Содержание к диссертации
Стр.
Введение 4
1. Обзор литературы 8
Общая характеристика грибов рода Malassezia Baillon 8
Грибы рода Malassezia как представители нормальной микобиоты кожного покрова животных 10
Грибы рода Malassezia как возбудители инфекционных заболеваний животных 13
Патогенез Malassezia-инфекций 14
Клинические формы Malassezia-инфекций животных 25
Видовой состав возбудителей Malassezia-инфекций
и их распространенность у животных различных видов 28
1.4. Питательные потребности грибов рода Malassezia и
условия для их культивирования 32
1.5. Методы диагностики Malassezia-инфекций животных 35
Видовая идентификация и биологические особенности 37
Цитологические и культуральные методы диагностики 40
1.6. Заключение к обзору литературы 49
2. Собственные исследования
Материалы и методы исследований 50
Результаты исследований 61
2.2.1. Разработка алгоритма диагностики Malassezia-инфекций
животных 61
Сравнительная оценка методов выявления грибов рода Malassezia на покровных тканях животных 61
Изучение частоты встречаемости и плотности популяции грибов рода Malassezia в слуховом канале клинически здоровых животных 69
2.2.1.3. Изучение частоты встречаемости и плотности популяции
грибов рода Malassezia в слуховом канале животных с
проявлениями отитов 71
2.2.2. Изучение клинико-эпизоотологических особенностей
Malassezia-инфекций домашних животных в Московском регионе 74
2.2.2.1. Изучение распространенности и этиологической
структуры Malassezia-инфекций среди собак и кошек 74
Выявление наиболее характерных клинических особенностей (клинических предикторов) Malassezia-инфекций 80
Изучение эпизоотологических особенностей Malassezia-отитов у собак 85
Изучение факторов, предрасполагающих к возникновению Malassezia-отитов у собак 88
2.2.3. Изучение биологических свойств возбудителей Malassezia-
инфекций животных 90
Изучение культуральных и морфологических свойств 90
Изучение цитоморфологических свойств 98
Ферментативные и ассимилятивные свойства 100
Изучение чувствительности к антифунгальным препаратам.... 102
Изучение вирулентных свойств 103
2.2.4. Изучение условий поддержания и хранения культур
М. pachydermatis в лабораторных условиях 109
Обсуждение результатов исследований 113
В ыводы 124
Практическое использование полученных результатов 125
Рекомендации по использованию научных выводов 126
Список использованной литературы 127
Приложения 144
Введение к работе
Актуальность работы
Инфекции, вызываемые дрожжевыми грибами, в последние годы стали одним из приоритетных вопросов ветеринарной микологии. Возрастает их распространенность среди домашних животных, выявляются новые этиологические агенты, однако вопросы диагностики, терапии и профилактики дрожжевых инфекций животных остаются недостаточно изученными.
Заболевания, вызываемые дрожжевыми грибами, известны с глубокой древности. Их описание встречается уже у Гиппократа (5 век до н.э.). Роль дрожжевых грибов в этиологии инфекционных заболеваний («молочницы») была впервые продемонстрирована Langenbeck в 1839 г., и впоследствии подтверждена Berg и Graby [15].
Термин «дрожжи» является собирательным; он объединяет виды грибов, не образующие мицелий, имеющие одноклеточное строение и размножающиеся в вегетативной стадии почкованием или делением. Таксономически дрожжи относятся к отделам Ascomycota и Basidiomycota. К настоящему времени известно 7 родов дрожжевых грибов, представители которых способны вызывать инфекционные заболевания человека и животных: Candida, Trichosporon, Cryptococcus, Saccharomyces, Geotrichum, Rhodotorula, Malassezia.
У животных дрожжевые грибы способны вызывать патологии различной формы - заболевания мочеполового тракта, в т.ч. приводящие к абортам у самок и бесплодию у самцов, маститы, заболевания пищеварительного тракта (стоматиты, гастриты, энтериты), поражения внутренних органов, а также кожные поражения и заболевания органов слуха [50].
Особенно проблема дрожжевых инфекций обострилась в последние 2 десятилетия. Начиная с 1980-х гг., в литературе стали появляться сообщения о возрастающем количестве дрожжевых инфекций в медицинской практике. Были описаны патогенные свойства у ряда видов грибов, ранее считавшихся
сапротрофными [93]. В последние годы самое пристальное внимание как медицинскими, так и ветеринарными микологами уделяется заболеваниям человека и животных, вызываемым дрожжевыми грибами рода Malassezia [126, 80,]. У людей эти микроорганизмы вызывают ряд кожных заболеваний («пестрый лишай», себорейный дерматит, фолликулиты, расстройства пигментации), а также системные микозы у лиц с ослабленным иммунным статусом. У животных дрожжи рода Malassezia являются причиной широко распространенных инфекционных дерматитов, отитов, заболеваний органов ЖКТ и органов зрения, участвуют в патогенезе атопического дерматита. Начиная с 1990-хх гг., Malassezia-инфекции de facto рассматриваются в ветеринарии как отдельная нозологическая единица, приобретающая все большее клиническое значение [63].
Таким образом, актуальность исследования обусловлена необходимостью изучения этиологической структуры, распространенности и клинико-эпизоотологических особенностей Malassezia-инфекции животных, что может быть достигнуто путем создания эффективного метода лабораторной диагностики данных заболеваний.
Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы изучение этиологической значимости грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях мелких домашних животных, оценка распространенности и этиологической структуры малассезиозов в Московском регионе и разработка рациональной схемы диагностики этих заболеваний.
Для достижения цели необходимо было решить следующие задачи:
Разработать оптимальный алгоритм выявления и количественного учета грибов рода Malassezia на покровных тканях животных.
В сравнительном аспекте изучить частоту всречаемости и плотность популяции грибов рода Malassezia в слуховом канале здоровых животных и больных острыми и хроническими отитами.
3. Изучить распространенность и этиологическую структуру Malassezia-
инфекций среди мелких домашних животных Московского региона.
4. Изучить клинические формы и предрасполагающие факторы
Malassezia-инфекций мелких домашних животных.
Выделить культуры возбудителей Malassezia-инфекций животных и изучить их биологические свойств (морфологические, физиологические, вирулентные).
Определить оптимальные условия поддержания и хранения культур грибов рода Malassezia.
Научная новизна. Впервые разработан алгоритм выявления грибов рода Malassezia на покровных тканях животных.
Впервые получены количественные данные об изменении частоты встречаемости и плотности популяции грибов рода Malassezia в слуховом канале здоровых животных и больных острыми и хроническими отитами, что демонстрирует роль этих микроорганизмов в патогенезе хронических отитов.
Впервые в РФ получены данные о широкой распространенности Malassezia-инфекций среди мелких домашних животных, систематизированы их клинические формы, выявлены предрасполагающие факторы.
Показано, что основным возбудителем Malassezia-инфекций мелких домашних животных в РФ является вид М. pachydermatis.
Впервые выделена чистая культура эпизоотических штаммов возбудителя, охарактеризованы их морфологические, физиологические и вирулентные свойства.
Впервые был воспроизведен экспериментальный Malassezia-дерматит при накожном заражении собак. Практическая значимость.
Паспортизированы этиологические штаммы М. pachydermatis №№:12803, 15003, 15503, 16103, 16903 ВГНКИ, которые хранятся в отделе
контроля качества и стандартизации лекарственных средств против микозов и микотоксикозов животных ФГУ ВГНКИ.
Разработан алгоритм, выявления грибов рода Malassezia на покровных тканях животных, одобренный на межлабораторном совещании ФГУ ВПЖИ 05.07.2007 г. и рекомендован к утверждению на Федеральном уровне.
Разработан метод диагностики поверхностных микозов животных апробированный в условиях ветеринарных клиник Москвы, Казани и других городов РФ.
В опытах на лабораторных животных при экспериментальном заражении собак изучен патогенез поверхностных микозов, вызванных этиологическими штаммами М. pachydermatis, дана оценка влияния М. pachydermatis на обменные и иммунные процессы организма животных.
Разработаны и утверждены в установленном порядке методические указания по диагностике микозов животных, вызываемых грибами рода Malassezia, которые позволяют рационализировать микологический анализ кожного покрова и слухового канала животных.
Результаты исследований используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГУПБ, ФГОУ ВПО РУДН, ФГОУ ВПО УГАВМ, ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплинам: «Микробиология», «Биология и патология мелких домашних, лабораторных и экзотических животных».
Апробация результатов исследований. Материалы исследований изложены на заседаниях Учёного совета, методических комиссиях ФГУ ВГНКИ (2002-2005); Международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных» (г. Владимир, 2004); Всероссийской конференции «Лекарственные средства для животных и корма. Современное состояние и перспективы» (г. Москва, 2004); IV Всероссийском конгрессе по медицинской микологии (г. Москва, 2005)
Основные положения и результаты работы, выносимые на защиту:
Результаты изучения клинической роли грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных.
Метод лабораторной диагностики Malassezia-инфекций домашних животных.
Результаты изучения распространенности, этиологической структуры, клинико-эпизоотологических особенностей Malassezia-инфекций домашних животных.
Публикации результатов исследований. Основные результаты исследований опубликованы в 7 научных работах, в т.ч. 1 статья в научном журнале, 6 - в сборниках научных трудов.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 165 листах машинописного текста и включает такие разделы, как введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов исследований, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (171 источник в т.ч. 161 иностранный) и приложения. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 49 рисунками.
