Введение к работе
Актуальность темы. Вирус иммунодефицита крупного рогатого скота (вирус бычьего иммунодефицита, ВБИ) относится к семейству Retroviridae и роду Lentivirus, который включает также вирусы иммунодефицита человека, кошек, обезьян, вирус инфекционной анемии лошадей, вирусы артрита - энцефалита коз и мэди-висна овец (Van Regenmortel et al 2000). Особое' внимание к вирусу бычьего иммунодефицита вызвано его филогенетической близостью к вирусу иммунодефицита человека-1 (ВИЧ-1), что позволяет использовать ВБИ в качестве удобной модели для изучения иммунодефицитных состояний животных и человека.
Впервые ВБИ был выделен из крови коровы с повышенным лимфоцитозом, прогрессирующей слабостью и истощением (Van der Maaten et al 1972). При экспериментальном заражении телят у них появлялись противовирусные антитела и развивалась гиперплазия лимфатических узлов. Вирус бычьего иммунодефицита, встречается во многих странах мира и часто сопутствует другой ретровирусной инфекции, вызываемой вирусом бычьего лейкоза (ВБЛ) (Carpenter et al 1992, Meas et al 2003, Usui et al 2003, Snider et al 2003).
Работы, посвященные изучению ВБЛ, начали появляться в 70-х годах, сразу после доказательства вируснойприроды лейкоза, КРС. К настоящему моменту изучена природа возбудителя, степень распространенности вируса в стадах разных стран, созданы системы диагностики и разработаны рекомендации по оздоровлению хозяйств (Гулюкин и др. 2005, Бурба, Шишков и др. 1985, 1992). Имеются только отдельные сообщения о выявлении ВБИ на территории Российской/Федерации, что не позволяет сделать объективные выводы о степени его распространения в популяции крупного рогатого скота (Колотвин В.В. и др. 2006, Федоров, Верховский 1996). В тоже время процент инфицированное животных в скотоводческих хозяйствах разных стран достигает 33%, на основании чего можно сделать вывод о широком распространении. ВБИ (Scobie, Venables, Sayers et al 2001). Получение информации о циркуляции вирусов в популяциях домашних животных. является достаточно важным для обеспечения здоровья КРС и безопасности продуктов питания.
Воздействие вируса бычьего иммунодефицита на организм КРС
недостаточно изучено, а воспроизведение инфекции на естественном
хозяине требует значительных материальных затрат. В связи, с чем
возникает потребность в удобной, чувствительной к экспериментальному
заражению ВБИ лабораторной модели. t. ..
Цель и задачи исследования. В связи с вышеизложенным целью нашей работы является разработка лабораторной (экспериментальной)
модели для воспроизваения инфгкционного процесса вируса бычьего иммунодефицита.
Для достижения уюзанной целн необходимо было решить следующие задачи:
-разработка и оптшизация ПЦР тест-системы для индикации провируса ВБИ;
-изучить степень рспространенности ВБИ в различных хозяйствах Российской Федерации;
- получить инфекциошый вирус бычьего иммунодефицита;
-изучить динами;у инфекционного процесса ВБИ на
экспериментально зараженных лабораторных животных;
-определить локали:ацию провируа вируса иммунодефицита КРС в органах и тканях экспериментально зараженных лабораторных животных; -изучить патологошатомические и гистологические изменения экспериментально инфицированных ВБМ животных.
Научная новизна. Установлена чувствительность кроликов к ВБИ при экспериментальном заражении. Показано, что патоморфологические изменения у ВБК-инфицированных кроликов характеризуются спленомегалией и сражением легких. Гистологические изменения проявляются дистрофическими изменениями во всех системах органов и пролиферацией лилфоидных элементов. Установлена локализация провируса вируса бычьего иммунодефицита в тканях и органах инфицированных жиютных. Подобраны видоспецифичные праймеры для идентификации ДНК провируса ВБИ. Проведено исследование крови крупного рогатого <кота из нескольких животноводческих хозяйств на содержание провир)сной ДНК.
Практическая значимость. Установлено, что кроликов можно использовать в качестве лабораторной модели для изучения инфекционного прцесса ВБИ. Получена перевиваемая линия клеток легкого эмбриона коровы (FBL), продуцирующая инфекционный вирус бычьего иммунодгфицита. Разработанная тест-система способна выявлять провирусную ДЖ у естественно инфицированных животных и эксперименталью зараженных кроликов. Материалы диссертационной работы исполоуются в учебном процессе. Результаты работы использованы \пя составления учебно-методического пособия для слушателей ветіринарно-санитарного факультета по курсу «Ветеринарная вирусология» го специальностям 110500, 110501 и 110502, утвержденные советом по издітельской деятельности МГУПБ.
Основные положения, выносимые на защиту:
- патоморфоюгические изменения у ВБИ-инфицированных кроликов;
-локализация провируса вируса бычьего иммунодефицита в органах и тканях инфицированных животных;
-получение перевиваемой линии клеток легкого эмбриона коровы (FBL), пригодной для размножения ВБИ;
- создание видоспецифических праймеров для выявления провирусной
ДНК ВБИ методом ПЦР;
-исследование проб крови крупного рогатого скота из различных хозяйств РФ на содержание провирусной ДНК ВБИ методом ПЦР;
- обнаружение инфекции вызываемой ВБИ в хозяйствах РФ.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены
и обсуждены на VII Международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2008г), II Международной научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2008г), VI Международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2007г), заседаниях ученого совета ГОУ ВПО МГУПБ в 2008-2009гг.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы.
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, вывода и практических предложений, приложения и списка литературы, включающий 149 источников. Работа содержит 8 таблиц, 17 фотографий и 16 рисунков.
