Введение к работе
Аспшальнасгаь гаелы. Необходимость создания ассоциированных вакцин продиктована появлением вспышек целого ряда смешанных болезней, возникших при интенсивных методах ведения животноводства, в связи с перегруппировками большого количества животных на ограниченных площадях, а также при наличии природных очагов болезни.
В овцеводческих хозяйствах у овец часто регистрируются аборты и мертворождения. вызываемые целым рядом полиэтилогическнх болезней. Массовые аборты инфекционной природы, и как следствие яловость и бесплодие, наносят значительный экономический ущерб овцеводству.
В России наибольшая пораженность овцепоголовья хламидиями. кампилобактериями, сальмонеллами и лептоспирами регистрируется в Поволжском. Северо-Кавказском, Уральском и Восточно-Сибирском районах России. Поэтому применение в этих регионах ассоциированной вакцины одновременно против нескольких регистрируемых болезней значительно повысит эффективность и снизит затраты на проведение ветеринарных мероприятий.
Разработанная в 1978 г. авторами ВГНКИ ветпрепаратов поливалентная депонированная вакцина против лептоспироза животных нуждается в совершенствовании в направлении повышения иммуноген-ности и стандартности, а также механизации и автоматизации технологических процессов производства.
Требуют дальнейшего усовершенствования питательные среды и разработка режима управляемого культивирования лептоспир в биореакторах, а также методы диагностики хламидиоза и лептоспироза животных. В настоящее время наиболее эффективным методом серологической диагностики хламидиоза является НФА. Наборы'ИФА применяются сейчас в большинстве развитых стран, как в медицине, так н ветеринарии.
Для эффективного выделения лептоспир пригодны эффективные альбуминовые и твин-альбуминовые среды, для обнаружения лептоспир - реакция иммунофлуорёсценции.
Цель и задачи исслеЗований. Разработать и внедрить специфическую профилактику и диагностику хламидиоза. кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза животных по заданию Главного управления ветеринарии МСХ СССР (1989) и программам НИР (1980-1995).
- 2.-
В задачи исследований входило:
разработать ассоциированную вакцину против хланидиоза. кампилобактериоза. сальмонеллеза и лептоспироза овец, подобрать оптимальные соотношения антигенов и адъюванта в препарате:
исследовать иммунобиологические свойства вакцины в лабораторных и производственных условиях;
усовершенствовать промышленную технологию производства вакцины против лептоспироза животных (разработка питательной среды, режима управляемого культивирования лептоспир в биореакторах и методов концентрирование лептоспир);
разработать набор ИФА для диагностики хламидиоза овец;
разработать флуоресцирующий глобулин для диагностики лептоспироза животных:
разработать методы идентификации производственных штаммов лептоспир и дифференциации L. interrogans от L. ЫПеха в реакции ДНК - ДНК гибридизации.
Научная новизна. Впервые создана ассоциированная вакцина против хламидиоза. кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза овец. Определены основные параметры ассоциированной вакцины (совместимость и концентрация антигенов, оптимальное соотношение компонентов), обеспечивающие формирование иммунитета ко всем антигенам такой же напряженности и продолжительности, как и соответствующие моновакцины против хламидиоза, кампилобактериоза, сальмонеллеза и лептоспироза (патент 94030862 (029122) от 03.08.94г.).
Разработана питательная среда процесс управляемого культивирования лептоспир на твин-альбуминовой среде по значимым биотехнологическим показателям (РО^я концентрация твин-80).. позволяющие повысить накопление лептоспир в 6-10 раз (1.5 млрд/мл) и стабильность биологической активности препарата (патент 95114193 (024121) ОТ 08.08.95 г.).
Доказана возможность применения мембранной технологии для концентрирования лептоспир. Промышленнг«; модули ВПУ-І5ПА с селективностью мембраны по молекулярному весу белка І5000 « обеспечивают концентрирование лептоспир в 10-30 раз с высокой скоростью без изменения их биологических свойств (патент 2030915 от 31.10.90 Г.).
Разработаны набор для иммунофёрментной диагностики хламиди-
оза и флуоресцирующий глобулин для выявления лептоспир. позволяющие повысить эффективность лабораторной диагностики хламидиоза на 17.5*. и лептоспироза тавотных на 5.2-19.8%;
Из ДНК лептоспир сероьара Pomona получена плазмида pLp 41. которая в реакции ДНК-ДНК гибридизации позволяет идентифицировать производственные штаммы лептог-чф (ВГНКИ 1-6) на генетическом уровне и дифференцировать L.Interrogans от L.biflexa.
Новизна полученных результатов подтверждена также авторскими свидетельствами:
авторское свидетельство N 1102101 "Вакцина против лептос-пироза сельскохозяйственных животных и способ ее изготовления";
авторское свидетельство N 1102105 "Вакцина против лептос-
ПИрОЗа СеЛЬСКОХОЗЯЙСТВеННЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОб ЄЄ ИЗГ0Т08-
ния":
авторское свидетельство М 1102106 "Вакцина против лептоспироза сельскохозяйственных животных и способ ее изготовления";
авторское свидетельство N 1102102 "Вакцина протчв лептоспироза сельскохозяйственных животных и способ ее изготовления"; .
авторское свидетельство N 1102103 "Вакцина против лептоспироза сельскохозяйственных животных и способ ее изготовления";
- авторское свидетельство N1102104 "Вакцина против лептос-
' пироза сельскохозяйственных животных и способ ее изготов
ления".
Практическая значилюсть. На основе полученных результатов внедрены в биологическую промышленность и ветеринарную практику:
- вакцина ассоциированная инактивированная против хламидио
за. кампилобактериоза, сальмонеллеза'и лептоспироза овец;
- методы диагностики хламидиоза и лептоспироза животных;
.'-. промышленная технология произведете вакцины против леп
тоспироза животных (опытно-^промышленный регламент произ
водства); методы генетического картирования штаммов леп
тоспир.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсузде-ны на конференциях и симпозиумах:
Всесоюзном симпозиуме "Актуальные проблемы лептоспироза". (Москва, 1979г), VII и VIII Всесоюзном симпозиуме "Актуальные проблемы лептоспироза", Киев, 1979г., (Тбилиси. 1983г.). III Всесоюзной научно-производственной конференции, (Махачкала, 1981г.). Всесоюзной научной конференции "Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов, (Москва. 1981г.). Всесоюзной конференции "Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней общих для человека и животных, (Львов, 1988г.), VII Evropean and IX USSR Leptospirosis research Conference, (Moscow, 1990г.). Всесоюзной научной конференции "Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов, (Москва, 1991г.), IV Всесоюзной и V Всероссийской конференциях "Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов. (Москва, 1991, 1996г.), Всероссийской научно-практической конференции "Вирусные болезни сельскохозяйственных животных", (Владимир. 1995г.). Всероссийской научной конференции "Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных. (Москва, 1996г.): Всемирном конгрессе по лептоспирозу (г.Нант Франция, 1996г.): Ученых советах ВГНКИ ветпрепаратов (1980-1983Г.Г,) и ВНИТИБП в (1989-1996г).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 42 статьи, получено 3 патента, 6 авторских свидетельств, 2 заключительных отчета по законченным научно-исследовательским работам, 11 нормативно-технических документов на изготовление, контроль и применение вакцин и диапюстикумов, Участвовал в разработке инструкций по профилактике и ликвидации хламидиоза и лептоспироза животных.
Основные положения, выносимые на защипу
і. Результаты работы по созданию и внедрению ассоциированной ннактивированной вакцины против хламидиоза, кампилобактерио-за, сальмонеллеза и лептоспироза овец.
-
Результаты разработки, испытания и внедрения набора ИФА для диагностики хламидиоза овец.
-
Результаты разработки, испытания и внедрения флуоресци-рукщего глобулина для диагностики лептоспироза жиботных.
-
Результаты разработки, испытания и внедрения способа изготовления вакцины против лептоспироза животных.
-.-5 -
-
Результаты разработки, испытания и внедрения питательной среды для культивирования лептоспир.
-
Результаты разработки методов идентификации производственных штаммов лептоспир и дифференциации L.interrogans от L.biflexa с использованием ДНК-зондов.
