Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы
1. Характеристика инфекционного ринотрахеита-пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота (ИРТ КРС)
3. Распространение и особенности течения ИРТ КРС у латентно инфицированных быков-производителей
4. Применение ДНК-зондов для диагностики ИРТ КРС
- Характеристика инфекционного ринотрахеита-пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота (ИРТ КРС)
- Распространение и особенности течения ИРТ КРС у латентно инфицированных быков-производителей
- Применение ДНК-зондов для диагностики ИРТ КРС
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время меняется стратегия ведения животноводства. В этой связи очевидны и изменения в проявлении болезней животных, в том числе и вирусных респираторных.
Среди вирусных болезней крупного рогатого скота инфекционный ринотра-хеит (ИРТ КРС), вызываемый вирусом герпеса КРС 1-го типа, в последние годы занял ведущее место, являясь одним из этиологических агентов острых респираторных заболеваний молодняка КРС и гинекологической патологии у взрослых животных. Заболевание регистрируется во многих областях Российской Федерации и странах СНГ (П.А. Красочко, 1991; П.Н. Пыталев, 1996; А.И. Салимов, 1997; О.Г. Петрова и соавт., 1999; А.Г. Высокопоясный и соавт., 2000; Н.И. Закутский, 2000).
Эпизоотическая ситуация по ИРТ КРС осложнилась после завоза из-за рубежа в 90-е годы прошлого столетия на головные племпредприятия латентно инфицированных быков-производителей (А.Г. Глотов,1999). Такие быки представляют опасность в распространении заболевания (Е.В. Андреев и соавт., 1975, 1984; Г.Э. Фарботко и соавт., 1989; J.T. van Oirschot et al., 1995; G.Van Shaik, 1998).
Известно, что вирус ИРТ КРС способен размножаться в организме латентно инфицированных животных даже на фоне высоких титров вируснейтрализующих антител и контаминировать сперму быков-производителей (P.-P. Pastoret et al., 1985). Учитывая масштабы искусственного осеменения, заболевание распространилось в товарных и племенных хозяйствах. Распространению способствовала также слабая эффективность, а порой и отсутствие диагностических и профилактических мероприятий в этот период.
На многих племпредприятиях живых быков нет, но в условиях глубокой заморозки хранится полученная от них за годы эксплуатации сперма (Б.Г. Галлер, 2001).
Характер течения латентной формы инфекции у животных в нашей стране изучен слабо. Нет однозначной оценки методов контроля продаваемых племенных животных и спермы быков-производителей, недостаточно отработаны способы применения вакцин в зависимости от наличия латентной формы инфекции у животных. Практически нет данных о степени контаминации банков спермы, полученных от инфицированных быков и хранящихся на племпредприятиях в условиях глубокой заморозки.
В настоящее время наиболее чувствительными и специфичными для диагностики инфекционных заболеваний признаны методы, основанные на определении в материале нуклеиновых кислот, позволяющие значительно сократить время на постановку диагноза.
Такими качествами обладает разработанная в ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН совместно с НИИ биоинженерии ГНЦ ВБ «Вектор» тест-система для диагностики ИРТ КРС методом молекулярной гибридизации, в основе которой лежит однонитиевый биотинилированный ДНК-зонд.
Тест-система показала высокую эффективность в производственных условиях (А.Г. Глотов, 1999). НТД на нее утверждена Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 15.08.2001 г. №13-7-2/1551.
При помощи тест-системы можно проводить массовые диагностические обследования животных в короткие сроки, что важно для планирования и проведения оздоровительных и профилактических мероприятий.
Иммунодефицитные состояния у животных вторичной природы, в том числе вызванные вирусом ИРТ КРС, снижают эффективность вакцинации и способствуют реактивации латентного вируса и его периодическому выделению во внешнюю среду (D. Wiestan, 1991; L. A. Babiuk et al., 1996; L. Eskra et al., 1997). В связи с тем, что освободить макроорганизм от латентного вируса невозможно, большое значение приобретает возможность увеличения сроков ремиссии.
Для этой цели представляется эффективным использование биологически активных веществ, обладающих иммуномодулирующим действием для коррекции иммунологических нарушений и снижения частоты реактивации и выделения вируса (Ф.И. Ершов, 2000).
В последнее время в медицине и ветеринарии находит применение метод эндогенной интерферонизации с помощью различных индукторов, в том числе дрожжевой двуспиральной (дс-) РНК. На ее основе в НИКТИБАВ ГНЦ ВБ «Вектор» разработаны и применяются эффективные препараты, обладающие иммуно-модулирующими свойствами (В.И. Масычева и соавт., 2000).
Цель и задачи исследований. В связи с вышеизложенным целью работы являлось изучение особенностей течения латентной формы ИРТ у крупного рогатого скота и эффективности применения иммуномодуляторов.
Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:
-
Изучить распространение ИРТ КРС и определить степень контаминации банка спермы, полученной от латентно инфицированных быков за период эксплуатации, хранящейся в условиях глубокой заморозки на головных племпредприяти-ях Сибири. В лабораторных условиях изучить влияние сроков хранения в условиях глубокой заморозки на инфекционную активность вируса;
-
Изучить частоту выделения вируса ИРТ КРС со спермой инфицированных быков-производителей в естественных условиях и влияние на этот процесс иммунизации инактивированной вакциной против ИРТ КРС и времени года;
-
Изучить длительность выделения вируса ИРТ КРС у телят, переболевших острой формой заболевания;
-
Изучить иммуномодулирующее действие биологически активных веществ на организм латентно инфицированных животных;
Научная новизна. С помощью метода молекулярной гибридизации изучено распространение ИРТ КРС среди племенных быков головных племпредприятий Сибири.
Впервые изучена степень контаминации банков семени, полученной от инфицированных быков в различные годы.
Впервые изучено влияние времени года и иммунизации инактивированной вакциной против ИРТ КРС на частоту выделения вируса ИРТ КРС со спермой инфицированных быков-производителей.
Впервые изучено действие биологически активных веществ на организм латентно инфицированных вирусом ИРТ КРС животных.
Практическое значение. Материалы диссертации использованы при составлении:
Мероприятий по оздоровлению ФГУП Новосибирскгосплем от ИРТ КРС (утверждены начальником управления ветеринарии Новосибирской области 4.02.2000 г.);
Программы по профилактике и борьбе с ИРТ КРС в Алтайском крае (утверждена начальником управления ветеринарии 11.05.2000.);
-Методических рекомендаций «Вирусные заболевания крупного рогатого скота в Сибири и на Урале», утвержденных Ученым советом ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН (протокол №1 от 12 января 2001 г.) и подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока» отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (протокол №1 от 15 января 2001 г.).
-Наставления по диагностике ИРТ КРС методом молекулярной гибридизации, утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 15.08.2001 г. №13-7-2/1551.
Полученные результаты позволяют расширить научные представления о значении латентной формы инфекции в эпизоотологии заболевания, а также ее патогенезе у быков-производителей и могут быть использованы в практике при разработке оздоровительно-профилактических мероприятий.
Апробация работы. Материалы исследований доложены на научно-практической конференции молодых ученых (Барнаул, 1999); на научно-практической конференции (Новокузнецк, 2000); конференции молодых ученых СО РАСХН (Краснообск, 2000); научно-практической конференции (Иркутск, 2001).
Публикации. По теме диссертации опубликованы 11 печатных работ.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Результаты изучения распространения ИРТ КРС и определения степени контаминации банка спермы, полученной от инфицированных быков за период эксплуатации, хранящейся в условиях глубокой заморозки на четырех головных племпредприятиях Сибири.
-
Результаты изучения частоты выделения вируса ИРТ КРС со спермой инфицированных быков-производителей в естественных условиях и влияние на этот процесс времени года и иммунизации инактивированной вакциной;
-
Результаты изучения длительности выделения вируса ИРТ КРС с носовыми истечениями телят, переболевших острой формой заболевания.
-
Результаты изучения иммуномодулирующего действия биологически активных веществ на организм латентно инфицированных животных.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, приложения.
Работа иллюстрирована 10 рисунками и 15 таблицами. Список литературы включает 308 источников, в том числе 184 зарубежных.
Характеристика инфекционного ринотрахеита-пустулезного вульвовагинита крупного рогатого скота (ИРТ КРС)
Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота (ИРТ КРС); инфекционный пустулёзный вульвовагинит (ИПВ КРС); некротический ринот-рахеит; «красный нос»; пузырьковая сыпь; инфекционный катар верхних дыхательных путей – герпесвирусная инфекция, характеризующаяся многообразием клинических форм. Заболевание проявляется в виде поражений респираторного тракта, вульвовагинитов, маститов и абортов у коров, баланопо-ститов у быков, конъюнктивитов, менингоэнцефалитов, а также, в отдельных случаях, артритов, диарей и генерализованной инфекции у телят.
Первые сообщения об ИРТ КРС относятся к 50 годам ХХ столетия. Впервые это заболевание описали R.J.Schroeder и D.M. Moys (1954) в США (штат Калифорния). N.J. Myller (1954) опубликовал сообщение о подобном заболевании, установленном им в штате Колорадо в 1940 г. под названием «некротический ринотрахеит».
Инфекционный пустулёзный вульвовагинит (ИПВ КРС) официально регистрировался в Германии с 1909 г. (O.C. Stroub, 1978). Клиническую картину и инфекционный характер ИПВ КРС (под названием везикулярная сыпь) в Европе впервые описал Rohlwes в 1838 г (C. Niewohner 1990). Подобное заболевание описано в 1895 г Steddom (J.W. Kendrik et al.,1958) и свидетельствует о том, что ИПВ КРС существовал до ИРТ как в Европе, так и в США (О.С.Stroub, 1975).2001 L. Reisinger и H. Reiman в 1928 году доказали, что возбудитель ИПВ относится к фильтрующимся вирусам (N. Roers, 1990). В пятидесятых годах R.J. Schroder и D.M. Moys (1954) описали вспышку заболевания среди телят с поражением респираторного тракта на востоке США в откормочном хозяйстве, которое D.J. McKercher в 1955 г. охарактеризовал как инфекционный ри-нотрахеит. Годом позже вирус был выделен и идентифицирован в культуре клеток из носовых секретов больных респираторными заболеваниями телят (S.H. Madin et al 1956). C.J.York et al в 1957 г. также выделили вирус в культуре клеток и идентифицировали его как вирус ИРТ КРС. J.H. Gillespie et al 1959 г. доказали, что изоляты из половых органов животных способны вызывать поражения респираторного тракта телят, т.е. идентичность возбудителей ИРТ и ИПВ (Д.Г. Мак Керчер,1970).
Таким образом было доказано, что оба эти клинические проявления заболевания, обозначаемого как ИРТ-ИПВ КРС (в дальнейшем – ИРТ КРС), вызываются одним этиологическим агентом, известным в данное время как «Bovine Herpes Virus-1; BHV-1» (H. Ludwig , 1984).
По данным многих авторов ИРТ и ИПВ редко встречаются в одном стаде в одно и то же время. Большинство из них полагают, что вирус ИРТ произошел от вируса ИПВ в США, а позднее в Европе, в результате определенных крупных изменений в системе содержания крупного рогатого скота, таких, как скопление большого числа животных на откорм площадках (O.C. Stroub, 1978, 1984; H. Ludwig, 1983).
В настоящее время заболевание регистрируется во многих странах мира (O.C. Stroub, 1978, 1992; R. Gvert, 1991; Lyaku J.R.S., 1991; A. Salwa, 1991; L. Lowato et al. 1995; G.J. Renukaradhya et al., 1996; G. Castrucci et al., 1997; B. Nylin et al., 1998).
В нашей стране заболевание, сходное с ИРТ КРС по клиническим и патолого-анатомическим признакам, наблюдал Ф.М. Пономаренко в 1938 г. у группы телят, находившихся на откорме, и описал его в 1940 г. под названием «инфекционный катар верхних дыхательных путей» (Ф.М. Пономаренко, 1940, 1950).
Вирус впервые в СССР был выделен в 1969 г. Н.Н. Крюковым от больных телят в Тамбовской области. В этой же области впоследствии от те 12
лят были выделены еще несколько штаммов вируса (Г.Ф. Иванова, 1970; А.Д. Майборода, Н.Н. Крюков, 1971; Н.Н. Крюков, 1972; Ю.В. Фомин, 1974).
Заболевание получило широкое распространение на территории нашей страны и в настоящее время регистрируется во многих субъектах Российской Федерации, а также странах СНГ (Е.В. Андреев, 1974; Н.М. Коннов и соавт., 1981; К.Н. Кондрахина и соавт., 1984; О.И. Сухарев, 1988; Э. Айвер, 1988; А.С. Нужнов, 1989; Н.Н. Гизитдинов, 1990; П.А. Красочко, 1991; А.И. Салимов, 1997; О.Г. Петрова, 1999; А.Г. Высокопоясный и соавт.,1999, 2000; И. П. Иванова, П. А. Красочко, 2000; Н.И. Закутский, 2000).
В период 1976-1980 гг. заболеваемость инфекционным ринотрахеитом в России составляла 1,35% в структуре всех инфекционных болезней крупного рогатого скота, а в 1986-90 гг. 3,36% (П.Н. Пыталев, 1996).
Н.И. Закутский и соавт. (1998), проанализировали данные Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ по ИРТ КРС, и пришли к выводу, что на протяжении последних 10 лет заболевание регистрируется во многих регионах России, что свидетельствует о сложившейся напряженной эпизоотической ситуации. Результаты анализа показали, что частота выявления ИРТ КРС в различных экономических регионах России на протяжении 1988-1996 гг. была неодинакова. Наибольшее распространение заболевания отмечено в Центральном, Волго-Вятском и Уральском экономических районах. Напряженной остается ситуация в Центрально-Чернозёмном, Поволжском и Западно-Сибирском регионах. Наблюдается тенденция распространения ИРТ КРС в районы Восточной Сибири и Дальнего Востока.
В регионе Урала и Сибири в 1993 – 1996 гг. количество острых вспышек ИРТ среди телят сократилось, причем практически во всех типах хозяйств, но после 1996 г. их число вновь стало нарастать на фоне увеличения числа серонегативных животных. Одновременно отмечается формирование стационарных очагов болезни с длительной персистенцией возбудителя в закрытых стадах (А.Г. Глотов и соавт., 2002; О.Г. Петрова и соавт., 2002). Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота впервые зарегистри -рован в Сибири в 1989 г. Вирус был выделен от телят откормочного комплекса в Новосибирской области (А.Г. Глотов, 1990). В последующие годы от больных животных из различных областей Сибири (телята, коровы, быки-производители ) выделили еще 11 изолятов (А.Г. Глотов, 1999).
Многие исследователи считают, что возбудитель заносится в восприимчивое стадо с закупаемыми животными-вирусоносителями (H.R. Frey et al., 1974; Х. Харламбиев и соавт., 1974; Е.В. Андреев, 1975, 1977; Н.Н. Крюков, 1980; V. Bitcsh, 1978; P.-P. Pastoret et al., 1978; K. Bauer, 1980; P.-P. Pasoret et al., 1980b; P.-P. Pastoret et al., 1982; V. Bitsch, 1984; P. Passelegue et al.,1991; C.K. Fong et al., 1992; S. Klimentowski, 1994).
Б. Пурэвцэрэн (1989) при первичном исследовании 22 животноводческих хозяйств в Монголии выявил в среднем 35,8 % серопозитивных животных. У аборигенного скота, не имевшего контактов со скотом госхозов, антител к вирусу ИРТ КРС не было выявлено.
Распространение и особенности течения ИРТ КРС у латентно инфицированных быков-производителей
Первичная репликация вируса наблюдается в месте его проникновения. Дальнейшее развитие заболевания связано с генерализацией инфекции. Генерализация осуществляется тремя различными путями: вирусемией, невраль-ным распространением и пассированием вируса от клетки к клетке через межклеточные мостики, избегая тем самым воздействия антител (L.A. Babiuk et al, 1979; P.-P. Pastoret, 1985). Последний тип распространения, возможно, важен для размножения вируса после реактивации из латентного состояния. Это объясняет, почему вирус может диссеминировать в присутствии высоких титров антител (P.-P. Pastoret et al., 1982; C. Schroder et al., 1999).
Вирусемия может быть кратковременной после первичной инфекции и продолжаться до появления антител, а также при рецидивах. Ею можно объяснить заражение и гибель плода, так как вирус может преодолевать плацентарный барьер, а также редкие случаи энцефалита (W.D.G. Yates, 1982; P.- P. Pastoret et al, 1982).
При невральном распространении вирус, интенсивно размножающийся в месте первичного проникновения, контаминирует периферические нервы и достигает центральной нервной системы. В этом случае могут быть энцефалиты. При интраназальном и интравагинальном введении вируса инфекция развивалась нервным путём, и распространение его было сходным за исключением различий в локализации в нервной системе. При интравагинальном введении вирус обнаруживали в головном и спинном мозге, а при интрана-зальном – только в головном (P.-P. Pastoret et al, 1982).
Как правило после острого заболевания устанавливается латентная форма с персистенцией вируса в нервных ганглиях вблизи места первичного размножения: тройничном при респираторной и сакральном - при половой форме (M. Narita et al., 1978; J. Espinasse, 1978; P. Thein, 1980; C.R. Rossi et al., 1982a,b; M. Ackerman et al., 1984; E. Dahme, 1984; E. Gimeno et al., 1990; F. Tolari et al, 1990; A. Hossain et al., 1995; J.A. Galeota et al., 1997; L.V. Shang et al., 1997). Помимо этого латенция может поддерживаться также в лимфоид-ных и эпителиальных клетках респираторного тракта ( P.-P. Pastoret et al., 1980).
При латентной форме инфекции нет полного цикла репродукции вируса в организме. Размножение его прерывается после репликации вирусной ДНК или на уровне синтеза отдельных белков, когда при персистенции образуются инфекционные вирусные частицы, но инфицированные ими клетки не разрушаются (В.А. Зуев, 1979; L.A. Babiuk, B.T. Rouse, 1979; B.L. Barron, N. Vales, 1991; O.R. Kaaden, 1992). Вирус ИРТ представлен в данном случае ДНК- копиями, интегрированными с ДНК клетки-хозяина (B. Roisman, 1983; H. Ludwig, 1983; E. Dahme, 1984; B.W.J. Mahy, 1985; Ludwig et al., 1986; D.L. Rock et al., 1987; W. Hammerschmidt et al., 1990; G. Delhon et al., 1997).
Определённые эндо- и экзогенные факторы могут демаскировать вирус время от времени и он может выделяться во внешнюю среду через первично инфицированный орган (C.R.Rossi et al, 1982). Вирус может реактивироваться спонтанно (P.-P. Pastoret et al., 1982; H.R. Frey, 1983), не теряя при этом своей патогенности (G. Castrucci et al.,1984; E. Dahme, 1984). В естественных условиях к вирусу ИРТ КРС восприимчив крупный рогатый скот всех пород и возрастов. У молодняка заболевание протекает тяжелее, чем у взрослых животных, у мясного скота тяжелее, чем у молочного.
ИРТ КРС характеризуется высокой контагиозностью, заболеваемость может составлять от 15-50% до 100%. Летальность при удовлетворительных условиях кормления и содержания не высокая (2-15%), но если болезнь осложняется секундарной микрофлорой или протекает с поражением центральной нервной системы, то гибель животных может достигать 50-100% (Н.Н. Крюков, 1971, 1972, 1980; О.И. Сухарев и соавт., 1981; В.И. Науменков, 1994; A. Wiseman, 1979; E.B. Belknap et al., 1994; L.A. Bryan et al., 1994; S.K. Tikoo et al., 1995; C. Raggo, 1997).
Значительное влияние на возникновение и течение ИРТ КРС оказывают неблагоприятные факторы внешней среды (O.C. Stroub, 1975, 1978; Н.Н. Крюков, 1980, 1984).
У телят заболевание проявляется чаще в респираторной форме. При этом отмечают различной формы воспаление носовой полости, трахеи с образованием дифтеритических наложений и язв, катаральную, реже крупозную пневмонию (Усова Н., 1980; G. Bracca, 1979; E. Allan et al., 1980; W.D.G.Yates, 1984; Н.Н. Крюков и соавт., 1984; Е.В. Андреев, 1984; K.W.F. Jericho et al., 1986). У новорожденных, заразившихся внутриутробно, болезнь протекает в виде вирусемии с некротическими поражениями внутренних органов и, возможно, выраженного гастроэнтерита ( R. Miller et al., 1978). У молодых животных отмечаются менингоэнцефалиты ( L.A.V. Jonston et al., 1962; D.W. Blanch et al., 1972; B.E. Beck, 1975; Г.П. Демкин с соавт., 1979;R. Weiblen et al., 1990; A.S. Mweene et al., 1996; S. Roels et al., 2000 ).
У взрослого крупного рогатого скота заболевание чаще протекает в половой форме. У быков ИРТ КРС приводит к снижению количества и качества спермы, баланопоститам, орхитам (V. Bitsch, 1973, 1978; E.P.J. Gibbs, M.M. Rweyemamu, 1977, Е.В. Андреев, 1977; В.Н. Трефилов, 1979; Н. Коннов и соавт., 1980; O.C. Stroub et al., 1984; О.Д. Дудник, 1987; Г.Д. Святовец , 1988; П. Чечеткина, 1990; W. Deptula, 1992; van Schaik G. et al., 1998). У коров регистрируют аборты (до 20% от общего поголовья), метриты, эндометриты, яловость, воспаление яичников, снижение массы тела и удоев (J.W. Kendrick et. al, 1958; H. Kohler and C. Kubin, 1972; K. Loretu et al., 1974; M. Eleshary et al., 1980; U. Probst et al., 1985; O.C.Stroub et al., 1984; Van Der Maaten et al., 1985; A. Theodoridis, 1985; J.M. Miller et al., 1985, 1986, 1987, 1988; З.С. Засадная, 1989; P.C. Smith, 1990; J.J. Hage, et al., 1996; H.J. Rziha, 1997; B. Nylin et al., 1998; G.Van Schaik, et al., 1998 ; Vonk Noordegraaf, 1998).
Применение ДНК-зондов для диагностики ИРТ КРС
После внесения индикаторного вируса и титрования его дозы культуру клеток инкубировали 2 суток в термостате под контролем дозы вируса.
За титр интерферона принимали величину, обратную разведению сыворотки, при котором клеточная культура в 50 % лунок оказалась полностью защищенной от цитопатического действия вируса и пересчитывали по формуле: Х МЕ/мл. = Титр образца х активность ОСО/ титр ОСО, где ОСО – стандартный образец. Молекулярная гибридизация. В качестве образцов исследовали пробы спермы рабочих и выбракованных ранее быков-производителей, которые получали из хранилищ племпредприятий, а также в обследуемых хозяйствах области.
Кроме того исследовали пробы носовых истечений телят, маточных и вагинальных истечений коров, пробы внутренних органов абортплодов и телят различного возраста.
Выделение ДНК и постановку метода молекулярной гибридизации проводили в соответствии с «Наставлением по применению тест-системы для диагностики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота методом молекулярной гибридизации», утвержденной Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ от 15.08.2001 г. №13-7-2/1551.
При изучении эпизоотической ситуации на племпредприятиях использовали следующий принцип отбора проб спермы: от выявленных нами в качестве инфицированных рабочих и выбракованных ранее быков серии спермы, полу 35
ченные в течение месяца, объединяли и исследовали как одну пробу. При отборе проб исходили из остатка запасов спермы, хранящейся на племпредприя-тиях на момент проведения исследований.
На ФГУП «Барнаульское» исследовали 1453 серий семени из хранилища от 325 быков, в том числе в динамике 1026 серий от выявленных нами 62 инфицированных быков с 1982 по 1999 гг.
На ФГУП «Красноярское» в результате предварительного серологического обследования 66 живых быков-производителей у 28 животных (42 %) выявили вируснейтрализующие антитела к вирусу ИРТ КРС. В дальнейшем исследовали 418 серий из банка спермы, полученной от быков в течение срока эксплуатации с 1997 по 2001 гг.
На ФГУП «Новосибирскгосплем» исследовали 689 серий спермы от 73 быков, привитых инактивированной вакциной против ИРТ КРС.
Всего отобрали и исследовали методо м молекулярной гибридизации 2560 проб спермы.
На ФГУП «Хакасское» проводили только серологические исследования проб сыворотки крови от 116 быков-производителей. В результате выявили 29 быков, реагирующих положительно на ИРТ КРС.
Индекс сезонности колебания количества контаминированной вирусом ИРТ КРС спермы и коэффициент корреляции рассчитывали по М.Г. Таршис (1975).
Опыты на животных. В контролируемых опытах использовали 12 быков-производителей, принадлежащих ФГУП «Барнаульское», из них 8 были латентно инфицированы вирусом ИРТ КРС, а 4 здоровых служили контролем. Использовали также 40 телят 1-4 месячного возраста, принадлежащих АОЗТ «Ужанихинское» Чулымского района Новосибирской области.
Препараты группы вестина (комплекс А и В), дозы и схемы их применения в опыте на латентно инфицированных быках были любезно предоставлены проф. Ю.С. Аликиным. Схема применения препаратов в опытах на телятах была выбрана с учетом данных Г.А. Ноздрина (1996) и Ю.С. Аликина (1998) .
Для определения иммуностимулирующего действия изучаемых препаратов у опытных животных отбирали пробы сыворотки крови, а также пробы спермы от быков и носовых истечений от телят до и в различные сроки после введения иммуномодуляторов. Эффективность действия препаратов оценивали по их влиянию на частоту выделения вируса со спермой быков или носовыми истечениями у телят, титрам вируснейтрализующих антител и сывороточного интерферона.
Биохимические исследования. Биохимические исследования сыворотки крови проводили совместно с сотрудниками лаборатории лейкоза ГНУ ИЭВСиДВ СО РАСХН с использованием спектроанализатора «Инфрапид – 61».
Математические расчеты. Достоверность результатов подтверждали путем статистической обработки и определения различий средних значений с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при Р 0,05.
Для обработки полученных данных использовали программу «Microsoft Excel», входящую в пакет программ «Microsoft Office 7.0».
Индекс сезонности выделения вируса ИРТ КРС со спермой инфицированных быков-производителей рассч итывали по Таршису М.Г . (1975), что позволило нейтрализовать случайные колебания и определить сезонность за анализируемый период. Первоначально рассчитывали процент положительных проб спермы за месяц. Для этого выявленные за месяц положительные пробы делили на общее количество исследованных проб за год и умножали на 100%. Затем определяли помесячное среднее за каждый месяц на протяжении анализируемого периода и среднемесячный уровень за весь период в целом. Индекс сезонности определяется как отношение помесячных средних к среднемесячному за весь период (в процентах).
Схемы проведения опытов и методики исследований приведены по мере изложения материалов собственных исследований в начале соответствующих подразделов.
Автор выражает благодарность за помощь в выполнении некоторы х разделов диссертации сотрудникам лаборатории биотехнологии (Глотовой Т.И., Шапченковой Т.В., Котеневой С.В.) и лаборатории лейкозов ( Итесю Ю.В.) ГНУ ИЭВС и ДВ СО РАСХН.
