Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Антимикробные пептиды .11
1.1.2. Дефензины .13
1.1.3. Кателицидины .16
1.1.4. Механизм действия антимикробных пептидов 18
1.1.5. Антимикробные пептиды полости рта 21
1.2. Атопический дерматит. Общие сведения 25
1.2.1. Роль АМП при атопическом дерматите 31
ГЛАВА 2. Методология и методы исследования
2.1. Характеристика обследованных групп .37
2.2. Клиническое обследование 37
2.3. Определение стоматологического статуса 40
2.4. Иммуноферментный анализ 46
2.5. Статистическая обработка данных 47
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований .48
3.1. Стоматологический статус детей с атопическим дерматитом 50
3.2. Концентрация антимикробных пептидов полости рта в зависимости от тяжести основного заболевания 59
3.3. Исследование концентрации антимиробных пептидов ротовой полости в зависимости от интенсивности кариозного процесса 63
3.4. Исследование концентрации антимикробных пептидов ротовой полости при заболеваниях пародонта 70
ГЛАВА 4. Заключение 73
Выводы 81
Практические рекомендации .
Список сокращений .84
Список литературы
- Дефензины
- Механизм действия антимикробных пептидов
- Определение стоматологического статуса
- Исследование концентрации антимиробных пептидов ротовой полости в зависимости от интенсивности кариозного процесса
Дефензины
Одним из малоизученных компонентов системы врожденного иммунитета являются антимикробные пептиды (АМП). Антимикробные пептиды - древнее звено иммунной защиты живых организмов и растений, существующее 2 миллиарда лет. Эти соединения вызывают гибель бактерий, грибов, вирусов и протозойных микроорганизмов при первом контакте, без предварительной презентации антигена. Одно из названий указанных пептидов – эндогенные антибиотики [17]. Антибактериальное воздействие и сегодня остается критерием объединения в данную группу крайне разнородных по структуре пептидов различных тканей организма, контактирующих с окружающей средой: кожи, слизистых оболочек, желудочно-кишечного тракта, мочевыделительной и половой систем [90].
К настоящему времени известно, что, наряду с оказанием антимикробного эффекта, антимикробные пептиды опосредуют взаимодействие двух основных звеньев иммунной защиты организма – врожденного и приобретенного [86,89]. Их активация и координация при участии антимикробных пептидов способствует более высокой эффективности распознавания и уничтожения патогенов [87,89].
На сегодняшний день описано более 800 таких пептидов. Несмотря на то, что о существовании атимикробных пептидов известно уже в течение нескольких десятилетий, их роль в формировании иммунного ответа в организме стали изучать сравнительно недавно [49,50]. У человека обнаружено три семейства пептидов-антибиотиков – дефензины, кателицидины и гистатин. Известны также и другие антимикробные пептиды: азуроцирин, гистатин, аденомедуллин, дермицидин [3,17].
В 1980 году Lehner с сотрудниками выделил из альвеолярных макрофагов кролика и охарактеризовал антимикробные пептиды млекопитающих, которые назвал дефензинами. Впоследствии эти пептиды были найдены у человека, мышей и других млекопитающих [17,37]. Первые -дефензины человека были выделены в 1980 году из азурофильных гранул нейтрофилов, которые являются основным депо четырех -дефензинов. Отсюда их название – human neutrophils peptides (HNP), пептиды нейтрофилов человека; и присвоили каждому порядковые номера (1,2,3). В 1992 и в 1993 гг. были обнаружены в клетках Пеннета еще два дефензина (Human neutrophils defensin 5и 6 – HD5 и HD6) [39]. В 1994 году R.Gallo обнаружен катионный пептид с молекулярной массой 1,8 кДа из группы кателицидинов hCAP-18(human cationic antimicrobial protein), от которого под влиянием протеаз отщепляется пептид из 37 аминокислот. В коже здорового человека они практически не вырабатываются, но начинают активно синтезироваться в случае развития инфекций [81].
В коже и слизистых человека обнаружено более двадцати антимикробных пептидов. Кератиноциты, клетки потовых и сальных желез, эпителий слизистой оболочки полости рта синтезируют не менее десяти пептидов этой группы [39]. Примерно столько же обнаружено в клетках, инфильтрирующих кожу: в нейтрофилах, тучных клетках, макрофагах и естественных киллерах. Способностью уничтожать патогенные микроорганизмы обладают пептиды с различными химико-биологическими свойствами - ингибиторы протеиназ, нейропептиды, хемокины [86,87]. Наиболее изучены два семейства антимикробных пептидов человека - дефензины и кателецидины. Это катионные белки, поскольку поверхностный заряд этих пептидов положительный. Благодаря катионным свойствам антимикробные пептиды нарушают целостность отрицательно заряженной мембраны микробов, грибов и вирусов и оказывают ингибирующее влияние на внутриклеточные функции патогенного организма [58,87].
Первый -дефензин человека был выделен в 1995 году Bensch и сотрудниками при изучении почки человека из диализата гемофильтрата. Это был пептид из 36 аминокислотных остатков [19, 31]. Его назвали HBD-1 (Human Beta Defensin - 1). Последующие открытые -дефензины принято обозначать, добавляя к аббревиатуре HBD их порядковый номер по мере их описания. На данный момент у человека выделено 6 -дефензинов [58,63].
Антимикробные пептиды можно разделить на несколько групп по структурной организации: линейные пептиды -спиральной структуры, не содержащие цистеин (например LL-37 у человека, магаинин, темпорин, цекропин, выделенные у насекомых); пептиды, содержащие несколько цистеинов, между которыми установлены 1-4 дисульфидные связи. К ним относятся дефензины (выделенные у млекопитающих), прогерины и лантибиотики - высокоактивные бактериальные пептиды (например, низин); пептиды, в составе которых содержится необычно много какой-либо одной или двух аминокислот, чаще всего пролина, аргинина, триптофана, глицина или гистидина (например, гистатин в слюне человека, апидицины в крови птиц) [17].
Дефензины - небольшие катионные пептиды. Обычно они содержат от 34 до 47 аминокислотных остатков, среди них от 6 до 8 остатков цистеина, создающих дисульфидные мостики [23, 39]. Наличие дисульфидных связей обеспечивает сохранение устойчивости молекул дефензинов к многочисленным лейкоцитарным и микробным протеиназам и сохранение антибиотических свойств в очаге воспаления и тканевой деструкции. Дефензины являются амфипатичными молекулами, то есть гидрофильные и гидрофобные участки молекулы четко отделены друг от друга. Это свойство облегчает связывание и встраивание их в фосфолипидный слой микроорганизмов [25]. Они обладают микробицидной активностью в отношении грибов, бактерий и оболочечных вирусов. На основании молекулярной структуры дефензины делятся на 3 класса: ,,. На данный момент у человека известно шесть -дефезинов: HNP-1, HNP-2, HNP-3, HNP-4, HD-5, HD -6; шесть -дефензинов: HBD-1, HBD-2, HBD-3, HBD-4, HBD-5, HBD-6. – дефензины изучены мало, обнаружены только в лейкоцитах приматов [64,65,66].
A–дефензины представляют собой цепочку из 29 - 35 остатков, содержащую три дисульфидных мостика в 1-6, 2-4, 3-5 положении. Эти соединения составляют 30-50 % от общего содержания белка азурофильных гранул нейтрофилов и 99% от всех дефензинов клетки (рисунок 1) [23]. Также -дефензины обнаружены в NK клетках, В-лимфоцитах, Т-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах и клетках эпителия [40]. Они синтезируются только нейтрофилами, что позволяет считать их специфическими клеточными маркерами этих клеток . Активация нейтрофилов при инфекционных и воспалительных процессах приводит к быстрому высвобождению дефензинов [48], которые затем обнаруживаются в плазме и других жидкостях организма. В нормальной плазме обнаруживается очень низкий уровень дефензинов (от неопределяемых величин до 50-100 нг/мл), однако в условиях сепсиса содержание дефензинов может возрасти до 10 мг/мл и даже выше [42].
В дополнение к микробицидному действию -дефензинов проявляют также хемотаксическую, иммуномодулирующую и цитотоксическую активность, вносят вклад в общую защиту организма и развитие процессов воспаления [52]. Совсем недавно была открыта антивирусная активность некоторых -дефензинов. Известно, что -дефензины вносят серьезный вклад в анти-ВИЧ-1 активность антивирусного фактора CD8. Это обстоятельство открывает новые возможности в исследовании ВИЧ. Показано, что пациенты, у которых отсутствуют дефензинов (синдромом недостаточности специфических гранул) страдают частыми и тяжелыми бактериальными инфекциями [42].
Механизм действия антимикробных пептидов
Атопический дерматит (АтД) является широко распространенным заболеванием у детей. По данным эпидемиологических исследований в разных странах атопическим дерматитом страдают от 10 до 20% детей [14]. Острота проблемы атопического дерматита в педиатрии обусловлена ранним началом заболевания, быстротой развития хронических форм. Приблизительно у 85% пациентов проявления атопического дерматита начинаются в раннем детском возрасте, у 70% больных тяжелыми формами АтД в дальнейшем развивается бронхиальная астма или аллергический ринит [2, 7]. Тяжелые, резистентные к терапии формы АтД значительно ухудшают качество жизни пациента и его семьи [16], приводя к снижению социальной адаптации и инвалидизации ребенка. В основе патогенеза АтД лежат генетически детерминированные особенности иммунного ответа. К числу наиболее значимых иммунологических нарушений при АтД относят дисбаланс Th1 и Th2 клеток, повышенную дегрануляцию тучных клеток и измененную антигенпрезентирующую активность клеток Лангерганса [2, 4, 7]. Для больных, страдающих АтД характерен целый спектр иммунологических феноменов: повышение экспрессии ряда цитокинов и хемокинов, увеличение уровня общего IgE в плазме; высокая экспрессия высокоаффинных рецепторов к IgE (FcRI) на эпидермальных дендритных клетках; повышение спонтанного высвобождения гистамина базофилами; повышение экспрессии рецепторов к sIL-2; увеличение концентрации эозинофильного катионного протеина в плазме, эозинофильного протеина X в моче и т.д. [97].
АтД относится к мультифакториальным заболеваниям. Генетические и эпидемиологические исследования показали, что заболевание вызывается различными триггерами внешней среды у людей, предрасположенных к развитию АтД. К провоцирующим или триггерным факторам, запускающим развитие АтД, относят ингаляционные аллергены (бытовые, пыльцевые, грибковые, бактериальные), пищевые продукты, стресс (гормональные и эмоциональные изменения), химические и физические воздействия, инфекции и т.д.. Механизмы развития АтД представляют собой комплексное взаимодействие между генетическими факторами, незрелостью и/или нарушением барьерной функции и факторами внешней среды. Атопическим дерматитом заболевают преимущественно дети, заболеваемость и тяжесть заболевания, как правило, снижается с возрастом (фото 1). Решающее значение в этом процессе придается незрелости физиологических механизмов в организме ребенка – незрелости кожной барьерной функции, иммунитета слизистых оболочек, системного иммунитета, выработки пищеварительных ферментов (рисунок 5) [15, 73]. Вместе с тем, атопический дерматит может развиться в любом возрастевития АтД: иммунологическая и барьерная. Иммунологическая гипотеза предполагает, что первичный дефект, ответственный за развитие заболевания, связан с иммунологическими нарушениями, которые обусловливают IgE-опосредованную сенсибилизацию и воспаление, следствием которого является нарушение эпителиального барьера [15].
Барьерная гипотеза рассматривает дефект эпителиального барьера как первичный, что ведет в дальнейшем к возникновению иммунологических нарушений в качестве эпифеномена и местного воспаления [20]. Факторы врожденного иммунитета, осуществляют типовое распознавание патогенов. Эпителиальные клетки, расположенные на границе между кожей и окружающей средой, являются первой линией обороны врожденной иммунной системы. Защитная функция кожи в первую очередь связана с толл-подобными рецепторами, которые связываются с клеточными стенками бактерий и грибов, а также вирусными структурами. Это взаимодействие ведет к активации эпителиальных клеток, проявляющейся в синтезе антимикробных пептидов. С дефицитом антимикробных пептидов (кателицидина, дефензинов и др.) некоторые авторы связывают повышение колонизации кожи золотистым стафилококком (Staphylococcus aureus) и вторичное инфицирование у пациентов с АтД. Кроме того, доказано, что предрасполагающим фактором к развитию экземы Капоши является уменьшение продукции кателицидина, который обладает сильной противовирусной активностью [20, 46, 51, 52].
Развитие воспаления и клинических проявлений АтД связано с поступлением аллергена в сенсибилизированный организм. При этом аллерген (например, пищевой или ингаляционный) достигает тучных клеток с зафиксированными специфичными к нему IgE-антителами и, связываясь с ними, вызывает их активацию и дегрануляцию. В результате высвобождается большое количество ферментов, медиаторов воспаления, хемокинов – факторов привлечения других эффекторных клеток, в частности базофилов и эозинофилов [55, 63, 67]. Продуцируемые эффекторными клетками медиаторы в свою очередь способствуют повышенному высвобождению из них гистамина, лейкотриенов, фактора активации тромбоцитов.
Среди медиаторов воспаления, роль которых доказана в развитии АтД, можно выделить гистамин, эйкозаноиды (лейкотриены, простагландины, тромбоксан), нейропептиды, компоненты системы комплемента, хемокины, и ряд цитокинов (IL -1 ,IL – 4, IL – 5, IL – 6, IL – 6, IL - 13 и т.д.) [68, 71].
Одним из триггерных факторов, запускающих каскад иммунологических реакций при АтД, являются патогенные микроорганизмы, населяющие кожные покровы. Наиболее существенное влияние оказывают золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), малассезия (Malassezia furfur), и дрожжеподобные грибы кандида (Candida), колонизирующие кожу вместо обычного эпидермального стафилококка (Staphylococcus epidermidis) [15, 20, 34].
В качестве причин, приводящих к изменению состава микробиоценоза кожи больных АтД, рассматриваются снижение барьерных свойств кожи, связанное с уменьшением содержания в ней липидов, изменением сальной и потовой секреции, сдвигом рН кожи в сторону алкалоза, нарушением обмена церамидов и снижением уровня сфингозина и секреторного IgA на поверхности кожи, снижением уровня эндогенных антимикробных пептидов -дефензина и кателицидина, усилением продукции фибронектина и фибриногена, являющихся адгезинами для золотистого стафилококка под влиянием провоспалительных цитокинов ФНО-. [28, 32,74].
Определение стоматологического статуса
Всем детям было проведено общеклиническое обследование (анализ анамнестических данных, оценка клинических симптомов, клинического анализов крови, мочи, кала, биохимического исследования крови (выполнены в клинико-диагностической лаборатории – зав. лаборатории Акопова Т.В.), ультразвуковые исследования органов брюшной полости и забрюшинного пространства (выполнены в отделении ультразвуковых методов исследования зав. отд. к.м.н. Э.К.Осипова). По показаниям проводились другие методы исследования (ультразвуковые и функциональные исследования (выполнены в отделении функциональной диагностики – зав. отд. Мастеркова Т.Т.)), рентгенографические исследования (выполнены в отделении рентгеновских методов исследования - зав. отд. Назарова Н.Ф.), эзофагогастродуоденоскопия (выполнены в отделении гастроэнтерологии и эндоскопических методов исследования - зав. отд., д.м.н. проф. Хавкин А.И.) и консультации врачей специалистов (дерматолог, ЛОР, эндокринолог, психоневролог, уролог, нефролог, гинеколог и др.).
Критерии диагноза и оценка степени тяжести атопического дерматита соответствовали общепринятым стандартам [64; 65; 96].
Для оценки тяжести атопического дерматита использовалась полуколичественная шкала SCORAD (severity scoring of atopic dermatitis), разработанную группой ученых европейских стран [European Task Force on Atopic Dermatitis, 1993]. Данная шкала объединяет объективные (интенсивность и распространенность кожного поражения) и субъективные (интенсивность ночного кожного зуда и нарушение сна) критерии.
Основным преимуществом использования шкалы SCORAD является возможность сравнительного анализа полученных результатов при помощи компъютерной обработки, а также объективная оценка эффективности различных методов терапии. Индекс SCORAD определялся формулой, в которой комплексно учитывались распространенность кожных высыпаний, их характер, степень выраженности проявлений и тяжесть субъективных ощущений пациента. Распространенность (площадь) поражения (0-100%) определялась путем использования правил «девяток». Очаги, принимаемые во внимание, имели только воспалительные поражения. Сухая кожа не учитывалась. При оценке интенсивности выраженности симптомов учитывался каждый из шести признаков (эритема, отек/инфильтрация, мокнутие/корки, экскориации, лихенизация, сухость) в средней интенсивности по шкале от 1 до 3 баллов: 0-отсутствие, 1-легкая, 2-среднетяжелая, 3-тяжелая выраженность. Сухость оценивалась на невоспаленной коже. Субъективные симптомы: аналогичная шкала (0-10) оценки следующих симптомов: зуд и потеря сна, общее состояние кожи (приложение 1).
Индекс SCORAD рассчитывался по формуле: S=A/5+7B/2+C, где А-распространенность (площадь поражения) В-интенсивность выраженности симптомов атопического дерматита С-субъективные симптомы. Значения индекса могут варьировать в пределах от 0 (нет заболевания) до 103 (максимально тяжелое течение АтД). Оценку индекса SCORAD проводили дважды: до начала элиминационной диеты, и на – 7 день диетотерапии. Всем детям было проведено аллергологическое и иммунологическое обследование. Аллергологическое обследование включало в себя сбор и анализ аллергологического анамнеза по общепринятой схеме, кожные пробы с различными аллергенами определение уровня специфического IgE в сыворотке крови. Определение уровней специфических IgE к ингаляционным, пищевым, эпидермальным аллергенам в сыворотке крови проводилось иммунохемилюминесцентным методом (ImmunoCap, Phadia AB, Швеция) с использованием коммерческих реактивов. Концентрацию IgE антител измеряли в единицах кUA/l. Уровень специфических IgE антител 0.35 кUA/l считался положительным (таблица 2). Уровень специфических IgE антител выше 100 кUA/l не оценивался, в связи с отсутствием клинической необходимости [78]. Данные исследования проведены научным сотрудником Т.С. Окуневой в научно-исследовательской лаборатории общей патологии института (заведующий д.м.н., профессор Сухоруков В.С.).
Для определения стоматологического статуса использовались данные основных и дополнительных методов обследования. Обьективное обследование включало в себя: осмотр полости рта и зубов при помощи стандартного набора стоматологических инструментов. Оценивалось состояние твердых тканей зубов (наличие кариеса), тканей пародонта.
Интенсивность кариеса зубов отражает степень поражаемости зубов кариесом у одного индивидуума [5]. интенсивность кариеса зубов в период сменного прикуса: индекс КПУ+кп - сумма всех постоянных и временных зубов, пораженных кариесом, пломбированных и удаленных [5] (рисунок 8). интенсивность кариеса постоянных зубов: индекс КПУ зубов - это сумма кариозных, пломбированных и удаленных зубов у одного пациента (зуб, имеющий одновременно кариозную полость и пломбу считается кариозным) [5] (рисунок 9).
Определение гигиенического состояния полости рта проводилось с использованием упрощенного индекса гигиены полости рта, отражающего количество (толщину и площадь) и качество зубных отложений. Перед проведением исследования для обнаружения зубного налета поверхности исследуемых зубов окрашивались специальными красителями [6]. Упрощенный индекс гигиены полости рта (ИГР-У) по Грин-Вермильону (OHI-S, Green J.C., Vermillion J.K., 1964) основан на количественном изучении мягких и твердых зубных отложений [6]. Мягкий зубной налет выявлялся путем окрашивание вестибулярной поверхности 16, 11, 26, 31 зубов и язычной поверхности 36, 46 зубов растворов Шиллера-Писарева. Наличие над- и поддесневых твердых зубных отложений определялось при помощи стоматологического зонда на язычной и вестибулярной поверхностях тех же зубов (рисунок 10). Следует отметить, что на данной иллюстрациии дальше в качестве красителя использовался препарат Caries Marker (Voco, Германия). Данный препарат применялся для лучшей визуализации зубного налета в иллюстрациях.
Исследование концентрации антимиробных пептидов ротовой полости в зависимости от интенсивности кариозного процесса
При анализе гигиенического состояния полости рта по индексу OHI-S (упрощенный индекс гигиены полости рта (ИГР-У) по Gren J.C., Vermillion J.K.) было выявлено, что 44 ребенка имели удовлетворительный уровень гигиены полости рта (значение индекса 1,3-3,0), из них 34 ребенка, страдающих АтД средней степени тяжести; 10 детей из группы сравнения. Хорошая гигиена полости рта отмечалась у 16 детей, из них 4 ребенка с атопическим дерматитом различной степени тяжести, 12 детей – группы сравнения. Плохой уровень гигиены у обследованных детей выявлен не был. При исследовании индекса РМА 21 ребенок страдал гингивитом средней степени тяжести, из них 18 детей, страдающих АтД различной степени тяжести; 3 ребенка из группы сравнения. Легкая степень гингивита обнаружилась у 23 детей, из них 15 детей с АтД и 8 детей без атопии. Дети с гингивитом тяжелой степени в нашем исследовании отсутствовали.
При исследовании уровня -дефензинов ротовой жидкости при различной степени тяжести гингивита у детей с атопическим дерматитом показаны следующие результаты: концентрация -дефензинов в слюне при средней степени тяжести гингивита и у детей с легкой степенью тяжести гингивита не имела статистически достоверных различий (n=18, Ме 7,4 нг/мл , 50% интерквартильный размах 4,3,.. 10,0 нг/мл; n=15, Ме 7,2 нг/мл, 50 % интерквартильный размах 3,0…10,0 нг/мл, соответственно, р =0,43).
При сравнение концентрации -дефензинов в слюне у детей с атопическим дерматитом у детей при наличии и отсутствии гингивита получены следующие результаты (n=33, Me 7,1 нг/мл, 50% интерквартильный размах 3,3…10,0 мкг/мл; n=5, Ме 6,9 нг/мл, 50% интерквартильный размах 5,4…..8,9 нг/мл, соответственно, р =0,23). Статистической достоверности не выявлено.
Также нами было проведено сравнение уровня концентрации LL-37 у детей группы сравнения в зависимости от наличия или отсутствия гингивита: (n=11, Me 1,2 нг/мл, 50% интерквартильный размах 0,3…1,35 нг/мл; n=11, Ме 0,9 нг/мл, 50% интерквартильный размах 0,4….1,62 нг/мл, соответственно). Статистической достоверности не выявлено, р=0,204.
Таким образом, выявлено, что уровень кателицидина у детей с атопическим дерматитом снижен при наличии воспалительных заболеваний пародонта (в нашем случае, гингивита), тогда как концентрация -дефензинов существенно не изменяется.
В группе сравнения нет существенных изменений в уровне антимикробных пептидов полости рта (-дефензинов, кателицидина) в зависимости от наличия или отсутствия гингивита. Глава 4 Заключение Несомненно, атопический дерматит остается важной медико-социальной проблемой; по данным разных авторов 15-24 %, а в некоторых экологически неблагоприятных регионах около 50% детского населения страдает этим заболеванием. В патогенезе атопического дерматита важную роль играет снижение местных факторов защиты, изменение системы врожденного иммунитета. Одним из компонентов врожденного иммунитета являются антимикробные пептиды. Многие авторы сообщают о снижении уровня дефензинов и кателицидинов в коже больных атопическим дерматитом. Учитывая то, что основные классы антимикробных полипептидов присутствуют во всех биологических жидкостях и тканях организма, необходимость в изучении роли этих соединений при различных состояниях макроорганизма не вызывает сомнений. Количественный и качественный состав антимикробных пептидов представляет особый интерес и является предметом интенсивного изучения.
Антимикробные пептиды – факторы врожденного иммунитета, древнее звено иммунной защиты живых организмов и растений, существующее 2 миллиардов лет. Другое название этих соединений – эндогенные антибиотики. В последние два десятилетия активно ведутся исследования по синтезированию этих соединений in vitro, что может дать начало новой эре антибактериальных препаратов. Учитывая все возрастающую резистентность микроорганизмов к традиционным антибактериальным препаратам, синтезирование и внедрение синтетических антимикробных пептидов, по нашему мнению, является перспективным направлением научного поиска.
Участие антимикробных пептидов в реакциях воспаления к настоящему времени общепризнано; установлено, что они оказывают прямое влияние на эффекторные звенья воспалительного процесса. LL-37 индуцируют синтез интерлейкинов (ИЛ) ИЛ-6, ИЛ-10 и хемокинов в кератиноцитах, что вызывает мобилизацию нейтрофилов, моноцитов, T-клеток и тучных клеток. Последние при воздействии LL-37 дегранулируют и высвобождают медиаторы, в том числе гистамин. Существует и обратная связь - медиаторы воспаления воздействуют на выработку антимикробных пептидов. Разрушать мембраны клеток организма хозяина с последующим некрозом способны высокие концентрации антимикробных пептидов. Таким эффектом обладает LL-37 в высоких концентрациях. Низкие концентрации LL-37 могут приводить к гибели клеток вследствие апоптоза, усиление которого значимо при вирусных инфекциях кожи, а уменьшение - при псориазе, заживлении ран и реэпителизации.
В исследованиях активности антимикробных пептидов при атопическом дерматите не раз отмечалась четкая зависимость между течением процесса, наличием вторичной инфекции и снижением уровня антимикробных пептидов как в сыворотке крови, так и в участках воспаления. Одной из составляющих повышенной чувствительности больных атопическим дерматитом к различным инфекционным агентам является недостаточная выработка антимикробных пептидов, и, в частности, кателицидина LL-37 и -дефензинов. Этот факт рассматривается в качестве одного из центральных звеньев патогенеза атопического дерматита. Изначально предполагалось, что уровень LL-37 и -дефензинов должен быть высоким из-за наличия механической травмы зудящей кожи. Однако при использовании количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени как при остром, так и при хроническом атопическом дерматите было выявлено значительное снижение уровней LL-37 и -дефензинов. Данные о количестве индуцируемых антимикробных пептидов в коже больных атопическим дерматитом расходятся. Установлено, что нормальное содержание LL-37 в плазме составляет 1,2-1,8 нг/мл.
При исследовании -дефензинов у больных с атопическим дерматитом также выявлено снижение их уровня по сравнению со здоровыми донорами. По данным Yount N. Y. (2005), снижение уровня -дефензинов может свидетельствовать об активном воспалительном процессе.
В нашей работе была предпринята попытка исследовать активность этих антимикробных пептидов в ротовой полости у детей с атопическим дерматитом. Известно, что основные классы антимикробных пептидов вырабатываются практически во всех биологических жидкостях организма, в том числе и в ротовой жидкости. Неоспорим тот факт, что состояние полости рта, в частности кариозные поражения твердых тканей зубов, поражения пародонта напрямую связано с общим соматическим статусом ребенка. Учитывая то, что атопический дерматит является часто встречаемой патологией, в патогенезе которого антимикробные пептиды играют основополагающую роль, нам показалось интересным и перспективным исследование антимикробных пептидов ротовой полости у детей, страдающих АтД. Простота забора материала для исследования, небольшое количество требуемого материала, исключение инвазивных методик делает данный эксперимент особенно интересным. Следует отметить, что собирание слюны вызывало огромный позитивный интерес у детей младшего, дошкольного возраста, что, несомненно, делает более привлекательным данную методику исследования. В литературе нет данных об уровне антимикробных пептидов полости рта у детей с атопическим дерматитом. Для постановки экперимента были использованы наборы Human LL-37 ELISA, HNP 1-3 ELISA (Hycult Biotech, Голландия). Данные наборы предназначены для определения антимикробных пептидов в сыворотке крови и других биологических жидкостях.
Похожие диссертации на Значение антимикробных пептидов в формировании патологии полости рта у детей с атопическим дерматитом
