Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1 . Современное состояние проблемы неспецифических... воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта и значение иммунокоррегирующих препаратов в лечении 12
1.2. Проблема боли и её решение при лечении воспалительных заболеваний слизистой оболочки рта...22
1.3. Значение иммуномодулятора Галавит при лечении воспалительных заболеваний различных органов и систем организма 30
ГЛАВА 2. Материал и методы исследований 36
2.1 .Клинические исследования 36
2.1.1.Клиническое исследование здоровых добровольцев..
2.1.2. Методы клинического исследования и лечения-пациентов с заболеваниями слизистой оболочки рта
2.2. Методика применения препарата галавит 42
2.2.1. Общие сведения о препарате галавит
2.2.2.Клиническое применение препарата галавит
2.3. Лабораторные иммунологические методы исследования 46
2.4. Методы статистической обработки материалов. 48
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 49
3.1. Результаты клинических исследований 49
3.1.1. Результаты обследования практически здоровых добровольцев.
3.1.2. Результаты обследования и лечения больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом
3.1.3. Результаты обследования и лечения больных с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая
3.2. Результаты иммунологических исследований 86
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов
4.1. Обсуждение результатов клинических исследований .. 110
4.2. Обсуждение результатов иммунологических исследований 114
Приложение 122
Выводы 126
Практические рекомендации 128
Список литературы 129
Отечественная литература 129
Иностранная литература 147
- Современное состояние проблемы неспецифических... воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта и значение иммунокоррегирующих препаратов в лечении
- Методы клинического исследования и лечения-пациентов с заболеваниями слизистой оболочки рта
- Результаты обследования практически здоровых добровольцев.
- Обсуждение результатов клинических исследований
Введение к работе
Заболевания слизистой оболочки рта являются одной из наиболее сложных, актуальных проблем стоматологии, и до настоящего времени- наименее изученная среди других стоматологических; заболеваний; (Боровский Е.В;, Машкиллейсон А.Л.,1998;. Банченко« F.B;. и» соавт: 2000; Барер Г.М.,: 2005; Рабинович И.Мі,2005). Это? объясняется, сложностью диагностики, дифференциальной диагностики; различных заболеваний, проявляющихся схожими элементами- поражения на; слизистой оболочке; Клиницисты ощущают значительные трудности в лечения патологии слизистой оболочки; что обусловлено недостаточными знаниями об этиологии; и патогенезе данных заболеваний;
Установлено, что • развитие ряда заболеваний слизистой оболочки обусловлено множественными патогенетическими связями; с иммунным; статусом; с патологией; внутренних органов, нарушением» обмена веществ (МаксимовскаяЛ.Н., 1992; Шумский А.В., 1998; Алик ЕЛ;, 2001; Иванова Е.В., 2003; Елькова Н.П.,2006). Особую проблему в стоматологии представляет лечение заболеваний слизистой оболочки рта, сопровождающиеся развитием эрозивно-язвенных элементов поражения и.хроническим или рецидивирующем, течением. К таким заболеваниям: следует отнести красный плоский лишай и хронический рецидивирующий афтозный стоматит.. Развитие данных заболеваний сопровождается воспалительной реакцией слизистой оболочки, значительной; болезненностью и торпидностью течения, полиформизмом клинических проявлений и: малой эффективностью лечения, о чем свидетельствуют многочисленные исследования (Рабинович О.Ф.,2001; Єпицина В.И.,2004; Литвинов С.Л.,2004; Сабанцова Е.Г., Рабинович И.М., 2005 и др.).
Научные работы по изучению сложного, не до конца раскрытого патогенеза данных заболеваний слизистой оболочки рта указывают на значение иммунных нарушений в механизме их развития. Это объясняет актуальность поиска различных иммунокорригирующих препаратов для повышения эффективности лечения данных заболеваний слизистой оболочки рта, разрабатываются различные схемы их клинического применения.
Внедрение в клиническую практику в 1997 году нового отечественного препарата галавит (регистрационные номера 97\91\3 и 000088\02 - 2000 МЗ РФ) в качестве лекарственного вещества, изменяющего функциональную активность макрофагов, регулирующего синтез цитокинов макрофагами и лимфоцитами, послужило началом широкомасштабного изучения данного препарата и разработки оригинальных методов лечения с его помощью целого ряда заболеваний. Клинические исследования в различных областях медицины продемонстрировали хорошую переносимость и терапевтическую эффективность галавита при его парентеральном введении (Израилов Р.Е.,2003; Куликова Т.Ю., Турина О.И:, 2004; Каграманова Ж.А., Малиновская В.В.,2005; Буянова С.Н. с соавт. 2005; Латышева Т.В. с соавт., 2005; Свиридова С.П.,2007).
В стоматологии с успехом использовали инъекции галавита в схеме комплексного лечения пародонтита (В.В.Щупак, 2003), биополимерные пленки «Диплен» с галавитом («Галавит П.Л.») применяли при лечении эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая (В.Б.Акинфеева, С.Д.Арутюнов с соавт., 2005, 2007) и стоматита у онкологических больных (Велыыер З.Л., 2004, 2005).
В настоящее время разработана новая форма препарата галавит — сублингвальные таблетки для рассасывания в полости рта. Сублингвальные таблетки галавит разрешены фармкомитетом РФ для клинического применения.
Цель исследования - повышение эффективности иммуномодулирующей и обезболивающей терапии в комплексном лечении больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая.
Для достижения цели- исследования были поставлены следующие задачи:
1. Разработать способ лечения и средство для местной иммуномодулирующей и обезболивающей терапии эрозивно-язвенных элементов на слизистой оболочке полости,рта на основе бензокаина и галавита и сравнить его с традиционно используемыми препаратами.
2. Провести сравнительную оценку клинической эффективности общего комплексного лечения пациентов с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая при применении сублингвальных таблеток галавит и при традиционной общей терапии.
3. Изучить уровень иммунологических показателей смешанной слюны (секреторного иммуноглобулина А, общего белка, интерлейкинов 4, 1 (3) в смешанной слюне у здоровых добровольцев и у пациентов с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая.
4. Провести мониторинг иммунологических показателей у пациентов с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая в процессе терапии сублингвальными таблетками галавит и при традиционном лечении.
5. Определить показания - и режим применения сублингвальных таблеток галавит при лечении заболеваний слизистой оболочки полости рта.
Научная новизна
Предложен способ и- средство, обеспечивающее (патент на изобретение № 2290918) обезболивание и ускорение эпителизации эрозивно-язвенных элементов на слизистой оболочке рта, основанное на применении геля бензокаина и галавита в соотношении 1:20.
Впервые в клинических условиях получены данные о терапевтической эффективности сублингвальных таблеток галавита при лечении хронического рецидивирующего афтозного стоматита и эрозивно-язвенной формы красного плоского • лишая. Эффективность лечения по результатам эпителизации эрозивно-язвенных элементов на слизистой оболочке рта и по длительности ремиссии составила 86,7 % для рецидивирующего афтозного стоматита и 43,7% для эрозивно-язвенной формы красного плоского лишая.
Впервые проведен сравнительный анализ содержания в смешанной слюне секреторного иммуноглобулина А, интерлейкинов 4 и ір, общего белка у добровольцев, не отягощенных общесоматической патологией и здоровой- полостью рта и у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая.
Впервые изучено содержание в смешанной слюне секреторного иммуноглобулина А, интерлейкинов 4 и 1 р\ общего белка у больных с ХРАС и КПЛ на фоне лечения галавитом и при традиционной терапии.
Впервые для больных с рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая разработана схема комплексного лечения, включающая применение сублингвальных таблеток иммуноимодулятора галавит и обезболивающего геля на основе бензокаина и галавита.
Практическая значимость
В результате проведенных исследований предложен и внедрен новый эффективный комплексный метод лечения больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая, основанный на применении сублингвальных таблеток иммуномодулятора галавит.
Для лечения эрозивно-язвенных элементов поражения на слизистой оболочке рта разработана схема создания геля на основе бензокаина и галавита, обладающего местнообезболивающим и репаративным эффектами.
Применение разработанной в диссертационной работе схемы приема сублигвальных таблеток и обезболивающего геля на основе галавита позволит достичь ускоренной эпителизации и продолжительной ремиссии у больных с рецидивирующим афтозным стоматитом и облегчить состояние пациентов с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая.
Предложенная комплексная схема терапевтических мероприятий при лечении больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая достаточно проста, дает хорошие результаты и может быть рекомендована к использованию в стоматологии.
Разработаны практические рекомендации по применению иммуномодулирующего препарата галавит при лечении заболеваний слизистой оболочки рта.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Результаты комплексного лечения пациентов с хроническим рецидивирующим: афтозным стоматитом и красным плоским лишаем с применением нового способа и средства для иммунокоррекции и: обезболивания эрозивно-язвенных элементов на слизистой оболочке полости рта.,
2. Оценка иммунологических показателей смешанной слюны пациентов?с.заболеваниями слизистой оболочки полости рта на; фоне приема сублингвальных таблеток галавит и. традиционного; леченияш их сравнительный анализ с показателями у здоровых людей.
3. Рекомендации: по повышению эффективности иммунокоррегирующего и местнообезболивающего лечения: пациентов- с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и красным плоским лишаем с использованием в клинической практике сублингвальных таблеток галавит в сочетании с местнообезболивающим препаратом.
Личный вклад
Автором лично были обследованы 108 человек, среди них 92 пациента с заболеваниями1 слизистой оболочки полости рта и 16 здоровых добровольцев (учащиеся MFMCY). Автор лично осуществляла комплексное местное и общее лечение и динамическое наблюдение в отдаленные сроки за пациентами с заболеваниями слизистой оболочки- рта, проводила забор смешанной слюны: у- исследуемых лиц. При участии автора были проведены серии иммунологических исследований смешанной слюны. Автором разработаны протоколы исследования, позволяющие получать полную информацию на всех этапах диссертационного исследования. В ходе сбора и на этапе анализа полученного материала для диссертационной работы, соискатель освоила методы статистической обработки. Автором лично проработан большой объем научной литературы, что было представлено в литературном обзоре. 1
Апробация работы
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XII Международной конференции челюстно-лицевых хирургов и стоматологов «Новые технологии в стоматологии» (Россия, Санкт-Петербург, 22 -24 мая 2007г.), на региональной конференции молодых ученых (Москва,27-29 мая 2007 г), на юбилейной научно-практической конференции «Стоматологическая анестезиология: вчера, сегодня, завтра» (7 февраля 2008 г.); на XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» в рамках конкурса научных работ молодых ученых (Москва, 16 апреля 2008 г.).
Апробация диссертации состоялась на межкафедральном заседании кафедр стоматологии общей практики и анестезиологии ФПДО, госпитальной терапевтической стоматологии, кожных и венерических болезней ГОУ ВПО МГМСУ, лаборатории изучения боли и методов обезболивания отдела основ стоматологии НИМСИ МГМСУ, института диагностики и профилактики социально-значимых заболеваний ООО «Прогрессивные Био-Медицинские технологи» 17 марта 2008 г.
Внедрение результатов исследования
Результаты работы внедрены в учебный процесс и используются в преподавании интернам, ординаторам и врачам - стоматологам на циклах повышения квалификации на кафедре стоматологии, общей практики и анестезиологии ФПДО МГМСУ, на кафедре кожных и венерических болезней МГМСУ, в клиническую практику МЛПУ «Королёвская стоматологическая поликлиника».
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 работы в изданиях рекомендуемых ВАК Минобнауки РФ, получен патент на изобретение № 2290918 от 10 января 2007г.
Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, приложения, выводов и практических рекомендаций, списка литературы и изложена на 156 страницах машинописного текста. Диссертация содержит 25 таблиц и 53 рисунка. Обзор литературы включает 292 источника, в том числе -181 отечественных и 111 иностранных авторов.
Современное состояние проблемы неспецифических... воспалительных заболеваний слизистой оболочки полости рта и значение иммунокоррегирующих препаратов в лечении
Заболевания слизистой оболочки рта наименее изученная проблема среди других стоматологических заболеваний. Трудность диагностики и лечения патологии слизистой оболочки обусловлена множественными патогенетическими связями с иммунным статусом, патологией внутренних органов, состоянием нервной системы, нарушением обмена веществ (Боровский Е.В.,Машкиллейсон А.Л.,1989; Menni S. et al.,1995; Гилева О.С. с соавт, 2007). Это нашло выражение в прогнозе развития медицинской науки на XXI век (рассмотрено на заседании Президиума РАМН от 8.12.1999), где одним из основных направлений научных исследований в стоматологии называют изучение роли иммунной системы в патологии заболеваний слизистой оболочки рта. Действительно анализ литературных данных в период с 2000 года по настоящее время демонстрирует высокую активность исследователей и большое количество работ посвященных изучению иммунологических показателей крови, слюны, десневой жидкости при различных заболеваниях слизистой оболочки рта и пародонта, помогающие вскрыть патогенетические механизмы развития патологии и найти пути адекватной коррекции иммунной системы (Хаитов P.M. с соавт., 1996,2000; Федько М.Ю., 2000; Ульянова М.А., 2003).
Воспалительные заболевания слизистой оболочки рта, особенно те из них, которые сопровождаются развитием эрозивно-язвенных элементов и хроническим или рецидивирующем течением представляют серьёзную проблему в стоматологии. К таким заболеваниям следует отнести красный плоский лишай, афтозный стоматит, которые отличаются торпидностью течения, полиформизмом клинических проявлений, сложностью диагностики? и малой эффективностью лечения; (Терехова Н.В. с соавт., 1983; Володина Е.В., 1998;Шумскийі АЖД998;; Лукиных ЛМ.,2000; Трунина Л:П., 2005; Елькова Н. Лі, Максимовская. Л.Щ2006).
Это ставит проблему лечения? воспалительных заболевании-слизистой оболочки рта в; ряд наиболее сложных и важных задач современной стоматологии; Распространенность неспецифических воспалительных заболеваний слизистой? оболочки, рта. в- структуре: других неспецифических воспалительных заболеваний? челюстно-лицевой : области .составляет по данным разных: авторов от, 8 до 19 % (Кабак Аг;М;,I960; Рыбаков, А.Ш964; ЛНе Z., 1995; Zain, R.B;,. 2000; ЛаскарисД:,.СкаллиК;, 2005). Так, по данным С.А.Литвиновой:(2004) в структуре:заболеванийхлизистой оболочки рта красный плоский лишай составляет 17 %, а сред№ населения і варьирует в пределах 1-2% (Quaranta М;, et ali, 1981; Bonquot-Y., 1986; Eamey, P: et aK, 1987; BrowmRi, 1993;, Vincent S. et alU990; Scully G., Eisen; Dj, Garrozzo Mi, 2000 Как изолированное поражение только слизистой оболочки: рта распространенность красного плоского лишая варьирует от 70 до 75% (Иванова Е.В. с соавт.,2002; Brown R., 1993)
Такое заболевание как хронический рецидивирующий афтозньш: стоматит поражает по данным разных авторовют 5 до 50 % населения;. (Дитер Е. Ланге,1999; Сабанцева: Е.Г. с соавт. 2003; Antoon J.W.et al.,1980; Cohen Ь.,1980); Это указывает на достаточную, распространенность и актуальность таких поражений слизистой оболочки полости рта;
Многочисленные: работы по изучению сложного и не:до конца: раскрытого патогенеза заболеваний слизистой;оболочкиртауказывают на важное значение иммунных нарушений: в механизме развития.этих болезней (Лукиных Л.М:,2000; Шумский А.В., 2000; Рабинович ИМ.с соавт., 2000; Abbas А.К., Lichtman А.Н., 2001,2003). Научные исследования доказали наличие выраженных изменений в гуморальном и клеточном звеньях системы иммунитета при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите и красном плоском лишае.
Так, в возникновении хронического рецидивирующего афтозного стоматита рассматривается вирусная теория (Hooks JJ.,1987), но наиболее научно обоснованной считается иммунная, теория, связанная с нарушениями клеточного и гуморального иммунитета, как местного, так и общего (Griffin CJ.,1981). Подчеркивается роль клеточного иммунодефицита слизистой оболочки в условиях недостаточной функции секреторного аппарата пищеварительного тракта (Г.В. Банченко, Е.В.Боровский, И.М.Рабинович, 2003). Иммунофлюоресцентные исследования слизистой оболочки рта предполагают, что деструкция эпителия и развитие афтозных элементов связана с циркулирующими иммунными комплексами, где антигенами являются микроорганизмы или клетки, самой слизистой оболочки, а антителами - иммуноглобулины-(Guven О., 1988; Е В.Боровский, 2003).
При- красном плоском лишае в крови регистрировали признаки вторичного иммунодефицита: нарушения соотношения субпопуляций Т лимфоцитов, что выражалось в повышении показателей СД4+ и снижении СД8+, дисглобулинемии G,A;M, гиперактивацией синтеза клеточных медиаторов воспаления - цитокинов, тромбаксана, лейкотриенов, кининов и т.д. Эти изменения особенно выражены на фоне деструкции эпителия при эрозивно-язвенной форме красного плоского лишая (Трунина Л.П.,2005; Coffoni F. et al.,1988). Ещё ранее Bechei В., et. al.(1999) и Рабинович О.Ф. с соавторами (2000) установили при красном плоском лишае сдвиги в Т-системе иммунитета, что определялось по уменьшению количества В-лимфоцитов снижению их функциональной активности. На этом основании рекомендовалось применение иммунотропных препаратов (Рабинович О.Ф. исоавт., 2001).
Однако следует учитывать, что иммунодефицитное состояние может формироваться не только как результат снижения- количества и функциональной активности иммунокомпетентных клеток, которые рассматриваются специалистами как «истинный» иммунодефицит, но и как результат нарушения регуляторных связей внутри иммунной системы (Волохин А.И. с соавт.,1995; Иванова Е.В., Рабинович О.Ф. с соавт., 2002; Елькова Н.Л., 2002; Brogi Е. et al, 1994;. Baxvanis C.N. et al, 1994; Cebra J.J. et al, 1994; Bradwell A.R., 1995; Delves P.J. et al, 1996; Natah S.S. et al, 2000).
В настоящее время установлено влияние интерлейкинов на координацию иммунного ответа (Vegesna V. et al, 1995; Paul W.E.et al, 1999; Schierano G. et al, 1999), при их недостаточности развивается так называемый интерлейкин зависимый иммунодефицит (Спицына В.И.,2004). Однако научной информации о взаимосвязи интерлейкинов с функцией клеток иммунной системы при воспалительных заболеваниях слизистой оболочки рта не достаточно (Ono I. et al, 1995; Goretsky M.J. et al, 1996; Fitzgerald K.A. et al, 2001). Назначение иммунокоррегирующих препаратов на основании снижения тех или иных иммунологических показателей, часто носит стереотипный характер, что не всегда раскрывает механизм этого воздействия (Sell S. et al, 2001). Тем более, что последние наблюдения свидетельствуют, что оценка иммунного статуса только по отклонениям иммунологических показателей от нормы мало информативна и может приводить к противоречивым результатам (Володина Е.В:, 1998).
Методы клинического исследования и лечения-пациентов с заболеваниями слизистой оболочки рта
Под наблюдением и лечением находилось 92 человека с заболеваниями слизистой оболочки рта, среди них 43 человека с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и 49 - с, различными формами красного плоского лишая.
Для дифференциальной диагностики заболеваний слизистой; оболочки рта использовали цитологический и бактериоскопический методы исследования. Изучали соскобы с поверхности элементов поражения окрашенные азур-эозином для исследования клеточного состава и для исключения присоединения вторичной инфекции (фузо-спирохетоза, кандидоза). Среди больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом (43 человека) было 22 женщины и 21 мужчин (52,1% и 47,9%), средний возраст 36,2 ± 1,55. Распределение пациентов по возрасту представлено в таблице 1.
Среди больных с красным плоским лишаем (49 человек) было 39 женщин (79,6%) и 10 мужчин (20,4%), средний возраст 62,4± 1,1 лет. Распределение пациентов по возрасту представлено в таблице 2. Среди больных с заболеванием слизистой оболочки рта были выделены пациенты с ХРАС и КПЛ, отличающиеся тяжелым, хроническим, перманентным течением болезни, с длительно незаживающими эрозивно язвенными поражениями на слизистой оболочке рта. Среди отобранных пациентов было 24- с ХРАС и 26 - с КПЛ.
Данные пациенты составили 2 группы, которым было проведено клинико-лабораторное обследование и лечение.
В каждой группе были выделены 2 подгруппы пациентов, рандомизированных по возрасту, полу, основному заболеванию, обследование которых проводилось едиными методами, жг отличающихся комплексом лечебных назначений. 1 группа - пациенты с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом: основная подгруппа - 15 человек (8 женщин и 7 мужчин) в возрасте от 12 до 74 лет (средний возраст 36,2 ± 1,55 лет), получавшие в схеме комплексного лечения иммунмодулирующий препарат галавит. контрольная подгруппа - 9 человек (5 женщин и 4 мужчин, средний возраст 32,2 ± 1,40), схема их лечения исключала применение препарата галавит. 2 группа - пациенты с эрозивно-язвенной формой красного плоского лишая: основная подгруппа- 16 пациентов (12 женщин и 4 мужчин) в возрасте от 25 до 79 лет (средний возраст 60,6 ± 0, 84 лет), для лечения которых использовался галавит. контрольная подгруппа - 10 человек (7 женщин и 3 мужчин, средний возраст 66,8 ± 1,28 лет), в схеме лечения исключалось применение галавита.
Всех обследованных регистрировали в специально разработанные нами протоколы клинического исследования, куда вносились данные о перенесенных и сопутствующих заболеваниях, развитии настоящего заболевания, состоянии зубов и пародонта, уровне гигиены, данных осмотра слизистой оболочки рта.
Пациенты основных и контрольных подгрупп получали комплексное лечение, включающее санацию полости рта, проведение профессиональной гигиены, устранение травматических факторов и назначение средств общей и местной терапии.
Всем пациентам с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом назначалась следующая схема лечения: Общее лечение . антигистаминные средства (препарат выбора)- кларитин по 10 мг 1 раз в сутки в течение 10 дней; стабилизатор мембран тучных клеток - кетотифен по 1 мг 1 раз в сутки (на ночь, длительно) назначали после курса антигистаминных препаратов; витамины или витаминоподобные препараты: провитамин А - веторон-Т - ежедневно по одной таблетке после еды или веторон - Е по 5-11 капель 1 раз в сутки во время еды в течение месяца.
Пациентам основной подгруппы дополнительно назначали сублингвальные таблетки иммуномодулятора галавит. Местное лечение (препарат выбора): Солкосерил - (гель или дентальная адгезивная паста) для стимуляции регенерации в аппликациях по 15-20 минут 3 раза в день после еды; Актовегин - гель для аппликаций. Пациентам основной подгруппы дополнительно назначали гель с галавитом. Всем пациентам с красным плоским лишаем назначалась следующая схема лечения: Общее лечение: антигистаминные средства (препарат выбора)- кларитин по 10 мг 1 раз в сутки в течение 10 дней;
Результаты обследования практически здоровых добровольцев.
Генетически детерминированная реактивность организма может оцениваться через показатели иммунной защиты в смешанной слюне.
Для оценки показателей местного иммунитета полости рта, как в норме, так и в качестве критериев эффективности лечения заболеваний слизистой оболочки рта галавитом по сравнению с традиционным способом лечения, изучали динамику изменения содержания в смешанной слюне таких показателей местной иммунной защиты как - секреторный иммуноглобулин А, общий белок, интерлейкины- IL- ip,IL-4.
Лабораторные исследования проводили в институте диагностики и профилактики социально-значимых заболеваний - ООО «Прогрессивные Био-Медицинские Технологии»
Смешанную слюну собирали натощак после ополаскивания полости рта водой без стимуляции путем сплевывания в градуированную пробирку объемом 2 мл, в течение 6 минут, которую затем хранили при t: - 20С до момента проведения анализа.
Смешанную слюну собирали до лечения, через 5 или 10 дней интенсивного приема препарата галавит и через месяц от начала наблюдения, т.е. в конце лечебного курса. Аналогичные исследования проводились в контрольных подгруппах больных с эрозивно-язвенными изменениями на слизистой оболочке рта, получавших традиционное местное лечение. У здоровых добровольцев, составивших группу «чистого контроля», так же собирали смешанную слюну, соблюдая единую методику. Заборы слюны проводили 3-х кратно в течение месяца, с интервалом в 10 - 20 дней.
Все пробирки со смешанной слюной были закодированы и в таком виде направлялись в лабораторию. Перед анализом слюну размораживали и центрифугировали при 3000 об/мин.
В супернатанте определяли: - содержание slgA с помощью набора реагентов для одностадийного количественного иммуноферментного определения. slgA в секретах человека, производимого 000 «Прогрессивные Био-Медицинские Технологии», Москва;.
Определение содержания секреторного иммуноглобулина А в смешанной слюне основано на принципе одностадийного иммуноферментного "сэндвич" анализа:: slgA, содержащийся; в исследуемом образце,: специфически, связывается с сорбированными; на- твердой фазе (лунки полистироловых планшетов) моноклональными антителами к slgA и одновременно с другими моноклональными антителами: к slgA, конъюгированными с пероксидазой; После отмывки от не связавшихся компонентов проводилась, ферментативная- реакция для? определения активности пероксидазы, сорбировавшейся в;результате на лунках планшета., Результат, оценивали фотометрически- при длине волны 450 нм.; Интенсивность окраски прямо: пропорциональна; концентрации slgA в-анализируемом образце: Концентрацию- slgA в исследуемых образцах определяли по калибровочному графику зависимости оптической плотности от содержания slgA в калибровочных пробах.
- содержание белка по методу Бредфорда с использованием; набора реагентов фирмы Sigma (США - Bradford reagent кат. № В6916);
Определение белка в. ротовой жидкости проводили по методу Брэдфорда, основанного на построении калибровочной кривой зависимости оптической; плотности от концентрации белка. (Bradford М.М., 1976). Для этого был приготовлен раствор БСА (бычий сывороточный, альбумин) в воде с концентрациями 0Ц; 0-2; 0;3;: 0;4; 0;5 ш 0;6 мг/мл; В-пробирки с оптическим путем 1 см наливалиг по 1 мл реактива- Брэдфорда w добавляли по 20 мкл растворов БСА..Измеряли оптическую плотность при длине волны 595 нм на фотометре Statfax фирмы Awareness Technology Inc . Далее измеряли концентрацию белка в пробах слюны. Образцы слюны готовились с соответствии с инструкцией к набору Секреторный IgA-ИФА.
- содержание ИЛ-ip и ИЛ-4 с помощью наборов реагентов для количественного иммуноферментного анализа ProCon-IL 1 beta и ProCon IL 4 фирмы «Протеиновый контур», С.-Петербург.
Для измерения уровня интерлейкинов в пг/мл ИЛ-4 и ИЛ —ip использовали твердофазный иммуноферментный метод с применением пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Один тип антител иммобилизировали на внутренних поверхностях ячеек планшетов для микротитрования. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитопу молекулы цитокина (ИЛ-4 или ИЛ -IP) находился в наборе реагентов в виде коньюганта с биотином. Индикаторным компонентом являлся коньюгант пероксидазы хрена со стрептавидином, имеющим, очень высокое сродство к биотину. После инкубации и промывок в ячейки вносили коньюгант пероксидазы со стрептавидином, вновь инкубировали, промывали, вносили субстрат и измеряли активность связанной пероксидазы с использованием автоматического фотометра для микропланшетов.
Обсуждение результатов клинических исследований
Приведенные данные свидетельствуют, что после лечения пациентов сублингвальными таблетками галавит (основная подгруппа) все изучаемые параметры статистически значимо приблизились к показателям у здоровых людей (различия не достоверны), тогда как в контрольной подгруппе после традиционного лечения достигнутые показатели секреторного иммуноглобулина и общего белка статистически не отличались от показателей у здоровых людей. Но показатели интерлейкина - 4 и - ip сохранились на достоверно более высоком уровне, чем у здоровых добровольцев.
Таким образом, анализ иммунологических показателей, смешанной ( слюны у пациентов с ХРАС свидетельствует об изменениях, которые претерпевает организм в процессе проводимого лечения, как под влиянием курса сублингвальных таблеток галавита, так и при традиционном лечении. Однако изменения в содержании исследуемых \ иммунологических параметров, которые зафиксированы, в процессе j лечения, галавитом, носили выраженный; достоверный; характера пршэтом; снизились показатели секреторного иммуноглобулина, в; 1,75; раза;, интелейкина -4 в 2,3 раза, интерлейкина - 1р%- в 3,7 раза; и статистически не отличались от показателей; у здоровых людей: Сопоставляя эти-данные с клиническими результатами,, которые характеризовались эпителизацией. афтозных элементов? и; стойкош ремиссией; заболевания; в течении; 1, 5 лет у 86 7% больных, можно; утверждать о положительном влиянии, галавитана иммунологическийстатус пациентовс ХРАЄ.
Результаты иммунологических исследований; пациентов 2-ой группы; (эрозивно-язвенная форма красного плоского лишая) сравнивали между основной; и контрольной;- подгруппами ;(табл.24).
В процессе лечения больных 2-ой? группы (КИЛ) сублингвальными таблетками; галавит (основная? подгруппа); наблюдалось; статистически достоверное снижение показателей; секреторного; иммуноглобулина A? w интерлейкин-4, которое было зафиксировано уже на; этапе лечениям Так,, через 5-10 дней от начала курса- галавита; было зарегистрировано достоверное; снижение в, показателях, секреторного.; иммуноглобулина As на:, 64,5% (р 0,001), и IE-4 - на 28,5% (р 0 05).
Дальнейшее лечение- таблетками; галавита- способствовало достоверному снижению;- показателя; IL-4 на 68% ІЕ-ір на 40;8%,. зафиксированноекконцу лечебного курса:(рис.50-53).
Показатели общего? белка; в? процессе: лечения галавитом имели-тенденцию снижению; ( на 17,9% - р- 0;05) Несмотря; на? достоверное снижение показателя секреторного иммуноглобулина в процессе лечения: галавитом в основной; подгруппе, при: анализе значений данного показателя; у каждого пациента; былш установлены индивидуальные колебания в уровне иммуноглобулина.
Снижение уровня секреторного иммуноглобулина А, было более выражено у лиц» с его? исходными высокими цифрами-. Тогда как; у других; пациентов отмечалось некоторое: повышение данного показателя к концу лечения. Аналогичные индивидуальные колебания при лечении галавитом. были выявлены, в показателях интерлейкинов;. (приложение 2). У пациентов: контрольной подгруппы; при традиционном-лечении отмечено; достоверное: снижение секреторного иммуноглобулина А на 24,76% (р 0;05);тенденция; к снижению. Ш-4 (на 11,0% - р: 0;05)s и; достоверное увеличение.показателейТЕ-іріна: 37,57% (р 0;001);.
Колебания в показателях общего белка у пациентов; с красным-плоским лишаем в основной и контрольной подгруппах не носили достоверного характера.
