Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 8
2.1. Загрязненность продуктов животноводства антибиотиками и их влияние на здоровье человека 8
2.1.1.Аллергенность тилозина и механизм аллергических реакций, подбор для их оценки и количественного определения объектив ных критериев и тестов 12
2.1.2. Роль остатков антибиотиков и их метаболитов для здоровья потребителя 16
2.1.3. Влияние препаратов тилозина на некоторые биологические показатели животных 19
2.1.4. Аргументированные предпосылки к проводимым исследованиям качества продуктов животного происхождения, содержащих посторонние вещества и побочных их влияний на организм потребителя 21
2.2. Физико-химическая характеристика антибиотика тилозина 25
2.2.1. Антимикробные свойства препаратов группы макролидов 27
2.2.2. Фармакокинетика биологически активных веществ из группы макролидов 30
3. Собственные исследования 33
3.1. Материал и методы исследований З 3
4. Результаты собственных исследований 37
4.1. Критерии физико-химической оценки биологической активности тилозина и ряда других его параметров 37
4.2. Методы качественного и количественного определения антибиотиков группы макролидов в продуктах убоя птиц 41
4.3. Распределение и выведение тилозина из органов и тканей кур 46 4.3.1.Фармакокинетика тилозина в организме цыплят при однократном пероральном введении с водой 46 4.3.2. Фармакокинетика тилозина в организме кур при применении фрадизина-5 с кормом 50 4.3.3.Фармакокинетика тилозина в организме цыплят при ингаляции аэрозоля фармазина 51
4.3.4. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса птиц при содержании остаточных количеств тилозина 53
4.3.5. Влияние остаточных количеств тилозина на биологическую ценность продуктов убоя кур 57
4.3.6. Влияние остаточных количеств тилозина на интегральный скор суммарных белков мяса птиц 59
4.3.7. Степень инактивации остаточных количеств тилозина в мясе птиц при хранении в замороженном состоянии 61
4.3.8. Влияние остатков тилозина
на сохранность мяса при длительном хранении в замороженном состоянии 63
4.3.9. Степень инактивации тилозина в мясе через 1 час после получения птицей препаратов антибиотика при различной продолжительности варки 65
4.3.10. Степень инактивации тилозина в мясе через 48 часов после получения птицей препаратов антибиотика при варке в течение 1 часа. 67
4.4. Ветеринарно-санитарная оценка мяса птиц, убитых через 48
часов после получения внутрь тилозина 70
4.4.1. Химический состав и калорийность мяса тушек цыплят через 48 часов после получения птицей антибиотика тилозина 72
4.4.2.Влияние тилозина на минеральный состав мяса через 48 часов после получения птицей антибиотика 73
4.5. Определение степени биологической безвредности продуктов убоя кур, содержащего тилозин 75
4.5.1. Влияние остаточных количеств тилозина в мясе цыплят на возникновение аллергических реакций 75
4.5.2. Влияние проваренного мяса кур, получавших за 48 часов до убоя тилозин, на токсичность и биологическая ценность белковых компонентов пищи 93
4.5.3. Мутагенная безопасность для потребителя мяса /мышечной ткани и кожи/ кур, получавших за 48 часов до убоя тилозин 97
4.5.4. Ветсаноценка мяса кур, получавших внутрь с питьевой водой препараты тилозина 98 CLASS 5.Обсуждение результатов исследований 99 CLASS
6. Выводы 114
7. Практические предложения 115
8. Список использованной литература
- Загрязненность продуктов животноводства антибиотиками и их влияние на здоровье человека
- Аргументированные предпосылки к проводимым исследованиям качества продуктов животного происхождения, содержащих посторонние вещества и побочных их влияний на организм потребителя
- Методы качественного и количественного определения антибиотиков группы макролидов в продуктах убоя птиц
- Степень инактивации тилозина в мясе через 1 час после получения птицей препаратов антибиотика при различной продолжительности варки
Введение к работе
Актуальность работы. Повышение благосостояния людей неразрывно связано с улучшением снабжения населения продуктами питания.
Важная роль в росте производства продуктов питания принадлежит птицеводству, как наиболее интенсивной отрасли животноводства. Повышение эффективности этой отрасли во многом зависит от внедрения прогрессивных технологий. В настоящее время в современном отечественном птицеводстве развиваются новые направления по созданию безотходного производства с высоким уровнем санитарно - ветеринарной обеспеченности птицеводческих предприятий с единым замкнутым технологическим процессом (В. И. Малофеев, 1986; К.Х. Папуниди и др., 2000; А.В. Якимов и др., 2001). Повышается уровень селекционно-племенной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств птиц, созданию новых высокопродуктивных пород линий и гибридов, отвечающих требованиям промышленной технологии. Происходит техническое перевоору . жение в комбикормовой промышленности и т.п. (М,Т.Петраш, 1985; Т. Щербатова, 1994; Б.Ф. Бессарабов, 2001).
Интенсификация и концентрация производства обуславливает не только внедрение новых технологий, но и предусматривает создание стойкого благополучия птицеводческих предприятий по инфекционным и незаразным болезням, получение продуктов высокого санитарного качества (В.М.Митюшников,1985; В.А. Макаров, В.П. Фролов, Н.Ф. Шуклин, 1991; • МЛ. Бутко, Ю.Г. Костенко, 1994; С.А. Артемьева и др., 2003).
При промышленном интенсивно-поточном способе ведения животноводства, когда на ограниченных площадях, под одной крышей сосредотачиваются десятки тысячи животных, кроме проведения общих ветери-нарно-санитарных мероприятий, неуклонно, возрастает и применение различных лечебно-профилактических лекарственных средств, биологически активных веществ, большую долю которых составляют антимикробные препараты (В.И.Аксенов, В.Ф.Ковалев, 1977; М.И.Лотенков, 1979; В.А. Кузьмин, Г.Г. Сорокина, 1997; А.Б. Байдевлятов, 1992; Д.А. Алтунин и др., 1999; Ш.А. Имангулов и др., 2001; А.В. Малков и др., 2002).
Из большого арсенала используемых в животноводстве антибиотиков, препараты тилозина в последнее время нашли широкое применение в ветеринарной практике. Однако при этом, возникает возможность загрязнения ими продуктов животноводства, используемых в питании, что ставит перед гигиенистами задачу исключить опасность потребления загрязненных продуктов (М.Ф. Нестерина с соавт71974; В.И. Аксенов, В. Ф. Ковалев, 1977; Л.С. Припутина, О.Д. Ольшанская, Т.В. Воробьева, Ж.Я. Жильская, 1982). По санитарному законодательству в нашей стране остатки антибиотиков в продуктах питания не допускаются (А.Н. Еншина, Р.Л. Патент, М.М. Дубенецкая, 1980; Л. С. Припутина, О.Д. Ольшанская, Ж. Я. Жильская, 1988).
В США и Финляндии убой птиц на мясо разрешен через 6-8 дней после окончания лечения препаратами тилозина, при этом проводят обязательное исследование мяса на наличие остатков антибиотика (R. Berqer, 1971; Houwelinq, 1970; Herrick, 1971; Jdaho Farmer- Stockman, 1981).
Следует отметить, что у исследователей по срокам выдержки животных до убоя после использования препаратов тилозина нет единых рекомендаций, что свидетельствует о недостаточной изученности данной проблемы. К тому же, имеются многочисленные данные, что препараты тилозина являются сильными аллергенами для животных, а продукты убоя могут быть более токсичными и оказывать нежелательное влияние на здоровье человека. (V.Weqe/1969; J.Raynaud, 1969; В.Ф.Грезин, В.М.Гулин, В. И. Аксенов, В. Ф. Ковалев, 1973; Farm-Store, 1977; В. Ф. Ковалев, 1978; J.Boisseau, 1982; А.М.Иваницкий, 1982; Л.С.Припутина, О.Д.Ольшанская, Ж.Я.Жильская, 1988). Кроме того установлено, что остаточные количества некоторых лекарственных веществ, содержащиеся в продуктах питания обладают канцерогенным, тератогенным, мутагенным действием (W.Laue, G.Scheibner, S.Baldauf, H.Trolldenier, W.Pietsch, 1979).
В доступной литературе не нашли данных о влиянии остаточных количеств тилозина на качественные показатели мяса кур и о ветеринарно-санитарной его оценке, о биологической ценности и безвредности такого продукта. Возникает необходимость разработки высокочувствительных, простых и доступных методов определения содержания тилозина в мясе для ветеринарной практики.
Цель и задачи исследований. Основной целью наших исследований являлась усовершенствование методов ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов убоя птиц, получавших антибиотики группы макролидов. При этом ставились задачи:
1.Изыскать и разработать наиболее пригодный для практического применения метод качественного и количественного определения тилозина в мясе птиц.
2. Выяснить особенности распределения тилозина в тканях кур и скорость его разрушения и выведения из организма.
3. Определить биологическую полноценность и безвредность мяса кур с остаточным количеством антибиотиков.
4. Разработать методику ветеринарно-санитарной оценки мяса кур при содержании в нем антибиотиков из группы макролидов.
Научная новизна. Впервые выполнено, комплексное исследование по нескольким показателям качества мяса кур, получавших пероралъно препараты тилозина. В динамике дана научно-обоснованная оценка вете-ринарно-санитарного состояния качества мяса кур при максимальном в нем содержании антибиотика и в процессе выведения его из организма птиц и на их основе выработаны новые сроки выдержки кур перед убоем.
Получены данные об отличии мяса кур, опытных тушек птиц при содержании в них тилозина, от мяса контрольных не получавших препараты антибиотика /птиц/ по общепринятым физико-химическим показателям, аминокислотному составу и индексу пищевой ценности белка. Выявлена степень разрушения тилозина в динамике в органах и тканях кур в различ ные сроки хранения в замороженном состоянии при температуре -6-8°С и продолжительности варки.
Практическая ценность. В экспериментальном и производственном опытах установлено, что остатки препаратов тилозина после однократного пероралъного применения сохраняются в организме птиц /легкие и костный мозг/ довольно продолжительное время /от 15 до 18 суток/, а наиболее ценные в пищевом отношении части тушек /красные и белые мышцы и кожа/ кур за суткидоубоя полностью освобождаются от антибиотика.
Установленные выше закономерности могут быть использованы для решения вопроса более рационального использования в пищу мяса кур, получавших до убоя, внутрь, препараты из группы макролидов.
На зашиту выносится положение. Научно- экспериментальное обоснование определения безвредности, биологической и питательной ценности продуктов убоя кур, получавших до убоя препараты тилозина, выяснения их аллергенности, токсичности и мутагенности на экспериментальных животных.
Апробадия работы. Основные теоретические, научные положения и практические рекомендации изложены в 10 научных работах, которые отражают основное содержание диссертации. Материалы диссертации доложены на Международных и Всероссийских научно-практических конференциях.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах компьютерного текста и состоит из общей характеристики работ, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 24 таблицами, 2 графиками, 1 диаграммой. Список литературы включает 192 источника, в том числе 47 на иностранных языках.
Загрязненность продуктов животноводства антибиотиками и их влияние на здоровье человека
В настоящее время в нашей стране многочисленная группа ученых во многих специальных лабораториях и институтах успешно развивают учение об антибиотиках. Значительно выросла также и отечественная промышленность по производству антибиотиков (Я.Е.Коляков, 1960; А.Хенниг, 1976). Г.Бокер, А.Хенниг /1986/; Н.А. Соколова и др.,/2001/ считают, антибиотики- это продукты вторичного обмена веществ живых клеток, в частности клеток микроорганизмов. К антибиотикам относятся вещества, полученные из вторичных метаболитов путем их химической модификации или биотрансформации. Характерная особенность биологически активных веществ - способность в небольших количествах тормозить рост живых клеток микроорганизмов и вызывать их гибель. Исследователи отмечают, что антибиотики отличаются избирательностью токсического действия против определенных микроорганизмов и возбудителей болезней на фоне хорошей общей переносимости организма хозяина. Благодаря этому свойству они стали незаменимыми лекарственными препаратами в медицине и ветеринарии.
Д.Ланчини, Ф. Паренти /1985/ дают емкое и четкое определение, что антибиотики - низкомолекулярные продукты метаболизма микроорганизмов, подавляющие в малых концентрациях рост других микроорганизмов.
Наиболее интересным, на наш взгляд, является определение, данное в своей монографии В.Д.Соколовым /1984/. Антибиотики - биологически активные вещества, являющиеся продуктами жизнедеятельности различных организмов, и обладающие способностью избирательно подавлять in vitro /в питательной среде/ in vivo в организме больного возбудителей болезни и оказывать химиотерапевтическое действие. Он отмечает, что из химиотерапевтических средств антибиотики не имеют себе равных по широте и глобальности применения, как в медицине, так и в ветеринарии.
Кроме губительного действия на многие патогенные микроорганизмы /бактерии, микоплазмы, грибы, риккетсии/, кровепаразиты, гельминты, некоторые антибиотики обладают ростстимулирующим действием (В.П. Фролов, В.Р. Назаров, Е.4.Королев, 1997).
Наряду с положительными сторонами, широкое использование антибиотиков ставит перед исследователями ряд нерешенных проблем.
Так по данным литературного обзора (В.А.Шатерников, A.M. Ива-ницкий, 1982) частота загрязнения, предназначенных для питания населения, мясопродуктов антибиотиками в разных странах характеризуется различными величинами и колеблется от 1,7 - 5,9 до 58 - 100%. Исследователи указывают, что наличие антибиотических веществ в пищевых продуктах животного происхождения может быть связано с поступлением их в организм убойных животных и птицы во время лечения различных заболеваний; во время откорма и использования антибиотиков в качестве кормовой добавки с последующим сохранением их в органах и тканях, являющихся продуктами питания. До сих пор было принято считать, что содержащиеся в значительных количествах в пищевых продуктах антибиотики полностью разрушаются при термической обработке, и поэтому продукты, не содержащие активных в отношении микроорганизмов антибиотиков, безвредны для человека. Вместе с тем известно, что антибиотики, теряя активность в отношении микроорганизмов, почти полностью сохраняют свою химическую структуру, обуславливающие их токсические и аллергенные свойства. Кроме того, в пищевых продуктах антибиотики находятся под защитой буферности продукта, связи их с белками, что приводит к меньшей степени разрушения их при термической обработке. Авторами указывается, что скорость инактивации антибиотиков, содержащихся в животных продуктах, зависит от продолжительности кулинарной обработки, температуры, от начальной концентрации антибиотика и что остаточные количества антибиотиков, попадая в организм человека с пищей, могут представлять определенную опасность для его здоровья.
О возможности аналогичного действия высказывают и ряд других исследователей. В.И.Аксенов В.Ф.Ковалев /1977/ не исключают возможности, что некоторые продукты метаболизма и деструкции антибиотиков могут быть более токсичными, чем исходные препараты. Б.А. Тимофеев, Л.Р. Шаповалова /1984/ указывают на то, что накопление препаратов в продуктах животноводства нежелательно из-за отрицательного действия на человека. Как было отмечено на совещании французского общества токсикологов в Тулузе 1981 г., среди проблем охраны здоровья человека, связанных с широким применением в ветеринарии антибиотиков, важное место занимает загрязненность последними продуктов питания животного происхождения. К тому же антибиотики являются потенциальными аллергенами, в том числе из группы макролидов были отмечены антибиотики спирамицин, эритромицин, олеандомицин и тилозин (J. Boissau, 1982).
Имеются данные /Ferrando, 1969/ по изучению токсичности остаточных количеств антибиотиков, применяющихся во Франции в кормах для животных и представляющих риск для людей остаточных количеств некоторых из этих препаратов. Например, в отношении тилозина отмечено, что хорошо резорбируется желудочно-кишечным трактом, риск токсичности остаточных количеств отсутствует, оказывает инактивирующее действие на энтеробактерии, нарушение микрофлоры пищеварительного тракта не вызывает.
Аргументированные предпосылки к проводимым исследованиям качества продуктов животного происхождения, содержащих посторонние вещества и побочных их влияний на организм потребителя
Многими исследователями сообщается, что препараты тилозина, помимо имеющих высокоэффективных лечебно-профилактических свойств, обладают и хорошим ростстимулирующим действием на организм животных. Так например, добавка антибиотика тилозина в корм животным повышает использование его /корма/ до 9% и увеличивает ежедневный прирост телят более 8% /М.Wanner, E.Lehmann, J.Kruttli /1980/. По данным В.А.Антипова /1985,1988/ применение лечебно-профилактического кормового фрадизина /аналога тилозина/ способствует повышению среднесуточных привесов поросят на 25 -60%.
Экономические выгоды применения препаратов тилозина несомненны. Л.О.Припутиной с соавт. /1988/ проведены исследования с целью изучения возможности применения тилозин-фосфата в птицеводстве, как стимулятора роста. После перорального введения тилозин-фосфата в количестве 5; 50; 500 мг на 1 кг массы тела лабораторным животным, остаточные количества препарата были обнаружены ими в 1-е сутки в печени и легких; до 3-х суток тилозин выявлялся в селезенке и почках. В мышечной ткани антибиотик обнаружить им ни в одной из исследуемых проб не удалось.
Исследователи считают, что анализ полученных ими данных позволяет допустить применение тилозин-фосфата по рекомендованной v схеме: добавление его в корма в количестве 50 - 60 мг на 1 кг живой массы по 3 - 4 дня с интервалом 2-3 недели и периодом ожидания перед убоем 6 дней.
Авторы указывают, что длительное скармливание лабораторным животным мяса птицы, выращенной с применением указанных антибиотических кормовых добавок по рекомендованной ими схеме в производственных условиях, не привело к каким-либо физиолого-биохимическим сдвигам в состоянии организма экспериментальных животных.
В заключении, исследователями отмечается, что проведенными ими исследованиями обоснована с гигиенических позиций возможность применения тилозин-фосфата в производстве продуктов животноводства.
Следует указать, в отдельной серии опытов, при введении в желудок тилозин-фосфата в дозах 1,2 и 0,12 мг/кг экспериментальным животным, препарат вызывал у них образование в сыворотке крови специфических к антибиотику антител / т.е. он оказывал аллергенное действие/.
Авторами приводятся данные, что у животных этих же групп в кишечнике было меньшее количество E.coli. Резистентных к антибиотику форм Е. coli, исследователями, не выявлено.
Л.Росивал, Р.Энгст /1982/ сообщают, что доказать зависимость между остатками антибиотиков в пищевых продуктах и явлениями непереносимости часто очень сложно. Ими отмечается, что в Великобритании, Японии, ФРГ, США появляются много сообщений о влиянии применяемого для немедицинских целей тетрациклина на распространение среди людей устойчивых штаммов микроорганизмов. Число заболеваний, вызванных возбудителями, постоянно растет.
В.И.Аксенов, В. Ф.Ковалев /1977/ сообщают, в Японии в 1958 - 1960 гг., в Англии в 1963 и 1968гг. возникли эпидемии желудочно-кишечных болезней, вызванных антибиотико-резистентными возбудителями, которые дали повод для критической оценки методов профилактики и лечения с помощью антибиотиков. Исследователями отмечается, что особенно остро был поставлен вопрос о применении их в животноводстве и ветеринарии.
Авторами, приводятся настораживающие данные, при исследовании бактерий кала, кожи и носовой слизи, тилозин влиял на резистентность к антибиотикам грамположительных бактерий у поросят, в частности стафилококков и стрептококков. Скармливание тилозина в дозе 100 г/т приводило к увеличению устойчивости к нему резистентных к эритромицину грамположительных бактерий.
На настоящее время, в вопросах откорма животных, существует ряд до конца неразрешенных пока противоречивых мнений и рекомендаций по использованию антибиотика тилозина в качестве добавки в корма.
В частности, в Италии разрешено применение тилозина только для откорма животных с однокамерным желудком, т.е. свиньям /F.Valfre, 1980/.
Хотя в отдельных странах тилозин рекомендован как кормовой антибиотик для различных видов животных и птиц, но в тоже время, некоторые исследователи предостерегают, что антибиотики нитровин, тилозин, линкомицин и ряд др. не должны применяться, как стимуляторы роста в птицеводстве, так как птицы являются основным источником сальмонелл, которые вызывают пищевые отравления у людей /W.W.Smith, J.F.Tucker, 1980/.
S.Matthes, W.Leuchtenberqer, H.Loliqer /1982/ показано, что антибиотические препараты не оказывают явного влияния на состав кишечной флоры цыплят, и, по-видимому, благоприятствуют размножению энтеро-бактерий. У латентно зараженных цыплят добавление антибиотиков к корму увеличивало срок выделения и число выделителей.
Методы качественного и количественного определения антибиотиков группы макролидов в продуктах убоя птиц
В связи с неполной ясностью и отсутствием высокочувствительных, доступных для практического применения методов определения остаточных количеств препаратов тилозина и других антибактериальных веществ в продуктах животноводства и с острой необходимостью проведения большого количества исследований содержания остатков тилозина в изучаемых образцах нами проведены изыскания с целью разработки или модификации уже существующих методов определения антибиотиков и созданию на их основе наиболее чувствительного и простого метода.
После проведения множества сравнительных определений чувствительности различных тест-культур: S. lutea АТСС 9341, В. subtilis АТСС 6633, В. subtilis L2, В. micoides 537 и В. micoides НВ выбор наш был остановлен на споровой бактериальной тест-культуре В. subtilis АТСС 6633, которая, кроме хорошей чувствительности к препаратам тилозина, оказалась также и высокочувствительной к препаратам стрептомицина, пенициллина, неоветина и к другим антибиотикам. Она по сравнению с другими тест-организмами имела ряд преимуществ: была высокочувствительной ко многим антибиотикам, при определении антибиотиков образовывала четкие с хорошо очерченными краями зоны задержки роста, была неприхотлива и удобна в пользовании. Готовые впрок к исследованиям, засеянные тест-культурой чашки Петри с питательной средой хранились в холодильнике при температуре 4С до 7-11 суток, которые могли использоваться в любое время по мере необходимости.
Для повышения извлекающей способности остаточных количеств тилозина из гомогенатов исследуемых образцов нами проведены сравнительные испытания, предлагаемых в литературе для различных антибиотиков, растворителей и некоторых способов их экстракции.
В качестве экстрагентов были использованы: водные буферные растворы (содержащие калий фосфаты или калия и натрия фосфаты или натрия цитрата и соляную кислоту) с различной рН; метиловый спирт; 1 и 2%-ные растворы цитратно-солянокислого пепсина; физиологический раствор и дистиллированная вода.
Нами установлено, что наиболее полное извлечение из гомогенатов органов и тканей остатков тилозина происходило 2%-ным раствором цитратно-солянокислого пепсина и метанолом. Однако, последний экстрагент в виду определенных высоких требований к нему, как СДЯВ (сложности его приобретения, хранения, оформления для работы с ним специального допуска и ряда других причин) делало данный растворитель не пригодным для применения в массовых исследованиях и использования его в практических условиях ветеринарных лабораторий. В связи с ограничением его применения от данного химреактива в дальнейшем мы вынуждены были отказаться.
В наших исследованиях по определению содержания тилозина в органах и тканях птиц применялся модифицированный нами существующий количественный микробиологический метод диффузии в агар с использованием специального ферментативного извлечения из исследуемого материала антибиотика пепсином, предложенное Scheibner(1970) и для определения тетрациклинов, стрептомицина, мономицина и неомицина, разработанное Л.Т. Даниеловой (1972).
Необходимо отметить некоторые особенности и специфику в подготовке гомогената и проведение гидролиза. В отличии от других авторов (Л.Т. Да-ниелова, 1972 и др.), когда гидролиз осуществлялся при перемешивании магнитной мешалкой (30-120 минД нами же исследуемый материал мелко измельчался, затем, после внесения 2%-ного раствора цитратно-солянокислого пепсина в течение нескольких минут в присутствии кварцевого песка или битого стекла, растирался в фарфоровой ступке до получения желеподобной массы. Данная процедура значительно сокращала время на проведение гидролиза и способствовала почти полному высвобождению антибиотика.
При выборе питательной среды для тест-культуры В. subtilis АТСС 6633, из всех испытанных нами сред, предложенных различными авторами (В.И. Аксенов, В.Ф. Ковалев, 1977 и др.), наиболее оптимальной оказалась порошковая питательная среда на гидролизате кильки Nutrient Agar Siccum Дагестанской НИИ Министерства Здравоохранения РФ с рН 7,2-7,4. Данная питательная среда очень удобная в использовании и хранении.
Для наиболее полного извлечения антибиотиков из гомогенатов органов и тканей нами использовался метод ферментативного гидролиза раствором цитратно-солянокислого пепсина. Исследуемый материал брали в количестве 3-5 г, помещали в фарфоровую ступку, измельчали ножницами, добавляли 2%-ный раствор цитратно-солянокислого пепсина (из расчета на 1 г исследуемого материала 1 мл экстрагента).
Степень инактивации тилозина в мясе через 1 час после получения птицей препаратов антибиотика при различной продолжительности варки
Результаты исследований степени инактивации остаточных количеств макролидных атибиотиков в мясе цыплят и продуктах убоя представлены в таблице 10. Из которой видно, что в процессе варки мяса птиц /получавших до убоя 80 мг тилана/ в течение 1 часа тилозин разрушался полностью в красных мышцах и при 1,5 часовой термической обработке - в костном мозге. Однако при варке 1,5 часа в красных мышцах антибиотик обнаруживался в виде следов. Аналогичная картина накопления препарата нами выявлена в костном мозге после варки в течение 1 часа, а у цыплят, получавших до убоя препарат фармазина 600 мг на птицу - в печени. При этом необходимо отметить, депонирование антибиотика в тканях печени происходило в большей концентрации после варки в течение 1 часа, чем по сравнению с термической обработкой 1,5 часа. В мясном бульоне во всех исследованных образцах содержание антибиотика регистрировалось в основном от концентрации 0,8 до 1,55 мкг/г/мл/, а в 1-ой исследованной нами пробе обнаруживалось до 4 мкг/г /мл/. Накапливание в некоторых органах и тканях тилозина, по-видимому, объясняется переходом определенной концентрации антибиотика в процессе варки из мясного бульона в указанные выше органы и ткани. Полученные нами результаты показывают, что при варке мяса цыплят содержащего остатки тилозина в течение 1,5 часов в некоторых органах и тканях /в почках, сердце, костном мозге, коже птиц и др./ инактивация антибиотика происходила в большей степени, чем при варке в течение 1 часа, однако полная инактивация остаточных количеств тилозина /тилана и фармазина/ при этом в исследованных нами органах и тканях не отмечалась.
Таким образом, термическая обработка различной продолжительно сти при максимальном содержании в органах и тканях тилозина не способ ствует полному разрушению остаточных количеств препарата в мясе цып лят, по-видимому, данные температурные режимы не позволяют расще пить полностью молекулы тилозина, в связи с достаточно высо кой устойчивостью его химических связей. Напротив, благодаря разной полярности органов и тканей, в печени и в некоторой степени в костном мозге, происходит депонирование антибиотика, что, очевидно, связано с переходом в процессе варки определённой концентрации препарата из мясного бульона в названные ткани и органы.
Нами установлено /Рис. 21, через сутки тилозин выводится из наиболее ценных в пищевом отношении частей тушек мяса /мышечной ткани/ и кожи птиц. Наши результаты подтверждаются данными I.M.Wal /1971/, который спустя 24 часа после введения виннокислого тилозина в теле курицы не находил остатков антибиотика даже при удвоенной дозе 0,5 г на литр питьевой воды. К концу суток в скелетных мышцах остаточные количества тилозина /фрадизина/ не обнаруживал и В.А.Антипов /1985/ у лабораторных животных. Антибиотик быстро проникает в ткани птиц и продолжительное время задерживается в легких, но легко выводится из мыши, почек, сердца и селезенки.
В связи с этим, для более рационального и безвредного для здоровья потребителя использования мяса нами проведены исследования по выяснению степени инактивации тилозина в более отдаленные сроки после получения птицей макролидных антибиотиков. Полученные нами результаты представлены в таблице 11, из которой видно, что в процессе варки мяса время как наиболее ценные в съедобном отношении части тушек кур /мышечная ткань, кожа, сердце / полностью свободны от антибиотика. Из 6-ти исследованных проб мясного бульона /в группе, получавших 135 мг тилана на птицу/ в одной пробе обнаружено остаточное содержании тило-зина до 0,55 мкг/г/мл/, а в другой - следы антибиотика. Однако в группе получавших 600 мг фармазина на птицу остатки тилозина в бульоне нами не обнаружены.
Препарат тилозина, поступивший в организм птиц при жизни внутрь в значителеной степени препятствует образованию летучих жирных кислот в мясе, т.е. значительно влияет на степень свежести данного продукта. Нами выявлено достоверное отличие, как для белого, так и красного мяса по содержанию данных кислот (табл. 12). Белое и красное мясо опытных цыплят по сравнению с контрольными содержало соответственно меньше летучих жирных кислот на 2,61 мг КОН /р 0,001/ и 2,09 мг КОН /р 0,01/.
