Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 9
1. Влияние антигельминтных препаратов на иммунную систему животных и синтез поствакцинальных антител 9
2. Микрофлора организма животных в норме и влияние на нее дегельминтизации и вакцинации 16
3. Биохимический статус организма и его изменения под влиянием дегельминтизации и вакцинации 22
Собственные исследования 25
4. Материал и методы исследования 25
5. Результаты исследований 32
5.1. Влияние антигельминтика аверсект-2 (1%-ный) на морфологический состав крови овец 32
5.2. Влияние антигельминтика аверсект-2 (1%-ный) на биохимический статус организма овец 35
5.3. Динамика биохимических показателей крови кроликов под влиянием антигельминтика аверсект-2 (1 %-ный) 38
5.4. Динамика количественного и качественного состава микрофлоры кишечника овец под влиянием антигельминтика аверсект-2 (1%-ного).. 40
5.5. Влияние антигельминтного препарата аверсект-2 ВК (20%-ный) на энтеробиоценоз свиней 42
5.6. Влияние антигельминтика аверсект-2 (1%-ный) на иммунный статус организма овец 44
5.7. Влияние аверсекта-2 (1%-ного) на антителообразование при иммунизации овец против бруцеллеза вакциной из штамма 19 В. abortus 47
5.8. Формирование поствакцинального иммунитета при дегельминтизации овец аверсектом-2 (1%-ный) на фоне вакцинации поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза 50
5.9. Изменение морфологического состава крови при разных сроках дегельминтизации овец антигельминтиком аверсект-2 (1%-ный) на фоне вакцинации против бруцеллеза вакциной из штамма 19 В.abortus... 55
5.10. Динамика морфологического состава крови при разных сроках дегельминтизации овец антигельминтиком аверсект-2 (1%-ный) на фоне вакцинации против лептоспироза вакциной «ВГНКИ» 61
5.11. Влияние разных сроков дегельминтизации овец антигельминтиком аверсект-2 (1%-ный) и вакцинации сухой живой вакциной из штамма 19 В. abortus на биохимические показатели крови. 67
5.12. Динамика биохимических показателей крови при разных сроках дегельминтизации овец антигельминтиком аверсект-2 (1%-ный) на фоне вакцинации вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза 75
5.13. Изменения качественного и количественного состава микрофлоры кишечника при разных сроках дегельминтизации овец аверсектом-2 (1%-ный) на фоне вакцинации против бруцеллеза вакциной из штамма 19 В. abortus 83
5.14. Влияние антгельминтика аверсект-2 (1%-ный) на качественный и количественный состав микрофлоры кишечника при разных сроках дегельминтизации овец на фоне вакцинации поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза 89
5.15. Изменения иммунного статуса при разных сроках дегельминтизации овец аверсектом-2 (1%-ный) на фоне вакцинации сухой живой вакциной из штамма 19 В. abortus 95
5.16. Динамика иммунного статуса при разных сроках дегельминтизации овец аверсектом-2 (1%-ный) на фоне вакцинации поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза 103
Обсуждение результатов исследований 112
Выводы 127
Практические предложения 131
Библиография
- Микрофлора организма животных в норме и влияние на нее дегельминтизации и вакцинации
- Биохимический статус организма и его изменения под влиянием дегельминтизации и вакцинации
- Влияние антигельминтика аверсект-2 (1%-ный) на биохимический статус организма овец
- Формирование поствакцинального иммунитета при дегельминтизации овец аверсектом-2 (1%-ный) на фоне вакцинации поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза
Введение к работе
Актуальность работы. Интенсивный путь ведения сельского хозяйства невозможен без применения профилактических и лекарственных препаратов. Одними из широко используемых в ветеринарной практике химиотерапевтических средств являются противопаразитарные препараты, в частности антигельминтики.
Применение антигельминтиков обуславливает высокая экономическая эффективность – затраты на противопаразитарные обработки животных многократно окупаются увеличением продуктивности, снижением смертности и повышением качества животноводческой продукции. Кроме того, снижение инвазированности животных уменьшает риск заражения паразитами людей (А.А. Кузьмин, 2004).
Дегельминтизация как способ борьбы с распространением гельминтозов, проводимая человеком, является антропогенным фактором, имеющим ряд взаимопротивоположных воздействий и неоднозначных последствий, поэтому требует детального и тщательного изучения с разных экологических позиций. Антропогенный фактор в антигельминтной химиотерапии способен работать против популяции хозяина. В связи с этим, необходимо изучить влияние дегельминтизации на окружающую среду и понять, как экологические факторы, и какие из них, могут изменить сущность этого санитарно-эпидемического мероприятия. Целевой установкой дегельминтизации является стерилизация окружающей среды от инвазионного материала. Но наличие нежелательных побочных результатов химиотерапии гельминтозов связано с токсическим воздействием антигельминтиков на ткани хозяина, с «залповым» выбросом антигенного материала и аллергенов, с дестабилизацией гомеостатических систем организма, трансформировавшихся и адаптированных к хроническому паразитированию гельминтов (А.А. Кузьмин, 2004).
В связи с этим, изучение влияния антигельминтиков на биохимический, иммунный и микробный статусы организма животных представляет научный и практический интерес.
Многие авторы (М.М. Ахмедов, 1968; А.С. Бессонов, 2002; В.В. Горохов, 2003; В.В. Горохов, 2006; Я.З. Кенигсберг, 1985; М.А. Макарук, Ж.М. Сак, 1985; А.А. Миронова, Н.В. Стрельцов, 2009; А.А. Миронова, Е.А. Мирончук, 2009; Ю.Ф. Петров, 1988; В.А. Прискока, 1993; А.П. Красиков с соавт., 2005; А.М. третьяков, В.Л. Украинец, 2006; В.П. Урбан, 1985; E. Malvoz, J. Lambinet, 1918 и др.) указывают значительную роль инвазионного процесса в запуске механизмов инфекции. Поэтому разработка и внедрение комплексного системного подхода в профилактике инвазионных и инфекционных заболеваний приобрели актуальность с позиции ветеринарной экологии (С.М. Апатенко, 1990; П.И. Евдокимов с соавт., 2003; А.М. Третьяков, 2001; В.В. Филиппов, 1988).
Различного рода нарушения физиологического гомеостаза организма, происходящие при использовании гельминтоцидных средств, влияющие на лечебный эффект препаратов и формирование иммунного ответа при вакцинации, требуют дальнейшего детального изучения.
Это указывает на своевременность и актуальность проводимых нами исследований по определению влияния антгельминтиков на биохимический, иммунный и микробный статусы организма, а также на механизм формирования иммунного ответа при разных сроках дегельминтизации.
Данная диссертационная работа является самостоятельным разделом комплексной программы Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова «Мониторинг ветеринарного благополучия и получения животноводческой продукции высокого санитарного качества» (№ гос. регистрации 0120.0712173).
Цель исследований. Целью данных исследований выступает изучение влияния антигельминтика аверсект-2 на биохимический, микробный и иммунный статусы организма овец, а также поиск оптимальных схем дегельминтизации, с наименьшими нарушениями гомеостаза, для формирования полноценного иммунного ответа при вакцинации против лептоспироза и бруцеллеза.
Указанная цель определяет следующие задачи исследований: 1. Изучить влияние антгельминтика аверсект-2 на биохимический, иммунный и микробный статус организма овец.
2. Дать оценку влияния дегельминтизации аверсектом-2 на формирование поствакцинального иммунитета против лептоспироза и бруцеллеза овец. 3. Проанализировать динамику биохимического, иммунного и микробного статусов организма овец при вакцинации сухой живой вакциной из штамма 19 B. abortus и поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза в зависимости от сроков дегельминтизации.
4. Обосновать оптимальную схему проведения дегельминтизации и вакцинации овец против лептоспироза и бруцеллеза.
Научная новизна. Впервые в регионе озера Байкал изучено влияние антгельминтика аверсект-2 на антителогенез при вакцинации овец против бруцеллеза вакциной из штамма 19 B. abortus и против лептоспироза вакциной «ВГНКИ», определены оптимальные сроки проведения вакцинации и противопаразитарной обработки животных. Установлено влияние аверсекта-2 на биохимический, иммунный и микробный статус организма овец. Впервые изучено влияние антгельминтика аверсект-2 ВК 20%-ной концентрации на энтеробиоценоз свиней.
Практическая и теоретическая значимость работы. Результаты исследования расширяют представления о степени влияния антгельминтиков на клинико-биохимический, иммунологический и микробный статусы организма животных.
Выявленные особенности формирования поствакцинального иммунитета при разных сроках дегельминтизации могут учитываться при организации и проведении противопаразитарных лечебно-профилактических мероприятий в овцеводческих хозяйствах республики Бурятия.
С учетом полученного материала, может быть снижен риск побочных явлений при применении антигельминтика аверсект-2 и вакцин и проведена их коррекция, что позволяет оперативно управлять эпизоотической ситуацией по инфекционным и паразитарным болезням сельскохозяйственных животных и вносить соответствующие коррективы в проведение профилактических и оздоровительных мероприятий.
На основе проведенных исследований разработана технологическая схема проведения диагностических и ветеринарно-профилактических мероприятий используемых в хозяйствах Республики Бурятия. Разработаны и утверждены методические рекомендации: «Иммуногенность поливалентной вакцины «ВГНКИ» против лептоспироза в зависимости от сроков дегельминтизации овец» (утверждена 15.11.2009 г. научно-техническим советом Управления ветеринарии республики Бурятия, протокол № 5, одобрена ученым советом ФВМ ФГОУ ВПО БГСХА протокол № 22 от 27 сентября 2009 г.).
Реализация результатов исследований. Результаты исследований используются в хозяйствах и ветеринарных учреждениях Республики Бурятия при проведении ветеринарных лечебно-профилактических мероприятий по основным инфекционным и паразитарным болезням.
Материалы диссертационной работы применены для усовершенствования схемы ветеринарно-санитарных мероприятий в хозяйствах региона при составлении ветеринарно-технологических карт противоинвазионных обработок и вакцинаций.
Основные материалы диссертационной работы используются в учебном процессе: при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами и слушателями ФПК по эпизоотологии, микробиологии и паразитологии Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова, Иркутской государственной сельскохозяйственной академии и Дальневосточного государственного аграрного университета.
На защиту выносятся следующие положения:
1. Особенности биохимической и иммунологической реактивности при использовании антгельминтика аверсект-2.
2. Состояние микробиоценоза желудочно-кишечного тракта животных при использовании антгельминтика аверсект-2.
3. Результаты сравнения эффективности разных схем дегельминтизации и вакцинации животных против бруцеллеза и лептоспироза.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научно-практических конференциях факультета ветеринарной медицины Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова (г. Улан-Удэ, 2006-2010); научно-практической конференции преподавателей, сотрудников и аспирантов, посвященной 75-летию БГСХА им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 1-6 февраля 2007 г.); международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию образования кафедры паразитологии, эпизоотологии и организации ветеринарного дела факультета ветеринарной медицины Бурятской ГСХА им. В.Р. Филиппова (Улан-Удэ, 27-29 июня 2008 г.); международной научно-практической конференции, посвященной 35-летию образования факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета «Достижения современной ветеринарной науки и практики в области охраны здоровья животных» (Краснодар, 16-19 июня 2009 г.); международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию заведующего кафедрой терапии и клинической диагностики профессора Ю.А. Тарнуева (Улан-Удэ, 26-28 июня 2009 г.).
Публикации. Основные результаты и положения диссертации опубликованы в четырех статьях, в том числе в журнале по перечню ВАК (Труды Кубанского ГАУ) и одной научной рекомендации.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 152 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, библиографии и приложений. Диссертация включает 17 таблиц, 18 рисунков. В работе использовано 163 литературных источника, из них 20 иностранных.
Микрофлора организма животных в норме и влияние на нее дегельминтизации и вакцинации
Иммунитет это одна из основ поддержания гомеостаза организма животного [145, 147]. Основная биологическая функция иммунной системы связана с поддержанием постоянства молекулярного состава организма и гомеостатической регуляцией самых разных молекулярно-клеточных процессов в изменяющихся условиях внешней и внутренней среды. Важным свойством иммунной системы выступает не только борьба с инфекциями, но и постоянное сканирование, дифференциация и поддержание динамического постоянства молекулярной структуры организма на протяжении индивидуальной жизни [104, 105].
Все клетки иммунной системы происходят от стволовой кроветворной клетки, локализирующейся в костном мозге [51]. В дальнейшем их развитие может проходить либо по пути лимфопоэза, либо миэлопоэза. По первому пути развиваются лимфоциты. Все остальные лейкоциты развиваются по пути миэлопоэза. О состоянии лейкопоэза судят по количеству лейкоцитов, изменению их соотношения в лейкоцитарной формуле и появлению дегенеративных и атипичных клеток [108, 120].
Количество лейкоцитов в крови изменяется под действием сезонных, климатических внешних факторов, при различных физиологических состояниях организма, под действием лекарственных препаратов, разнообразной патологии и выражается повышением — лейкоцитоз или снижением - лейкопения [3, 59, 79, 81].
Лейкопения - это показатель депрессии костно-мозгового нейтропоэза, тяжести патологического процесса и низкой реактивности организма [79].
Лейкоцитозы и лейкопении развиваются чаще всего за счет преимущественного увеличения или снижения отдельных видов лейкоцитов.
Дифференцированные формы лейкоцитов отражают в виде лейкоцитарной формулы - процентного соотношения различных видов лейкоцитов в периферической крови [69, 73, 78, 85, 143]. На основе этого выделяют различные формы отклонений от нормального морфологического состава крови.
Нейтрофилия [77] нейтрофилез или нейтроцитоз [85] чаще встречается с увеличением числа лейкоцитов. Развивается вследствие увеличения продукции нейтрофилов, повышенной мобилизации костномозгового резерва или перераспределения пристеночного пула. Одновременное увеличение количества палочкоядерных и сегментоядерных форм встречается чаще, чем одних сегментоядерных.
Нейтропения обычно сопровождает лейкопению и возникает при бактериальных инфекциях, применении лекарственных средств и химических веществ, болезнях крови, нарушении питания и т.д. [77]. Резкое снижение количества нейтрофилов может привести к серьезным инфекционным осложнениям в организме [57, 85].
Эозинофилия является признаком сенсебилизации организма. Регистрируется при аллергиях, инфекционных и паразитарных заболеваниях, применении лекарственных средств, иммунодефицитах и т.д. [57, 69, 77].
Эозинопения выражена при инфекционных заболеваниях и в стадии кульминации воспаления [52, 74, 85, 143]. Базофилия встречается редко и сопровождает острое течение инфекционных заболеваний, беременность, гипертиреоз, химиопрофилактику и другие процессы [49, 54, 77, 85, 143]. Моноцитоз указывает на раздражение РГС и возникает в ответ на инфекционное заболевание и интоксикацию [77].
Моноцитопения встречается при гипоплазии кроветворения [75] и в начальной стадии инфекционных процессов, при туберкулезе, лейкозах и т.д. [37, 54, 77, 143].
Ведущее значение в оценке состояния иммунной системы имеет соотношение субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической крови, так как от этого зависит интенсивность иммунного ответа. Снижение функции Т-супрессоров ведет к t преобладанию стимулирующего влияния Т-хелперов, в том числе и на В-лимфоциты, которые продуцируют «нормальные» аутоантитела. При этом их количество может достигать критического уровня, что способно вызвать повреждение собственных тканей организма. Избыточная активность Т-супрессоров, напротив, приводит к быстрому подавлению и абортивному течению иммунного ответа и даже явлениям иммунологической толерантности. Высокая функциональная активность Т-супрессоров при таком ответе не позволяет развиться адекватному иммунному ответу в связи, с чем в клинической картине иммунодефицитов преобладают инфекции и предрасположенность к злокачественному росту.
Увеличение количества Т-лимфоцитов-киллеров в крови свидетельствует о недостаточности иммунитета, снижение - о гиперактивности иммунной системы. И наоборот, увеличение количества Т-лимфоцитов-хелперов свидетельствует о гиперактивности иммунитета, снижение — об иммунологической недостаточности [39, 41, 73].
При нарушении Т-звена иммунной системы больные подвергаются особой опасности поражения вирусными и грибковыми инфекциями [57,85].
Натуральные, нормальные или естественные киллеры (NK) обеспечивают первый уровень защиты против опухолевых клеток и внутриклеточных инфекций до включения специфических иммунных механизмов. В отличие от других цитотоксических клеток, естественные киллеры опосредуют цитотоксические реакции без пресенсибилизации [109, 143].
Высокая цитотоксичность и способность продуцировать многие цитокины — это основные свойства NK, которые могут быть нарушены различными факторами. Снижение количества натуральных киллеров приводит к развитию онкологических заболеваний и утяжелению течения вирусных инфекций, аутоиммунных заболеваний, повышение - к кризу [39, 57].
Биохимический статус организма и его изменения под влиянием дегельминтизации и вакцинации
Кровь, как одна из важнейших систем организма, играет большую роль в его жизнедеятельности. Благодаря широко развитой сети кровеносных капилляров она тесно контактирует с клетками всех тканей и органов. Поэтому различного рода воздействия на ткани организма отражаются на составе и свойствах крови. Наиболее информативным показателем в этом отношении является биохимический состав крови [32, 57, 134].
Концентрация биохимических компонентов в крови изменяется при нарушении метаболических процессов в тканях и органах, причиной которым может быть инфекция, инвазия, физиологическое состояние, физические нагрузки, применение лекарственных препаратов и т. д. [4, 5, 21].
Установлено, что после дегельминтизации наибольшее выраженные и длительные изменения возникают в углеводном и белковом обменах [21].
В опытах на пушных зверях выявлены нарушения углеводного, белкового и минерального обмена при вакцинации. Изменения со стороны углеводного обмена характеризовались нарушением процессов ресинтеза гликогена и окисления молочной кислоты до конечных продуктов в печени и мышцах. Вследствие чего повышалось содержание молочной кислоты и сахара в тканях и крови, снижалась щелочность крови, происходило обеднение печени гликогеном и повышение его уровня в сыворотке. Нарушения белкового обмена характеризовались нарастанием концентрации в крови остаточного азота и резким снижением альбуминов и альбумин-глобулинового коэффициента белков плазмы. Эти изменения носили стереотипный и неспецифический характер, протекали доброкачественно и недолгий срок [16, 60, 95, 133]. Идентичные изменения активности сывороточной лактатдегидрогеназы, аспартат- и аланинаминотрансферазы выявлены независимо от вида животного, природы антигена и способа его введения. Незначительная степень поствакцинальных изменений в данном случае являлась сигналом о благополучном и доброкачественном течении иммуногенеза [14, 58, 95].
Установлена зависимость биохимических изменений от степени активности вакцин, ее специфичности, кратности иммунизации, состояния организма и т.д. При введении активных вакцин происходило резкое увеличение гамма-глобул и нов, сиаловых и нуклеиновых кислот, ферментов и пропердина с развитием стойкого иммунитета. Применение слабых вакцин не влекло за собой изменений биохимического статуса или имело незначительный характер с формированием непрочного иммунитета. В поствакцинальный период в крови изменялось количество общего белка и белковых фракций, нуклеиновых кислот, пропердина, ферментов, липопротеидов, гликопротеидов и т.д. В первые дни после иммунизации отмечалось кратковременное снижение уровня общего белка и альбуминов с дальнейшим ростом.
При иммунизации против бруцеллеза в крови вакцинированных овец повышалось количество нуклеиновых кислот, поливиноградной кислоты и аминотрансфераз. Наибольшее повышение аспартатаминотрансферазы отмечалось на 79 день после вакцинации, а аланинаминотрансферазы на 35 и 50 дни. Значительно возрастали гамма-глобулиновые фракции в сыворотке крови и снижались альбуминовые. Максимума содержание гамма-глобулинов достигало на второй-третьей неделе иммунной реакции и могло сохраняться в течение года. У телят фракции гамма-глобулинов нарастали с 15 дня и сохранялись до шести-семи месяцев. Альфа и бета-глобулины также снижались. Общий белок сохранял повышенные значения в течение двух месяцев. Холестерин после применения вакцины возрастал, достигая максимума на 30 день. Его снижение начиналось только через два месяца и достигало физиологической нормы через год [21]. Данные изменения связаны с активным участием холестсрол-белковых комплексов в становлении иммунитета.
Не индифферентны в отношении биохимических показателей организма и антигельминтики
Дестабилизацию гомеостатических систем организма вызывают: камбендазол [20], фенбендазол, фебтал, абиктин, ивермаг и авертин в терапевтических дозах, агровик и алезан, альбен форте [90]; ивермек, ниацид, ниавет [83, 84].
При дегельминтизации гексихолом и политремом у старых высокопродуктивных коров отмечали повышение активности аспартатаминотрансферазы, аланинампнотрансферазы, альфа-амилазы и щелочной фосфотазы [28]; фенотиазин при обработке животных не вызывал изменений активности трансаминаз [14].
Таким образом, на современном этапе развития ветеринарии значительно возрасла значимость биохимических исследований. Данные методы позволяют с достаточно высокой степенью достоверности оценить состояние организма и степень влияния на него различного рода факторов. Применение лекарственных средств и новых методов лечения требует постоянного биохимического контроля. Особенно это актуально в отношении антигельминтиков, которые широко используются для лечения и профилактики. Изучение влияния на организм антигельминтиков является одним из важных практических вопросов, что и послужило толком к его решению.
Влияние антигельминтика аверсект-2 (1%-ный) на биохимический статус организма овец
Исследования проводились с 2005 по 2010 год на кафедре паразитологии,
эпизоотологии и организации ветеринарного дела Бурятской ГСХА,
серологическом отделе Бурятской республиканской научно производственной ветеринарной лаборатории и лаборатории клинической иммунологии, биохимии и бактериологии республиканской больницы им. Н.А. Семашко.
На первом этапе исследований по изучению влияния антигельминтика аверсект-2 (1%-ного) на морфологический, биохимический состав крови, энтеробиоценоз и иммунный статус организма подопытными животными служили овцы бурятского типа забайкальской тонкорунной породы в возрасте двух лет массой 45 кг (п = 5), кролики породы серый великан в возрасте полтора года массой 3-3,5 кг (п = 5). Опыты по изучению влияния 20%-ного аверсекта-2 ВК на микрофлору желудочно-кишечного тракта проводили на свиньях крупной белой породы в возрасте четырех месяцев массой 50 кг (п = 3).
1%-ный аверсект-2 вводили овцам подкожно однократно на внутренней поверхности бедра в дозе 1 мл на 50 кг массы; кроликам - подкожно однократно в заднюю треть шеи в дозе 0,02 мл на 1 кг массы. Для дегельминтизации свиней применяли 20%-ный аверсект-2 ВК внутрикожно в дозе 0,1 мл на 100 кг массы (0,2 мг/кг по ДВ) при помощи безигольного механического инъектора в области верхней трети шеи.
Второй этап эксперимента по изучению влияния разных сроков дегельминтизации аверсектом-2 (1%-ный) и вакцинации сухой живой вакциной из штамма 19 В. abortus и поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза на формирование иммунного ответа, биохимический, морфологический состав крови и микробный статус организма проводился на овцах бурятского типа забайкальской тонкорунной породы в возрасте 2 лет массой 45 кг. Животных разбивали на четыре группы (табл. 1). Схема применения аверсекта-2 и вакцин в разных группах овец № группы Количествоживотных вгруппе Схема дегельминтизации и вакцинации овец
Аверсект-2 (1%-ный) вводили подкожно однократно на внутренней поверхности бедра в дозе 1 мл на 50 кг массы. Для вакцинации применяли: в первом случае - сухую живую вакцину из штамма 19 В. abortus в дозе 2 см3 подкожно и во втором случае - поливалентную вакцину «ВГНКИ» против лептоспироза (вариант 2) в дозе 3 см внутримышечно.
Пробы крови отбирали непосредственно перед началом опыта (контроль), а затем на 7, 14, 21, 28 и 35 дни после вакцинации.
Кормление и содержание животных в период проведения опыта осуществлялось согласно зоотехническим нормам.
Для биохимических исследований на общий белок, билирубин применяли колориметрический метод; на сахар, холестерин - ферментативно-колориметрический; на мочевину, АЛТ, ACT, ЛДГ, КФК и щелочную фосфатазу - кинетические методы и на креатинин - кинетический колориметрический метод. Анализы проводили на аппарате-анализаторе «Сапфир 400». Пробой для анализа являлась негемолизированная сыворотка, которую отделяли после центрифугирования крови в течение 40 - 50 минут при 1500-2000 об/мин.
Общий подсчет лейкоцитов проводили с использованием камеры Горяева. под малым увеличением микроскопа при затемненном поле зрения в 100 больших квадратах. Дифференциальный подсчет лейкоцитов проводили под иммерсионной системой микроскопа в предварительно окрашенном по Романовскому-Гимзе мазке крови.
Микробиологические исследования фекалий осуществляли согласно методическим рекомендациям Э.П. Косаткиной, Л.А. Тараненко и А.А. Воронина (1996). Фекалии для исследования отбирали в стерильные флаконы непосредственно из прямой кишки с использованием стерильных перчаток. Готовили основное и ряд последовательных разведений от 10" до 1010. Из полученных разведений делали посевы на питательные среды. Ниже приведены схемы выделения и идентификации анаэробных и аэробных бактерий (рис. 1 и 2). Сбор, транспортировка и подготовка материала Рассев материала на селективные питательные среды Среда Эндо,Левина, Плоскирева Желточно-солевой агар Среда Сабуро ЖСА Инкубация 48 часов при 37 С, среду Сабуро - при 24 С I Учет Макроскопическое и микроскопическое изучение колоний, отсев для получения чистой культуры бактерий Инкубация в условиях аэробиоза 4 Идентификация Рисунок 1. - Схема выделения и идентификации аэробных бактерий Взятие, транспортировка и подготовка материала к посеву Посев материала на селективные питательные среды МРС-агар, среда Блаурока Инкубация в условиях анаэробиоза (в микроанаэростате) 72 ч, при 37 С I Учет Макроскопическое и микроскопическое изучение колоний, отсев для получения чистой культуры бактерий Рисунок 2. - Схема выделения и идентификации анаэробных бактерий Для учета бифидобактерий использовали среду Блаурока. Из выросших колоний готовили мазки, окрашивали по Граму и микроскопировали. Грамположительные, крупные палочки с бифуркацией или булавовидным окончанием относили к виду В. bifidum.
Для обнаружения лактобактерий использовали полужидкую среду МРС-агар, разлитую в высокие столбики. Приготовленный из выросшей культуры мазок и окрашивали его по Граму. Грамположительные небольшие по размеру палочки, образующие цепочки или смесь коротких и длинных палочек относили к роду Lactobacillus.
Посев на выделение микробов семейства Enterobacteriaceae проводили на среду Эндо, Плоскирева и Левина, кишечной палочки с гемолитическими свойствами — на 3-5 % кровяной агар. На основании морфологии колоний и данных микроскопических исследований подсчитывали количество кишечных палочек, сальмонелл и протея.
Стафилококк выявляли посевом на желточно-солевой. Положительным результат считали при наличии в мазке из выросших колоний гроздевидных скоплений кокков, окрашивающихся по Граму положительно.
Плесневые грибы выделяли путем посева материала на среду Сабуро с добавлением глюкозы из расчета 40 г и левомицетина - 53 мг на 1 литр среды. Микроскопию колоний проводили после окраски мазков метиленовым синим.
Посев для выделения клостридий осуществляли на среде Вильсон-Блер. Неспоровые микроорганизмы удаляли нагреванием пробирки на водяной бане при +80 С 20 минут. О наличии клостридий судили по обнаружению колоний черного цвета в глубине столбика среды Вильсон-Блер в нижней части пробирки. При микроскопии окрашенных по Граму мазков из колоний обнаруживали грамположительные палочки со слегка закругленными краями.
Формирование поствакцинального иммунитета при дегельминтизации овец аверсектом-2 (1%-ный) на фоне вакцинации поливалентной вакциной «ВГНКИ» против лептоспироза
процессов протекающих в организме животного. Даже незначительные изменения в функционировании органов и систем организма неизбежно приводят к тем или иным изменениям в составе периферической крови.
Данный этап экспериментальных исследований характеризует влияние аверсекта-2 на морфологический состав крови в зависимости от сроков дегельминтизации на фоне вакцинации против бруцеллеза (табл. 10).
Динамика морфологии крови у овец, вакцинация которых проводилась через неделю после дегельминтизации (табл. 1) носила следующий характер (рис. 9а). На четвертый день исчезали палочкоядерные нейтрофилы, количество эозинофилов снижалось до 2,00±0,25, сегментоядерных нейтрофилов до 14,40±1,05 % и увеличивалось процентное содержание в крови лимфоцитов до 83,60±0,95.
К 11 дню относительное количество эозинофилов повышалось до 2,60±0,55 %, сегментоядерных нейтрофилов до 17,80±1,05 %, а лимфоцитов, напротив, уменьшалось до 79,60±0,95 %.
18 день опыта имел аналогичную тенденцию - рост эозинофилов до 4,00±0,25 %, сегментоядерных нейтрофилов до 22,80±2,11 % и снижение относительного содержания лимфоцитов до 73,20±2,36 %.
Во второй группе овец (табл. 1), где дегельминтизация проводилась на фоне вакцинации (рис. 96) после инъекции вакцины отмечалось исчезновение эозинофилов и палочкоядерных нейтрофилов, снижение относительного количества сегментоядерных нейтрофилов до 17,20±1,03 % и рост лимфоцитов до 82,80±0,90 %.
После инъекции аверсекта-2 в крови появлялись эозинофилы (1,40±0,38 %), уменьшалось количество сегментоядерных нейтрофилов (15,00±1,75 %) и возрастало число лимфоцитов до 83,60±2,05 %.
Обозначения: -Р 0,1; - Р 0,01; -Р 0,001 Изменения морфологического состава крови овец на 18 день характеризовалось повышением количества эозинофилов до 5,40±0,70 %, снижением числа сегментоядерных нейтрофилов до 13,00±0,75 % и лимфоцитов до 81,60±0,55 %.
На 25 день в крови были обнаружены палочкоядерные нейтрофилы в количестве 2,20±0,65 %, происходило снижение относительного содержания эозинофилов до 4,00±0,55 %, сегментоядерных нейтрофилов до 11,40±0,38 % и повышение числа лимфоцитов до 82,40±0,80 %.
У овец третьей группы (табл. 1), подвергавшиеся дегельминтизации спустя 14 дней после вакцинации (рис. 9в) на четвертый день после вакцинации происходил рост количества лимфоцитов до 64,20±3,61 %, снижение числа сегментоядерных нейтрофилов до 34,80±3,16 % и палочкоядерных нейтрофилов до 1,00±0,13 %. Эозинофилы отсутствовали.
К 11 дню опыта было выявлено наличие эозинофилов в количестве 2,00±0,25, дальнейшее снижение содержания сегментоядерных нейтрофилов до 8,00±1,50 % и рост количества лимфоцитов до 90,00±2,76 %, а также исчезновение палочкоядерных нейтрофилов.
После дегельминтизации число эозинофилов в крови уменьшалось до 1,20±0,18 %, снижалось содержание сегментоядерных нейтрофилов до 4,00±0,75 % и увеличивалось содержание лимфоцитов до 94,80±0,45 %.
25 день исследований овец характеризовался эозинофилией (3,00±0,55 %), лимфоцитопенией (92,60±0,30 %) и ростом числа сегментоядерных нейтрофилов (4,40±0,55 %).
На заключительном этапе опыта относительное количество эозинофилов составило 2,00±0,38 %, сегментоядерных нейтрофилов - 3,40±0,80 % и лимфоцитов - 94,60±0,70 %.
Динамика морфологического состава крови при одновременном применении вакцины и антигельминтика в четвертой группе (табл. 1) характеризовалось (рис. 9г) стойким снижением содержания в крови эозинофилов с 5,40±0,58 % в контроле до 5,20±0,65 % на четвертый день, 1,20±0,35 % - на 11 день, 1,20±0,20 % - на 18 день опыта и сегментоядерных нейтрофилов до 14,20±1,65 - на четвертый день, 10,80±0,90 % - на 11 день, 8,40±0,55 % - на 18 день, при исходных данных в 32,00±0,76 %; ростом процентного количества лимфоцитов с 60,60±3,56 % до 80,60±1,40 % - на четвертый день, 88,00±1,50 - на 11 день, 90,40±0,70 - на 18 день, а также исчезновением палочкоядерных нейтрофилов и отсутствием базофилов, миелоцитов, юных нейтрофилов и моноцитов.
Таким образом, изменения морфологического состава крови у всех четырех групп овец, вакцинированных сухой живой вакциной из штамма 19 В. abortus с фоновым применением антгельминтика аверсект-2 характеризовались эозинопенией, лимфоцитозом, снижением количества сегментоядерных и исчезновением палочкоядерных форм нейтрофилов.
Различие в динамике морфологического состава крови выражались лишь в сроках, на которые приходится максимум изменений. Так, у первой группы овец, вакцинированных через семь дней после дегельминтизации, пик изменений отмечался на четвертый день опыта, с последующей тенденцией к нормализации. У овец второй группы, где вакцинация проводилась за семь дней до дегельминтизации и третьей группы, вакцинированных за 14 дней до дегельминтизации максимальные изменения морфологического состава выявлялись на четвертый день после введения аверсекта-2. У животных четвертой группы, где препараты применяли одновременно, изменение морфологических показателей крови отмечалось с четвертого дня опыта и продолжало усугубляться вплоть до 18 дня исследований.
Динамика морфологического состава крови при дегельминтизации за семь дней до вакцинации, в сравнительном аспекте наиболее оптимальна, поскольку изменения морфологического состава крови в этом случае хоть и значительны, но имели стойкую тенденцию к стабилизации.
