Содержание к диссертации
Введение
РАЗДЕЛ 1.Обзор литературы 19
1.1. Взаимосвязь и взаимообусловленность стоматологического и соматического здоровья у детей 19
1.2. Роль тиреоидных гормонов в интегральной регуляции костного метаболизма .27
1.2.1. Влияние гормонов на ортодонтическое перемещение зубов 45
1.3. Коррекция нарушений минерального обмена, костного метаболизма при заболеваниях щитовидной железы у детей и подростков 49
РАЗДЕЛ 2. Материалы и методы исследования 61
2.1. Обоснование цели работы .61
2.2. Характеристика объектов исследования 62
2.3. Методы исследования 65
2.3.1. Клинические методы исследования 65
2.3.2. Антропометрические методы измерения диагностических моделей челюстей .66
2.3.3. Рентгенологические методы исследования .67
2.3.4. Биохимические методы исследования .69
2.3.5. Биофизические методы исследования .71
2.3.6. Ультразвуковые методы исследования минеральной плотности костной ткани 72
2.3.7. Спектроколорометрический метод исследования 73
2.4.Характеристика экспериментальных моделей и методов экспериментального исследования 74
2.5. Характеристика лечебно-профилактических мероприятий .77
2.6. Статистическая обработка полученных данных 84
РАЗДЕЛ 3. Состояние зубочелюстной системы у детей с эндокринными заболеваниями 86
3.1. Частота зубочелюстных аномалий у детей с эндокринными заболеваниями 86
3.2. Состояние твердых тканей зуба, гигиены полости рта и тканей пародонта у детей с эндокринными заболеваниями 92
3.3. Сравнительная оценка интенсивности кариеса зубов, состояния тканей пародонта у детей с заболеваниями щитовидной железы при наличии и отсутствии зубочелюстных аномалий .103
РАЗДЕЛ 4. Экспериментальное обоснование применения адаптогенов и остеотропных препаратов при ортодонтическом перемещении зубов на фоне зоба 106
4.1. Эффективность комплексного использования адаптогенов и остеопротекторов при ортодонтическом перемещении зубов на фоне экспериментального зоба 106
4.2. Морфологические изменения околозубных тканей при ортодонтическом перемещении зубов на фоне экспериментального зоба 129
РАЗДЕЛ 5. Структурно-функциональной состояние костной ткани, неспецифической резистентности организма у детей с зубочелюстными аномалиями и сопутствующим диффузным нетоксическим зобом 143
5.1. Оценка роста и развития зубочелюстной системы у детей с диффузным нетоксическим зобом 143
5.2. Функциональное состояние тироидной системы, показатели биохимических маркеров костного метаболизма у детей с зубочелюстными аномалиями и диффузным нетоксическим зобом 155
5.3. Биохимические параметры ротовой жидкости у детей с диффузным нетоксическим зобом, имеющих зубочелюстные аномалии 164 5.4. Cостояние гомеостаза ротовой полости и зарядового состояния клеток буккального эпителия (КБЭ) у детей с зубочелюстными аномалиями и диффузным нетоксическим зобом .168
5.5. Спектроколориметрические исследования тканей пародонта у детей с зубочелюстными аномалиями и диффузным нетоксическим зобом 171
5.6. Ультразвуковые исследования минеральной плотности костной ткани у детей с зубочелюстными аномалиями и диффузным нетоксическим зобом 179
РАЗДЕЛ 6. Клинико-лабораторная оценка эффективности комплексного ортодонтического лечения детей с диффузным нетоксическим зобом 183
6.1. Состояние гигиены полости рта и тканей пародонта у детей с диффузным нетоксическим зобом I степени (I группа) в динамике ортодонтического лечения 183
6.2. Состояние гигиены полости рта и тканей пародонта у детей с диффузным нетоксическим зобом II степени (II группа) в динамике ортодонтического лечения 198
6.3. Биохимические параметры ротовой жидкости у детей с диффузным нетоксическим зобом в процессе ортодонтического лечения .213
6.4. Изменения биохимических маркеров костного метаболизма у детей с диффузным нетоксическим зобом в процессе комплексного ортодонтического лечения .234
6.5. Влияние комплексной терапии сопровождения ортодонтического лечения детей с диффузным нетоксическим зобом на состояние костного метаболизма и тканей пародонта .241
6.6. Биофизические параметры ротовой жидкости и клеток буккального эпителия у детей с диффузным нетоксическим зобом в процессе ортодонтического лечения зубчелюстных аномалий .245
РАЗДЕЛ 7. Анализ и обсуждение результатов исследования 250
Выводы .278
Практические рекомендации .281
Список использованных источников .2
- Влияние гормонов на ортодонтическое перемещение зубов
- Антропометрические методы измерения диагностических моделей челюстей
- Состояние твердых тканей зуба, гигиены полости рта и тканей пародонта у детей с эндокринными заболеваниями
- Изменения биохимических маркеров костного метаболизма у детей с диффузным нетоксическим зобом в процессе комплексного ортодонтического лечения
Влияние гормонов на ортодонтическое перемещение зубов
Эпидемиологические исследования, проведенные на территории Украины и в зарубежных странах, свидетельствуют о стабильно высокой частоте зубочелюстных аномалий и деформаций у детей и подростков [6, 50, 51, 61, 67, 134, 144, 186, 175]. Представленная информация достаточно вариабельна, что связано с социально-экономическими, региональными и популяционными различиями обследованных групп. При этом существенное влияние оказывают и отличия методологий и ошибки репрезентативности. Значительный уровень морфологических и функциональных отклонений в зубочелюстной системе обеспечивается генетическими, биологическими и социально – средовыми детерминантами [36, 148, 229]. Большое значение имеет и высокая частота осложненного течения беременности и родов, неблагоприятная тенденция увеличения числа соматических заболеваний у детей и подростков.
В настоящее время исследователи обосновали концепцию общности факторов, формирующих как стоматологический статус, так и состояние соматического здоровья [11, 104, 146, 177, 200]. Одной из составляющих стоматологического здоровья является морфологический, функциональный, эстетический оптимум и равновесие в зубочелюстной системе, что отражает понятие «нормы» в ортодонтии [236].
Установлено, что у 12-ти летних детей, проживающих в разных регионах Украины, интегральный показатель уровня стоматологического здоровья снижен на 22-35%. Это обусловлено высокой распространенностью и интенсивностью кариеса, высокой частотой заболеваний тканей пародонта и зубочелюстно-лицевых аномалий [235]
Изучение распространенности зубочелюстных аномалий в разных группах здоровья детей, углубленные клинико-лабораторные исследования позволяют выявлять причинно-следственную взаимосвязь между различными заболеваниями организма и деформациями зубочелюстно-лицевой системы [52, 174, 193, 233, 251, 263]. Эти данные согласуются с представлениями о единстве структуры и функции систем организма человека [213, 291]. Морфологической основой единства характеристик стоматологического и соматического здоровья является общность эмбрионального происхождения лицевой части черепа, кожи, ее производных, опорно-двигательного аппарата, клапанов сердца, сосудов [294].
С одной стороны, неудовлетворительный стоматологический статус является фактором риска возникновения и хронизации общих заболеваний организма [282]. С другой стороны, состояние зубочелюстной системы рассматривается в качестве индикатора соматического здоровья [55, 113, 125, 179, 393].
Исследования показали, что выраженные морфологические и функциональные нарушения в зубочелюстно-лицевом комплексе сочетаются с паттерном хронических симптомов со стороны органов и систем организма.. Fonder А.С. [250] обозначил данное состояние как Стоматологический Дистресс - Синдром (Dental Distress Syndrome). При этом у пациентов с тяжелой степенью зубочелюстных аномалий и деформаций диагностировались аурикулотемпоральные, респираторные, висцеральные симптомы, в последнем случае часто определялась дисфункция щитовидной железы. Больные предъявляли жалобы на головные боли, недомогание, нервное напряжение, нарушения со стороны зрения. Некоторые из указанных симптомов являются характерными для какой-либо стрессовой ситуации. Исследователи отмечают, что нормализация окклюзии и устранение миофункциональных проблем приводило к улучшению общего состояния организма в соответствии с субъективными и объективными критериями.
На основании анализа корреляции между параметрами ЭКГ, электромиографии и ЭДГ доказана межсистемная интеграция функционального состояния зубочелюстной и вегетативной нервной системы, а также сердечно 21 сосудистой и дыхательной системы. Нарушения корреляции между исследованными параметрами были обнаружены при максимальном волевом напряжении жевательных мышц. Следовательно, функциональное состояние зубочелюстной системы оказывает значительное влияние на функциональное состояние всего организма [21].
Взаимосвязъ локальных нарушений в зубочелюстно-лицевой области у детей и подростков с общими заболеваниями позволяет рассматривать зубочелюстные аномалии и деформации как полиорганную, социально – значимую патологию [79, 177].
Изучение ортодонтического статуса у детей с соматическими дисфункциями выявило характерные признаки. У них наблюдалось нарушение положения нижней челюсти в 76% случаев, диспропорциональное развитие челюстей в трансверзальном и сагиттальном направлении - в 40% случаев, ретрузия и небное положение зубов - в 15% случаев, резцовая дизокклюзия - в 14% случаев, глубокое резцовое перекрытие - в 13% случаев [56].
Увеличение частоты зубочелюстных аномалий и деформаций в 1,6-2,3 раза отмечается при нарушениях опорно-двигательного аппарата [29, 68, 211]. У данной категории детей преобладает глубокая резцовая окклюзия, дистальная окклюзия и нейтральная окклюзия с аномалиями отдельных зубов. Выявлено, что с увеличением степени тяжести нарушений опорно-двигательного аппарата (от нарушения осанки к сколиозу III-IV степени тяжести) возрастает распространенность дистального прикуса [165]. У детей со сколиозом в 72,9-84,3% случаев диагностируются зубочелюстные аномалии и деформации [114].
Зубочелюстно-лицевые аномалии и деформации являются фенотипическими признаками недифференцированной дисплазии соединительной ткани. Диспластикозависимые дисморфии челюстно-лицевой области проявляются в виде истинного прогнатического соотношения челюстей, скученности и мезиального положения зубов, сужения и деформации зубных рядов [15, 22, 112, 164].
Антропометрические методы измерения диагностических моделей челюстей
Костная ткань является метаболически активной системой, в которой происходят два разнонаправленных и взаимосвязанных процесса: резорбция старой кости остеокластами и формирование новой кости остеобластами. В физиологических условиях эти процессы строго сбалансированы [81, 137, 152, 185, 257].
Костная ткань у детей и подростков постоянно обновляется благодаря процессам моделирования кости, которое представляет собой удаление материала с одной точки и отложение его на другой. При достижении полного развития скелета регенерация костной ткани продолжается. Это происходит в форме ремоделирования (внутренней перестройки), т.е. периодической замены старой кости на новую в этом же участке [137].
Процессы роста и минерализации костей у детей в различные возрастные периоды характеризуются динамизмом и сменой доминантного фактора регуляции. В детстве и юности костная масса растет до определенного времени, до достижения ее пикового значения. Исследования минеральной плотности костной ткани в динамике продемонстрировали, что 86% костной массы взрослого человека формируется в возрастном периоде 10-14 лет. Пик костной массы достигается к 16-20 годам. Кальциевый баланс в организме ребенка и взрослого тесно связан с интенсивностью протекания обменных процессов в костной ткани. У растущих детей скелет полностью обновляется за 1-2 года, при этом у взрослых - за 10-12 лет. [16, 17, 120, 121, 187, 199 ]. Тот факт, что ремоделирование костей происходит одновременно во множественных местах скелета, указывает на то, что оно регулируется локально с помощью аутокринных и/или паракринных механизмов и находится под эндокринным контролем.
Факторы, регулирующие и контролирующие процессы костного ремоделирования, можно разделить на 4 группы: кальцийрегулирующие гормоны (паратиреоидный гормон - ПТГ, кальцитонин и активный метаболит витамина D - кальцитриол); другие системные гормоны (глюкокортикоиды - ГК, тироксин, половые гормоны, соматотропный гормон - СТГ, инсулин); ростовые факторы (инсулиноподобные ростовые факторы - IGF-1 и IGF-2, ростовой фактор фибробластов (FGF), трансформирующий фактор роста (TGF ), ростовой фактор тромбоцитарного происхождения (PDGF), эпидермальный ростовой фактор); цитокины и колонийстимулирующие факторы (интерлейкины IL-1, IL-3, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11, IL-18, -интерферон, онкостатин М, фактор некроза опухолей (TNF), гранулоцито-макрофаго-колонийстимулирующий фактор (GM-CSF), M-CSF, c-kit-лиганд); местные факторы, продуцируемые самими костными клетками и высвобождающиеся при деструкции тканевого материала (простагландины, остеокласт-активирующий фактор и лейкотриены, оксид азота, витамин А, нейтральный фосфат, коллагеназа, бактериальная гиалуронидаза, лизосомальные ферменты) [187, 392, 336, 271, 364, 107, 253, 257].
Структурно-функциональное состояние костной ткани, интенсивность протекающих в ней обменных процессах в первую очередь связано с кальциевым гомеостазом. Регуляция содержания кальция в организме обеспечивается кальцийрегулирующими гормонами [71, 81, 253, 352 ] (табл.1.1)
Регуляция содержания кальция в организме Кальцийрегулирующие гормоны Основное действие на костную ткань Паратгормон Регуляция концентрации кальция в крови. Cтимуляция остеокластической костной резорбции и остеоцитарного остеолизиса. Может, как стимулировать, так и замедлять синтез коллагена и костного матрикса.
Кальцитонин(гипокальциемическийгормон) Первичное угнетение остеокластической активности. Уменьшение количества остеокластов, и остеолизис, стимулированный ПТГ, витамином D и др. факторами. Подавление распада коллагена, положительное влияние на остеосинтез. Функциональный антагонист ПТГ. 1,25-гидроксихолекальциферол(1,25 (ОН)2D3) -кальцитриол,1,24,25-дигидроксихолекальциферол (1,24,25 (ОН)2D3) -биологически активные метаболиты витамина D. Регуляция фосфорно-кальциевого обмена за счет стимуляции кишечной абсорбции кальция и фосфора, и усиления реабсорбции кальция в дистальных почечных канальцах; поддерживает гомеостаз кальция. Вместе с ПТГ, через остеобласты, стимулирует костную резорбциюОпосредованное участие, через трансформирующий фактор роста и простагландины, в образовании и дифференцировке остеокластов из их предшественников -клеток гемопоэтического ряда. На остеобластах модулирует экспрессию генов коллагена I типа, щелочной фосфатазы, остеопонтина, остеокальцина.Медленно, долговременно действующее соединение, контролирующее образование и минерализацию костного матрикса при достаточной доставке кальция к участкам оссификации. При снижении концентрации кальция в крови запускаются процессы, восстанавливающие баланс. При гипокальциемии до 2,25 ммоль/л наблюдается линейное увеличение уровня ПТГ, при гипокальциемии до 1,75 ммоль/л происходит резкое повышение секреции ПТГ [173] В результате действия ПТГ повышается активность остеокластов, снижается активность и пролиферация остеобластов, тормозится синтез коллагена, что способствует мобилизации кальция из костной ткани в межклеточную жидкость. Равновесие резорбция-остеосинтез сохраняется благодаря способности ПТГ стимулировать выработку кальцитриола почечной тканью, который выступает активным ремодулятором костной ткани [173, 187, 332].
Системные гормоны играют ведущую роль в костном метаболизме. Их действие на клеточном уровне опосредуется через взаимодействие с ядерными и клеточными рецепторами. Они осуществляют свой эффект как транскрипционные регуляторы ядер клеток-мишеней: остеобластов и остеокластов.
Гормоны, наряду со специфическими эффектами, оказывают контролирующее и регулирующее влияние на созревание ростковой пластинки, линейный рост кости, достижение пика костной массы, процессы моделирования и ремоделирования костной ткани [16, 59, 137, 369]. (табл. 1.2).
Кроме прямого действия соматические гормоны влияют на развитие и дифференцировку остеобластов и остеокластов путем их способности контролировать продукцию и/или действие локальных аутокринных и паракринных факторов. Ростовые факторы и цитокины осуществляют каскадный контроль продукции друг друга, формируя в некоторых случаях негативные «петли» обратной связи [384, 361, 137]. Данные о влиянии ростовых факторов и цитокинов на костную ткань представлены в табл. 1.3. Таблица 1.2
Влияние гормонов на костную ткань Системные гормоны Основное действие на костную ткань Инсулин Стимуляция синтеза компонентов костного матрикса за счет влияния на дифференциацию остеобластов и увеличения количества коллагенпродуцирующих клеток. Стимуляция синтеза хряща, увеличение продукции IGF-1 печенью.
Гормон роста(СТГ -соматотропныйгормон) Прямое стимулирующее влияние на хондроциты и пролиферацию остеобластов посредством регуляции синтеза IGF-1 и продуцирования в костной ткани местных факторов:TGF-, костных морфогенетических белков. Действуя через IGF-1, активирует 1-альфа-гидроксилазу. почек, увеличивая превращение транспортной формы витамина D в кальцитриол
Глюкокортикоиды Стимуляция (низкие концентрации, короткий период воздействия) и ингибирование (высокие концентрации, длительное воздействие) остеорезорбции и деградации коллагена в зависимости от концентрации в крови.
Тироксин Прямое воздействие на образование хряща во взаимодействии с IGF-1, как прямой, так и опосредованный эффект на активацию костного обмена. Эстрогены Участие в созревании скелета, формировании диморфизма, наборе пика костной массы, предотвращении потерь костной массы, поддержании минерального гомеостаза и костного баланса у взрослых в течение репродуктивного периода. Подавление активности остеокластов в стадии ранней дифференцировки, угнетение продукции IL-1, IL-6, TNF-, GM-CSF.
Состояние твердых тканей зуба, гигиены полости рта и тканей пародонта у детей с эндокринными заболеваниями
Доминируют экспериментальные исследования, при этом используется различный дизайн эксперимента: модели, схемы и дозы введения препаратов, различная силовая характеристика ортодонтических элементов. Однако клинических наблюдений по данной проблеме недостаточно [325]. И несмотря на то, что результаты эксперимента не могут быть прямо экстраполированы в клинику, ортодонты при обследовании пациентов и планировании лечения должны учитывать их гормональный статус, наличие в анамнезе приема препаратов по поводу сопутствующего эндокринного заболевания.
В эксперименте было установлено, что как системное, так и локальное пролонгированное введение ПТГ активно стимулировало скорость ортодонтического перемещения зубов. При этом указанный эффект был получен и при применении общего (1-84) ПТГ и активного фрагмента -терипаратида (1-34) [321, 284]. Косвенные свидетельства влияния ПТГ на скорость ОПЗ были получены при экспериментах на животных, содержащихся на диетах с низким содержанием кальция, что приводило к увеличению уровня ПТГ[326,293].
В большинстве исследований изучалось воздействие экзогенного тироксина на кинетику и биомеханику перемещения зубов, индуцированного приложением ортодонтических сил [365,396,394]. Так, в работе Shirazi M. и соавт. [365] было продемонстрировано, что внутрибрюшинное введение тироксина в дозах 5, 10 и 20 мг на кг в день способствовало ускорению мезиального перемещения моляров. Было показано, что тироксин повышал активность костной резорбции на стороне давления, снижал плотность костной ткани альвеолярного отростка челюстей, активизировал процессы регенераторного моделирования. Данный эффект авторы связывают с увеличением продукции интерлейкина-1 (IL-1В), инициированным низкими концентрациями гормона. Представляют интерес исследования Verna C. и соавт. [396], которые продемонстрировали, что на фоне экспериментального гипертиреоза скорость ортодонтического перемещения зубов повышалась, при моделировании гипотиреоза – снижалась. Определялась различная локализация центра ротации моляра (СRot): при высокой скорости метаболизма костной ткани СRot располагался в апикальной части, при низкой – ближе к коронковой части зуба, в последнем случае отмечалась выраженная инклинация моляра, значительная частота лакунарной резорбции корня [395]. Общее и местное введение тиреоидных гормонов (комбинации Т3 и Т4) в небольших дозировках оказывало протекторное действие на цемент и дентин корня перемещаемых зубов, существенно снижая частоту резорбции корня. При этом определялась значительная активность 5 дейодиназы в периодонтальной связке и как результат локальное увеличение концентрации Т3 [344].
Анализ литературных источников показал, что экспериментальные данные о влиянии экзогенного кальцитонина на биологические процессы, происходящие в околозубных тканях при перемещении зубов, отсутствуют.
В ряде исследований было установлено дозо-зависимое влияние активного метаболита витамина D - дигидроксихолекальциферола 1,25 (1,25 [OH] 2D3) на скорость перемещения зубов. В физиологических дозах 1,25 (OH) 2D3 не стимулировал резорбцию кости и не оказывал влияние на активность перемещения зубов. Введение низких концентраций 1,25 (OH) 2D3 стимулировало экструзию клыков [268], дистализацию резцов под воздействием ортодонтических лигатур [269] и буккальное смещение моляров при применении расширяющих пружин [368]. Авторы связывают данный эффект с тем, что низкая локальная концентрация 1,25 (OH) 2D3 активизирует экспрессию RANKL, являющегося лигандом рецептора, активирующего ядерный фактор кВ на остеобластах. Это приводит к стимуляции дифференцировки остеокластов посредством RANK / RANKL системы [400]. Кроме этого введение витамина D способствовало интенсификации процессов костного формирования в зоне тяги, тем самым стабилизируя результат ортодонтического перемещения зуба [310].
В работе Midgett R.J. и соавт. было продемонстрировано, что у собак, которые находились на низкокальциевой диете в течение 10 недель до фиксации ортодонтических конструкций, наблюдалась более высокая скорость перемещения зубов, чем у экспериментальных животных, которые содержались на рационе с высоким уровнем кальция [326].
Полученные результаты согласовались с исследованиями Goldie R.S. и соавт. [293] и объясняются тем, что при алиментарной недостаточности кальция наблюдается нарушение фенотипа костного ремоделирования, при котором интенсивность костной резорбция превалирует над костным формированием [387]. Определено, что активность преобразований в околозубных тканях, индуцированных приложением ортодотических сил обратно пропорциональна содержанию эстрогенов в сыворотке крови экспериментальных животных [286]. Было выявлено, что после овариэктомии у крыс скорость ортодонтического перемещения зубов увеличивается, а при введении эстрогена – замедляется [403]. Кортикостероиды, особенно глюкокортикоиды стимулировали процесс ортодонтического перемещения зубов, однако результат был нестабильным.
Данный эффект зависел от дозы введения препаратов [337,307]. Экспериментальные исследования свидетельствуют, что в динамике ортодотического перемещения зубов происходят изменения гормонального профиля.
Установлено, что в активном периоде ортодонтического лечения отмечается двухкратное увеличение в сыворотке крови количества инсулина и полуторакратное - кортизола, трехкратное снижение количества прогестерона — предшественника синтеза тестостерона в половых железах, тенденция к снижению уровня тестостерона. В ретенционном периоде ортодонтического лечения сывороточный уровень прогестерона снижается в 16 раз, тестостерона (анаболического гормона) – в 12 раз при уменьшении количества тироксинсвязывающего глобулина и тенденции к увеличению сывороточного уровня катаболического гормона – тироксина [365].
Изменения биохимических маркеров костного метаболизма у детей с диффузным нетоксическим зобом в процессе комплексного ортодонтического лечения
Содержание малонового диальдегида (МДА) определяли при помощи тиобарбитуровой кислоты, в результате взаимодействия с которой образуется окрашенный триметиловый комплекс [209]. Концентрация МДА пропорциональна интенсивности окраски. Уровень МДА в ротовой жидкости, который выражали в миллимолях на 1 мл ротовой жидкости, свидетельствовало о степени ПОЛ.
ПОЛ контролируется антиоксидантной системой (АОС), которая состоит из многих компонентов. Наиболее простым методом оценки АОС является определение активности каталазы, изменения содержания которой происходят паралельно с другими антиоксидатными ферментами. Активность каталазы характеризует местную сопротивляемость микробным факторам. Уровень фермента в ротовой жидкости определяли при помощи метода, основанного на способности перекиси водорода, образовавшейся в присутствии каталазы, соединяться с молями молибдена в стойкий оранжевый комплекс [30]. По интенсивности окраски комплекса судили об активности каталазы. Активность фермента выражали в милликаталах на 1 литр ротовой жидкости. 1 катал - это способность фермента катализировать образование 1 моля перекиси водорода. Для определения состояния местной неспецифической резистентности исследовали уровень лизоцима в ротовой жидкости [116]. Использовали индикаторные микроорганизмы Micrococcus Lisodeicticus – НПО "Биохимреактив" (г. Санкт-Петербург). Исследования проводили фотоколориметрическим методом, который определяет разницу степени экстинкции на длине волны 540 нм (зеленый фильтр) через 15 и 180 минут.
Для оценки степени обсемененности полости рта изучали активность уреазы, которая синтезируется условно-патогенной микрофлорой и не выделяется соматическими клетками [27]. Активность уреазы в ротовой жидкости исследовали при помощи субстрата мочевины, которая в присутствии уреазы расщепляется до аммиака, количество последнего определяли по реакции с реактивом Несслера. Активность уреазы выражали в микромолях аммиака, образованного за 1 минуту в 1 литре ротовой жидкости (мкмоль NH3 / мин.л). Показателем степени дисбактериоза является отношение удельной активности уреазы к удельному содержанию лизоцима в ротовой жидкости [228].
В ротовой жидкости также определяли содержание ионизированного кальция, магния и неорганического фосфора [105] В ходе исследования были изучены показатели тиреоидного статуса, уровни кальцийрегулирующих гормонов, биохимических маркеров костного метаболизма.
Уровень тиреотропного гормона (ТТГ), тироксина (Т4) и трийодтиронина (Т3) в сыворотке крови определяли иммуноферментным методом. Для интегральной оценки функционального состояния гипофизарно-тиреоидной системы у детей с ДНЗ выполняли расчет величин тиреоидных индексов (тиреоидный индекс (ТИ =Т3+Т4/ТТГ); индекс биологической конверсии (компенсации) Т4/Т3; индексы ТТГ/Т3 и ТТГ/Т4).
Уровень паратиреоидного гормона (ПТГ) в сыворотке крови определяли с использованием набора реактивов I-PTH ELISA (DSL, США); кальцитонина -Calcitonin ELISA (BIOMERICA, США). Определение уровня кальцитриола в сыворотке крови проводили количественным методом иммуноферментного анализа с помощью набора 1,25 Vitamin D ELISA (Immundiagnostik, Германия).
Активность остеокальцина в сыворотке крови изучали с помощью набора N-MID Osteocalcin (Nordic Bioscience Diagnostics A/S, Канада) методом иммуноферментного анализа (ИФА-метод).
Содержание дезоксипиридинолина (ДПД) определяли в утренней моче набором Metra DPD EIA kit (Quidel Corporation, США) ИФА - методом по отношению с содержанием креатинина.
Биофизические методы исследо вания . Исследования стабильности pH ротовой жидкости (pH) проводили по методу Деньги О.В. и соавт. [163]. Стабильность pH ротовой жидкости отражает уровень регуляторных реакций, обеспечивающих гомеостаз в полости рта. Изучить уровень неспецифической резистентности организма в целом и в ротовой полости, в частности позволяет также комплексная оценка зарядового состояния клеток буккального эпителия (КБЭ).
Исследования зарядового состояния клеток буккальнго эпителия осуществляли по методу Деньги О.В. [45]. При этом определяли процент подвижных ядер КБЭ, отношение амплитуд электрофоретического смещения ядер и плазмолемм с помощью биологического микроскопа при увеличении 480 для 100 неповрежденных клеток в каждом препарате. Амплитуды смещения ядер и плазмолемм оценивались с помощью окулярной линейки.
Ультразвуковые методы и сследования м и н е р а л ь н о й п л о т н о с т и к о с т н о й т к а н и . Ультразвуковая денситометрия дает возможность неинвазивно количественно определять минеральную плотность костной ткани (МПКТ), которую наиболее оптимально измерять в костях, состоящих преимущественно из трабекулярного вещества, т.к. скорость минерального метаболизма в нём намного выше и составляет 20-25% в год по сравнению с 1-3% в кортикальном веществе.
Денситометрические показатели пяточной кости, которая в большей степени состоит из трабекулярного вещества, измеряли с помощью денситометра "Sonost 2000" (Корея). При этом определяли следующие параметры: - СРУ ( SOS ) - скорость распространения (прохождение) ультразвука через кость (м/с), которая зависит от эластичности и плотности костной ткани; - ШОУ ( BUA ) - широкополосное ослабление ультразвука (дБ/мГц) характеризует потерю интенсивности ультразвука в среде его распространения и отражает не только костную плотность, но и количество, размеры и пространственную ориентацию трабекулярной костной ткани; - ИМ (в %) (BQI) - индекс прочности костной ткани, который рассчитывается на базе СРУ и ШОУ, отражает состояние губчатой костной ткани обследуемого по категории взрослых людей в возрасте 20 лет; Эхоостеометрический метод исследования. Скорость распространения ультразвуковой волны в нижней челюсти детей определяли с помощью эхоостеометра "ЭОМ-01Ц". Частота УЗ колебаний, излучаемых диагностической головкой ( ДГ ) измерительного прибора составляет 0,12 ± 0,036 МГц. Прибор обеспечивает измерение временных интервалов УЗ - волн в диапазоне 1-300 мкс .
При этом использовались как излучатели и приемники УЗ - волн промышленного производства (диаметр 1 см), так и специально разработанные и изготовленные излучатели диаметром 0,3 см, работающие на той же частоте.
Датчики закреплялись на жесткой или гибкой миллиметровой линейке. При этом прямыми измерениями определяли время (t) прохождения УЗ сигнала от излучателя к приемнику и расстояние (L) между ними. Скорость прохождения УЗ - волны рассчитывали по следующей формуле (2.1):
