Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Механизмы иммунологической защиты и оценка иммунного статуса у новорожденных 9
1.2. Желудочно-кишечные болезни у телят: этиологическая структура, терапия и профилактика 16
1.3. Влияние препаратов озона на физиологическое состояние организма 22
1.4. Рефлексотерапия, как метод воздействия на иммунную систему 29
2. Собственные исследования
2.1 Материалы и методы 34
2.2. Результаты исследований 39
2.2.1. Этиология желудочно-кишечных болезней новорожденных телят 39
2.2.2. Иммунный статус телят при желудочно-кишечных болезнях 44
2.2.3. Иммуномодулирующая активность квациклина при вторичном иммунодефицитном состоянии у телят 45
2.2.4. Влияние квациклина на эффективность вакцинации стельных коров против ротавирусного энтерита 51
2.2.5. Влияние квациклина на эффективность вакцинации стельных коров против коронавирусного энтерита 61
2.2.6. Влияние озонидов на естественную резистентность коров и сохранность телят 72
2.2.7. Влияние озонопунктуры на гуморальные и клеточные факторы естественной резистентности у коров и устойчивость телят к желудочно-кишечным болезням 77
2.2.8. Влияние озонидов на иммунный статус и биохимические показатели крови у новорожденных телят з
2.2.9. Рефлексотерапия (фармако- и лазеропунктура), как метод стимуляции организма 91
2.2.10. Терапевтическая эффективность квациклина и глюкофура при желудочно-кишечных болезнях у новорожденных телят 96
2.2.11. Терапевтическая эффективность квациклина и глюкофурацидапри желудочно-кишечных болезнях у телят 103
3. Заключение
4. Выводы 121
5. Практические предложения 124
6. Список использованной литературы 125
- Желудочно-кишечные болезни у телят: этиологическая структура, терапия и профилактика
- Рефлексотерапия, как метод воздействия на иммунную систему
- Иммуномодулирующая активность квациклина при вторичном иммунодефицитном состоянии у телят
- Рефлексотерапия (фармако- и лазеропунктура), как метод стимуляции организма
Желудочно-кишечные болезни у телят: этиологическая структура, терапия и профилактика
Современные задачи научной и практической ветеринарной медицины требуют более широкого внедрения высокоэффективных средств терапии и профилактики болезней животных, воздействующих на неспецифические и специфические механизмы защиты организма. В последние годы значительный интерес специалистов в этой связи привлекают озонотерапия и озонопрофилактика.
Первые сведения об озоне появились еще в 18 веке, когда было замечено, что электрическая искра в закрытом объеме воздуха вызывает объемную компрессию. Подвергнув кислород электрическому разряду, "появляется запах электрического вещества" с ускорением окисления ртути. В 1840 году C.Schonbein повторил эти эксперименты и сделал заключение, что, возникающий при этом запах, связан с наличием газа, который он назвал "озон" (от греческого - пахучий) и описал некоторые его свойства. Было показано, что озон является аллотропной формой кислорода и прояснили его молекулярную структуру. Значительно позднее было обнаружено, что озон окисляет ряд органических соединений и реагирует с двойными связями. В силу своей способности разрушать токсины, вредные промышленные отходы и бактерии, уже в 1901 году озон впервые был использован для очистки сточных вод. A.Wolff (1915) выполнил первые бактериологические исследования патогенных микроорганизмов, используя трубку Сименса, сразу после ее изобретения. E.Paur (1938) был первым клиницистом, кто применил озон в медицинской практике и разработал одну из первых моделей надежного генератора озона.
Озон является мощным окислителем, уступающим по этой способности только фтору. C.Schonbein (1869) обнаружил, что озон реагирует с этиленом. Контакт озона с органическими молекулами, содержащими двойные или тройные связи, приводит к образованию многих еще неизученных эфимерных переходных соединений (цвиттероны, молозаниды, циклические озониды), которые могут гидролизироваться, окисляться, восстанавливаться или термически расщепляться на множество веществ, преимущественно -альдегидов кетонов, кислот или спиртов. Озон реагирует с насыщенными углеводородами, аминами, сульфгидрильными группами. Озон (Оз) имеет молекулярную массу 48, его плотность в 1,5 раза выше кислорода, содержит в своей молекуле большое количество энергии - 143 кдж/моль.
Представляет научный и практический интерес физиологические основы и метаболические аспекты влияния озона на живой организм. L.L.Smith (1937) изучил перекисное окисление липидов озона. Так, при общей концентрации липидов 450-1000 на 100 мл и широком разнообразии липидных компонентов, озонирование вызывает образование большого количества переходных соединений. При этом в организме происходят следующие процессы: - повышается р02 при увеличении артериовенозной разницы этого показателя, происходит сдвиг рН в щелочную сторону, уменьшается дефицит буферных оснований; - активизируются кислородзависимые процессы в эритроцитах путем повышения содержания АТФ, 2-3-ДФГ и НАДФН2. При этом: 2-3 ДФГ определяет прочность связи гемоглобина с кислородом, НАДФН2 восстанавливает окисленный глутатион и антиоксидантный фермент глютатионпероксидазу, в результате чего нормализуется перекисное окисление липидов, которое регулирует структурно-функциональное состояние мембраны и, соответственно, активность мембранвстроенных ферментов. Поэтому, как следствие, возрастает деформабельность эритроцитов, улучшаются реологические свойства крови (К.Н. Конторщи кова, 1995).
Озон обладает мощным адаптогенным действием, гомеостазирующим нарушенный окислительно-восстановительный потенциал организма. При исходном прооксидантном сдвиге, который характерен для острых воспалительных процессов, он активирует систему антиоксидантной защиты (АОЗ) и тем самым оказывает противовоспалительное действие. И наоборот, при избытке АОЗ при хронических процессах, озон индуцирует проокси-дантный сдвиг со снижением уровня АОЗ, при этом хронический процесс обостряется. Повышается энергетическая эффективность окислительных процессов в организме, и поэтому озон способствует интеграции гомеостати-ческих реакций разных уровней, что в конечном итоге восстанавливает нарушенную саморегуляцию организма (Г.В. Леонтьева, О.Е.Колесова, 1995).
В 1893 году озон был использован для бактериологической очистки воды в Голландии. На микробоцидные свойства озона влияют следующие факторы: - концентрация: большинство микроорганизмов погибает в течение 1 мин при концентрации озона 5 мг/ л; - температура: оптимальной температурой, при которой действует озон, является О С; - влажность: установлено, что нейтрализация микроорганизмов препаратами озона более эффективна во влажной среде; - величина рН: максимальная эффективность озона проявляется при рН 2,0.
При концентрации озона 1 мг/ л в воде при температуре 1 С он быстро инактивирует колиподобные бактерии, золотистый стафилококк и аэромонады. Скорость инактивации энтеровирусов выше, чем скорость инактивации колибактерий, причем она происходит при сравнительно небольшой концентрации озона. Различные вирусы отличаются по способности противостоять разрушающему действию озона. Так, полиовирус типа 2 в сорок раз более устойчив, чем вирус коксаки AC (D.Roy et al., 1981). Механизм бактерицидного действия озона заключается в нарушении целостности оболочек, вызываемое окислением фосфолипидов или липопротеинов (K.Ishizaki et al, 1987). при взаимодействии с E.coli озон проникает в мембрану клетки, вступает в реакцию с веществами цитоплазмы, превращая замкнутые круглые плазмиды ДНК в открытую круглую ДНК, что снижает активность бактерий. Высшие организмы имеют энзиматиче-ские механизмы для восстановления стабильности разорванных ДНК и РНК, что частично объясняет причину токсического действия озона при лечении инфицированного организма.
Рефлексотерапия, как метод воздействия на иммунную систему
Так, уже после двукратного введения препарата к 11-му дню жизни, относительное количество В-лимфоцитов возросло на 100% по сравнению с контрольной группой животных, а после третьего - на 157% (Р 0,05) и достигло уровня физиологической нормы для данного возраста. В то же время не было установлено различий в относительном количестве Т-лимфоцитов у телят опытной и контрольной групп.
После применения квациклина в сыворотке крови у телят наблюдалось достоверное увеличение общего белка к 11-му и 16-му дню жизни на 17 и 21,6%, соответственно по сравнению с контрольной группой животных (рис. 2). Концентрация IgG и IgM в сыворотке крови телят опытной группы к 6-му дню жизни была выше по сравнений с контрольной группой на 11,9 и 14,2% (Р 0,05). К 11-му и 16-му дню жизни у телят обеих групп отмечали снижение содержания IgG и IgM, однако в опытной группе эти показатели к 16-му дню жизни были достоверно выше на 37,2 и 55,6% соответственно.
Влияние кващклина на содержание иммуноглобулинов классов G иМ, общего белка в сыворотке крови телят. 1- содержание иммуноглобулина G (опыт); 2- содержание иммуноглобулина G (контроль); 3- содержание общего белка (опыт); 4- содержание общего белка (контроль); 5- содержание иммуноглобулина М (опыт); 6- содержание иммуноглобулина М (контроль).
У телят опытной группы по сравнению с контрольной в различные возрастные периоды отмечено достоверное повышение функциональной активности нейтрофилов крови (спонтанный тест) на 41,7; 56,0 и 56,4% (рис. 3). Наиболее выраженные различия наблюдались в числе активированных нейтрофилов (индуцированный тест), этот показатель в опытной группе был выше на 48,8; 95,4 и 123,4% по сравнению с контрольной группой. Повышение спонтанного НСТ-теста свидетельствует о том, что в организме опытных телят активизируются энергетические процессы, обеспечивающие внутриклеточное переваривание, то есть возрастает способность клеток к завершенному фагоцитозу. Повышение индуцированного теста свидетельствует о повышении функциональной активности нейтрофилов.
Исследования показали, что в раннем постнатальном онтогенезе квациклин оказывает выраженное влияние на В-систему иммунитета, которое характеризовалось повышением содержания В-лимфоцитов. Препарат оказывал также нормализующее воздействие на факторы естественной резистентности организма (на бактерицидную, лизоцимнуо и Р-лизинную активность сыворотки и функциональную активность нейтрофилов крови). Иммуномодулирующее действие квациклина на организм новорожденных телят с признаками иммунодефицитного состояния, отсутствие побочных эффектов дают основание для проведения дальнейших исследований по изучению действия квациклина на организм новорожденных телят в комплексе с другими средствами.
С этой целью были сформированы две группы стельных коров. Животных контрольной группы (43 гол.) иммунизировали инактивированной противоротави русной вакциной в объеме 5 мл внутримышечно, через 20 дней проводили ревакцинацию. Животным опытной группы (48 гол.) за 12-24 часа до вакцинации вводили 2% раствор квациклина в объеме 10 мл и затем еще двукратно с интервалом 5-7 дней, ревакцинацию проводили также через 20 дней. Взятие крови для исследований (у 5 коров из каждой группы) проводилось перед вакцинацией (фоновое исследование) и во время отёла; у телят - через 2 и 10 суток после рождения, у коров определяли функциональную активность нейтрофилов крови НСТ-тест, в сыворотке 20- ------2 J &» 15- -Of -4 JV 2,2 7,8 10- 5- -Al,8 8,6 4 Fr 4,8 5 0- —возраст телят (сутки) Рис.3. Влияние квациклина на функциональную активность нейтро-филов крови телят (НСТ-тест). Индуцированный НСТ-тест: 1-опытная группа; 2- контрольная группа; Спонтанный НСТ-тест: 3-опытная группа; 4- контрольная группа.
Влияние квациклина на гуморальные показатели естественной резистентности телят. 1- бактерицидная активность сыворотки крови (опыт); 2- бактерицидная активность сыворотки крови (контроль); 3- /3-лизинная активность сыворотки крови (опыт); 4- fi-лизинная активность сыворотки крови (контроль); 5- лизоцимная активность сыворотки крови (опыт); б- лизоцимная активность сыворотки крови (контроль). крови - уровень специфических антител к ротавирусу, концентрацию иммуноглобулинов классов G и М; бактерицидную, лизоцимную и [3 лизинную активность сыворотки крови. Исследовалось также молозиво коров-матерей на содержание антител к ротавирусу. У телят в крови дополнительно определяли абсолютное количество лейкоцитов, относительное содержание лимфоцитов, Т-и В-лимфоцитов, в сыворотке крови - общий белок. Результаты исследований представлены в табл. 6 и на
Иммуномодулирующая активность квациклина при вторичном иммунодефицитном состоянии у телят
В связи с тем, что в колхозе "Искра" отмечается большой процент рождаемости слабого нежизнеспособного приплода, с низкими показателями естественной резистентности организма, нами проведены исследования по изучению влияния некоторых нетрадиционных методов воздействия на организм глубокостельных коров с целью профилактики желудочно-кишечных болезней получаемого потомства. Одним из этих методов является применение препаратов озона.
Озонирование изотонического раствора хлорида натрия и иммунного молозива проводили с помощью аппарата озонотерапии с низкой концентрацией и деструктора озона- производителя кислородно-озоновой смеси для медицинских целей, разработанного и изготовленного на ОАО "Арзамасский приборостроительный завод".
Изотонический раствор хлорида натрия и иммунное молозиво в течение 30-120 минут подвергали барботажу кислородно-озоновой смесью со скоростью 100 м/с и получали концентрацию озона в изотоническом растворе хлорида натрия 20-22 мг/л и 45- 0 мг/л: в молозиве - 1 2-1,3 мг/л. Концентрация озона в препаратах рассчитывалась по формуле (В.В.Новомлинский с соавт., 1995): С КСгР/Р где: Cs - концентрация озона в жидкости при насыщении; К- коэффициент распределения (по таблице); Сг - концентрация озона в газовой смеси; Р - давление озонированного кислорода; РА - атмосферное давление. Все препараты озона применялись животным в течение 20 минут после озонирования при температуре окружающей среды не менее 15-20С.
Изучение влияния озонированного изотонического раствора хлорида натрия на показатели естественной резистентности стельных коров при внутривенном введении осуществляли на двух группах животных опытная (50 гол.) и контрольная (45 гол.).
Опытной группе животных за 2 месяца до отёла внутривенно вводили изотонический раствор хлорида натрия в количестве 0,5 л с концентрацией озона 20-22 мг/л пятикратно, с интервалом 7 дней. Контрольной группе препарат не применялся.
Исследование крови и сыворотки крови подопытных животных проводили до применения препаратов (фоновое исследование) и спустя 7 дней после завершения опыта. Результаты исследования представлены в табл. 12, рис. 19, 20, 21.
Как видно из таблицы 12 в опытной группе животных после внутривенного применения озонированного изотонического раствора хлорида натрия наблюдается повышение показателей естественной резистентности. Так, в опытной группе бактерицидная активность после применения препаратов озона увеличилась по сравнению с контрольной группой на 14,2% (Р 0,05) (рис. 20); лизоцимная активность - 14,6% (Р 0,05); р- лизинная активность - на 34,02% (Р 0,05).
Озон оказывал влияние на функциональную активность нейтрофилов крови. Так показатели спонтанного и индуцированного НСТ-теста у коров опытной группы были на 30,5 к 22,7% выше (Р 0,05) чем в контрольной группе (рис. 19). % Влияние озонированного изотонического раствора NaCl на бактерицидную активность сыворотки крови стельных коров. 1,2-опытная группа до и после применения препарата; 3-контрольная группа, фоновое исследование; 4- контрольная группа, второе исследование.
Влияние внутривенного введения озонированного изотонического раствора NaCl на /З-лизинную активность сыворотки крови стельных коров. 1,2- опытная группа до и после применения препарата; 3-контрольная группа, фоновое исследование; 4- контрольная группа, второе исследование. В результате проведенных исследований установлено, что внутривенное введение озонированного изотонического раствора хлорида натрия оказывает стимулирующее влияние на естественную резистентность организма стельных коров. Результаты профилактической эффективности желудочно-кишечных болезней телят, полученных от матерей, обработанных изотоническим раствором хлорида натрия, представлены в табл. 13. Таблица 13 Заболеваемость и сохранность телят, полученных от коров после внутривенного введения им озонированного изотонического раствора хлорида натрия Показатели Группы животных Опытная группа (внутривенное введение озонированного изотонического раствора хлорида натрия) Контрольная группа Количество животных 50 45 Заболело телят (гол.),%- из них пало (гол.)% 7 14 0 0 276013,7 Профилактическая эффективность, % 86,0 40,0 Профилактическая эффективность при желудочно-кишечных болезнях телят, полученных от матерей, которым внутривенно вводили озонированный изотонический раствор хлорида натрия, составила 86,0% в сравнении с контролем - 40,0%. Сохранность животных в опытной группе была равна 100%, в контрольной группе пал один теленок из числа 27 заболевших. Опытной группе животных вводили озонированный изотонический раствор хлорида натрия с концентрацией озона 45-50 мг/л в количестве 5 мл в биологически активные точки, ежедневно в течение 7 дней. Контрольной группе животных препарат не применяли.
Исследования крови и сыворотки крови подопытных животных проводили до применения препаратов (фоновое исследование) и спустя 7 дней после завершения опыта.
Результаты исследований представлены в табл. 14 и рис. 22, 23, 24. Из данных табл. 14 видно, что введение озонидов в биологически активные точки увеличивает бактерицидную активность сыворотки крови стельных коров на 23,1% (Р 0,05), лизоцимную активность - на 22,5% (Р 0,05), бета-лизинную активность на 44,5% (Р 0,05) (рис. 23, 24) по сравнению с контрольной группой. Функциональная активность нейтрофилов крови по НСТ-тесту в опытной группе после озонопунктуры была на 79,0% выше в спонтанном тесте и на 43,5% выше в индуцированном тесте (Р 0,05) (рис. 22).
Таким образом, озониды, введенные в биологически активные точки стельных коров, оказывают стимулирующее влияние на естественную резистентность организма, особенно выраженное действие оказывают на функциональную активность нейтрофилов крови.
Результаты профилактической эффективности желудочно-кишечных болезней телят, полученных от матерей, которым применяли озонированный изотонический раствор хлорида натрия в биологический активные точки, представлены в табл. 15.
Рефлексотерапия (фармако- и лазеропунктура), как метод стимуляции организма
В медицине и ветеринарии постоянно идет поиск новых методов терапии и профилактики. В последние годы наряду с применением различных фармакологических средств и средств иммунокоррекции внимание специалистов привлекают нетрадиционные способы терапии и профилактики различных заболеваний. Среди них выделяются: физиотерапия, иглорефлексотерапия и озонотерапия. Последний метод является одним из новых методов немедикаментозной терапии, который основан на лечении озонокислородными смесями. Спектр применения озонотерапии довольно широк, из-за свойств озона оказывать влияние на транспортировку и высвобождение кислорода в ткани. В настоящее время имеются экспериментальные и клинические материалы, свидетельствующие об иммуномодулирующем, противовоспалительном, бактерицидном и других свойствах (С.П.Перетягин, 1995; К.Н.Конторщикова, 1998; В.В.Шукалов и др., 1998; Т.С.Качалина и др., 1998; А.Д.Лелянов, 1999; О.В.Масленников, К.Н.Конторщикова, 1999). О большом интересе исследователей и практических специалистов свидетельствуют материалы Всероссийских научно-практических конференций, состоявшихся в Нижнем Новгороде в 1992, 1995 и 1998 гг.
В литературном обзоре мы представили данные об использовании озона в ветеринарии с целью терапии и профилактики патологических процессов различного генеза. В наших исследованиях мы использовали озонированные растворы хлорида натрия и молозива с целью стимуляции факторов естественной резистентности у коров-матерей и повышения иммунологического статуса у новорожденных телят. При этом мы руководствовались данными о том, что иммуномодулирующее действие озона связано с активацией синтеза лимфоцитами и моноцитами цитокинов - интерферона, фактора некроза опухолей, интерлейкинов, которые активируют как клеточный, так и гуморальный иммунитет. Антибактериальное действие озона связано с усилением действия свободных радикалов и повышения фагоцитарной активности лейкоцитов, а антивирусное- с повреждением полипептидных цепей оболочки, что препятствует вирусам прикрепляться к клеткам. Кроме того происходит расщепление одной нити РНК на две части, благодаря чему нарушается процесс репликации вируса. Защита от проникновения вируса обеспечивается и синтезом интерферона (О.В.Масленников, К.Н.Конторщикова, 1999). Полученные нами данные показали, что введение озонированных растворов хлорида натрия стельным коровам стимулировало гуморальные и клеточные факторы естественной резистентности, что оказывало влияние на повышение сохранности полученных от этих коров телят. Введение озонированных растворов в биологически активные точки повышало эффективность их применения. Выпаивание телятам озонированного молозива повышало абсорбционную способность кишечника, в результате чего у них повышался уровень иммуноглобулинов. Парентеральное введение телятам озонированных растворов хлорида натрия стимулировало функциональную активность различных звеньев иммунной системы и обеспечивало высокую сохранность животных (85% против 57% в контроле). При этом установлен как терапевтический, так и профилактический эффект использования озонированных растворов. Мы считаем, что применение озона в системе мер профилактики и терапии желудочно-кишечных болезней с симптомокомплексом диарея является 119 научно обоснованным, поскольку озон обладает иммунокорригирующим, антибактериальным и антивирусным действием, а именно вирусы и бактерии играют ведущую роль в структуре желудочно-кишечной патологии у телят в раннем постнатальном онтогенезе.
Среди нетрадиционных методов терапии в последние годы находит применение и метод рефлексотерапии (иглорефлексотерапия, иглоукалывание, акупунктура, чжень-цзю), в основе которого лежит принцип рефлекса-наиболее универсального механизма нервной деятельности (Д.М.Табеева, 1980). Этот метод способен дополнять или заменять фармакологические методы терапии. В наших исследованиях мы использовали метод рефлексотерапии с целью стимуляции факторов естественной резистентности у коров и повышения жизнеспособности телят. При этом в биологически активные точки вводили 0,5% раствор новокаина или воздействовали на них лазером. Исследования показали, что фармако- и лазеропунктура способствовали повышению гуморальных и клеточных факторов естественной резистентности у коров, причем наиболее выраженные изменения установлены при применении лазеропунктуры. У телят, полученных от коров, подвергшихся воздействию указанных методов, меньше наблюдались желудочно-кишечные болезни, сохранность составляла 100%. Полученные данные свидетельствуют о принципиальной возможности использования нетрадиционных методов с целью стимуляции защитных факторов организма.
Учитывая сложную этиологическую структуру желудочно-кишечных болезней новорожденных телят, развивающихся на фоне вторичных иммунодефицитных состояний, мы испытали иммунокорригирующий препарат квациклин совместно с антибактериальными препаратами. В качестве средства с выраженным антибактериальным действием мы использовали глюкофур - комплексный препарат и регидратационное средство глкжофурацид. Указанные препараты были использованы при терапии желудочно-кишечных болезней у телят с симптомокомплексом диарея в сравнении с традиционными средствами терапии. Исследования показали, что применение антибактериального препарата совместно с иммунокорригирующим средством оказалось ниболее эффективным. При этом снижалась продолжительность болезни, больший процент телят выздоравливало, терапевтическая эффективность составляла 92,9%, в то время как в группе телят, подвергавшихся традиционному лечению, сохранность составила 78%. При этом у телят, получавших в комплексном лечении квациклин, отмечали вырженное иммуностимулирующее действие, которое выражалось в повышении функциональной активности иммунокомпетентных клеток. Такие же закономерности в терапевтическом и иммуностимулирующем влиянии на организм телят установлены нами при применении глюкофурацида в комплексе с квациклином. Эти данные свидетельствуют о том, что терапия желудочно-кишечных болезней с симптомокомплексом диарея должна носить комплексный характер, в которой применение иммунокорригирующих препаратов является научно обоснованным, поскольку практически любому патологическому процессу сопутствуют иммунодефицитные состояния организма. Об эффективности применения средств иммунокоррекции с целью профилактики и терапии желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка со сложной этиологической структурой свидетельствуют исследования последних лет (Т.Н.Грязнева, 1990; Н.К.Кривошеева, 1992; Г.М.Нагибина, 1994; Е.С.Воронин и др., 1994; С.М.Грибко, 1998; Д.А.Девришов, 2000 и др.).
