Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 9-25
1.1 Состояние водоемов Акмолинской области по инвазионным болезням. 9-13
1.2 Описторхоз плотоядных, распространение, терапия и профилактика 13-19
1.3 Новое в терапии описторхоза 19-25
2 Собственные исследования
2.1 Материалы и методы исследований 26-35
2.1.1 Методика исследования рыбы на наличие метацеркариев Opisthorchis felineus 26-27
2.1.2 Характеристика экспериментальных животных 27-30
2.1.3 Фармакологические средства, использованные в эксперименте 30
2.1.4 Изучение показателя общего состояния у животных при экспериментальном описторхозе 30-32
2.1.5 Определение летальных доз и токсичности на хомяках 32-33
2.1.6 Изучение дозозависимости, противоописторхозной активнасти 33-34
2.1.7 Методика копроскопического исследования 34
2.1.8 Изучение гемотологических и биохимических исследований 34
2.1.9 Патоморфологические исследование 34
2.1.10 Статистическая обработка полученных результатов 35
2.2 Результаты исследования 35-84
2.2.1 Ветеринарно-санитарная оценка рыбы водоемов Акмолинской области пораженных личинками описторхоза 35-45
2.2.2 Обезвреживание мяса рыбы, пораженной метацеркариями Opisthorchis felineus 46-47
2.2.3 Изучение фармакологических свойств настойки Saussurea amara 47-54
2.2.4 Показатели общего состояния у собак, зараженных Opisthorchis felineus 54-58
2.2.5 Противогельминтная активность настойки Saussurea amara при описторхозе собак 58-61
2.2.6 Сравнительная характеристика показателей общего состояния животных на фоне проводимой терапии 61-65
2.2.7 Сравнительная характеристика лабораторных показателей при описторхозе собак 66-80
2.2.8 Патологические изменения в органах 80-84
Обобщение результатов 85-88
Выводы 89-90
Список использованных источников 91-100
Приложения 101-115
- Описторхоз плотоядных, распространение, терапия и профилактика
- Методика исследования рыбы на наличие метацеркариев Opisthorchis felineus
- Изучение дозозависимости, противоописторхозной активнасти
- Обезвреживание мяса рыбы, пораженной метацеркариями Opisthorchis felineus
Введение к работе
Актуальность проблемы. Описторхоз в Казахстане - одна из проблем краевой патологии ряда областей. Описторхоз является эндемичным, но довольно распространенным заболеванием в мире, в том числе и в Казахстане. Актуальность проблемы возрастает в связи с миграцией населения в эндемичные очаги описторхоза. Для успешной борьбы с описторхозом важное значение имеет выявление распространенности инвазии на территории, где обнаружены очаги описторхоза, это бассейны рек Обь, Иртыш, Иргиз, Тургай, Нура и Ишим [1,2].
В последние годы большое внимание медиков и ветеринарных специалистов привлекают лекарственные растения, а также препараты, созданные на их основе, способные не только эффективно воздействовать на патологические очаги, но и существенно повышать защитные силы организма. В отличие от синтетических препаратов, которые для организма являются чужеродными, применение лекарственных растительных средств, содержащих необходимые компоненты в соотношениях, оптимально сбалансированных в процессе эволюции животных и растений самой природой, следует рассматривать как наиболее физиологический метод нормализации гемостаза животных [3].
Согласно Указу № 3621 Президента Казахстана Н.А. Назарбаева «О мерах по развитию фармацевтической промышленности Республики Казахстан» актуальность изучаемой проблемы возрастает, так как одной из целей данной программы является интродукция лекарственных растений и разработка технологии синтеза лекарственных соединений из растительного сырья, как препаратов экономически выгодных и обладающих минимальными побочными эффектами, что обуславливает необходимость изучения фармакологических свойств новых препаратов растительного происхождения.
Поэтому изыскание новых лекарственных растений, их изучение и внедрение в широкую ветеринарную практику имеют большое народнохозяйственное значение [5].
Современный арсенал лекарственных средств, используемых для лечения описторхоза, включает препараты различных химических классов, в частности хлоксил и празиквантел, но недостаточная эффективность, большая токсичность, возникновение побочных реакций и осложнений указывают на необходимость усовершенствования лечебных мероприятий по борьбе с этой инвазией [5,6]. В настоящее время актуальность поиска обусловлена также неблагоприятной экологической обстановкой, влиянием химических и медикаментозных воздействий на организм животных, что привело к снижению иммунитета и защитной функции гепатобилиарной системы.
Широкое распространение этого заболевания среди животных и людей диктует необходимость создания нетоксического препарата, обладающего комплексным фармакологическим действием, включающим не только противопаразитарную, но и противовоспалительную, желчегонную, спазмолитическую активности [6,7].
Богатство флоры нашей страны даёт возможность выбора и получения препаратов растительного происхождение для лечебного воздействия на организм [7,8]. Среди огромного разнообразия лекарственных растений значительный интерес в этом плане представляет род Соссюрея, так как ряд видов которого широко используется в народной медицине и ветеринарии для лечения заболеваний печени, почек, желудочно-кишечного тракта.
Цели и задачи исследований. Целью научных исследований явилось изучение распространения описторхоза рыбы в водоемах Акмолинской области Республики Казахстан, клинико- лабораторных аспектов диагностики экспериментального описторхоза собак и методов эффективной фармакотерапии больных.
Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
- дать ветеринарно-санитарную оценку пораженной описторхозом рыбы в водоемов Акмолинской области Республики Казахстан; изучить общетоксикологическое действие настойки Saussurea amara в эксперименте на лабораторных животных; определить дозазависимость противоописторхозного действия настойки Saussurea amara в эксперименте на собаках и сирийских хомяках;
- изучить клинические изменения при описторхозе собак;
- исследовать противоописторхозную активность настойки Saussurea amara в сравнении с синтетическим препаратом дронцитом.
Научная новизна работы. Установлена степень зараженности рыбы метацеркариями Opisthorchis felineus в водоемах Акмолинской области и дана ветеринарно-санитарная оценка пораженной рыбы.
Впервые изучено токсическое действие настойки Saussurea amara и определены эффективные лечебные дозы препарата на экспериментальной модели описторхоза лабораторных животных.
Уточнены и конкретизированы региональные особенности клинических, биохимических, гематологических и морфологических изменений в организме при описторхозе собак.
Впервые проведен сравнительный анализ противоописторхозной
активности настойки Saussurea amara в сравнении с дронцитом.
Практическое значение. Полученные данные об эндемичности и большой распространенности описторхоза животных в Акмолинской области Республики Казахстан, а также высокой фармакологической эффективности настойки Saussurea amara послужили основой для разработки «Рекомендации по лечению описторхоза собак». Проведенные клинические и лабораторные исследования позволили обосновать перспективность применение настойки Saussurea amara для лечения собак при описторхозе. Дано методическое обоснование ветеринарно-санитарной оценки пораженной рыбы, методов ее обезвреживания и последующего применения в качестве продукта питания или технического сырья.
Основные положения диссертации, выдвигаемые на защиту:
ветеринарно-санитарная оценка рыбы, пораженных метацеркариями Opisthorchis felineus в водоемах Акмолинской области Республики Казахстан; - клинико-лабораторный статус собак при описторхозе в эксперименте;
противоописторхозная активность настойки Saussurea amara в сравнении с дронцитом при лечении собак, больных описторхозом.
Личный вклад автора: автором лично выполнена основная экспериментальная часть, сбор литературного обзора, их анализ и обработка, а также самостоятельно проведено обобщение всех результатов и выводов.
Реализация результатов исследования. Основные положения и
практические предложения, вытекающие из результатов выполненных исследований, доложены, обсуждены и одобрены на заседаниях ученого совета Каз. ГАТУ им. С. Сейфуллина (2005), на научных конференциях Каз. ГАТУ им. С. Сейфуллина (2002-2004), втором международном ветеринарном конгрессе. (Алматы, 2003), 1-ой Всесоюзной конференции по иммунотерапии (Сочи, 2003). Они используются в рыболовецких хозяйствах Акмолинской области Республики Казахстан по ветеринарно-санитарной оценке пораженной рыбы.
Публикация результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 8 работ и 1 рекомендация.
1. Результаты исследования рыб семейства карповых на описторхоз в водоемах Акмолинской области. Вестник науки Казахского аграрного университета им. С. Сейфуллина Т. III, № 8 Астана, 2003
2. Гельминтозные болезни рыб в северном регионе Акмолинской области. Вестник науки Казахского аграрного университета им. С.Сейфуллина ТIII, № 9 Астана, 2003
3. Клинико-гематологические показатели собак при экспериментальном описторхозе. Второй международный ветеринарный конгресс. Алматы, 2003
4. Биохимические аспекты противопаразитарной Эффективности биологически - активной субстанции растительного сырья Казахстана. Диагностика, лечение и профилактика болезней животного. Сборник научных трудов. ТIII. Воронеж, 2004
5. Клинико-иммунологические исследования при описторхозе у собак. Диагностика, лечение и профилактика болезней животного. Сборник научных трудов. ТIII. Воронеж, 2004
6. Фитотерапия экспериментального описторхоза собак. Вестник № 4 Семипалатинского государственного университета им. Шакарима. Семей, 2004
7. Клинико-иммунологические показатели при описторхозе собак. Сборник научных трудов факультета ветеринарной медицины. Т III Воронеж, 2004
8. Изучение биохимических показателей функции печени у экспериментальных хомячков, зараженных описторхозом на фоне антигельминтной терапии, различными препаратами. Вестник Южно - Казахстанской медицинской академии № 3 (23), Шымкент, 2005
9. Рекомендации по лечению описторхоза собак. Астана, 2005
Структура диссертации. Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждение результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Работа содержит 29 таблиц, 17 рисунок, 185 библиографических источников, в том числе 13 иностранных.
Описторхоз плотоядных, распространение, терапия и профилактика
Впервые описторхоз у человека обнаружил профессор Томского университета К.Н. Виноградов, найдя в 1891 году в печени умершего больного плоских червей величиной около 1 см. Это были описторхи, названные К.Н. Виноградовым сибирской двуусткой. Это открытие послужило толчком к всестороннему изучению описторха как в России, так и за рубежом. Особенно большой размах работы по изучению этого заболевания в нашей стране, заметен с 1929 года. В том году в низовьях Оби работала гельминтологическая экспедиция под руководством К.И. Скрябина. Участники отряда провели исследование, благодаря чему удалось выяснить, что описторхоз чрезвычайно широко распространен в этой местности, как среди людей, так и среди животных (Е.Г. Сидоров, 1970).
Первые сведения о распространении описторхоза на территории Казахстана имеются в диссертации К.И. Скрябина на степень магистра ветеринарных наук (1916г). Изучая в г. Аулиэ - Ата (ныне г. Джамбул) зараженность различных животных паразитическими червями - гельминтами, он нашел сибирскую двуустку у домашней кошки. В 1925 году гельминтологической экспедицией, работающей под руководством Н.П. Попова в Актюбинской и Кзыл- Ординской областях, эти паразиты также были найдены у собак и кошек . По данным Е.Г.Сидорова, A.M. Пантюхова [45], первые случаи описторхоза среди населения Казахстана зарегистрированы в 30-х годах, но нужно учесть, что массовых специальных обследований людей на описторхоз до 1941 года не проводилось. Широкое обследование населения на гельминтозы стало проводиться в последние годы. Это позволило установить существование крупного очага описторхоза, охватывающего все Прииртышье в пределах Казахстана. На севере этот очаг уходит за пределы республики, захватывая Прииртышье и другие притоки реки Оби, до самого ее устья. Оказалось, что описторхоз здесь имеет крайне широкое распространение среди населения и домашних плотоядных животных. Достаточно сказать, что экстенсивность описторхозной инвазии среди взрослого населения Тобольска достигло 84,3 %, Обдорска (ныне Салехард) - 85,2%, Березовского района -90%. Описторхозом были поражены 100% кошек и 90% собак.
В 1941-1942гг. в Павлодаре было зарегистрировано 67 случаев заболеваний описторхозом (1,4% от числа обследованных), в это же время заболевание было отмечено у собак в Павлодаре и Усть- Каменогорске . Помимо Иртышского очага, в Казахстане за последние 6-8 лет выявлен ряд неизвестных ранее очагов описторхоза. Один из наиболее крупных среди них — Нуринский. Охватывающий территорию на протяжении реки Нуры, от Карагандинского водохранилища до Коргалжынской системы озер. Таким образом очаги описторхоза зарегистрированы во многих районах Казахстана, Восточно-Казахстанской, Семипалатинской, Павлодарской, Кустанайской, Акмолинской, Карагандинской, Актюбинской областях [45].
Определенную известность приобрела р. Шидерты среди гельминтологов и медиков после выявления на ней очага описторхоза и расшифровки его структуры (Сидоров, 1964,1975). Было установлено, что 100% зараженность гольянов в реке обеспечивает (естественно, через посредство битиний) водяная полевка. Тем самым впервые удалось подтвердить предположение Е.М. Павловского о возможности циркуляции возбудителя описторхоза в природе без участия человека. Как было сказано, на р. Шидерты функционировал природный очаг описторхоза. Канал же, соединив реки Иртыш и Нура, тем самым соединил Обь - Иртышский очаг описторхоза с Нуринским, выявленным в 1960 году (Сидоров) [42,43,44,45].
Очаги описторхоза также выявлены и в Европейской части СССР в бассейнах Днепра, Камы, Волги, Донца, Дона, Северной Двины, Невы, Немана и Карелии. Описторхоз у домашних плотоядных установлен в Польше, ФРГ, Голландии, Франции, Венгрии, Румынии, Италии, Индии. Дельта реки Волги и Волго-Ахтубинская пойма являются крупными природными очагом описторхоза [46].
В последнее время наблюдается значительное расширение ареала распространения этого гельминтоза, он обнаружен в неэндемичных регионах, включающих Северную Америку и Западную Европу. Обусловлено это возросшей миграцией населения и животных, ростом удельного веса рыбы в рационе питания, недостаточным контролем за переработкой рыбы, ее употреблением в пишу на значительном удалении от очага заражения.
В настоящее время становится очевидным повсеместное распространение паразита этого заболевания и о возможности выделения европейской, казахстанской и сибирской разновидностей Opisthorchis felineus [47]. Описторхоз - тяжелое гельминтозное очаговое заболевание плотоядных и в частности человека, вызываемое трематодами (Opisthorchis felineus).
Описторхоз является одним из древнейших и самых распространенных гельминтозов и представляет собой важную социально-экономическую ветеринарную, медицинскую проблему, поскольку гельминты оказывают существенное влияние на экономику, здоровье животных и людей увеличивают заболеваемость и приводят к потере трудоспособности [48]. В 1884 году Ривальта (Rivalta) в Италии описал описторхоз у кошки, а впервые описторхоз у человека обнаружил профессор Томского университета К. Н. Виноградов, найдя в 1891 году в печени умершего больного плоских червей величиной около 1 см. Это были описторхи, называемые К.Н. Виноградовым сибирской двуусткой [49].
Это открытие послужило толчком к всестороннему изучению описторхоза как в России, так и за рубежом. В этом году в устьях Оби гельминтологическая экспедиция под руководством К.И. Скрябина установила, что описторхоз чрезвычайно широко распространен в этой местности, как среди людей, так и среди животных [50]. От описторхоза особенно сильно страдают молодые щенки и котята, однако и взрослые собаки и кошки нередко гибнут от паразитических червей, за счет ежегодного нарастания инвазии [60].
Большинство глистных болезней в т.ч. и описторхоз протекает хронически, вызывая истощение собак и кошек. Эти гнилостные хронические заболевания, протекающие в самый важный и ответственный период роста щенков и котят, ведут к недоразвитости собак и кошек и большей восприимчивости их ко всяким рода иным заболеваниям. [61]. Из данных литературы известно, что собаки являются носителями многочисленных видов гельминтов (около 250) и служат источником заражения сельскохозяйственных животных и человека, поэтому инвазированные гельминтами собаки и кошки, находятся в постоянном и самом тесном контакте с человеком и сельскохозяйственными животными, представляют серьезную опасность в ветеринарно-санитарном отношении [62,63].
В настоящее время по статистическим данным ветеринарной отчетности, а также по данным санитарных эпидемиологов, в нашем регионе (Акмолинская область) констатируется увеличение заболеваемости описторхозом, как среди людей, так и среди животных.
Методика исследования рыбы на наличие метацеркариев Opisthorchis felineus
Гельминтологическое исследование проводили согласно ГОСТа 7631-85 органолептическими и лабораторными методами, а также на зараженность личинками гельминтов. Определение метацеркариев в мышцах рыбы проводили двумя методами: а) компрессорного исследования. Ланцетом удаляем чешую с одного боку под спинным плавником рыбы, затем надрезаем кожу в двух направлениях. Первый разрез делали впереди спинного плавника перпендикулярно продольной оси тела до боковой линии, второй - от конца первого надреза по направлению к хвостовому плавнику вдоль боковой линии. Пинцетом поднимаем край кожи и отпрепаровываем ее на площади до 25см так, чтобы подкожная клетчатка оставалась на поверхности мышц. После этого срезали поверхностный слой мышц толщиной 0,2 - 0,5 см, нарезали мелкими кусочками и размещали по всей поверхности нижнего стекла комперессориума, покрывали верхним стеклом и сжимали винтами. Под малым увеличением микроскопа просматривали все срезы, взятые от одной рыбы. Имеющиеся личинки легко обнаруживали, они имели вид цисты округлой формы серогоцвета размером 0,17- 0,21 мм. Личинка в цисте очень подвижная. Размер освобожденного метацеркария 0,44 - 1,36х 0,15-0,30мм. У него хорошо видны 2 присоски и экскреторный пузырек округлой формы, заполненный черными гранулами. [106,107,108]. б) переваривания мышечной ткани в искусственном желудочном соке. Для метода переваривания брали всю поверхность мышечной ткани (до 0,5 см) отделяли от кожи, тщательно измельчали ножом. Мышечную ткань рыбы заливали в соотношении 1:10 искусственным желудочным соком (11мл концентрированной соляной кислоты, 7г пепсина, 9г поваренной соли на 1л дистиллированной воды). Пробу помещали в термостат на 3 часа при температуре 36-38С, после чего содержимое фильтровали в стеклянный цилиндр через металлический фильтр с размером ячеек 1x1 мм. Через 15-20 мин. верхний слой желудочного сока с переваренной мышечной тканью сливали, а осадок переносят в чашку Петри, где подсчитывали метацеркариев.
Для лучшего отделения личинок, в чашку Петри наливали физиологический раствор, делали несколько круговых движений, в результате которых метацеркарии концентрируются в центре чашки Петри, а излишки физраствора с остатками мышечной ткани удаляли пипеткой. Эффективность метода переваривания (в сравнении с компрессионным) в 1,5 раза выше, но методика трудоемка и требует много времени. Метацеркарии, выделенные методом переваривания в искусственном желудочном соке из свежей рыбы, сохраняли свою структуру и жизнеспособность в течение 12 часов. [109,110]. Потом данный раствор перорально вводили золотистым хомякам и скармливали собакам, смешав с хлебным мякишем или мясным фаршем в количестве 25 и 60 шт. метацеркариев на каждое животное. Экспериментальная часть работы выполнена на 85 беспородных щенках обоего пола, массой от 2,5 до 3 кг двух месячного возраста. Животные были взяты от 15 пометов, а так же в эксперименте использовали 100 сирийских хомячков[111,112]. Все животные были подобраны по принципу аналогов. Выбор собак в качестве опытных животных объясняется, прежде всего, тем, что они являются окончательными хозяевами описторхоза, охотно поедают зараженную рыбу. Кроме того, использование собак в качестве лабораторных животных имеет ряд преимуществ: неприхотливость, небольшие размеры, удобство содержания, объем крови у собак позволяет более глубже изучить картину крови. Все животные содержались на стандартном пищевом рационе и свободном доступе к воде (Таблица 3). Характер кормления большое влияние оказывает и на пищеварительную систему, связанную с потреблением, переваримостью и усвоением корма на здоровье собак. Поэтому, кормление собак должно быть полноценным, сбалансированным и рациональным. Количество корма, выдаваемое каждому щенку, может быть разное в зависимости от его породы, возраста, аппетита. Однако при этом можно руководствоваться следующими рекомендациями, которых придерживаются многие практики собаководы : объём корма на одно кормление для щенков в возрасте от 1 до 2 месяцев -1-2 стакана, от 2 до 4 месяцев- от 2 стаканов до 1 литра, от 4 до 6 месяцев - 1-1,5литра, от 6 до 11 месяцев -1,5 - 2литра [113]. Опытные и контрольные животные содержались в одинаковых условиях клиники Казахского государственного агротехнического университета им. С. Сейфуллина в индивидуальных металлических клетках. Клетки предварительно были обработаны дезинфицирующим 3%-ным раствором NaOH. Для воспроизведения экспериментального заражения описторхозом животные брались натощак 1 раз в день с 8 до 10 часов в течение 14 дней. Моделирование хронического описторхоза на хомяках проводили согласно модели хронического описторхоза по методу Д.Г.Баяндиной. На собаках воспроизведение хронического описторхоза проводили по той же методике, но нашей модификации (заявка на авторские права подана) [114].
Изучение дозозависимости, противоописторхозной активнасти
Экспериментальное исследование in УІУО.ПОСЛЄ заражения на 25-30 сутки проводили контроль копроскопией эфир-формалиновым методом (80) и определением числа описторхов в печени и желчных протоках при вскрытии, а также их распределение по органам [119].
Учёт эффективности проводили методом непрямой активности (интенс-эффективность), который приводится в литературных данных для учета эффективности различных доз препарата при гельминтозах. При определении интенс-эффективности в связи с трудностью, а часто и невозможностью подсчета отшедших паразитов сравнивают среднее число гельминтов у вскрытых животных в опытной и контрольной группах и определяют интенс-эффективность при помощи «контрольного теста». Так называемого процента непрямой эффективности, и вычисляется по формуле: Где, К - количество описторхов у животных контрольной группы;
О - количество описторхов у животных опытной группы [120,121,125]. Для определения «доза-эффект» проводили общеклинические, биохимические и морфологические исследования. Павшие животные вскрывались, описывались, органы с выраженными изменениями отбирались для гистологического анализа. По окончании срока наблюдения выживших животных забивали декапитацией, вскрывали, описывали, отбирали пробы тканей для гистологического изучения.
Экспериментальное исследование in vitro [122,124]. Для исследования из заражённых собак и хомяков извлекались половозрелые особи (при микроскопическом исследовании тело сужено в передней части и тупо закругленно на заднем конце, ротовая присоска расположена у переднего конца тела, брюшная — на границе первой и второй четвертей тела). Проводилось непосредственное капание на половозрелую мариту и микроскопировалось на микроскопе МБИ- 15 (7x15). При исследовании фекалий нами был использован эфирно- формалиновый метод.
Ход метода. В пробирку наливали 7мл 10% раствора формалина, до 8 мл брали фекалии, размешивали стеклянной палочкой до однородной массы, отстаивали 5 минут, затем снова перемешивали и фильтровали через ситечко, в фильтрат добавляли Змл эфира, перемешивали и центрифугировали при 1500 об. 2 минуты, при 3000 об. 1 минуту.
После чего снимали проволочной петлей верхний слой на предметное стекло и исследовали под микроскопом, кроме верхнего слоя исследовали и осадок на наличие яиц описторхиса [126,127].
При изучении гематологических показателей отбирали кровь из вены сафена (v. saphena) перед заражением и через 1 месяц, 3 месяца, 6 месяцев, через год после заражения. Количество эритроцитов, лейкоцитов подсчитывали с помощью камеры Горяева; гемоглобин - гемоглобин-цианидным (колориметрическим) методом; сахар - ферментативным методом с помощью теста «Оксохром»; уровень общего белка - рефрактометрическим методом [128,129].
Павшие животные вскрывались, описывались, органы с выраженными изменениями отбирались для гистологического анализа. По окончании срока наблюдения выживших животных забивали декапитацией. Вскрывали, описывали, органы взвешивали и отбирали пробы для морфологического изучения (сердце, головной мозг, почки, надпочечники, печень, поджелудочная железа, легкие, кишечник, селезенка, яичники). [130,140,141].
Патоморфологические исследования проводились на кафедре патологической анатомии КазГМА под руководством д.м.н. К.Б.Манекеновой и на кафедре ветеринарно санитарной медицины и сертификации продуктов животноводства Казахского государственного агротехнического университета им. С. Сейфуллина под руководством к.в.н. К.Н. Сыздыкова.
Материалом для морфологического исследования явились органы, взятые во время аутопсии, фиксированные в 10% нейтральном формалине, после обезвоживания в спиртах возрастающей крепости. [142,143,144,145].
Обезвреживание мяса рыбы, пораженной метацеркариями Opisthorchis felineus
По содержанию белка наиболее достоверные отличия установлены в мясе судака, чебака и язя (Р 0,001). В мясе рыбы пораженной метацеркариями Opisthorchis felineus, содержание белка меньше, чем у здоровой: в чебаке на 11,1%, в язе на 11,8%. В судаке на 14,6%. По содержанию жира наиболее достоверные отличия установлены в мясе язя и чебака (Р 0,001), Минеральные вещества в мясе всех видов рыб изменены достоверно на одном уровне. Таким образом, нами установлено, что мясо больных рыб содержало меньше белка, жира, золы и больше воды. Калорийность такого мяса ниже, чем мяса здоровой рыбы. Обеззараживание рыбы семейства карповых от личинок описторхоза, проводили тремя методами: посолом (смешенным, крепким и средним); замораживанием и термическим. При посоле пораженной рыбы с содержанием соли в мясе рыбы 14% (плотность тузлука с первого дня посола 1,20 при температуре +1С, +2С) нами установлено, что обеззараживание красноперки по истечении двадцати дней достигло 86%, а язя, линя и леща к сорока дням составило 88%. Исследование по обеззараживанию пораженной рыбы методом замораживания при температуре - 40С с экспозицией 7 часов, рыба обеззараживается на 100%, при применении температурного режима - 35С в течении 14 часов рыба обезвреживается на 90,6%, а при температуре - 28С с экспозицией 24 часов обеззараживается на 68%. Помимо посола и замораживания нами также была проведена термическая обработка пораженной рыбы. Изделия из частиковых рыб и рыбные котлеты жарили в жире 15 минут. Крупные куски рыбы весом до ЮОг жарили в распластанном виде в течение 20 минут. Мелкую рыбу жарили целиком в течение 15-20 минут. Рыбу подвергали варке не менее 20 минут после закипания воды, с последующей двукратной ее заменой. При невозможности обеспечить режимы замораживания, гарантирующие обеззараживание рыбы, ее следует использовать для пищевых целей только после засаливания, термической обработки или в виде консервов.
В результате проведенных исследований нами установлено, что все методы обеззараживания могут быть использованы. Однако следует отметить, что наиболее приемлемым методом обезвреживания предлагаем использовать термическую обработку. Так как термическая обработка позволяет обезвредить рыбу в 100% случаев. Определение летальных доз: при пероральном введении хомякам в эксперименте согласно методическим рекомендациям были использованы дозы: 285мг/кг - максимальная доза для выявления предлагаемой токсичности 100мг/кг - малая, близкая к предполагаемой терапевтической дозе 168мг/кг - промежуточная доза (средняя геометрическая доза между высокой и низкой дозами - корень квадратный из произведения высокой и низкой доз), после чего методом более точного математического расчета по Прозоровскому-Фрумину были получены следующие результаты. Таким образом, пробит-анализ Прозоровского - Фрумина позволяет с большой точностью определить летальные дозы субстанции, при вычислении которого установлено, что минимальная летальная доза у хомяков составляет 145мг/кг. Острая токсичность. После установления минимальной летальной дозы на хомяках, которая составила 145 мг/кг, мы приступили к изучению острой токсичности. Дозовый режим - 140 мг/кг, 100 мг/кг, 70 мг/кг, в последующем для конкретизации токсических доз был применен пробит- анализ Прозоровского - Фрумина Тох Дв4+ 140 мг/кг, ТохД50 =100мг/кг, ТохДі6 = 70 мг/кг. Экспериментальные животные распределены по группам: 1. Интактная группа - здоровые животные 2. Контрольная группа - животные, получавшие 70% спиртовой раствор 3. Опытная группа № 1 - животные, получавшие дозу 140 мг/кг настойки Saussurea amara 4. Опытная группа № 2 - животные, получавшие дозу 100 мг/кг настойки 5. Опытная группа № 3 - животные, получавшие дозу 70 мг/кг настойки Saussurea amara Исследование влияния на организм настойки Saussurea amara проводили по следующим показателям: интегральные показатели (выживаемости, осмотр, прирост массы тела, общее поведение, потребление воды и пищи), общий анализ крови. На 7 сутки при пероральном введении доз 140 мг/кг, 100 мг/кг и 70 мг/кг масса тела уменьшается (таблица 13) При исследовании лейкоцитарной формулы крови выявлено, что на 7 сутки в динамике происходит нарастание лейкоцитоза, так в опытной группе №1 увеличивается количество лейкоцитов в 1,5 раза в сравнении и интактной группой ( р 0,05), в опытной группе №2 в 1,4 раза по отношению к интактным животным (р 0,05), в опытных группах № 3 и 4 динамика незначительна, между опытными группами динамика также незначительна. В показателях сегментоядерных клеток динамика также нарастает: в опытной группе № 1 увеличение показателей в 2 раза в сравнении с интактной группой (р 0,001) и в 1,6 раза по отношению к опытной группе № 4 ( р 0,001) и в 1,4 раз с опытной группой №3 ( р 0,001). И на 7 сутки появляется в опытных группах № 1 и №2, что немаловажно, токсическая зернистость. Это говорит о том, что данная доза уже на 7 сутки является токсической дозой для организма (таблица 14).
