Введение к работе
з 1.
1.1. Актуальность темы. Инфекционная бурсальная болезнь (ИББ) гистрируется во многих странах мира, включая Российскую Федерацию, и носит значительный экономический ущерб птицеводству, который падывается из прямых потерь (гибель, потеря продуктивности), затрат на оведение ветеринарно-санитарных и других мероприятий. Опасность спространения инфекционной бурсальной болезни резко возросла в связи с явлением высоковирулентных штаммов вируса, которые вызывают актически 100% заболеваемость цыплят, падеж молодняка яичных пород от до 80% и бройлеров - от 20 до 50%. В период с 1991 по 1993 г.г. в ссийской Федерации зарегистрировано несколько вспышек заболевания, званных высоковирулентными штаммами вируса ИББ.
Так, в 1993 г. отход птицы от ИББ в Российской Федерации составил 55,5 тыс. голов, что составляет 34,7% от общего падежа, вызванного рекционными болезнями.
Применение импортных биопрепаратов из «промежуточных» штаммов и ічественной живой вакцины против ИББ из штамма «ВНИВИП» не зспечивало ожидаемого эффекта.
Все это определило необходимость совершенствования и разработки )ых более эффективных средств и методов диагностики и профилактики ИББ. Разработкой эффективных средств защиты цыплят от высоковирулентных эммов вируса ИББ занимались многие исследователи [Бирман Б.Я. с соавт., )6; Kouwenhoven В., Воз I., 1994], которые отмечали, что с помощью живых цин из «промежуточных» штаммов невозможно добиться оздоровления цехозяйств. Применение в Европе в последние годы «горячих» вакцинных аммов, способных создавать надежную защиту на фоне материнского сивного иммунитета, привело к положительным результатам.
Высокая устойчивость вируса ИББ в окружающей среде в большинстве чаев является одной из причин его длительного персистирования в цехозяйствах и эндемичности заболевания в регионах.
Во многих странах мира, включая Российскую Федерацию, наряду с рективными ветеринарно-санитарными мероприятиями проводится научно-снованная планируемая стратегия комплексной вакцинопрофилактики ИББ с эльзованием современных средств и методов диагностики. Для осуществления постоянного эпизоотологического монитгринга за
еЖйімвкАйюлят; іми вируса ИББ, вызывающими вспышки заболевания, ДАРСТВЕННАЯ Т
требуется совершенствование методов диагностики, предполагающ повышение их чувствительности и специфичности, а также возможность только выявлять, но и идентифицировать вирус.
В последние годы широкое распространение нашел метод полимеразн цепной реакции (ПЦР) для диагностики и идентификации различных вирусов их штаммов [Jackwood D.I. с соавт., 1996; Lin T.L. с соавт.; 1994,1995; Tham К. с соавт., 1995; Тиге О. с соавт., 1998].
Использование метода ПЦР позволяет выявлять не только инфекционні вирус, но и фрагменты вирусного генома, т.е. наиболее точно и достовер устанавливать штаммовую принадлежность вируса. Сравнительный анал соответствующих аминокислотных последовательностей полевых и вакцинн штаммов позволяет выявить вакцинные штаммы, имеющие наименьш отличия от полевых. Это имеет определяющее значение для выбора полевс изолята вируса, пригодного Для создания живой вакцины против ИББ.
При разработке оптимальных схем иммунизации птиц против ИББ усил исследователей направлены на достижение баланса между оптимальні уровнем материнского иммунитета и иммуногенной активностью вакцинн штаммов [Hitchner D.B., 1976; Rosales A.G. с соавт., 1989; Wyeth P.I., Cullen G. 1976, 1978, 1992].
Возраст птиц, при котором иммунизация наиболее эффективна, являет решающим фактором, обеспечивающим их защиту от заражения и заболевак ИББ.
Для определения наличия у птиц антител к вирусу ИББ в Российо Федерации до 1993 г. применяли реакцию диффузионной преципитаці которая обладает низкой чувствительностью, значительной трудоемкостьк дает результат только через 24-48 ч. после постановки [Алиев А.С. с coai 1989, 1990; Phillips W.E., 1981].
Более чувствительная и специфичная реакция нейтрализации применялась из-за отсутствия СПФ-эмбрионов, к тому же продолжительность постановки составляет 5-7 суток [Phillips W.E., 1981; Winterfield R.W.; Thac H.L., 1978].
Для экспресс-диагностики ИББ, массового эпизоотологичесю обследования птицепоголовья и определения оптимальных сроков иммунизаі цыплят живыми вакцинами потребовалась разработка набора для определеї наличия антител к вирусу ИББ иммуноферментным методом.
Эффективность иммунизации живыми вакцинами во многом зависит от породности материнского иммунитета. Для обеспечения однородного и іпряженного иммунитета против ИББ у цыплят потребовалось создание іактивированной вакцины против ИББ для иммунизации ремонтного злодняка. Важнейшим моментом в ликвидации очагов заболевания и допущении развития эпизоотии ИББ в Российской Федерации является їздпние живой вакцины из «горячего» штамма, способного преодолевать ітеринский иммунитет у цыплят, вызывать образование раннего ютвакцинального иммунитета и, тем самым, оказывать конкуренцию іісоковирулентньїм полевым штаммам.
В регионах с развитым птицеводством, где отсутствуют острые вспышки
болевания, для специфической профилактики ИББ необходимо использовать
1вые вакцины из «промежуточных» штаммов, имеющих наименьшие отличия
полевых штаммов, вызывающих субклиническую форму заболевания,
іиводящую в ряде случаев к иммунодепрессии.
Таким образом, разработка новых средств и методов диагностики и іецифической профилактики инфекционной бурсальной болезни является туальной проблемой и имеет важное народнохозяйственное значение.
1.2. Цель и задачи научных исследований. Главной целью следований являлась разработка и внедрение в ветеринарную практику рфективных средств и методов диагностики и специфической профилактики іфекционной бурсальной болезни.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие ідачи:
изучить эпизоотическую ситуацию по ИББ в России с 1990 по 1999 г.г.;
разработать стратегию и тактику борьбы с ИББ и на основе
экспериментальных исследований создать новые средства и методы
диагностики и специфической профилактики;
разработать метод индикации и штаммовой дифференциации вируса ИББ
и изучить с помощью методов молекулярной биологии генетические
взаимоотношения штаммов вируса ИББ с целью определения пригодности
полевых изолятов и музейных вакцинных штаммов для конструирования
живых вакцин против ИББ;
разработать экспресс-метод диагностики ИББ и создать набор для
определения наличия антител к вирусу ИББ методом иммуноферментного
анализа;
изыскать в естественных условиях полевой изолят вируса ИББ, пригодн
для создания живой вакцины против ИББ и провести его аттенуацию;
изучить иммунобиологические свойства вакцинных штаммов из коллекц
ВГНКИ и ВНИИЗЖ и селекционировать наиболее перспективные из ні
отвечающие современным требованиям к продуцентам профилактическ
биопрепаратов;
разработать технологические регламенты получения живых
инактивированной вакцин против ИББ, методы контроля качества вакцм
наставления по их применению;
изучить эффективность разработанных вакцин против ИББ
лабораторных и производственных условиях;
подготовить нормативно-техническую документацию на разработанні
биопрепараты и осуществить их промышленное производство;
внедрить в производство и широкую ветеринарную практк
диагностикумы и биопрепараты для специфической профилактики ИББ.
1.3. Научная новизна. С помощью разработанного метода штаммов дифференциации вируса ИББ на основе ПЦР и секвенирования исследоваї полевые изоляты и вакцинные штаммы вируса ИББ, выявлены генетическ группы штаммов, отличающиеся степенью антигенного родства, патогенності созданы новые профилактические препараты на основе близкородственн вакцинных штаммов.
Впервые в Российской Федерации выделен в естественных условк полевой изолят вируса ИББ, который подвергнут аттенуации и получ «горячий» вакцинный штамм «БГ» для промышленного изготовлен вирусвакцины сухой против инфекционной бурсальной болезни.
На основании эпизоотологических обследований, результат лабораторных экспериментов и данных молякулярно-биологическ исследований для производства живой вакцины против ИББ «промежуточного» штамма предложен вакцинный штамм «Винтерфилд 251« который имеет максимальное антигенное родство с полевыми изолятами виру ИББ.
Предложенные вакцинные штаммы «БГ» и «Винтерфилд 251 селекционированы, всесторонне изучены и депонированы в ВГНІ ветпрепаратов.
На основе вакцинных штаммов «БГ» и «Винтерфилд 2512» разработаї технологии изготовления живых вакцин против ИББ.
7 Научно обоснованы и экспериментально подтверждены иммунизирующие озы, способы введения и схемы применения живых вакцин против ИББ из ітаммов «БГ» и «Винтерфилд 2512».
Показано, что живая вакцина против ИББ из штамма «БГ» обладает ысокими защитными свойствами в неблагополучных птицехозяиствах, где ИББ ыла вызвана высоковирулентными штаммами, а живая вакцина из штамма Винтерфилд 2512» обеспечивала надежную защиту птиц при эофилактических вакцинациях в благополучных хозяйствах.
Для создания однородного и напряженного материнского иммунитета у зіплят впервые в Российской Федерации разработана инактивированная идкая сорбированная вакцина против ИББ для иммунизации ремонтного олодняка родительских стад. При изготовлении вакцины определены ттимальные условия получения вирусного сырья, отработаны методы очистки инактивации, обоснованы ингредиентный состав и методы контроля.
Новизна полученных результатов подтверждена тремя патентами на юбретения: «Штамм «БГ» вируса инфекционной бурсальной болезни птиц и жцина против инфекционной бурсальной болезни птиц», патент РФ №2127602 21.11.1997 г.; «Вакцина против'инфекционной бурсальной болезни птиц», ітєнт РФ № 2127604 от 14.04.1998 г.; «Инактивированная вакцина против Секционной бурсальной болезни птиц», патент РФ №2127603 от 23.02.1998 г. 1.4. Практическая значимость. Полученные результаты научных .следований легли в основу 34 нормативных документов, методик, инструкций, азаний и рекомендаций по диагностике, специфической профилактике и >рьбе с ИББ, которые одобрены ученым советом ВНИИЗЖ, утверждены іректором института или Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода эссии.
На основании проведенных исследований пазработаны и утверждены в тановленном порядке НТД на следующие биопрепараты, которые широко іедреньї в ветеринарную практику:
вирусвакцина сухая против ИББ из штамма «БГ», за период с 1994 по
1999 г.г. выпущено 2,2 млрд. доз вакцины;
вирусвакцина живая культуральная против ИББ из штамма «Винтерфилд
2512», за период с 1994 по 1999 г.г. выпущено 1,23 млрд. доз вакцины;
вакцина против ИББ жидкая сорбированная инактивированная, за период с
1994 по 1999 г.г. выпущено 33,5 млн. доз вакцины.
набор для определения антител к вирусу ИББ методе иммуноферментного анализа, за период с 1995 по 1999 г.г. выпущено 45J наборов ИФА;
набор для определения антител к вирусу ИББ иммуноферментны методом при тестировании сывороток в одном разведении, за 1999 выпущено 47 наборов ИФА.
1.5. Основные положения диссертационной работы, выносимые ь
защиту:
анализ и обобщение эпизоотических данных по ИББ в России; метод индикации и штаммовой дифференциации вируса ИББ на ochoe ПЦР и прямого секвенирования амплифицированных фрагментов кДНК; разработка и внедрение в ветеринарную практику набора дг определения антител к вирусу ИББ методом иммуноферментного анализ получение вакцинного штамма «БГ» путем аттенуации полевого изолята адаптации его к системе культивирования в СПФ-эмбрионах; разработка технологий изготовления и биологического контроля живых инактивированной вакцин против ИББ;
оценка иммуногенных и антигенных свойств живых вакцин против ИББ лабораторных и производственных условиях;
оценка иммуногенных и антигенных свойств инактивированной вакцик против ИББ и изучение иммунитета, передаваемого потомству; научное обоснование и экспериментальное подтверждение стратеп применения разработанных вакцин против ИББ и і противоэпизоотическая эффективность.
1.6. Апробация. Основные материалы диссертации доложены
обсуждены на Межрегиональных координационных совещаниях по проблел
«Ветеринарная практика в промышленном птицеводстве» и научно-практическі
конференциях-семинарах специалистов по птицеводству стран СНГ (Ломоносо
1996, 1997, 1998), на Всероссийских и Международных научно-практическі
конференциях (Владимир, 1995, 1998), на российско-американском симпозиул
«Проблемы инфекционной патологии птиц» (Санкт-Петербург, 1996), f
Международной конференции «Актуальные проблемы биотехнологии
растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (Москва, 1996), на >
Интернациональном конгрессе всемирной птицеводческой ассоциации (Венгри
Будапешт, 1997), на Международной конференции «Современные мето/:
9 офилактики инфекционных болезней птиц» (Киев, 1998), на 10-ой іропейской птицеводческой конференции (Израиль, 1998), на Всероссийской нференции «Производство и контроль медицинских и ветеринарных епаратов, опыт применения и реализация их в странах СНГ, посвященной 30-тию ФГУП ПЗБ (Вольгинский, Владимирской области, 1999), на Всероссийских зональных совещаниях-семинарах ветеринарных специалистов (Новосибирск, 96; Красноярск, 1997; Уфа, 1997; Казань 1998, 1999; Тюмень, 1999), на :ероссийских и зональных совещаниях-семинарах руководителей и главных теринарных специалистов птицехозяйств и объединений (Свердловск, 1995; іжний Новгород, 1996; Брянск 1997; Москва, 1998, 1999), на совещаниях-минарах директоров и главных специалистов производственно-научных стем «Свердловск», «Смена», «Можайское», «Сибирь», «Александровский», онкурсный» (1996, 1997, 1998, 1999), на совещаниях-семинарах ветеринарных ециалистов птицехозяйств Украины (Киев, 1998) и Белоруссии (Минск, 1998), а юке на заседаниях методического и ученого советов ВНИИЗЖ (1994-1999г.г.).
-
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 52 научные боты, в т.ч. получены 3 патента РФ на изобретения, утверждено в тановленном порядке 34 нормативных документа (технические условия, ставлення по применению, инструкции, методики, указания, рекомендации).
-
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 359 раницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных следований, выводов и практических предложений, содержит 59 таблиц и 23 сунка. Список использованной литературы включает 623 наименования, из х 71 отечественных и 552 зарубежных. В приьожении представлены копии кументов, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и актическую значимость.
В выполнении некоторых разделов диссертации принимали участие и азывали практическую и консультативную помощь А.А. Гусев, В.В. Дрыгин, А. Перевозчикова, Л.О. Щербакова, Н.С. Мудрак, Т.В. Оковытая, В.Н. знецов, Ю.В. Кузнецов, С.А. Гусев, З.Я. Михалишина, К.Ю. Федосеев, В.ІО. лаков, М.В. Гирин, В.В. Борисов, В.И. Смоленский, С.Н. Норкина, С.К. Старов, И. Ломакин, Г.В. Марков, О.А. Борисова, В.Н. Ирза, за что приносим им рдечную благодарность. Выражаем искреннюю признательность за помощь и м сотрудникам, которые перечислены в качестве соавторов в списке бликаций по теме.
Похожие диссертации на Разработка средств и методов диагностики и специфической профилактики инфекционной бурсальной болезни
