Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 7
2.1. Основные возбудители аспергиллёза пчёл, его распространение и экономический ущерб, причиняемый им пчеловодству 7
2.2. Характеристика возбудителей аспергиллёза пчёл 10
2.3. Особенности эпизоотического процесса при аспергиллёзе пчёл 15
2.4. Патогенез, клинические признаки и диагностика заболевания 20
2.5. Средства и способы борьбы с аспергиллёзом пчёл 25
2.6. Дезинфекция объектов пчеловодства при аспергиллёзе 33
3. Материалы и методы исследований 38
3.1. Методика эпизоотологических исследований на пасеках 39
3.2. Методы лабораторной диагностики аспергиллёза пчёл 41
3.2.1. Методика микроскопического исследования при выделении возбудителя аспергиллёза пчёл 42
3.2.2. Микологическое исследование 42
3.3. Методика определения фунгицидной активности изучаемых препаратов 43
3.4. Изучение влияния препарата апиаск-полоски на пчёл 45
3.5. Определение остатков клотримазола в мёде 47
3.6. Методика изучения активности дезинфицирующих веществ для обеззараживания сотов и пчеловодного инвентаря 48
3.7. Методы контроля качества дезинфекции 49
3.8. Техника озонирования 50
3.9. Термическая обработка 51
4. Результаты исследований 53
4.1. Некоторые эпизоотологические и биологические особенности аспергиллёзного процесса 53
4.1.1. Изучение факторов, влияющих на интенсивность эпизоотического процесса при аспергиллёзе пчёл 57
4.1.2. Изучение влияния стимулирующего препарата ковитсан на активность «гигиенического поведения» пчёл 62
4.2. Дифференциальная диагностика аспергиллёза пчёл 65
4.3. Изучение морфологии возбудителей аспергиллёза и аскосфероза пчёл.. 69
4.4. Изучение антифунгальной активности испытуемых препаратов 74
4.4.1. Изучение антифунгальной активности испытуемого препарата в лабораторных условиях 75
4.4.2. Изучение эффективности препарата апиаск-полоски при микозах пчёл в условиях пасеки 78
4.4.3. Влияние препарата апиаск-полоски на репродуктивные способности пчелиных маток 81
4.4.4. Влияние апиаск-полосок на биохимические показатели пчёл 84
4.4.4.1. Определение гемолимфоформулы пчёл 84
4.4.4.2. Определение степени развития жирового тела по Маурицио 85
4.4.4.3. Определение общего количества липидов в гемолимфе 88
4.4.4.4. Определение содержания глюкозы в гемолимфе 89
4.5. Токсичность препарата апиаск-полоски 90
4.5.1. Токсичность действующего вещества препарата апиаск-полоски для пчёл. 90
4.5.2. Изучение юпроса содержания остаточных количеств клотримазола в мёде. 92
4.6. Изыскание средства дезинфекции объектов пчеловодства при
аспергиллёзе пчёл 95
4.6.1. Проверка активности дезинфицирующих препаратов на тест-объектах... 95
4.6.2. Сравнение активности дезинфицирующих препаратов при обработке соторамок в лабораторных и полупроизводственных условиях 99
4.6.3. Дезинфекция объектов пчеловодства водной смесью озона и уксусной кислоты 102
4.6.4. Изучение безвредности для пчёл предложенных дезинфектантов... 103
4.6.5. Термическая обработка ульев 106
5. Обсуждение результатов исследований 110
6. Выводы 120
7. Список использованной литературы
- Характеристика возбудителей аспергиллёза пчёл
- Патогенез, клинические признаки и диагностика заболевания
- Методика микроскопического исследования при выделении возбудителя аспергиллёза пчёл
- Изучение факторов, влияющих на интенсивность эпизоотического процесса при аспергиллёзе пчёл
Введение к работе
Комплекс климатических и экологических изменений окружающей среды как в результате глобального потепления климата, так и в результате усиливающегося антропогенного воздействия вызывает непредсказуемые последствия в мире переносчиков и возбудителей опасных инфекционных заболеваний, в том числе микозов. В результате таких процессов возникают новые варианты заболеваний с широкими адаптационными возможностями, способные привести к масштабным вспышкам в регионах, ранее благополучных по ним. Такая ситуация возникла и с аспергиллёзом пчёл, развитие которого происходит в настоящее время на фоне аскосферозной инфекции.
Среди микозов аспергиллёз занимает особое место. Грибы рода Aspergillus распространены повсеместно, их можно встретить на поверхности растений, в почве, кормах, воздухе.
В результате обследований пасек ряда областей В.А. Скосырских, В.Д. Бобов и Т.П. Жарков (1985) выявили поражение пчелиного и трутневого расплода грибами родов Aspergillus и Ascosphaera.
В настоящем, очевидно, в силу общих предрасполагающих факторов аспергиллёз протекает чаще совместно с аскосферозом. В Уральско-Сибирском регионе, по данным В.Д. Бобова (1985), Aspergillus flavus и Ascosphaera apis выявлены в 2,09% проб, a A. flavus только в 0,67%.
Исследования Е.В. Руденко (2003) показывают, что на Украине грибы A.flavus, A.niger, A.fumigatus совместно с Asc. apis и возбудителями американского, европейского гнильцов и парагнильцов обнаруживаются в семьях пчёл чаще, чем отдельно протекающие инфекции. Наличие A. glaucus, A. flavus, A. terreus Г. Камбуров и А. Петков, (1980) устанавливали при смешанных инфекциях с Asc. apis и спорообразующими микроорганизмами.
Грибы A. flavus, A. niger и A. fumigatus устойчивы во внешней среде и к воздействию различных дезинфектантов, поэтому многие из существующих лечебно-профилактических средств при аспергиллёзе недостаточно эффективны.
Целью работы являлось изыскание новых экологически безопасных средств и методов борьбы с аспергиллёзом как самостоятельной инфекцией, так и на фоне аскосфероза пчёл.
В связи с этим в задачи работы входило:
1. Изучить особенности и формы проявления аспергиллёза как самостоятельной инфекции, так и на фоне аскосфероза пчёл.
2. Провести научное изыскание лечебных средств, эффективных при аспергиллёзе и аскосферозе пчёл.
3. Изыскать средства и режимы дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря при аспергиллёзе пчёл.
Исследования проводились в лабораторных и производственных условиях на пасеках, неблагополучных по аспергиллёзу, на современном методическом уровне, при использовании энтомологических, токсикологических, биохимических и микробиологических методик, с постановкой биологической пробы на семьях пчёл.
Научная новизна. Определена степень природной устойчивости пчелиной семьи по активности «гигиенического поведения» пчёл, которое направлено на удаление источника возбудителя (заболевших личинок) из семьи.
Доказана фунгицидная активность и эффективность применения препарата апиаск-полоски при аспергиллёзе и аскосферозе пчёл. Изучено влияние апиаск-полосок на пчёл, а также динамика накопления действующего вещества препарата в мёде обрабатываемых ульев.
Практическая значимость
На основании проведённых исследований в соавторстве с сотрудниками лаборатории ветеринарной санитарии в пчеловодстве ВНИИВСГЭ разработаны инструкция по применению препарата апиаск-полоски для борьбы с аспергиллёзом и аскосферозом пчёл (утверждено Россельхознадзором в 2006 г.) и технические условия на препарат апиаск-полоски СТО 45027172-0017-2006 от 14.11.2006 г. Предложен способ термической обработки ульев и инвентаря термофеном.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены:
- на пятой международной выставке и конференции «Интермёд-2004» в выставочном комплексе «Экспострой на Нахимовском», г. Москва (02.09.2004 г.);
на шестой международной выставке и конференции «Интермёд-2005» на ВВЦ, г. Москва (22.04.2005 г.);
- на международной конференции «40 лет систематического изучения карпатских пчёл» в г. Мукачево, Закарпатская обл., Украина (16.09.2006);
на межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (г. Москва, 18.12.2006). Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 4 работы. Проведённые исследования и полученные результаты позволяют вынести на защиту следующие положения диссертационной работы:
- некоторые эпизоотологические и биологические особенности аспергиллёзного поражения на фоне аскосфероза пчёл;
- значимость стимуляции активности «гигиенического поведения» пчёл при аспергиллёзе биологическими препаратами на примере ковитсана;
- эффективность препарата апиаск-полоски при аспергиллёзе пчёл на фоне аскосферозной инфекции;
- токсикологическая характеристика препарата апиаск-полоски;
- методы и способы дезинфекции ульев и пчеловодного инвентаря при аспергиллёзе пчёл;
Характеристика возбудителей аспергиллёза пчёл
СЕ. Burnside (1930) установил, что из всех аспергилл A. flavus и А. fumigatus наиболее вирулентны для медоносных пчёл. Патогенными свойствами обладает также A. niger. Кроме указанных видов рода Aspergilus, в ульях обнаружены многочисленные другие виды этого рода, но значение их в патологии пчёл не изучено.
Грибы рода Aspergillus, по утверждению В.В. Гулий и др. (1981), не являются специализированными паразитами, большей частью они поражают насекомых при высокой влажности и повышенной температуре.
Наиболее частые поражения медоносных пчёл {Apis mellifera) и карликовой пчёлы (Apis jlorea) в Иране, как сообщают A. Alizaden и M.S. Mossadegh (1994), вызывает A.flavus, несколько реже A.fumigatus, A.niger, A.nidulans и др. Аспергиллы (A.flavus, A.candidus, A.fumigatus, A.niger) часто поражают зимующих маток шмелей естественных популяций и при их лабораторном разведении.
Следует заметить, что аспергиллёз медоносных пчёл зарегистрирован во всех странах Европы, Азии, Северной Америке и Венесуэле, вероятно, он может встречаться повсеместно. Чаще болеют отдельные семьи, реже болезнь охватывает все семьи пчёл пасеки. В последние годы заболевание часто протекает совместно с аскосферозом и приобретает несколько большее распространение, кроме того, учитывая опасность, аспергилл для человека, оно требует большего внимания (Гробов, 2003; Baker, Torchi, 1968; Furya et all. 1981; Sulimanjvic, Matasin, 1983).
Аспергиллы относят к группе несовершенных грибов Fungi imperfecti, порядку Hyphales, семейству Dematicae, классу Ascomicetes. Они аэробы, оптимальный рН 5-6, температура роста 25-37С, хорошо растут на средах Сабуро и Чапека. Ряд авторов описывают более 350 видов, наиболее частыми возбудителями асперпшлёза они называют: A.fumigatus, A. flavus, A.niger (Ainsworth, Austwicr, 1955; Chute и др., 1958; Kiss, Kelentey, 1960; Stock, 1961; Алексеев и др., 1961; Awad, 1962; Генис, 1968; Козлов, 1968; Малахов и др., 1971; БилайВ.И., 1980).
По данным Н.П. Блинова (2001), возбудители аспергиллёза являются гиалогифомицетами или, точнее, лейкогифомицетами, у которых тканевые формы состоят, как правило, из бесцветных (гиалиновых), септированных элементов, иногда ветвящихся или, реже, округлых, тогда как в культуре аспергиллы - белые по цвету до периода спорообразования, или плодоношения.
П.Н. Кашкин и Н.Д. Шеклаков (1978), В.И. Билай и Э.З. Коваль (1988) описывают морфологию видов рода Aspergillus так: мицелий бесцветный или светлоокрашенный, цвет колоний определяется массой конидий (спор), развивающихся на конидиеносцах. Конидиеносцы на концах имеют вздутие различной формы, на поверхности которого сплошным слоем располагаются конидиегенные клетки, называемые фиалидами: либо непосредственно на вздутии, либо в пучках на цилиндрических клетках, называемых метулами; фиалиды развивают цепочки конидий. Совокупность вздутия конидиеносцев, метул, фиалид и цепочек конидий составляют головку аспергилл.
A.M. Ариевич (1957) описывает A. flavus как широко разрастающиеся колонии зеленой, часто с оттенком желтой, лимонной окраски, с возрастом обычно тёмно-жёлто-зелёные; на обратной стороне бесцветные или розовато-тускло-желтоватые. Многие штаммы образуют склероции, хорошо видимые невооружённым глазом в виде шаровидых твердых образований, сначала белые, затем коричневые. При микроскопии препаратов, уточняет П.Н. Кашкин (1962), конидиеносцы 400-1000x5-15 ц, с бесцветной шероховатой оболочкой, на верхушке у молодых культур образуют продолговатые, позже полукруглые или круглые вздутия 10-40 ц в диаметре. Головки радиальные. Стеригмы одноярусные (главным образом на маленьких вздутиях) или двухъярусные (на больших вздутиях). Конидии яйцевидные или шаровидные, от бесцветных до жёлто-зелёных, иногда почти гладкие, но большей частью с шероховатой оболочкой.
В.И. Билай и др. (1980) описывают A. Fumigatus. У этого гриба широко разрастающиеся колонии, бархатистые, редко пушисто-войлочные от развития воздушного мицелия, сначала голубовато-зелёные, затем зелёные, с возрастом темнеющие. Обратная сторона колонии бесцветная или окрашена в жёлто-коричневые тона. При микроскопии препарата конидиеносцы гладкие, короткие, до 300 ц длиной и 5-8 ц толщиной, часто более или менее зелёные. Головки нерадиальные - в верхней части колбообразного вздутия развиваются одноярусные стеригмы, расположенные не строго параллельно оси конидиеносца, конидии шиповатые, округлые, цепочки их склеены в колонку.
A.niger более подробно описывает Н.А. Спесивцева (1967). Это быстро растущие, бурые, черновато-коричневые, или угольно-чёрные, на обратной стороне бесцветные или желтоватые колонии, иногда образуют твердые белые, с возрастом становящиеся коричневыми, склероции. Конидиеносцы 200-400 х 7-Ю д, иногда значительно крупнее, с гладкой толстостенной оболочкой, обычно желтые, а ближе к вершине коричневые. Головки радиальные, крупные. Вздутие шаровидное, иногда до 100 д в диаметре, стеригмы одно- и двухъярусные, коричневатые, или почти чёрные.
Патогенез, клинические признаки и диагностика заболевания
По О.Ф. Гробову (2003), в улье обычно поражается только часть расплода и взрослых пчёл, реже болезнь охватывает весь расплод и значительную часть имаго.
К. Toumanoff(1928) описывает, что заражение личинок происходит через кишечник при употреблении инфицированных спорами гриба нектара, пыльцы. Заболевать личинки и пчёлы могут в любом возрасте. По мнению Toumanoff, гибель их наступает через два, чаще на третий день после заражения. Больные личинки беспокоятся, меняют положение в ячейке.
Последние изучения Ф.М. Алексеенко, В.А. Ревенка и М.А. Чепурко (1991) говорят о возможности проникновения гриба в организм насекомых через кутикулу, через поврежденные различными паразитами наружные покровы. Патогенное действие A.jlavus заключается не только в образовании мицелия, который прорастает сквозь тело хозяина, но и главным образом в действии выделяющихся токсинов, которые разрушают ткани расплода и взрослых пчёл. Строение гриба способствует его распространению в улье. Пчёлы легко приходят в соприкосновение со спорами и на ножках, волосках тела, ротовом аппарате переносят их при уходе за расплодом на личинок, а также передают друг другу. Кроме того, при чистке ячеек споры переносятся на здоровые особи более активно, чем при других заболеваниях.
По мнению В.Д. Бобова и В.Ф. Титова (1985), гриб после инфицирования развивается с различной скоростью. И первые изменения в расплоде наблюдаются в течение нескольких дней. Больные личинки становятся малоподвижны и быстро погибают. Пчеловоды обнаруживают заболевание в основном по изменению цвета и состоянию расплода.
М.Н. Мукминов и Д.Г. Вакилова (2004) установили, что внедрение конидий возбудителя аспергиллёза в кишечник личинок пчёл выявляется на 4 день после заражения. При экспериментальном заражении в средней кишке аспергиллёз встречался через 2 часа в виде конидий на поверхности слизистой без каких-либо повреждений эпителия пищеварительного тракта. Через 10 часов установили интенсивное развитие гриба, которое сопровождалось началом деструктивных процессов в виде колоний на эпителии (слизистой) кишечника. Развитие первичного инфицирования кишечника личинки отмечали через 72 часа, это показывало интенсивную деструкцию эпителия. Также мицелий гриба распространялся в полость тела личинки.
Проникновение мицелия через наружные покровы начинается в первые 1-2 дня у головы личинки или между сегментами. Поверхность тела становится грубой, сморщенной, приобретает кремово-белый цвет, исчезает сегментация. Личинки погибают на 5-6 день или в начале стадии распрямления. Тело погибшей личинки постепенно затвердевает, мумифицируется. При выходе мицелия на поверхность тела погибшей особи формируются конидиофоры, споры гриба заполняют ячейки, содержащие мумии личинок, и встречаются на крышечках таких ячеек (Смирнов, Григорян, 1985; Гробов, Смирнов, Попов, 1987).
В.И. Полтев и Е.В. Нешатаева (1977) отмечают: мумифицированных личинок часто трудно извлечь из ячеек, так как мицелий соединен с их стенками. Гриб может так сильно разрастаться, что закрывает поверхность расплода, и создается впечатление, что это жёлто-зелёная пыльца. Различные виды гриба имеют на открытой части ячейки различный вид. В печатных и частично скрытых ячейках сотов твердые, мумифицированные личинки бело-жёлтого, жёлто-зелёного (A.flavus), серо-зелёного (A.fumigatus) или чёрно-белого цвета (A.niger). У закрытых ячеек крышечки большей частью провалившиеся, заражённые личинки лежат отдельными или сплошными участками. При гибели в открытом расплоде личинки кремового цвета. Чаще гибель происходит в печатном расплоде, погибают личинки последних стадий развития, предкуколки и куколки рабочих пчёл, трутней и маток. Крышечки над такими ячейками обычно вдавлены, часто с отверстиями неправильной формы. Трупы личинок становятся морщинистыми, меньшими по объёму, боковая поверхность, обращенная кверху, высыхает раньше и труп сначала принимает С-образную форму, а затем выпрямляется. На переднем конце тела личинки образуется кольцо беловато-жёлтого мицелия или все тело покрыто оболочкой мицелия. Образование спор начинается на передней части личинки.
В.П. Урбан (1987) также выделяет трудность удаления пчёлами мумий, они выгрызают стенки ячеек или прополисуют их. По его описанию, поверхность сота приобретает углубления, края ячеек неровные, расплод пестрый, ячейки со здоровым расплодом в различных стадиях развития располагаются между пустыми или содержащими остатки бело-желтых или желто-зеленых (при A.flavus) мумий ячейками. Крышечки некоторых печатных ячеек покрыты жёлто-зелёным газоном гриба. Запах обычно отсутствует. В запущенных случаях плесень может распространяться на ячейки, занятые пергой, и свободные участки сота.
Мумификация трупов иногда происходит медленно, отмечает W. Ritter (1994), возможно, из-за развития банальной микрофлоры.
W. Ritter (1994) пишет, что при заболевании взрослых рабочих пчёл, трутней и маток отмечается беспокойство, пчёлы покидают клуб, становятся вялыми, у некоторых насекомых наблюдают параличи конечностей. Полёт их становится слабым, тяжелым, вскоре пчела совершенно теряет способность к полёту и погибает через несколько часов, брюшко больных насекомых увеличивается, становится более плотным, гибель основной массы пчёл происходит вне гнезда и часто остается незамеченной пчеловодами.
Методика микроскопического исследования при выделении возбудителя аспергиллёза пчёл
Микроскопическое исследование является одним из методов диагностики микозов. Существует множество методов исследования микроскопических грибов, наиболее широко применяется метод «раздавленной» капли.
С неблагополучных по аспергиллёзу пасек брали на исследование образцы сотов с расплодом на различных стадиях поражения (живые, погибшие, мумифицированные личинки) размерами 10 10 см и по 20-30 погибших личинок, а также взрослых пчёл. Для выявления возбудителя аспергиллёза делали соскоб мицелия с поверхности личинок. Исследуемый материал помещали на предметное стекло в каплю спирт-глицерина, покрывали покровным стеклом и проводили исследование под микроскопом при малом увеличении (х70).
Предварительный диагноз на аспергиллёз ставили при обнаружении в патологическом материале элементов гриба, характерных для рода Aspergillus
Микологическое исследование патологического материала заключалось в посеве его на сусловый агар с целью выделения грибов.
Личинок или трупов насекомых предварительно разрезали на кусочки. Для выделения грибов из кишечника пчёл поверхность хитинового покрова обрабатывали 70%-ым спиртом, промывали стерильной водой, после чего с помощью глазного пинцета и ножниц препарировали кишечник и распределяли его по поверхности среды.
Для приготовления смыва с сотов в каждом образце выявляли ячейки с погибшим расплодом или его останками и в 15-20 ячеек стерильной пипеткой заливали тёплый стерильный физиологический раствор. Через 20-30 минут (а в случае если материал не свежий, то через 1-2 часа) после тщательного перемешивания раствора в ячейках стерильной пипеткой смывы переносили в стерильную пробирку, где их смешивали, а далее использовали для выделения культур возбудителя аспергиллёза пчёл.
При микологических исследованиях диагностический смыв или кусочки погибших мумифицированных личинок помещали на поверхность питательной среды в чашки Петри. Перед посевом сусло-агар расплавляли на водяной бане, а затем охлаждали до 40-45С. Для подавления сопутствующей бактериальной микрофлоры в охлаждённый агар добавляли антибиотики (пенициллина 50 тыс. ЕД и стрептомицина 100 тыс. ЕД на 1 литр среды). Посевы выдерживали в термостате при температуре 35С и наблюдали за ними в течение 7 суток, учитывая, что в норме эти грибы развиваются на 3-5 сутки. Чистые культуры получали путем пересева на среду Чапека инокулюма с периферии колоний, характерных для данного вида гриба, выросших в первичных посевах. С целью обнаружения характерных признаков грибов рода Aspergillus готовили микропрепараты и исследовали их при увеличении х400 с помощью бинокулярного микроскопа МБС-1.
В ходе изучения потенциальных фунгицидов принимали во внимание физико-химические свойства и степень изученности каждого из них, включая биологическую активность, характер действия на пчёл, токсичность и другие показатели.
Определение чувствительности изучаемых грибов к фунгицидам проводили методом диффузии в агар (Вашков, 1977) с использованием дисков. С этой целью в стерильные чашки Петри, расположенные на горизонтальной поверхности, разливали питательную среду и подсушивали в течение 3-4 часов при температуре 37С. На поверхность подсушенного агара наносили 1 мл взвеси спор гриба (200 тыс/мл) и равномерно распределяли по поверхности стеклянным шпателем. Предварительно пропитывали бумажные диски (d=6 мм) растворами испытуемых веществ в определённых концентрациях и просушивали их в течение 5-7 часов при температуре 37С. Препарат апиаск-полоски для проведения испытаний резали на диски диаметром 6 мм. На поверхности засеянного агара пинцетом раскладывали диски, пропитанные испытуемыми веществами, на расстоянии 2,5 см от центра чашки. Чашки оставляли при комнатной температуре на 3 часа для преддиффузии, а затем проводили инкубирование в термостате при температуре 32-35С в течение 10 суток. Результаты опытов учитывали путем измерения зон задержки роста гриба вокруг дисков, включая диаметр самого диска. В качестве положительного контроля использовали общеизвестный и широко применяемый ранее антибиотик нистатин; в качестве чистого нейтрального контроля - стерильную водопроводную воду.
Изучение факторов, влияющих на интенсивность эпизоотического процесса при аспергиллёзе пчёл
На пасеках проводили изучение факторов, влияющих на интенсивность эпизоотического процесса при аспергиллёзе пчёл.
Эпизоотический процесс на обследованных пасеках проявлялся неодинаково. На сроки появления клинических признаков и формы проявления микозов в пчелиной семье оказывали влияние различные факторы. При изучении этого вопроса было рассмотрено формирование эпизоотической цепи при микозах в пчелиной семье.
Развитие аспергиллёза пчёл возникало, когда в семье появлялся источник инфекции - поражённая личинка, содержащая споры возбудителя аспергиллёза, а рядом располагались восприимчивые особи - разновозрастные личинки пчёл. Контаминированный спорами корм являлся фактором передачи, а механизм передачи осуществлялся непосредственно пчёлами-кормилицами. Таким образом, происходило формирование эпизоотической цепи как последовательных циклов заражения и гибели личинок пчёл и постепенное развитие эпизоотического процесса на уровне пчелосемьи.
Наибольший контакт с больными, погибшими личинками и пчёлами имели внутриульевые молодые пчёлы в возрасте 1-12 дней, которые осуществляли чистку ячеек, гнезда и кормление расплода. Когда расплод и корм размещались на одном соте и этот корм использовался для вскармливания личинок, создавались условия, в которых степень контаминации мёда и перги возбудителями аспергиллеза оказывала существенное влияние на скорость возникновения и развития эпизоотического процесса.
По мере развития аспергиллеза при поражении личинок в пчелиной семье происходил переход эпизоотического процесса на второй уровень, когда уже вся пчелиная семья, как целостная биологическая единица, являлась источником инфекции. Это происходило, когда в семье отмечалась значительная гибель личинок и взрослых пчёл, а в улье и на сотах находилось большое количество спор возбудителей. В механизме передачи аспергиллеза на этом уровне участвовали пчёлы-воровки, которые проникали за кормом в ослабленные больные семьи и тем самым заражали другие здоровые семьи.
Дальнейшее развитие эпизоотического процесса всегда характеризовалось выраженным клиническим проявлением аспергиллеза и общим ослаблением пчелиной семьи. На этом уровне без проведения специальных ветеринарно-санитарных мероприятий пчелиная семья погибает или непосредственно от заболевания или от общего ослабления и слёта пчёл.
Проведённые эпизоотологические исследования на пасеках различных регионов с различной технологией содержания пчёл подтвердили тот факт, что при уменьшении силы пчелиной семьи, вызванном формированием отводков, роением, высокой экстенсивностью варроатозной инвазии, отсутствием взятка в природе, хронический характер эпизоотического процесса обостряется.
Реакция пчёл на погибших личинок и скорость их удаления из ячеек - это один из механизмов природной устойчивости пчелиной семьи к инфекционным болезням. Такое отношение пчёл к погибшему расплоду называют «гигиеническим поведением».
Активность «гигиенического поведения» пчёл по их реакции на гибель личинок в запечатанном расплоде изучали методом, предложенным М. Spiwak (2001). Для этого тонкой иглой прокалывали личинок через крышечки запечатанного расплода; таким образом, подготавливали участок расплода 5x5 см (около 100 ячеек) с двух сторон одного сота. Через определённые промежутки времени (4,6, 8,12, 14,22, 24 часа) определяли степень удаления погибших личинок из этих ячеек. При постановке опыта формировали группы из здоровых пчелиных семей, а также семей с клиническими признаками аспергиллёза, находящихся в равных условиях.
В результате проведённых исследований установлено, что активность «гигиенического поведения» зависела от общей силы пчелиной семьи и была наиболее выражена в семьях, где было много молодых пчёл. Результаты эпизоотологических исследований свидетельствуют, что в пчелиных семьях слабой и средней силы смешанные формы проявления аспергиллёза регистрировались в 5-8 раз чаще, чем в сильных пчелиных семьях.
Для выявления отличий в активности «гигиенического поведения» пчёл разных пород были проведены опыты с пчёлами карпатской, кавказской и среднерусской пород.
