовых частей спермиев, разрушенных эритроцитов, спирилло-вибриоподобных и других микроорганизмов, а у хряков и от интерспир.
В последние несколько лет предпринимаются активные попытки разработать и применить полимеразную цепную реакцию (ПЦР) для ранней диагностики лептоспироза, обнаружения лептоспир в моче, сперме и биологических жидкостях (Bai А.Е. et al., 1994; Самсонова А.П. и др., 1994; Taylor M.J. et al., 1997), дифференцирования видов и сероваров лептоспир (Redstone I.S., Woodward M.I., 1996) и изучения генетической изменчивости изолятов внутри одного се- ровара (Zuerner R.S. et al., 1995). Использование ПЦР для определения видов патогенных и сапрофитных лептоспир в воде предложено Murgia R. et al., (1997).
Серологический метод основан на обнаружении специфических антител к лептоспирам в крови животных или плода, молоке, моче, сперме с помощью реакций: микроагглютинации (РМА), макроагглютинации (РА), связывания комплемента (РСК), непрямой гемагглютинации (РНГА), иммуноферментным методом (ИФА) и др. При этом РМА и РА определяют принадлежность возбудителя к серогруппе, а РСК, РНГА и ИФА - к роду, не дифференцируя патогенных лептоспир от сапрофитных.
Реакция микроагглютинации, несмотря на свою трудоемкость, работу с живыми антигенами и учет реакции под микроскопом, все еще остается эталонной, наиболее широко применяемой реакцией при диагностике лептоспиро- за и оценке других диагностических реакций.
Наличие специфических антител в сыворотке крови животных в титре 1:50 - 1:100 и выше свидетельствует об инфицировании данной особи лептос- пирами и возможном лептоспироносительстве. По результатам серологических исследований возбудителями лептоспироза считают лептоспир той серологической группы, с которой обнаружены антитела в наиболее высоком титре.
Попытки заменить РМА более доступной реакцией предпринимались многократно. Однако реакция микроагглютинации (РМА) до сих пор является официально принятым стандартным методом для серологической диагностики лептоспироза и серологической классификации лептоспир.
Гистологическое исследование проводится с целью обнаружения лептоспир в органах погибших от лептоспироза людей и животных (печени, почках), а также в органах абортированного плода. Патологическая диагностика лептоспироза основана на обнаружении под микроскопом в гистологических срезах специфических морфологических изменений и окрашенных серебром лептоспир. Обнаружение лептоспир в органах животных имеет большое значение для постановки диагноза на лептоспироз.
Таким образом, лептоспироз - широко распространенный зооноз во многих странах мира. К заболеванию восприимчивы все виды сельскохозяйственных и мелких домашних животных. Болезнь характеризуется острым, но, в основном, бессимптомным течением, наблюдается сезонность заболевания, особую опасность представляют животные-лептоспироносители. Чаще поражается молодняк, мелкие млекопитающие рассматриваются как первичные источники инфицирования животных. Диагноз ставится с учетом эпизоотологических, эпидемиологических, клинических и патологоанатомических данных с обязательным подтверждением лабораторными исследованиями.
1.3. Особенности проявления лептоспироза у кошек
Лептоспироз у кошек был впервые установлен в 1937 г. на острове Ява в Батавии (Martens W.), когда от погибшей кошки выделили культуру L. ictero- haemorrhagiae.
В 1938 г. там же, в Батавии и в некоторых других местах, Esseveld Н. и Collier W.A. обследовали 517 кошек, из которых 174 весили менее, чем по 1,5 кг, а остальные 343 превышали этот вес. От последних в посевах кусочков почек получено 13 штаммов лептоспир. При серологическом изучении выделенных штаммов они установили, что шесть штаммов относятся к L. javanica и восемь - к L. bataviae. По мнению авторов, высокие титры антител в крови животных (1:100 - 1:1000 и выше) свидетельствуют о недавно перенесенной инфекции, низкие - о ретроспективных реакциях или, возможно, о легкой форме инфекции. Различий в степени зараженности самцов и самок авторы не отметили. Заражение кошек происходит, главным образом, при пожирании грызунов- носителей лептоспир. Среди грызунов, обитающих в Батавии и окрестностях, серая крыса (пасюк) является носительницей L. bataviae, a Rattus rattus brevicau- datus - носительницей L. javanica. Эти виды лептоспир и были найдены у кошек.
Опыты Кларенбека А. (1939) показали, что у молодых котят лептоспиры выделяются с мочой спустя 19-78 дней после заражения штаммом L. canicola, в то время как попытки инфицировать иктерогеморрагическими лептоспирами оставались безрезультатными.
В Германии Оттен Е. и др. (1954) при исследовании сывороток 236 здоровых кошек не смогли найти лептоспирозных антител в реакции связывания комплемента, но 10 % имели невысокие титры антител к L. icterohaemorrhagiae и L. canicola в реакции агглютинации. Экспериментальное заражение животных лептоспирами не вызывало у них выраженного заболевания.
В эксперименте удавалось заразить кошек Noguchi Н. в 1918 г. иктерогеморрагическими лептоспирами. Над аналогичными исследованиями работали Uhlenhuth Р. и Fromme W. (1916), но ими были получены отрицательные результаты. Вызвать клиническую картину лептоспироза через искусственное заражение кошек не удалось также Wirth F. в Вене в 1937 г., однако у одного зараженного трехнедельного котенка он наблюдал лептоспироурию.
Fennestad K.L. (1956) в Дании обнаруживал у кошек антитела к лептоспи- рам Bataviae, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Hebdomadis.
Результаты исследований И. Джанкова (1963) в Болгарии показали, что из обследованных 44 кошек, из которых девять - 4-месячных и 35 - в возрасте от 1 до 13 лет, антитела не были обнаружены только у самых молодых. Среди старых кошек возрос процент серореагентов: у семи кошек выявлены антитела против серогруппы Pomona в титрах 1:80 - 1:12800, у двух - против Tarassovi в титрах 1:40 - 1:1280, у шести - против Ballum в титрах 1:20 - 1: 160, у двух - против Sejroe в титрах 1:40 - 1:200 и по одной - против серогрупп Australis, Grippotyphosa и Andamona. Также была обследована одна кошка годичного возраста на свиноферме в начале лептоспирозной энзоотии, которая протекала с абортами у свиноматок. Реакция микроагглютинации была отрицательной против десяти серогрупп L. interrogans. Через 80 дней в сыворотке ее крови появились антитела против серогруппы Pomona в титре 1:12800. Еще через 560 дней их титр снизился до 1: 640. Клинические наблюдения не позволили выявить каких-либо отклонений в состоянии здоровья кошки в тот период, когда организм реагировал на инфекцию образованием антител. При обследовании 15 кошек со специфическими антителами в сыворотке крови лептоспироурию не установили ни у одной из них. Из почек одной кошки 1,5-летнего возраста выделили штамм серогруппы Pomona. Посевы от другой кошки (с лептоспирами в почках) дали отрицательный результат. Автор объясняет это тем, что кислая моча этих животных убивает лептоспир, и поэтому он рассматривает кошек скорее как носителей, чем распространителей лептоспирозной инфекции. Однако он не исключает их из числа потенциального источника инфекции.
И. Иванов с соавт. (1970) при исследовании 128 кошек в районе Пловдива обнаружил антитела к лептоспирам только у девяти (7,0 %), чаще всего с серо- группой Pomona.
Из отечественных исследователей патогенность лептоспир для котят изучал С.Я. Любашенко (1948). Два котенка в возрасте двух месяцев были заражены 20-суточной культурой лептоспир (штамм №751) внутрибрюшинно дозой в 5 см . На следующий день у обоих котят была отмечена повышенная температура (40,3 - 40,5 С), угнетенное состояние и отказ от корма. На третий день у одного котенка наблюдалась рвота; у обоих котят появился понос, продолжавшийся три дня, а температура снизилась до 38,4 - 39,0 С. В дальнейшем котята поправились, не обнаруживая никаких клинических признаков заболевания в течение 30 дней наблюдения.
Амосенковой Н.И. (1954, 1958) при обследовании 358 кошек в Ленинграде антитела к L. icterohaemorrhagiae обнаружены у трех животных в титрах 1:100 — 1:500. Выделить культуры лептоспир от животных не удалось. После искусственного заражения (внутрибрюшинного введения и скармливания с молоком культур L. icterohaemorrhagiae) 12 котят 3 - 6-недельного возраста четверо из них погибли на 8 - 13-й день. Из трупов выделены лептоспиры, патолого- анатомические изменения были выражены в слабой степени (у двух животных - желтушность печени и у одного - геморрагии в легких). У остальных котят признаков болезни не установлено. Через 23 дня после заражения два котенка
были убиты, причем в почках и моче у них были обнаружены лептоспиры.
Значительно большую инфицированность кошек лептоспирами обнаружили в Таллинне Г.М. Мединский и P.A. Рая (1959). При исследовании 103 животных у 32 (31 %) были антитела к различным лептоспирам, чаще всего к L. pomona и L. icterohaemorrhagiae.
Б.В. Высоцкий с соавт. (1960) на Дальнем Востоке нашли антитела к L. grippotyphosa и L. canicola у трех из 29 обследованных кошек, а у одного животного была выделена культура лептоспир.
У двух кошек, исследованных В.В. Ананьиным и Е.В. Карасевой (1961) в очаге лептоспироза (Ярославская область), возбудитель не был обнаружен, и в крови отсутствовали антитела против известных в Советском Союзе серологических групп лептоспир. При этом в обоих случаях желудки были наполнены еще непереваренными остатками полевок-экономок и других грызунов.
JI.C. Малафеева с соавт. (1971) исследовала сыворотки 118 кошек, выловленных в центральной части города Саратова в реакции микроагглютинации с лептоспирами 13 серогрупп. Положительные реакции были получены с сыворотками 11 кошек (9,3 %). Чаще всего (у 7 из 11 кошек) они отмечались с L. icterohaemorrhagiae. Антитела к L. pomona найдены у четырех кошек, к L. tarass- ovi, к L. grippotyphosa и к L. australis - по одному животному. Следует отметить, что у одной кошки были найдены антитела одновременно к L. icterohaemorrhagiae и L. pomona и у одной - к L. icterohaemorrhagiae, L. pomona и L. australis. Титры антител в сыворотках были от 1:100 до 1:160.
При этом в Саратове было зарегистрировано 28 заболеваний людей, из которых 11 носили спорадический характер, а источники инфекции в этих очагах остались невыясненными. Авторы полагают, что кошки, имея в быту тесный контакт с человеком, могут служить причиной лептоспироза.
По мнению Е.П. Бернасовской и Б.Л. Угрюмова (1989), кошки обладают относительной видовой резистентностью к лептоспирозной инфекции, хотя инфицированность их доказана серологически и бактериологически во многих
странах, эпидемиологическое значение данного вида животных ограниченно.
На Северном Кавказе И.А. Болоцким, В.И. Семенцовым, М.Ф. Резниковой (1999) было установлено, что количество положительных серологических реакций на лептоспироз у кошек за последние 10 лет увеличилось на 2,4 %. Также возросло число положительных реакций к лептоспирам серогрупп 1с- 1егоЬаетогтЬа1ае (46,2 %) и Сашсо1а (39,2 %) и практически не регистрировали антитела к лептоспирам НеЬёотасНз и 8е]гое. Количество выделенных изолятов от 210 обследованных кошек составило 12,5 %.
Таким образом, лептоспироз у кошек имеет повсеместное распространение, но характеризуется невысоким процентом зараженности. Наиболее часто кошки инфицируются лептоспирами серогрупп 1с1егоЬаетогг^^1ае, Ротопа, Сатсо1а. Выделить культуру лептоспир от больных животных удавалось довольно редко. При искусственном заражении кошек клинические признаки леп- тоспироза проявляются чаще в легкой или бессимптомной форме, а патолого- анатомические изменения у таких животных в большинстве случаев выражены слабо.
1.4. Заключение по обзору литературы
Патогенные лептоспиры существуют в природе в форме многочисленных сероваров, каждый из которых паразитирует на теплокровных животных определенного вида или видов, являющихся их основными хозяевами (резервуарами). Все серовары распространены в природных и сельскохозяйственных очагах, территориальная приуроченность которых определяется климатогеографи- ческими условиями и ареалом основных хозяев данного серовара лептоспир. Количество известных сероваров постоянно увеличивается, и, следовательно, постоянно существует угроза заражения человека и животных лептоспирами новых, ранее не известных сероваров.
У сельскохозяйственных и мелких домашних животных развивается активный эпизоотический процесс, обеспечивающий циркуляцию возбудителя в природе. При крупногрупповом содержании сельскохозяйственных животных происходит поголовное перезаражение, сопровождающееся рядом патологических симптомов.
Продолжительность инкубационного периода у сельскохозяйственных животных колеблется от 3 до 14 дней, у собак - от 10 до 20 дней. У молодняка крупного рогатого скота, собак, реже - у овец и коз лептоспироз может протекать в форме иктерогемоглобинурии. У свиней, взрослого крупного и мелкого рогатого скота клинические признаки болезни бывают слабо выраженными. У супоросных свиней, стельных коров и беременных животных других видов лептоспироз служит причиной аборта, рождения мертвого или нежизнеспособного приплода.
Сохранение возбудителя в почках переболевших животных и длительное выделение его с мочой - одна из основных особенностей течения лептоспироза. Лептоспироносительство сопровождается патологоморфологическими изменениями в почках у крупного рогатого скота, свиней, собак.
Диагноз на лептоспироз устанавливают с учетом эпизоотологических, эпидемиологических, клинических, патологоанатомических данных с обязательным подтверждением лабораторными исследованиями. Серогрупповую принадлежность изолята лептоспир определяют в РМА с групповыми агглютинирующими сыворотками к лептоспирам всех известных серогрупп. Реакцию ставят в соответствии с наставлением по применению сывороток.
Исходя из литературных данных, лептоспироз у сельскохозяйственных животных и собак изучен в достаточно широком аспекте, чего нельзя сказать о лептоспирозе у кошек. Известно лишь, что кошки восприимчивы к заболеванию, это показывают поставленные эксперименты многих ученых. Выделять возбудителя от инфицированных животных удавалось не всем исследователям. Проследить клиническое течение болезни у кошек представлялось не всегда возможным, так как животные переносят заболевание чаще в легкой или бессимптомной форме.
Некоторые ученые пришли к выводу, что кошки не являются распространителями инфекции и безопасны для человека, однако в литературных данных отсутствуют доказательства этому. Возникающие спорадические случаи леп- тоспироза у людей почти всегда остаются без определения причин болезни. При таких спорадических вспышках лептоспироза нельзя исключать кошек из числа потенциальных источников инфекции. Также в литературе отсутствуют сведения об изменениях морфобиохимических показателей крови, биохимических показателей мочи и гистологических нарушениях в паренхиматозных органах у инфицированных животных, не выяснены сроки сохранения жизнеспособности лептоспир в моче у кошек, не проводилась разработка профилактических мероприятий и правил содержания кошек при возможном возникновении у них заболевания.
Таким образом, целью наших исследований является комплексное изучение инфицированности, патогенеза и профилактики лептоспироза у данного вида животных.
Характеристика возбудителя лептоспироза
В настоящее время вид патогенных лептоспир представлен 202 серова- рами, которые по степени антигенного родства объединены в 23 серологические группы.
По данным многих авторов (В.И. Терских с соавт., 1964; И.А. Коковин, 1965; В.В. Ананьин, 1971; B.C. Киктенко, 1985; Ю.А. Малахов, 1992, и др.) все лептоспиры при рассмотрении в темном поле микроскопа представляют собой спиралеподобные тонкие серебристые нити, концы которых, оба или один, загнуты и булавовидно утолщены. Встречаются и бескрючковые формы лептоспир. Диаметр клетки 0,06-0,15 мкм, длина - 6-12 мкм и более. Лептоспиры не имеют жгутиков, но обладают активной подвижностью. Постоянное движение является характерной особенностью представителей рода Leptospira.
Обычными формами движения в жидких средах являются: вращательное ротационное движение на месте, прямолинейное поступательное движение с одновременным вращением вокруг собственной оси, круговые движения. Одна и та же особь может совершать и вращательное, и поступательное движение. Движение лептоспир прекращается после их гибели.
Лептоспиры плохо окрашиваются анилиновыми красителями, и в процессе окрашивания их морфология изменяется. Окраска по Граму - отрицательная. Тело лептоспиры имеет коэффициент преломления, близкий к таковому стекла, поэтому они невидимы при обычной микроскопии.
Морфология и характер движения лептоспир настолько типичны, что позволяют распознавать их в патологическом материале. Лептоспиры в темном поле микроскопа в отличие от других микроорганизмов не отражают и не преломляют свет, и поэтому наблюдатель видит их матовыми, а не блестящими.
Субмикроскопическое строение лептоспир можно представить еле- дующим образом. Покров окружает осевую нить и цитоплазматический цилиндр. Он имеет трехслойное или более сложное строение, хорошо выявляемое лишь на ультратонких срезах, образует цистоподобные вздутия, полые и концевые вздутия к концевым придаткам. Осевая нить имеет двунитчатое строение и прикрепляется к цитоплазматическому цилиндру лишь одним концом с помощью гранулы - блефаропласта внутри терминального органа. В каждой клетке есть две независимые нити, прикрепленные на противоположных концах клетки и направленные навстречу друг другу, а средняя часть клетки не содержит осевой нити. На поперечных срезах осевая нить представлена двумя группами микрофибрилл, по 6 - 7 в каждой группе. Обе группы по размерам соответствуют дву- нитчатому аксистилю. Цитоплазматический цилиндр содержит ядерный материал, внутрицитоплазматические мембранные структуры, включения, проницаемые для электронов, неизвестной природы, а также электронно-плотные включения двух типов: состоящие из ДНК и полифосфатов или имеющие по- лисахаридную природу (В.В. Ананьин с соавт., 1961).
Лептоспиры — строгие аэробы. Оптимальный рН среды для их культивирования - 7,0 - 7,4, температура - 38 - 40 С, т.е. температура тела животных и человека (Берджи, 1983). Однако в лабораторных условиях их культивируют при температуре 28 - 30 С, ниже 13 С патогенные лептоспиры обычно не растут.
Лептоспиры размножаются путем поперечного деления клетки. Продолжительность одной генерации у лептоспир значительно больше, чем у бактерий многих видов и составляет 6-16 часов (B.C. Киктенко, 1955, Faine S., 1957).
Динамика размножения лептоспир в питательных средах подчиняется закономерностям, общим для большинства видов бактерий. Культура развивается в виде определенных последовательных фаз, характер которых зависит от состояния клеток, питательной среды и других внешних факторов. Требования лептоспир к составу питательной среды относительно просты, но весьма разнообразны.
Необходимыми органическими соединениями для лептоспир являются длинные цепи жирных кислот (15 атомов углерода и более) и витамины: тиамин (В,), цианкобаламин (В12). Inada R., Ido Y., Hoki R. et al. (1916) впервые выделили лептоспиры на среде Noguchi (питательный агар - 1 часть, раствор Рингера - 3, сыворотка кролика - 1 и цитратная плазма кролика - 0,5 части). Uhlenhuth Р., Fromme W. (1916) вырастили лептоспиры, независимо от японских исследователей, на инактивированной кроличьей сыворотке, разбавленной в 10 и 20 раз холодной водой. Кроличья сыворотка, добавляемая в пропорциях от 5 до 30 %, стала одним из основных компонентов, входящих в состав питательных сред для культивирования лептоспир (Vervoort Н., 1923; В.И. Терских, 1933; М.В. Зем- сков, A.A. Авроров, 1941 и др.).
Полужидкие сывороточные среды с агаром предложили Fletcher W. (1928), Wiesmann Е. (1952), B.C. Киктенко (1954). Добавление агара задерживает высыхание среды и способствует сохранению культуры более длительные сроки без пересевов.
Fukushima В. (1927) первый получил колонии лептоспир на плотной среде, состоящей из плазмы крови лошади, различных солей и агара. В Советском Союзе плотные питательные среды для культивирования лептоспир предложили З.Х. Каримова (1971), С.К. Канарейкина (1973), Г.Л. Соболева (1979) и др.
В последующие годы предложен ряд полусинтетических бессывороточных сред с бычьим и овечьим альбумином (Ellis W.A. et al., 1986). Синтетическую безбелковую среду предложили Staneck J., Henneberry J., Cox R. (1973).
Материалы и методы
Материалом для исследования являлись пробы крови, сыворотки, мочи и почек, которые получали от кошек, поступавших на эвтаназию в ветеринарную лечебницу Территориального управления ветеринарии государственной ветеринарной службы Алтайского края по г. Барнаулу. Всего исследовано 83 пробы крови, 651 - сыворотки, 518 - мочи и 90 - почек.
Пробы крови брали в чистые пробирки в количестве 3 - 5 мл из сердца или вены сафены на задней конечности, мочу собирали методом прокола мочевого пузыря и при естественном мочеиспускании в чистые пробирки в объеме 3 - 7 мл при помощи одноразовых шприцев. Почки для макромикроморфологи- ческого исследования отбирали при патологоанатомическом вскрытии животных после процедуры эвтаназии.
Постановку реакции микроагглютинации (РМА) осуществляли в соответствии с ГОСТ 25386-91 с использованием диагностических штаммов лептос- пир: Pomona (pomona), Tarassovi (Perepelicin), Grippotyphosa (Moskva-V), Heb- domadis (Kabira), Sejroe (493 Poland), Mini (Szway izak), Canicola (Hond Utrecht IV), Icterohaemorrhagiae (M-20), Bataviae (HS-26), Javanica (Veldrat Bataviae 46), Australis (Iez-e), Autumnalis (Akijami A), Ballum (Mus-127), Pyrogenes (Salinem), Cynopteri (Vlurmuis 3868), которые были получены в Алтайской краевой ветеринарной лаборатории.
При постановке реакции агглютинации (РА) использовали набор: Леп- тоспира Байрам-Али Слайд-Антиген (Лепто БАСА) , предназначенный для обнаружения специфических антител к лептоспирам различных серогрупп в сыворотках крови больных людей. Реакцию ставили на чистых предметных стеклах путем перемешивания исследуемой сыворотки крови (разведенной физиологическим раствором 1:1, 1:10, 1:100, 1:1000) и слайд-антигена. Учет реакции вели в свете вогнутого зеркала по наличию образовавшихся агглютининов.
При постановке полимеразной цепной реакции (ПЦР) руководствовались временным наставлением по применению тест-системы НПО "Нарвак" для обнаружения патогенных лептоспир.
Тест-система предназначена для выявления 15 наиболее распространенных серогрупп Leptospira interrogans в образцах крови и мочи животных (прижизненно), в патматериалах от умерших или вынужденно убитых животных (кровь, органы) и в образцах-культурах. Она состоит из трех наборов: 1. набор для выделения ДНК, в состав которого входят раствор-1, раствор-2, раствор-3, раствор-4, сорбент, вода дистиллированная; 2. набор для определения ДНК патогенных лептоспир методом ПЦР, состоящий из праймеров для ПЦР-1, ПЦР-2, положительного контроля (инактивированная культура лептоспир, ДНК лептоспир), буфер для ПЦР, фермент Tag-полимераза (5 ед./мкл), масло; 3. набор для электрофореза, в который входят одноразовый буфер для электрофореза (ТАЕ, 50-кратный), бромистый этидий (10 мг/мл), буфер для нанесения образца на гель. Для проведения ПЦР отбор проб вели согласно ГОСТ 25386-91.
Мочу в количестве 5 — 10 мл центрифугировали при 5000 1/мин в течение 10 мин, надосадочную жидкость отбирали и отбрасывали, осадок использовали для выделения ДНК. Пробы почек (10-20 мг) измельчали ножницами и растирали до гомогенного состояния в физиологическом растворе. Для анализа использовали 200 мкл полученной неосветленной суспензии.
При выделении ДНК из исследуемого биологического материала, во избежание перекрестной контаминации, до начала работы маркировали чистые пробирки объемом 1,5 мл и вносили в них по 200 мкл раствора-1. После этого приступали к работе с инфицированным материалом. В подготовленные пробирки с раствором-1 (200 мкл) вносили по 200 мкл исследуемого материала, перемешивание производили на смесителе типа Vortex и инкубировали в течение 20 мин при температуре 95 С в воздушном термостате. Затем пробы центрифугировали в настольной центрифуге типа "Эппендорф" в течение 2 мин при 10000 - 13000 1/мин. Надосадочную жидкость отбирали для дальнейшего анализа. В нее добавляли 0,9 мл раствора-2 и 20 мкл сорбента, пробы тщательно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем пробы центрифугировали 10 - 15 с при 10000 - 13000 1/мин для осаждения сорбента, надосадочную жидкость отбрасывали.
Затем добавляли 100 мкл раствора-3, перемешивали на смесителе, центрифугировали в течение 15 с, супернатант отбрасывали. Процедуру повторяли дважды. К полученному осадку добавляли 100 мкл раствора-4 и проделывали то же самое, что и при добавлении раствора-3. Осадок подсушивали при 56 С в течение 10-15 мин в пробирке с открытой крышкой. К осадку добавляли 30 мкл деионизированной воды для элюирования ДНК с сорбента, перемешивали и инкубировали 10-15 мин при 56 С в закрытых пробирках, потом центрифугировали в течение 1 мин при 13000 1/мин. Отобранную надосадочную жидкость использовали для проведения ПЦР.
На всех стадиях обработки биоматериала удаление супернатанта производили одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи водоструйного насоса в колбу-ловушку с дезинфицирующим раствором (3 % хлорамин или 5 % перекись водорода и т.п.).
Эпизоотологическое обследование кошек на лептоспироз в г. Барнауле
С целью изучения распространения лептоспироза кошек с ноября 1999 г. по ноябрь 2002 г. на базе ветеринарной лечебницы Территориального управления ветеринарии государственной ветеринарной службы Алтайского края по г. Барнаулу нами получено 568 проб сыворотки крови и 347 проб мочи or животных разных пород в возрасте от 2 месяцев до 15 лет, которые содержались в благоустроенных квартирах и частных домах города. Пробы сыворотки крови исследовали в РМА с лептоспирами 15 серогрупп, начиная с разведения 1:10. Пробы мочи исследовали, применяя метод темнопольной микроскопии.
Учитывая особенности физиологического развития организма кошек, все животные были разделены на четыре возрастные группы: 1 - до трех месяцев, 2 V - от трех месяцев до одного года, 3 - от года до пяти лет и 4 - старше пяти лет.
В результате серологического исследования сывороток крови лептоспи- розные антитела были обнаружены в 56 (9,9 %) пробах (табл. 1).
При этом в первой группе животных не выявлено проб с положительной реакцией на лептоспироз. Во второй группе обнаружены лептоспирозные антитела в пяти (5,8 %), в третьей группе - в 31 (12,4 %) и в четвертой группе - в 20 пробах (10,9 %). Титр лептоспирозных антител в 25 пробах (44,6 %) крови был 1:10, в 16 пробах (28,5 %) - 1:20 и в 15 пробах (26,7 %) - 1:50 (табл. 2).
В возрастной динамике титр антител составил: у животных в возрасте от трех месяцев до года в 3 пробах крови (60 %) - 1:10, в 2 пробах (40 %) - 1:50; в возрасте от года до пяти лет по 10 проб (по 32,2 %) - 1:10 и 1:20 и 1 1 проб (35,4 %) - 1:50; в возрасте старше пяти лет в 12 пробах (60 %) - 1:10, в 6 пробах (30 %) - 1:20 и в 2 пробах (10 %) - 1:50. При микроскопии мочи лептоспиры не были выявлены. Титр антител в сыворотках крови кошек, инфицированных возбудителем лептоспироза
Из 56 проб сыворотки крови животных, положительно реагировавших в PMA 28 (50 %) проб были получены от котов и 28 (50 %) - от кошек.
Исследования показали, что доля кошек, в сыворотке крови которых обнаружены антитела к лептоспирам, живущих в частном секторе, значительно выше, чем доля животных, живущих в благоустроенных квартирах (табл. 3).
Наблюдаемая зависимость четко прослеживается по всем возрастным группам: в возрасте от трех месяцев до года 4 пробы (25 %) - из частного сектора, одна проба (1,4 %) от животного, проживающего в благоустроенной квартире; в возрасте от года до пяти лет 12 проб (17,1 %) - из частного сектора, 19 проб (10,6 %) - от животных, проживающих в благоустроенных квартирах; у животных старше пяти лет 10 проб (28,6%) - из частного сектора, и 10 проб (6,8 %) — от животных, проживающих в благоустроенных квартирах.
Этиологическая структура лептоспироза у кошек представлена 12 серо- группами (табл. 4). Из данных таблицы видно, что в пробах сыворотки от 18 (32,1 %) животных обнаружены антитела к лептоспирам серогруппы Ictero- haemorrhagiae, в 14 (25,0 %) пробах - к лептоспирам серогруппы Grippotyphosa, в 9 (16,0 %) пробах - к лептоспирам серогруппы Cynopteri, в 6 (10,7 %) пробах - к лептоспирам серогруппы Sejroe, в 4 (7,1 %) пробах - к лептоспирам серогруппы Autumnalis, по 3 (5,3 %) пробы - к лептоспирам серогрупп Australis и Pyrogenes, в 2 (3,4 %) пробах - к лептоспирам серогруппы Hebdomadis и по одной пробе (1,8 %) - к лептоспирам серогрупп Ballum, Canicola, Pomona, Tarass- ovi.
Из 56 проб, положительных в PMA, в 6 пробах обнаружены антитела к лептоспирам одновременно двух серогрупп: Cynopteri и Grippotyphosa - две пробы, Icterohaemorrhagiae и Autumnalis, Icterohaemorrhagiae и Hebdomadis, Ic- terohaemorrhagiae и Canicola, Icterohaemorrhagiae и Australis - по одной пробе.
В возрастной динамике этиологическая структура лептоспироза указывает (табл. 5), что у животных в возрасте от трех месяцев до года наибольший процент реагирующих приходится на серогруппу лептоспир Sejroe - 40 % и по 20 % - на серогруппы лептоспир Tarassovi, Icterohaemorrhagiae и Pyrogenes. У животных в возрасте от одного года до пяти лет доминирующими серогруппа- ми являются Grippotyphosa - 26,0 %, Icterohaemorrhagiae и Cynopteri -по 22,5 %. В возрасте старше пяти лет высокий процент положительно реагирующих приходится на лептоспиры серогрупп Icterohaemorrhagiae - 50 % и Grippotyphosa - 30,0 %. Из числа исследованных проб мочи в 25 пробах (7,2 %) наблюдали кровь, методом темнопольной микроскопии возбудителя заболевания не обнаружили. При этом серологическим исследованием сывороток крови в РМА от этих животных лептоспирозные антитела не выявлены.
