Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Некоторые особенности эмбриогенеза ворсинчатого хориона 13
1.1. Формирование и развитие ворсинчатого хориона в первой половине беременности 13
1.2. Строение ворсинчатого хориона во второй половине беременности 16
1.3. Плацентарный рост и функциональная активность плаценты в конце беременности 17
1.4. «Старение» плаценты 19
Глава 2. Эндокринная функция плаценты 24
2.1. Плацента как железа внутренней секреции 24
2.2. Синтез и секреция «классических» гормонов плаценты 26
2.2.1. Хорионический гонадотропин человека 26
2.2.2. Кортикотропный рилизинг-фактор 27
2.2.3. Стероидные гормоны: прогестерон и эстрогены 28
2.2.3.1. Прогестерон 29
2.2.3.2. Эстрогены 30
2.2.4. Плацентарный лактоген 32
2.2.5. Пролактин 33
2.3. Синтез и секреция некоторых биологически активных сигнальных молекул плаценты 38
2.3.1. Плацентарный лептин 38
2.3.2. Факторы роста 39
2.3.2.1. Эпидермальный фактор роста 40
2.3.2.2. Инсулиноподобный фактор роста 40
2.3.2.3. Активины и ингибины 42
2.3.3. Некоторые вазоактивные пептиды плаценты 43
2.3.3.1. Эндотелины 44
2.3.3.2 Система ренин-ангиотензин 45
2.3.3.2.1. Ренин 46
2.3.3.2.2. Ангиотензины 47
2.3.3.3. ИО-синтаза 48
2.3.4. Мелатонин 51
2.3.5. Маркеры апоптоза в плаценте 54
2.3.5.1. Белок р53 55
2.3.5.2. Семейство Вс1-2 56
2.4. Плацента как иммунокомпетентный орган 56
2.4.1. Иммунокомпетентные клетки плаценты 57
2.4.2. Иммуномаскирующие факторы плаценты 58
2.4.3. Особенности экспрессии молекул главного
комплекса гистосовместимости в плаценте 59
2.5. Влияние различных факторов на гормональный статус плаценты 61
2.5.1. Гормоны и биологически активные вещества как маркеры различных патологических состояний беременности 61
2.5.1.1. Хорионический гонадотропин человека 61
2.5.1.2. Кортикостероидный рилизинг-фактор 62
2.5.1.3. Прогестерон 62
2.5.1.4. Эстрогены 63
2.5.1.5. Плацентарный лактоген 63
2.5.1.6. Пролактин 64
2.5.1.7. Плацентарный лептин 64
2.5.1.8. Факторы роста 65
2.5.1.9. Вазоактивные пептиды 65
2.5.1.10. ГГО-синтаза 66
2.5.1.11. Мелатонин 66
2.5.1.12. Маркеры апоптоза 66
2.5.2. Влияние различных факторов на морфофункциональный статус плаценты 67
2.5.3. Влияние возраста беременной женщины на
функциональную морфологию плаценты 69
Результаты собственных исследований 71
Глава 3. Материал и методы исследования 71
3.1. Исследуемый материал 71
3.2. Методы исследования 72
3.2.1. Гистологические методы 72
3.2.2. Иммуногистохимические методы 73
3.2.3. Морфометрические методы и компьютерный анализ микроскопических изображений 77
3.2.4. Статистическая обработка результатов 78
Глава 4. Иммуногистохимическое исследование доношенных плацент 79
4.1. Экспрессия гормонов - мелатонина и пролактина в клетках ворсинчатого хориона у женщин разного возраста 80
4.2. Экспрессия эндотелиального маркера СЭ34 в клетках ворсинчатого хориона у женщин разного возраста 83
4.3. Экспрессия эндотелиальной Ж синтазы в клетках ворсинчатого хориона у женщин разного возраста 86
4.4. Экспрессия НЬА-ЭК и СЭ35 в клетках ворсинчатого хориона у женщин разного возраста 88
4.5. Экспрессия маркеров Мс1-1 и р53 в клетках ворсинчатого хориона у женщин разного возраста 92
Глава 5. Анализ морфо-функционального состояния доношенных плацент 96
Глава 6. Иммуногистохимическое исследование «старения» плаценты 102
обсуждение результатов 104
Глава 7. Сигнальные молекулы как маркеры зрелости и старения плаценты у женщин разного возраста 104
7.1. Особенности синтеза и секреции гормонов плодовой части
плаценты 104
7.2. Влияние возраста беременной на структурнофункциональные особенности плаценты 106
7.3. Изучение феномена «старения» плаценты 116
Заключение 120
Выводы 121
Указатель литературы 123 список сокращений:
- Плацентарный рост и функциональная активность плаценты в конце беременности
- Кортикотропный рилизинг-фактор
- Иммуногистохимические методы
- Экспрессия маркеров Мс1-1 и р53 в клетках ворсинчатого хориона у женщин разного возраста
Введение к работе
Актуальность темы
Результаты многолетних исследований показали, что здоровье новорожденного ребенка в значительной степени определяется течением антенатального периода. Нарушение функций плаценты — одна из основных причин перинатальной заболеваемости и смертности [Савельева и др., 1991]. Еще в середине XX века известный классик отечественной плацентологии А.И. Брусиловский писал: «...мы постепенно приближаемся к прочтению плаценты как визитной карточки плода...».
Важнейшей функцией плаценты является синтез и секреция широкого спектра биологически активных веществ. Многочисленные плацентарные пептиды (их верифицировано уже более 100) выполняют роль гормонов, ферментов, проферментов, ингибиторов, рецепторов, факторов роста, иммунорегуляторных агентов, транспортных и связывающих белков. Уникальность этого органа в плане механизмов интеграции выполняемых функций и присутствие в нем основных регуляторных нейропептидов позволют считать плаценту- одним из важных отделов диффузной нейроэндокринной системы, впервые описанной Pearse в конце 60-х годов XX века [Pearse, 1977].
Из плацентарных компонентов объектом нашего исследования был выбран ворсинчатый хорион, так как в силу особенностей строения он играет наиболее важную роль в осуществлении обменных процессов между кровью матери и плода. В настоящее время убедительно доказано, что наиболее активной тканью плаценты в метаболическом и функциональном плане является эпителий ворсинчатого хориона.
Широкие возможности в изучении гормонального статуса плаценты связаны с появлением ряда методов, позволяющих изучить не только особенности гистологического строения и состояния обменных процессов, но
SbfjZ&K 3
и количественно оценить функциональное состояние различных структурных компонентов плаценты.
Расширению знаний способствует бурное развитие молекулярной микроскопии с помощью иммуноморфологических реакций на срезах на тканевом, клеточном и ультраструктурном уровнях исследования, позволяющих визуализировать макромолекулы гормонов, отдельных ферментов, рецепторов, коллагенов различных типов и т.п. Среди иммуногистохимических методов, широко применяемых как в клинической практике, так и в научно-исследовательской работе, одним из наиболее перспективных и высокочувствительных является авидин (или стрептавидин)-биотиновый (ABC) иммунопероксидазный метод.
В этой связи изучение гормональной активности плаценты с применением данного иммуногистохимического метода является актуальной и необходимой научно-практической задачей.
Анализ совремешюй литературы показал, что большинство авторов изучало развитие адаптационных механизмов при патологическом состоянии плаценты. Вместе с тем, необходимо отметить недостаточное внимание к вопросам развития компенсаторно-приспособительных реакций, степени их мобилизации в плацентах у женщин с нормальной физиологической беременностью в зависимости от их возраста. Имеются сведения, касающиеся степени структурных и функциональных сдвигов в плацентах у женщин различного возраста с нормальной физиологической беременностью, тогда как исследование нормальной плаценты ограничивалось лишь констатацией процессов, свидетельствующих о функциональном старении органа. Между тем от степени выраженности этих изменений зависит выключение больших или меньших участков из обменной поверхности плацентарной ткани.
Вышеизложенные обстоятельства, а также отсутствие подобных работ свидетельствуют об актуальности и необходимости проведения специального
исследования экспрессии гормонов и биологически активных веществ в ворсинчатом хорионе у беременных разного возраста.
Плацента уникальна и как объект для геронтологических исследований, поскольку ее онтогенез четко очерчен по времени гестации, а плацентарная ткань удобна для поиска четких, согласованных критериев старения на органном, тканевом, клеточном и субклеточном уровнях. Следует отметить, что в настоящее время убедительные морфологические доказательства истинного старения плаценты отсутствуют и вопрос «старения» плаценты остается дискуссионным. В литературе нами не найдено работ, касающихся изучения гормональной функции плаценты в связи со старением этого органа.
В основу клинической концепции «старения» плаценты положены исследования переношенной беременности. В этой связи исследование экспрессии гормонов при доношенной и переношешюй беременности также представляется актуальной темой для исследования.
Цель и задачи исследования
Целью диссертационного исследования является сравнительный анализ экспрессии гормонов и сигнальных молекул в ворсинчатом хорионе зрелой плаценты у беременных разного возраста, а также при доношенной - и переношенной беременности для оценки феномена «старения» плаценты.
Для достижения указанной цели были поставлены и последовательно решены следующие задачи:
Определить влияние возрастного фактора на качественные и количественные параметры экспрессии гормонов - пролактина и мелатонина.
Выявить особенности васкуляризации ворсинчатого хориона у женщин различных возрастных групп с помощью иммуногистохимического маркера эндотелиальных клеток CD34.
Определить качественные и количественные параметры экспрессии фермента NO-синтазы в ворсинчатом хорионе как главного плацентарного вазодилататора у женщин различных возрастных групп.
Выявить особенности экспрессии маркеров HLA-DR и CD35 как маркеров иммунного статуса плаценты в ворсинах хориона у женщин разного возраста.
Оценить влияние фактора возраста беременной на пролиферативную активность клеток плодовой части плаценты с помощью апоптозного (р53) и антиапоптозного (Мс1-1) маркеров.
Провести сравнительный анализ экспрессии гормонов и биологически активных веществ при доношенной и переношенной беременности у женщин нормального репродуктивного возраста для выяснения вопроса о возможном «старении» плаценты.
Научная новизна работы
Впервые проведен сравнительный анализ экспрессии гормонов пролактииа и мелатоиина, а также маркеров CD34, NO-синтазы, HLA-DR, CD35, р53, Мс1-1 в ворсинчатом хорионе зрелой плаценты у беременных разного возраста. Установлено влияние возраста беременной женщины на экспрессию всех исследуемых гормонов в ворсинчатом хорионе. Впервые выявлено снижение степени экспрессии пролактина, мелатонина, CD34, NO-синтазы, р53, Мс1-1 клетками плодовой части плаценты в связи с увеличением возраста беременной женщины. Обнаружены отличия в степени экспрессии антиген-презентирующих молекул CD35 и HLA-DR в плаценте у женщин разного возраста. Установлено снижение пролиферативной активности ворсинчатого хориона с увеличением возраста беременной женщины. На основании количественного и качественного анализа экспрессии гормонов пролактина, мелатонина, CD34, NO-синтазы, CD35, р53 и Мс1-1 не выявлено отличий в степени экспрессии этих гормонов в
ворсинчатом хорионе при доношенной и переношенной беременности, что свидетельствует о функциональной зрелости, а не «старении» плаценты.
Практическая значимость работы
Полученные результаты позволяют расширить представления о морфо-функциональных изменениях плаценты в связи с возрастом беременной, что следует учитывать в акушерско-гинекологической практике для повышения эффективности терапевтических мероприятий. Отсутствие различий в характере экспрессии гормонов при доношенной и переношенной беременности является убедительным контраргументом теории «старения» плаценты.
Положения, выносимые на защиту
Экспрессия пролактина, мелатонина, CD34, NO-синтазы, р53, Мс1-1 в клетках ворсинчатого хориона прогрессивно уменьшается в связи с увеличением возраста беременной женщины.
Пролиферативная активность ворсинчатого хориона с увеличением возраста матери прогрессивно снижается.
Достоверные отличия в концентрации и характере экспрессии пролактина, мелатонина, CD34, NO-синтазы, CD35, р53 и Мс1-1 в ворсинчатом хорионе при доношенной и переношенной беременности отсутствуют, что свидетельствует о несостоятельности теории «старения» плаценты.
Связь с научно-исследовательской работой Института
Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.
Структура и объем диссертации
Плацентарный рост и функциональная активность плаценты в конце беременности
Еще в середине прошлого века были предприняты попытки выяснить происхождение различных структур плаценты; в 60 - 70 -х гг. XIX века эта задача была решена П.А. Ленинским и Т. Лангтансом, которые установили фетальное происхождение эпителиального покрова хориона (Колесников, 1973; Кащенко, 1884).
Отличительной особенностью эмбриогенеза плацентарных млекопитающих, в том числе и человека, является раннее возникновение и быстрое развитие трофобласта (Цирельников, 1980).
Уже на первых этапах дробления зиготы и далее, на стадии морулы, обособляются и различимы два типа клеток: поверхностно расположенные, образующие трофобласт, и внутренние, более темные клетки, формирующие собственно эмбриобласт. Трофобласт еще неимплантированного зародыша, представляющий собой зачатковый материал хориального эпителия, в той или иной степени выполняет трофическую функцию (Федорова, Калашникова, 1986). Имплантация же является тем рубежом, с которого начинается превращение зачаткового трофобласта в хориальный эпителий, который вместе с внезародышевой мезенхимой формируют ворсинчатый хорион (Цирельников, 1980).
На 6-7 сутки развития зародыша начинается процесс имплантации, в котором трофобласт, внедряясь в слизистую матки, играет ведущую роль. С помощью выделяемых гистолитических ферментов трофобласт разрушает ткани слизистой оболочки матки на небольшом прилегающем участке, при этом исчезают не только эпителий и соединительная ткань матки, но и стенки сосудов и, таким образом зародыш оказывается окруженным материнской кровью (Кнорре, 1959; Зыбина, 1986). Причем прикрепление и инвазия яйца происходят только в той области, где в основании эпителия матки проходит крупный кровеносный сосуд, т.е. выбор места имплантации обусловлен созданием наиболее благоприятных условий микроокружения и переноса химических веществ, особенно удаления углекислоты (Цирельников, 1980).
Начиная с 9-10 дня развития размножение трофобласта становится настолько интенсивным, что новая генерация митотически делящихся клеток ЦТБ вытесняет имплантационный «плазмодий» и формирует собственно синцитиальный слой (Субботин и др., 1971; Новиков, 1971). В трофобласте появляются мелкие полости (лакуны), в которые вследствие эрозии мелких сосудов и капилляров поступает кровь матери. Тяжи и перегородки трофобласта, разделяющие лакуны, называют первичными ворсинами. С их появлением бластоцисту именуют плодным пузырем (Савельева и др., 1991).
К концу второй недели беременности (12 - 13 день развития) со стороны хориона в первичные ворсины врастает соединительная ткань, в результате чего образуются вторичные ворсины. Основу этих ворсин составляет соединительная ткань, а наружный покров образован трофобластом (Федорова, Калашникова, 1986).
С 3-й недели развития зародыша начинается период плацентации, который характеризуется васкуляризацией ворсин и превращением вторичных ворсин в третичные, содержащие сосуды. Процессу васкуляризации ворсин сопутствует снижение темпов роста и дифференцировки эпителия хориона (Савельева и др., 1991). В раннем ангиогенезе выделяют два основных процесса: 1) дифференциация ангиобластов из трофобласта; 2) соединение ангиобластов в плотные тяжи и в сосудистую сеть. В дальнейшем происходит врастание ангиобластических компонентов в первичные ворсины и их разветвления (Говорка, 1970). С 14го по 20-й день наблюдается интенсивная пролиферация трофобласта, в результате которой окончательно устанавливается циркуляция крови во вновь образованных лакунарных полостях, составляющих в совокупности межворсинчатое пространство (Милованов, Курик, 1990).
Васкуляризация ворсин и превращение вторичных ворсин в третичные не происходит одновременно и равномерно по всей поверхности хориона (Брусиловский, 1976). Третичные ворсины становятся толще, в них четко выявляется два слоя эпителия. Соединительнотканная строма ворсин представлена бесцветной массой с равномерной сетью нежных коллагеновых волокон и двумя типами клеток. Среди клеточных элементов крупных ворсин преобладают фиброциты, в средних и мелких ворсинах — гистиоциты. Количество клеток Кащенко-Гофбауера (плацентарных макрофагов) достаточно велико, но они имеют небольшие размеры и неправильную форму. К строме ворсин примыкает базальная мембрана трофобласта (Федорова, Калашникова, 1986). Кровеносные капилляры, уже образующиеся во многих ворсинках, обычно проходят сразу же под эпителием (Милованов, 1999).
При соединении ветвей сосудов пуповины с местной сетью кровообращения устанавливается циркуляция эмбриональной крови в третичных ворсинах, что совпадает с началом сердечных сокращений зародыша (21 день развития). Формирование плодово-плацентарного кровообращения является важным этапом морфогенеза плаценты. Вскрытие спиральных артерий матки вследствии врастания ЦТБ в стенку сосудов децидуальной оболочки обычно происходит в конце 6-й недели беременности и обусловливает возникновение маточно-плацентарного кровообращения (Говорка, 1970; Цирельников, 1980; Федорова, Калашникова, 1986).
Таким образом, в середине первого триместра антенатального развития трофобласт с его ворсинками и внезародышевой мезенхимой формируют хорион, представляющий собой высокоспециализированный, мощно развитый орган. Поверхность хориона, обращенная в сторону полости матки, теряет ворсинки, формируя таким образом гладкий хорион. Дифференцировка хориона на гладкий и ветвистый происходит в течение первого триместра и связана с различными условиями кровоснабжения (Милованов, Курик, 1990).
Кортикотропный рилизинг-фактор
Инсулиноподобные факторы роста — IGF I и IGF II - сывороточные факторы, относящиеся к семейству инсулина. Они представляют собой одноцепочечные полипептиды, обладающие гомологией до 65 % (Пальцев, Иванов, 1995). IGF выделен из экстрактов плацентарной ткани; он синтезируется в плаценте и маточно-плацентарной области, а также обнаруживается практически во всех развивающихся тканях плода.
IGF-I описан как один из первых регуляторов постнатального развития. Функции IGF-II не очень ясны, но показано его участие в росте и развитии эмбриона и плаценты. Инсулиноподобные факторы роста синтезируются клетками многих тканей и действуют через аутокринные/паракринные механизмы. Циркулирующие инсулиноподобные факторы роста могут также оказывать и эндокринное действие (Пальцев, Иванов, 1995).
При иммуноморфологическом исследовании сильное иммунопозитивное окрашивание на IGF обнаружено в цитоплазме СТБ, в строме и экстрацеллюлярном матриксе, а также в клетках Кащенко- Гофбауэра ворсин; в плодных оболочках наиболее сильная иммунопозитивная реакция на оба белка получена в децидуальных клетках, а чуть слабее - в фибробластах (Hill et al., 1993 цит по Милованов, 1999). По данным Matata (1994) на 4-5 неделе развития IGF-I и его рецептор локализуются исключительно в ЦТБ, повышая пролиферативную активность последнего. На 6-12 неделе беременности IGF-I и его рецептор обнаруживаются как в СТБ, так и в ЦТБ, при этом данный фактор стимулирует секрецию ХГЧ и ПЛ .
Помимо регуляторной функции в эпителии ворсинчатого хориона, IGF действует как метаболический активатор аминокислотного транспорта в плаценте, является митогеном для стромальных фибробластов, стимулятором синтеза предшественников стероидов и, возможно, прогестерона, ростового фактора для развивающихся тканей эмбриона и плода (Милованов, 1999).
Предполагается, что IGF-I является первичным гормоном, влияющим на рост плода на поздних сроках беременности, а также он имеет важное значение для роста плаценты и плода (Hill et al., 1998). Делеция гена-мишени IGF-I у мышей потомков гомозигот приводит к отклонению веса от нормального на 60% (Liu et al., 1993). В течение беременности концентрация IGF-I увеличивается параллельно увеличению размеров плода (Bocconi et al., 1998).
Активины и ингибины - димерные гликопротеины, принадлежат к суперсемейству трансформирующего фактора роста р (TGF-P) (Pezzani et al., 2000). Первоначально были описаны как гликопротеины гонад, оказывающие стимулирующий эффект на продукцию ФСГ в гипофизе. В настоящее время убедительно доказано, что активины являются важными регуляторными факторами во многих репродуктивных процессах. Вместе с сигнальными молекулами активины могут синтезироваться локально в разных тканях, оказывая на эту ткань аутокринное или паракринное воздействие. Открытие рецепторов активина, внутриклеточных сигнальных медиаторов и транскрипционных факторов, вовлеченных в систему ответа активина, помогают понять особенности функционирования сигнальных механизмов системы активин - трансформирующий фактор р (Ether, Findlay, 2001).
Активины были открыты в 1986 году; с тех пор проведено множество исследований, доказывающих их регуляторное действие на репродуктивную систему высших позвоночных. Биологически активная форма активина состоит из двух р-субъединиц, соединенных ковалентными мостиками. При гетеродимеризации этих субъединиц вместе с а-субъединицей формируется антогонист активина - ингибин (Ether, Findlay, 2001).
В многочисленных экспериментах было показано, что активин А оказывает прямое воздействие на синтез различных овариальных гормонов (LaPolt et al., 1989), модулирует стероидогенез (Shukovski, Findlay, 1990).
Основным источником синтеза активинов и ингибинов у небеременных женщин является яичник, с наступлением беременности эту функцию берет на себя плацента. Плацента, децидуальная оболочка и плодные оболочки служат источником секреции активина А, ингибина А и ингибина В в материнскую кровь, амниотическую жидкость и пуповинную вену (Florio et al., 2001). На ранних стадиях беременности активины экспрессируются в эндометрии (Jones, Salamonsen, 2000). В течение беременности активин В обычно отсутствует в материнском кровотоке, а концентрация активина А в кровотоке увеличивается в 10 раз, по сравнению с концентрацией при менструальном цикле. При этом концентрация активина А в сыворотке крови значительно выше у самостоятельно рожавших женщин, чем у женщин, подвергнутых операции кесарева сечения (Petraglia et al., 1994). Такое увеличение концентрации активина А, возможно, является следствием его синтеза в большей степени децидуальной оболочкой и плацентой, чем яичником (Otani et al., 1998).
Клетки трофобласта зрелой плаценты секретируют ингибин и активин в первичных культурах тканей. Рецепторы к активину были также найдены в тканях плаценты (Pezzani, 2000).
Иммуногистохимические методы
Ворсинчатый хорион чутко реагирует на многие вредные привычки матери, в частности, на курение и употребление алкоголя (Asmussen, 1980). При курении матерью более 10 сигарет в день отмечено утолщение и базального слоя капилляров и хориального эпителия, сужение плодных капилляров, коллагенизация стромы мелких ворсин. Подобные находки встречаются и в плацентах некурящих матерей, мужья которых активно курили. При употреблении матерью алкоголя отмечается выраженный эндартериит в составе опорных ворсин, увеличение количества коллагеновых волокон, фибробластов и перицитов в строме мелких ворсин (Amonkwah et al., 1981).
Прямая причинная связь описанных выше изменений плаценты с воздействием алкоголя показана и в эксперименте. При введении ацетальдегида внутрибрюшинно беременным крысам на 10-й, 11-й и 12-й день беременности (от 50 до 100 мг/кг) у плодов, извлекаемых на 21-й день беременности, обнаружены признаки, которые бывают при эмбриональном алкогольном синдроме - макроцефалия, микрогнатия, микромиелия, аномалии пальцев, гидроцефалия (Skreenathan, Shamer, 1984). В плацентах выявлены утолщенный плацентарный барьер, периваскулярный фиброз и нарушенная лабиринтная архитектура, на основании чего авторы делают вывод о вовлечении плаценты в патогенез алкогольного синдрома плода.
Такие факторы окружающей среды, как загрязнение атмосферы, влияют на функциональную систему «мать - плацента — плод», вызывая определенные структурные изменения ворсинчатого дерева.) В плацентах у женщин, проживающих в городе с повышенным уровнем атмосферных загрязнений, уменьшается площадь эпителиального покрова концевых ворсин, а площадь стромы ворсин - увеличивается по сравнению с плацентами контрольной группы (Федорова, Калашникова, 1986).
В число предполагаемых природных факторов, оказывающих влияние на плаценту посредством изменения параметров гомеостаза матери вошли следующие экзогенные причины: снижение парциального давления атмосферного кислорода, низкие и высокие температуры, дефицит или избыток микроэлементов и разнообразные факторы экзогенной природы, влияющие через саногенез матери (Милованов, Рыбалкина, 1987).
Описаны некоторые особенности строения плацент при неосложненной беременности у женщин коренных народностей Севера (ханты, манси). По сравнению с контрольной московской группой в плацентах у этих женщин больший удельный вес занимал ворсинчатый хорион за счет уменьшения объема хориальной и базальной пластинок и межворсинчатого пространства; у них достоверно уменьшались признаки патологических изменений (афункциоанальные зоны, кальцификаты); на 164% возрастал объем сосудистого русла и СТБ ворсин, а также элементов периферического трофобласта, что свидетельствовало об интенсивной эндокринной функции плаценты.
В условиях средне- и высокогорья (Цинзерлинг, Мельникова, 1988) при наличии относительного снижения массы новорожденных у постоянных жительниц-киргизок выявлены достоверное увеличение объема хориального эпителия, уменьшение объема стромы и тенденция к приросту емкости сосудов ворсин. На высотах порядка 3000 м над уровнем моря ярче проявлялись компенсаторные реакции в виде увеличения количества терминальных специализированных ворсинок и, наоборот, уменьшения объема патологических проявлений, что подтверждало высокую функциональную активность «высокогорных» плацент в конце беременности.
Плацента представляет собой весьма вариабельный по массе и гистологическому строению орган; в котором проявляются структурнофункциональные особенности, связанные с возрастом первородящих женщин. В литературе данные о влиянии возраста беременной немногочисленны и касаются в основном структурных особенностей плаценты.
Степень выраженности и распространенности морфо-функциональных, изменений в плаценте зависит от возраста женщины и кратности беременностей. С увеличением возраста и кратности беременности возрастают дегенеративно-дистрофические процессы и циркуляторные нарушения. Вес плаценты увеличивается параллельно повышению возраста беременной женщины до 30 лет, после 30 лет обнаружен относительный спад в весе плаценты. Чем старше возраст беременной, тем выше степень повреждения плаценты (Багдасарян, 1982).
По данным А.П. Шорлуян (1984), у первородящих в возрасте от 15 до 18 лет в плаценте отмечены более выраженные дистрофические и некротические изменения в децидуальной ткани, но при наличии множества мелких ворсин, превышающих на 6 - 10% число таковых у первородящих 20 - 24 лет. У юных рожениц оказалось меньше ворсин, окруженных фибриноидом и с коллагенизированной стромой.
Еще более выраженные патологические сдвиги выявляются в плацентах пожилых (от 35 до 45 лет) первородящих. В них был истончен хориальный эпителий опорных ворсин, отмечается обилие фибриноида в местах дефектов СТБ, выраженная дезорганизация соединительной ткани, вплоть до фибриноидного некроза стромы промежуточных и терминальных ворсин, утолщение базальной мембрана СТБ, что отражает несомненное снижение функции плаценты, особенно у матерей старше 40 лет (Степанов и ДР-, 1991).
Экспрессия маркеров Мс1-1 и р53 в клетках ворсинчатого хориона у женщин разного возраста
На всех иммуногистохимических препаратах была отмечена выраженная экспрессия исследуемых маркеров: мелатонина, пролактина, СЭ34, ИО-синтазы, НЬА-ЭЛ, СИЗ5, Мс1-1, р53. Характер экспрессии и распределение иммунопозитивных клеток в ворсинах хориона представлены в таблице 2.
Экспрессия мелатонина в ворсинах хориона. Метод АВС. х4 Площадь экспрессии мелатонина в 1, 3, 4 и 5 группах была достоверно меньше, чем в группе 2 ± группе сравнения (р 0,05). Так, у юных рожениц величина площади экспрессии мелатонина составила 0,39±0,01%, что в 17,7 раза меньше, чем в группе 2. У женщин 29-35-летнего возраста площадь экспрессии мелатонина почти в 2 раза меньше (3,78±0,04), чем у женщин нормального репродуктивного возраста (6,89±0,02). С увеличением возраста площадь экспрессии мелатонина уменьшается (рис. 2). Между возрастом матери и значениями площади экспрессии мелатонина выявлена положительная корреляция (к=0,06).
Оптическая плотность мелатонина достигает максимального значения во 2-ой группе (0,34±0,01 у.е.), у женщин старше 36 лет (4 и 5 группа) наблюдается достоверное снижение этого показателя (р 0,05). Площадь экспрессии в 1, 2, 3 и 4 группах достоверно не отличается; достоверно меньшая величина площади экспрессии наблюдалась в плацентах у женщин старше 40 лет (р 0,05) (рис. 4). Оптическая плотность экспрессии пролактина в плаценте у женщин старше 29 лет достоверно уменьшается (р 0,05) (рис. 5), что свидетельствует о сокращении числа иммунопозитивных клеток к пролактину.
Оптическая плотность экспрессии пролактина в плацентах беременных различных возрастных групп.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о снижении гормональной активности в плодовой части плаценты в связи с возрастом беременной.
Эндотелиальный маркер СБ34 экспрессируется в эндотелиальных клетках и клетках-предшественниках эндотелия и поэтому по характеру его экспрессии можно судить о степени васкуляризации ворсин. Известно, что степень васкуляризации ворсин является важным параметром функциональной активности плаценты.
Положительная иммуногистохимическая реакция с антителами к СБ34 наблюдалась на всех препаратах в эндотелии капилляров ворсин хориона (рис. 7).
Степень экспрессии СБ34 у женщин нормального репродуктивного возраста (2 группа) значительно превышает уровень экспрессии этого маркера в остальных возрастных группах, как по площади экспрессии, так и по показателям оптической плотности.
Самая низкая оптическая плотность оказалась в группе юных первородящих и составила 0,22±0,01 у.е., что в 2 раза ниже, чем в группе 2 (0,43±0,02). В плацентах женщин 4 и 5 групп наблюдается достоверное снижение показателей оптической плотности в связи с увеличением возраста женщин (р 0,05). Между показателями оптической плотности и возрастом женщин выявлена корреляционная связь (к=0,23) (рис.8).
Экспрессия СЭ 34 в ворсинах хориона. АВС-метод. х4 Рис. 9 Площадь экспрессии СБ34 в плацентах беременных различных возрастных групп. Полученные результаты свидетельствуют о прямом влиянии возраста матери на степень васкуляризации ворсинчатого хориона. Среди местных плацентарных вазодилататоров наибольшая роль отводится эндотелиальной ЫО-синтазе. Проведенные иммуногистохимические исследования показали, что СТБ, синцитиокапиллярные мембраны, эндотелий капилляров ворсин давали иммунопозитивную реакцию с антителами к эндотелиальной ЫО-синтазе (рис. 10). Особенно сильная экспрессия еТчЮБ наблюдалась в СТБ, что свидетельствует об участии трофобласта в контроле и поддержании низкого сосудистого сопротивления в системе плацентарно-плодового кровообращения.
Экспрессия еЖ)Б в ворсинах хориона. АВС-метод. х400. Наименее выраженная экспрессия этого маркера наблюдалась в плацентах беременных 1 группы; оптическая плотность (0,18±0,02 у.е.); площадь экспрессии (4,56±0,08%) еЖ)Б в этой группе значительно ниже, чем во 2 группе (0,37±0,04 у.е. и 7,4±0,01% соответственно). Оптическая плотность еЫОБ прогрессивно уменьшается с увеличением возраста беременной (у женщин 3, 4 и 5 групп) (р 0,05) (рис. 11). Площадь экспрессии е Ю8 в этих группах также достоверно меньше, чем у женщин нормального репродуктивного возраста (Р 0,05) (рис. 12).
Таким образом, у юных первородящих и у беременных старше 29 лет наблюдается снижение функциональной активности Ю-синтазы в ворсинчатом хорионе. женщин разного возраста
Для оценки состояния иммунной системы плаценты в связи с различным возрастом беременных был выбран маркер фолликулярных дендритных клеток СБ35 и антиген II класса главного комплекса гистосовместимости НЬА-ОЯ. Известно, что антигены II класса МНС играют важную роль в развитии гуморального и клеточного иммунного ответа. Дендритные клетки регулируют иммунологический баланс между тканями матери и плода, однако их функции на сегодняшний день остаются недостаточно изученными. Позитивная иммуногистохимическая реакция на исследуемые маркеры наблюдается на всех препаратах.
Единичные СБЗ 5 -содержащие клетки локализуются преимущественно в строме стволовых и промежуточных ворсин, а также в просветах стромальных каналов (рис. 15). Следует отметить, что в значениях оптической плотности нами не найдено статистически достоверных отличий между группами (рис. 13). Однако, при оценке площади экспрессии данного маркера выявлены достоверные отличия между 4 и 2, а также 5 и 2 группами (р 0,05), причем площадь экспрессии у женщин старше 36 лет в 3 раза больше (0,55±0,02% в 4 группе и 0,56±0,11% в 5 группе), чем у женщин нормального репродуктивного возраста (0,18±0,02%) (рис. 14).
Проведенный анализ показал наличие корреляции между возрастом беременных и значениями площади экспрессии С035 (к=0,37),что указывает на увеличение активности СБЗ 5-презентирующих клеток в связи с возрастом беременной женщины.
![Оценка репродуктивного здоровья на основе изучения качества жизни женщин фертильного возраста [Электронный ресурс]](/i/i/4356/183933.png "Оценка репродуктивного здоровья на основе изучения качества жизни женщин фертильного возраста [Электронный ресурс] Кусмарцева Ольга Федоровна")
