Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Роль суставных структур в жизнедеятельности организма 13
1.2. Экспериментальные модели для изучения функционирования суставов 17
1.3. Особенности морфофункциональных изменений суставов при аутоиммунных процессах 19
1.4. Механизмы действия полиферментов 24
1.5. Механизмы действия хондропротекторов 29
1.6. Механизмы действия антигипоксанта 33
Глава 2. Материалы и методы исследований 36
2.1. Объект исследования 36
2.2. Методы исследования 40
Глава 3. Общие, лабораторные и морфологические признаки формирования адъювантного артрита у крыс серий сравнения (2-я и 3-я серии)
3.1. Местные признаки воспаления 45
3.2. Гематологические биохимические и иммунологические тесты 48
3.3. Морфологические проявления 50
Глава 4. Влияние полиферментного препарата («Вобэнзим»), хондропро-тектора («Дона»), антигипоксанта («Оксибутират натрия») и их сочетан-ного применения на изменения в суставах крыс с адъювантным артритом 57
4.1. Влияние полиферментного препарата (Вобэнзим) на общие, лабораторные и морфологические признаки АдА у крыс 57
4.2. Влияние хондропротектора (дона) на общие, лабораторные и морфологические признаки АдА у крыс 61
4.3. Влияние антигипоксанта (оксибутират натрия) на общие, лабораторные и морфологические признаки АдА у крыс 66
4.4. Влияние сочетанного энтерального применения полиферментного препарата (вобэнзим) и хондропротектора (дона) на общие, лабораторные и морфологические признаки АдА у крыс 69
4.5. Влияние сочетанного энтерального применения полиферментного препарата (вобэнзим) и хондропротектора (дона), а также внутрисуставного введения антигипоксанта (оксибутират натрия) на общие, лабораторные и морфологические признаки АдА у крыс 73
Глава 5 Обсуждение полученных результатов 96
Выводы 115
Список литературы 117
- Роль суставных структур в жизнедеятельности организма
- Экспериментальные модели для изучения функционирования суставов
- Гематологические биохимические и иммунологические тесты
- Влияние полиферментного препарата (Вобэнзим) на общие, лабораторные и морфологические признаки АдА у крыс
Введение к работе
Здоровье граждан Российской Федерации — это важнейшая, область общественного развития; его исходный потенциал, в конечном итоге определяющий качество населения и его трудовых ресурсов, эффективность экономики и обороноспособность страны (Щепин О.П-, 1995, 2001, 2002; Лисицын Ю:П:, 2002; Фетисов Н:Н., 2004; Бабенко А.И., 2004; Рубцов* А.В., 2005)
Затянувшийся социально-экономический кризис в стране и недостаточная- эффективность отечественной, системы* здравоохранения* обусловливают ухудшение здоровья населения, рост его заболеваемости и смертности, особенно среди мужчин трудоспособных возрастов;
Особую значимость этот факт приобретает для- сохранения здоровья подростков и молодежи, которые в условиях общественно-экономических преобразований;, происходящих в стране, смены ценностей, изменений условий? жизни широких масс населения, демонстрируют наибольшую» интенсивность в снижении; показателей здоровья. (Максимова Т.М;, 2002, 2004; ЖуравлеваИ.В:, 2002;ХаджиевР:С,РамазановРіС:, 2004;)
По данным ряда исследований, проведенных; в Российской Федерации за последние 15 лет, общая заболеваемость подростков- и молодежи увеличилась в среднем в 1,7 раза и в 3,5 раза превышает рост заболеваемости взрослого населения; Примерно на: треть-выросла смертность подростков, включая насильственные причины, что отчасти связано с: пребыванием* юношей в возрасте 18-20 лет на военной службе, а при наличии особых условий - и в более поздней, возрастной; группе. (Журавлева И.В:, 2002; Чичерин ЛШ, Лешкевич ИІА., 2004)
В" Российской; Федерации многочисленными' стратегиями, концепциями; планами* социального развития, профилактическими программами: (включая Президентскую программу «Дети России», где отведено значительное место сохранению здоровья подростков) как на федеральном уровне,, так и на территориях предусмотрено и частично
4 осуществляется целый комплекс мероприятий в области охраны здоровья подросткового населения.
При этом следует отметить, что г. Москва и Московская область, как самостоятельные регионы, являются объектом особого внимания, так как здесь сосредоточены не только огромные трудовые, интеллектуальные и финансовые, ресурсы, но и наиболее эффективно проводится в жизнь целый ряд социальных программ,, в том- числе в сфере охраны здоровья детей, подростков и молодежи; опережая другие регионы страны. Достаточно упомянуть разработанный и принятый; 28 января? 2004 года, к действию в городе Москве Закон «О молодежи».
Значимость проблемы здоровья; подростков и молодежи обусловлена особой важностью данного возраста для всей последующей жизни человека, предопределяющим значением этот возрастной группы населения страны в развитиитрудовогои жизненного потенциала.
Следует учесть,, что в плане сбора, статистической информации о
состоянии здоровья мужского населения в возрастном периоде от 17 до 27
лет трудно^ переоценить разработанную систему медицинского
освидетельствования юношей допризывного и; призывного возрастов: на предмет изучениям состояния их здоровья, выявления острой и хронической патологии;постановки.их.на медицинский и воинский учет.
Многоплановая оценка здоровья юношей допризывного и призывного возрастов находится всфере наиболее актуализированных государственных интересов, так как медицинские и. социологические исследования последних лет свидетельствуют о снижении уровня= здоровья молодого пополнения Вооруженных Сил Российской Федерации (Зайцев А.Г., 2004, 2005; Фесенко В.В:, 2004; Марьин F.F., Мельниченко ГЪИ., 2005; Ибрагимова Л.Э., Гладько В;В., Соколова Т.В;, 2005);.
Известно, что медицинские осмотры при освидетельствовании граждан способствуют выявлению целого ряда заболеваний у юношей, что позволяет определить в дальнейшем медицинскую тактику в отношении данного
5 контингента. Именно поэтому данные, полученные в результате медицинского освидетельствования при первичной постановке на учет и при призыве на военную службу, являются наиболее полной статистической информацией о состоянии здоровья мужского населения в возрасте от 17 до 27 лет (Мануйлов В.М., Емельяненко В.М., 2005; Марьин Г.Г., Мельниченко П.И. с соавт., 2005) .
Анализ заболеваемости мужского населения в возрастной группе остается 17-27 лет важным, информационным материалом для оценки состояния здоровья населения и разработки целого ряда медико-социальных мероприятий, как на федеральном, так и на территориальном уровнях (Куликов В.В., Ядчук В.Н., Берг В.Г. с соавт., 2005, Гончаренко С.А., 2005, Манулов В.М., Емельяненко В.М., 2005).
Современная государственная социальная политика в сфере охраны здоровья ориентирована в основном на улучшение качества медицинского обслуживания всего населения, что в полной мере относится и к работе призывных медицинских комиссий.
В* условиях необходимости обеспечения, с одной стороны, правового
поля граждан, в том числе при призыве на военную службу, а с другой -
высокой эффективности работы призывной комиссии при
освидетельствовании юношей призывного возраста возникает необходимость поиска организационных решений. Одним из них может стать выделение контингента хронических больных, изначально признанных негодными к военной службе, например, при наличии у призывника хронической патологии кожи и подкожной клетчатки, и как следствие - сокращение контингента повторно осматриваемых медиками юношей в течение призывного периода.
Хотя в общей структуре заболеваемости призывников группа болезней кожи и подкожной клетчатки по материалам результатов обследования юношей в Московской области за последние семь лет традиционно занимает
6 место, а на их долю приходится не более 7 - 10%, тем не менее,
\
контингент призывников, страдающих данной патологией, представляет
интерес в плане решения вопроса о перспективе их призыва на военную
службу, а также улучшения организации деятельности врачебной
комиссии при работе с призывниками.
Однако в доступной нам литературе не встретилось комплексных исследований по анализу общей заболеваемости призывников Московской области за последние 10 лет, а также анализу заболеваемости хроническими болезнями кожи и подкожной клетчатки у юношей призывного возраста в связи с оценкой преемственности в организации работы призывных комиссий и специализированного дермато-венерологического учреждения -областного кожно-венерологического диспансера Московской области, что определило цель настоящего исследования.
Цель- исследования: разработать комплекс мероприятий, обеспечивающих улучшение преемственности в работе призывных и военно-врачебных комиссий со специализированными учреждениями дерматологического профиля, при медицинском освидетельствовании юношей, страдающих хроническими болезнями кожи и подкожной клетчатки.
Задачи исследования
1. Провести анализ общей заболеваемости юношей-призывников,
проживающих в Московской области, за период с 2000 по 2006 годы.
2. Изучить распространенность и структуру хронических болезней
кожи и подкожной клетчатки у юношей призывных возрастов в динамике за
указанный период.
3. Дать социально-гигиеническую характеристику контингента юношей
призывного возраста с выявленными болезнями кожи и подкожной
клетчатки.
4. Изучить опыт работы Московского областного кожно-
венерологического диспансера в обеспечении преемственности в
деятельности врачей призывных и военно-врачебных комиссий и
гражданских медицинских специализированных учреждений.
7 5. Разработать рекомендации по совершенствованию организации оказания медицинской помощи юношам призывного возраста, страдающих хроническими заболеваниями кожи и подкожной клетчатки.
Научная новизна исследования заключается в том, что в нем впервые применительно к Московскому региону:
оценена общая заболеваемость юношей допризывного и призывного возрастов, проживающих в Московской области, за период с 2002 по 2006 годы.
по данным семи районов Московской области изучена заболеваемость юношей допризывного и призывного возрастов, страдающих заболеваниями кожно-венерологического профиля, за период 2002-2006 годов;
проанализировано соблюдение преемственности в работе призывных и военно-врачебных комиссий и специализированного медицинского учреждения - Московского областного кожно-венерологического диспансера - при наблюдении юношей призывных возрастов, страдающих болезнями кожи и подкожной клетчатки;
получены показатели социально-гигиенической характеристики обследованных юношей призывных возрастов, страдающих хроническими, заболеваниями кожи и подкожной клетчатки.
разработаны рекомендации по совершенствованию организации совместной работы призывных и военно-врачебных комиссий при первичном и повторном освидетельствовании граждан призывных возрастов, страдающих болезнями кожи и подкожной клетчатки, и специализированного учреждения
Московского областного кожно-венерологического диспансера. Практическая значимость исследования
Анализ структуры общей заболеваемости юношей допризывного и призывного возрастов в динамике за период 2002 - 2006' годов позволил изучить тенденции в формировании здоровья мужского населения в Московской области.
Анализ заболеваемости юношей допризывного и призывного возрастов, страдающих хроническими болезнями* кожи и подкожной клетчатки в динамике за период с 2002 по 2006 год, позволил оценить частоту данной группы заболеваний, удельный вес в структуре общей заболеваемости и его динамику, обосновать перспективы планирования набора юношей в Вооруженные силы Московским областным военным комиссариатом.
Анализ обеспечения преемственности в работе призывных и военно-врачебных комиссий- и гражданских медицинских учреждений при наблюдении подростков допризывного возраста* и юношей призывного возраста позволил обосновать ряд предложений по совершенствованию их совместной деятельности.
Результаты исследования позволили обосновать предложения по совершенствованию организации работы призывных комиссий на призывных пунктах Московской области. Предложения по совершенствованию организации работы призывных и военно-врачебных комиссий при работе с контингентом хронических больных, страдающих заболеваниями кожи' и подкожной клетчатки, направлены на рассмотрение в военный комиссариат Московской области.
По результатам оценки состояния здоровья юношей в динамике за период с 2002 по 2006 год подготовлено информационное письмо для военного комиссара Московской области (сентябрь, 2006 г.)»
Результаты, социологического исследования юношей допризывного и призывного возрастов, страдающих хроническим заболеваниями, позволили определить круг медико-социальных проблем, наиболее характерных для данного, контингента, а также выявить основные закономерности в формировании взаимоотношений в системе « врач — юноша - подросток -здоровье».
Результаты исследования внедрены в практику работы Московского областного военного комиссариата, Московского областного кожно-
9 венерологического диспансера, используются в научно-практической работе кафедры международного здравоохранения Российской академии последипломного образования при проведении курса лекций и практических занятий для организаторов здравоохранения различных территорий Российской Федерации и ближнего зарубежья.
Апробация работы и публикации.
Основные положения диссертационного исследования доложены и обсуждены на:
Всероссийской конференции «Здоровье и безопасность жизнедеятельности молодежи: проблемы и пути решения» (Уфа, 20006);
заседании объединенной научной конференции Российской медицинской академии последипломного образования кафедр: общественного здоровья и организации здравоохранения; международного здравоохранения; технологии последипломного обучения; медицинской статистики и информатики (Москва, 2006);
- заседании совместной научной конференции кафедр: общественного
здоровья и здравоохранения с курсом экономики ММА И.М. Сеченова,
лаборатории проблем эффективности труда в здравоохранении, лаборатории
проблем стандартизации, лицензирования и аккредитации в здравоохранении
НИИ общественного здоровья и управления здравоохранением ММА им.
И.М. Сеченова, кафедры международного здравоохранения российской
медицинской академии последипломного образования (Москва, 2007).
По материалам исследования опубликованы 5 статей, в том числе, 1 -в издании по перечню ВАК.
Положения, выносимые на защиту.
- Медико-социальная характеристика факторов здоровья юношей
допризывного и призывного возрастов, проживающих в Московской
области, является научно-информационным обоснованием для
совершенствования организации оказания им медицинской помощи.
В структуре заболеваний, определяющих ограничение годности или негодность юношей к службе в Вооруженных Силах, важное место занимают бесперспективные в плане излечивания хронические заболевания кожи и подкожной клетчатки;, организация ежегодных повторных медицинских освидетельствований юношей, страдающих хроническими заболеваниями кожи и подкожной клетчатки, свидетельствует о нерациональном использовании медицинских ресурсов.
Для обеспечения эффективной преемственности в работе врачей призывных, военно-врачебных комиссий и специализированных медицинских учреждений, при медицинском наблюдении юношей, страдающих хроническими болезнями кожи и подкожной клетчатки, необходимы новые организационные формы взаимодействия.
Медико-социальные параметры являются основополагающими в формировании здравоохранительного поведения у юношей допризывного и призывного возрастов, страдающих хроническими-болезнями кожи и подкожной клетчатки.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 127 страницах компьютерного набора,
состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной материалам и методам исследования, 3-х глав собственного исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа иллюстрирована 19 рисунками, содержит 8 таблиц. Список литературы включает 132 источника, в том числе 110 отечественных и 22 зарубежных авторов.
Роль суставных структур в жизнедеятельности организма
Опорно-двигательная или костно-мышечная система имеет сложную организацию и включает разнообразные элементы: кости, хрящи, связочно-сухожильно-фасциальный комплекс и способную к сокращению мышечную ткань, обеспечивающую перемещение пассивных костных структур в трёхмерном пространстве под «руководством» центральной нервной системы.
Твёрдый скелет представлен костной и хрящевой соединительной тканью, которая формирует остов, опору организма, участвует в создании защитных полостей для головного, спинного мозга и внутренних органов (Са-фоничева О.Г., 2007).
Функции скелета обусловлены участием его в работе опорно-двигательной системы: функция рычагов при движении, опорная, защитная и структурообразовательная. Опорная (биомеханическая) функция обеспечивается в основном коллагеновыми и эластическими волокнами, составом и физико-химическими свойствами межклеточного вещества скелетной ткани (минерализацией). Биологические свойства костной и хрящевой ткани обусловливают их участие в общих гомеостатических процессах организма: обмене веществ, кроветворении, регуляции электролитного баланса.
Хрящевая ткань состоит из хондроцитов, хондробластов и большого количества межклеточного гидрофильного вещества, отличающегося упругостью. Регуляция метаболизма хрящевой ткани идёт под действием механической нагрузки, нервных и гуморальных факторов. Периодическое давление на хрящевую ткань и ослабление нагрузки являются постоянно действующими факторами диффузии растворённых в воде пластических веществ, продуктов метаболизма и гормонально-гуморальных регуляторов из капилляров надхрящницы или синовиальной жидкости суставов.
Большинство суставов туловища и конечностей — диартрозного типа. Основная их функция - двигательная и опорная.
Диартрозные (синовиальные) суставы состоят из нескольких видов тканей, которые обеспечивают их нормальное функционирование. Каждая реагирует на механические и фармакологические стимулы различным образом в процессе роста, моделирования и ремоделирования. Изменения в каждой из них могут иметь особый эффект для нормального функционирования суставов (Burr D.B., 2004).
В диартрозных суставах сочленяющиеся поверхности покрыты гиалиновым хрящом, между ним имеется полость, наполненная синовиальной жидкостью. Суставная полость выстлана СО. Суставные концы костей заключены в фиброзную, укреплённую связками суставную капсулу.
Капсула любого диартрозного сустава состоит из 2 слоев - наружного фиброзного и внутреннего - СО. Наружный слой состоит из плотной волокнистой соединительной ткани.
СО - это пласт соединительной ткани, состоящей из покровного, колла-генового и эластического слоев. СО, граничащая с суставной полостью, образована прерывистым слоем синовиоцитов - синовиальных клеток (специализированных фибробластов), не покрывающих СХ. По морфофункциональ-ной структуре синовиоциты подразделяются на 2 типа — А и В. Клетки типа А напоминают макрофаги, предполагают, что они происходят из моноцитов. Синовиоциты типа А элиминируют продукты клеточного и тканевого распада, хрящевой детрит. Клетки типа В напоминают фибробласты, они продуцируют ПГ — гиалуронаты. Основные функции СО - метаболическая, локомоторная, трофическая и барьерная. Метаболическая функция заключается в участии в процессах обмена между содержимым полости сустава и сосудистым руслом.
Локомоторная, или фрикционная, функция обеспечивает смазку сустава и идеальное скольжение трущихся его частей, а также компрессионно-де-компрессионный эффект за счёт высоковязких и упругоэластичных свойств гиалуронатов.
Трофическая функция заключается в транспортировке энергетических веществ для бессосудистого хряща.
Барьерная функция заключается в фагоцитировании и удалении чужеродных белковых соединений или собственных денатурированных белков. Наличие иммунокомпетентных клеток и макрофагов в синовиальной жидкости также обеспечивает защиту тканей сустава от повреждений (Мазуров В.И., 2005; Buckwalter J.A. et al., 2005).
СХ является разновидностью гиалинового хряща. Он состоит из межклеточного основного вещества и продуцирующих хрящевых клеток - хондроцитов. Основная функция хондроцитов заключается в продуцировании элементов матрикса, в первую очередь коллагена II типа и ПГ. Матрикс защищает хондроциты от повреждения, обеспечивает их питание и поддерживает фенотипическую однородность хондроцитов. Макроскопически хрящ представляет собой пласт, соответствующий по форме конфигурации костных суставных поверхностей. Толщина хряща зависит от типа сустава и функциональной нагрузки на него. Физиологическими свойствами гиалинового хряща являются упругость, эластичность, прочность, стабильность. СХ снижает трение суставных поверхностей, обеспечивая свободные, безболезненные движения в суставах.
Экспериментальные модели для изучения функционирования суставов
Биологическое моделирование открывает широкие возможности для разработки новых способов и схем коррекции патологических изменений при воспалении, что в значительной мере определяется сходством биохимических, иммунологических и морфологических проявлений при аутоиммунном воспалении у людей и экспериментальных животных (Керимов З.А., 1988; Плесковская Г.Н.,1991; Синяченко О.В. и соавт.,1991; Сигидин Я.А. и соавт., 1994; Kaab M.J. et al., 1998; Kuo S.Y. et al., 1994).
В качестве экспериментальных животных использовались крысы, мыши, морские свинки, собаки, кролики, приматы (Синяченко О.В. и соавт.,1991). Артрит у них вызывался введением различных белковых антигенов, таких как коллаген, лизоцим, фибрин, овальбумин, бычий сывороточный альбумин, ферритин, фрагменты клеточной стенки стрептококка (Синяченко О.В. и соавт., 1991; Сигидин Я.А. и соавт., 1994; Panayi G.S., 1993; Adorini L., 1993; Willians R.O., 1993). Кроме того, выведены животные с врожденными дефектами иммунной системы, у которых развитие артрита происходит спонтанно. Например, кролики Old English, мыши линий MRL/1, DBA/1, С57В1/6. Спонтанный артрит у мышей линии MRL/1 чрезвычайно близок по своим признакам к ревматоидному артриту (РА) человека. Следует отметить, что РА - это одна из наиболее часто встречающихся форм АА в суставной патологии людей. (Плесковская Г.Н., 1991; Синяченко О.В. и соавт., 1991; Мицкевич В.А., Раденска С.Г., 2002; Kollias G., 1993).
Антигенная модель артрита у кроликов вызывается сенсибилизацией белковым антигеном с последующим внутрисуставным введением разрешающей дозы того же антигена. Плазматические клетки воспаленной синовиаль ной оболочки продуцируют большое количество иммуноглобулинов, что сближает данную модель с РА человека. Ещё один признак сходства данной модели с РА - отложение иммуноглобулинов и компонентов комплемента в поверхностных слоях суставного хряща (Сигидин Я.А. и соавт., 1994; Lipsky Р., 1993).
Достаточно широкое распространение в экспериментальных исследованиях получили также смешанные модели антигенно-адъювантного артрита, что позволяет объединять те или иные достоинства отдельных способов в зависимости от поставленных задач. (Карякина Е.В., 1998; Белова СВ., 1999; Pettipher E.R. et al., 1988, 1989; Steinmetz M., Uematsu Y., Mori L., 1993).
В последние годы большинство исследователей отдают предпочтение АдА, считая его сходство с РА человека максимальным (Спасов А.А. и соавт., 2005; Hua J. et al., 2005). АдА может быть сформирован у животных разных видов, в том числе и у лабораторных крыс. Эта модель является одной из наиболее просто воспроизводимых и удобных. Она формируется путем подкожного введения классического адъюванта Фрейнда или одной из его модификаций (Чернух A.M., 1979; Юсипова Н.А., 1983; Дугина Ю.Л. и соавт., 2004; Гутнева Г.С., 2005; Dowd Е. et al., 1998; Kalareskog I, 1993).
В качестве экспериментальных животных для изучения АдА часто используются крысы (Чернух A.M., 1979; Дубиков А.И. и соавт., 2004; Heppel-mann В., Pawlak М., 1997; Guingamp С. et al., 1997 и др.). Уже в первые дни развития артрита отмечается пролиферация клеток СО. Через некоторое время развивается лимфогистиоцитарная и эозинофильная инфильтрация в пери-артикулярных тканях, прилежащих сухожилиях и подкожной жировой клетчатке. Через несколько дней с начала развития синовита на боковых поверхностях суставного хряща отмечается наползание грануляционной ткани, представленной слоем пролиферирующих клеток (Синяченко О.В. и соавт., 1991).
Таким образом, представляется возможным изучение коррекции аутоиммунного воспаления с использованием в качестве экспериментальной модели крыс с АдА.
Среди всех АА человека одним из наиболее тяжёлых и инвалидизиру-ющих заболеваний является РА. Распространённость РА в мире приближается к 1%. Стойкая утрата трудоспособности у больных РА наблюдается нередко уже к 3-му году от начала заболевания, при этом они становятся «бессрочными» инвалидами. Средняя продолжительность жизни больных РА на 10-15 лет меньше, а смертность на 70% выше, чем в общей популяции. Смертность при РА сравнима с таковой при ишемической болезни сердца, сахарном диабете 2 типа и лимфопролиферативных опухолях (Насонов Е.Л., 1997; Мазуров В.И., 2001; Сучков СВ. и соавт., 2004; Мартемьянов В.Ф. и соавт., 2005; Статун А.Н., 2005; Зборовский А.Б. и соавт., 2007 и др.).
Несмотря на то, что АА являются предметом многочисленных исследований, их этиология и многие механизмы развития остаются неясными (Насонова В.А., Бунчук Н.В., 1997; Насонов Е.Л., 2002; Бадокин В.В., 2003; Королик О.Д. и соавт., 2005; Harris E.D., 1990; Davidson A., Diamond В., 2001; El-Gabalway H.D., Lipsky Р.Е., 2004). На сегодняшний день известно около 20 инфекционных агентов, способных по принципу триггерного механизма запускать иммунологические процессы (Сальникова Т.С. и соавт., 2001; Егорова О.Н. и соавт., 2005; Ивашкин В.Т., Султанов В.К., 2005; Егорова О.Н., Балабанова P.M., 2006; Балабанова P.M., Белов Б.С, 2006; Белов Б.С. и соавт., 2006; Benoist С, Mathis D., 2001; Firestein G.S., 2001; Balandraud N. et al., 2003).
Гематологические биохимические и иммунологические тесты
Показатели крови (табл.2) соответствовали наличию у животных 2-й и 3-й серий выраженного воспалительного процесса.
У крыс с АдА 2-й и 3-й серий наблюдалось ускорение СОЭ в 2 раза по сравнению с контрольной серией (Рі_2 0,001 и Рі-з 0,001). Причём различий в величине СОЭ у крыс 2-й и 3-й серий не было (Р2-з 0,5). Примечание: - Р 0,05; - Рі-з 0,001 по сравнению с контролем (1-я серия). Содержание эритроцитов у крыс с АдА в обеих сериях было значительно ниже (Рі_2 0,001 и Рі.3 0,001), а число лейкоцитов выше (Р].2 0,05 и Рі_3 0,05), чем у здоровых животных (1-я серия).
При этом разницы в показателях количества эритроцитов и лейкоцитов между 2-й и 3-й сериями не наблюдалось (Р2.3 0,5; Р2-з 0,2).
Об интенсивности процессов ПОЛ мы судили по уровню МДА крови. Как известно, ПОЛ, в определённой степени, отражает выраженность эндогенной интоксикации, характерной для АА. У животных с АдА было выявлено существенное увеличение этого показателя по сравнению со здоровыми животными (табл.3). У животных 2-й серии было выявлено возрастание уровня МДА в 2 раза (Рі-2 0,001) по сравнению с аналогичным показателем здоровых животных. У крыс 3-й серии данный показатель был выше нормы в 2,2 раза (Риз 0,001), что свидетельствовало об активации процессов ПОЛ, характерной для АА.
Повышение уровня ГАГ (показателя воспалительно-деструктивных процессов) наблюдалось в 3 раза по уроновым кислотам ив 1,6 раза по гексозам; (Рі.2 0,001 иРі-3 0,001 соответственно). Таблица 3 Биохимические характеристики крови у здоровых крыс и при адъ ювантном артрите (М±т) Серии МДА в мкмоль/л ГАГвгх107л Уроновые КИСЛОТЫ Гексозы 1-я п=20 2,86±0,11 1,39±0,04 3,58+0,05 2-я п=20 5,93+0,21 4,25+0,25 5,93±0,22 3-я п=20 6,57±0,42 4,23±0,23 6,04+0,30 Примечание: - Р 0,001 по сравнению с контролем (1-я серия)
Различий между 2-й и 3-й сериями по уровню МДА (Р2-з 0,2), а также содержанию ГАГ по уроновым кислотам (Р2-з 0,5) и по гексозам (Р2.з 0,5) не было. О напряжённости иммунопатологических реакций у крыс с АдА судили по изменению содержания ЦИК в сыворотке крови (табл. 4). У животных со сформированным артритом происходило значительное увеличение данного показателя по сравнению со здоровыми животными, что подтверждало наличие у них аутоиммунного воспалительного процесса в суставах. По сравнению с контролем (1-я серия) содержание ЦИК в 2-й и 3-й сериях было резко повышено.
Во 2-й серии содержание ЦИК было выше по сравнению с интактными животными в 3,5 раза (Р).2 0,001) и 3-й - в 3,8 раза (Pi.3 0,001). При этом статистически достоверных различий между 2-й и 3-й сериями не обнаружено (Р2-з 0,5). Морфологические проявления
Макроскопически суставные ткани здоровых животных соответствовали нормальному физиологическому состоянию. Микроскопически при окраске гематоксилин-эозином (рис.8, рис.9) признаки воспалительных и деструктивных изменений отсутствуют.
В суставных тканях животных с АдА выявлялись признаки поражения, характерные для их воспалительной деструкции.
Макроскопически установлено, что у всех животных 2-й серии в поражённых суставах имелось утолщение СО, поверхность которой была разрыхлённой и неровной с единичными Микрофото СХ здоровой крысы (1-я серия). Окраска гематоксилином и эозином. Ув. об.20, ок.10 У большинства животных на СХ, гладком и блестящем на значительном протяжении, имелись очаги с тусклой шероховатой поверхностью, которые выявлялись, в основном, по краям суставных поверхностей. Микроскопически (рис. 10) во всех случаях в СО определялась очаговая пролиферация синовиоцитов, располагавшихся палисадообразно в 2-4 ряда. У 16 крыс имелись участки поверхностного некроза с наложением фибрина.
Наиболее постоянными и выраженными ПП была диффузная лимфоид-но-гистиоцитарная и плазмоцитарная инфильтрация субинтимального слоя СО (табл.5). Рис.10. Микрофото СО крысы с адъювантным артритом (2-я серия). Выраженная пролиферация синовиоцитов, отложения фибрина, воспалительная клеточная инфильтрация стромы. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. об. 20, ок. 10.
Поскольку у здоровых животных в СО представлены практически исключительно фибробласты, а остальные клеточные элементы встречались в единичных случаях, ПП СО и СХ у здоровых животных отсутствуют (сумма баллов ПП=0), то сравнение морфологических признаков у животных с АдА 2-8 серий с интактными животными (контрольная группа) в последующем не проводилось. На развернутой стадии процесса представлялось целесообразным сопоставлять микроскопическую картину изменений между животными с воспроизведенным АдА на фоне применения плацебо, моновоздействий изучаемых препаратов и при использовании их комбинаций. У крыс с АдА, не получавших никаких воздействий («нелеченных»), отмечалась очаговая пролиферация клеточных элементов воспалительного характера, напоминающая лимфоидные фолликулы. Такие изменения были выявлены у половины обследуемых животных (10 из 20) . В цитоплазме многих гистиоцитов обнаруживалась высокая активность кислой фосфатазы -маркера лизосом, отражающего макрофагальную природу этих клеток. Об аутоиммунном характере возникшего воспалительного процесса свидетельствовала пиронинофилия цитоплазмы (показатель накопления рибонуклеоти-дов) большого количества (68,34±0,76%) лимфоцитов и плазматических клеток, что являлось показателем их включения в процесс антителообразования и напряжённости иммунитета.
Имелись участки набухания и гомогенизации пучков коллагеновых волокон с неравномерной базофилией или повышенной эозинофилией. В 60% случаев встречались небольшие пикринофильные зоны резорбции коллагеновых волокон, которые были лишенные волокнистой структуры и выглядели глыбчатыми и зернистыми. Микроструктура СХ на значительном протяжении была сохранена. Однако окраска толуидиновым голубым выявила потерю ГАГ поверхностной и частично основной зонами, что являлось признаком начавшегося процесса дезорганизации хрящевого матрикса. Наряду с этим имелись участки с разрыхлённым и частично утраченным поверхностным слоем (рис. 11).
Влияние полиферментного препарата (Вобэнзим) на общие, лабораторные и морфологические признаки АдА у крыс
Экспериментальные исследования показали, что протеиназы растительного и животного происхождения, входящие в состав препарата вобэнзим, могут оказывать нормализующее влияние на такую универсальную системную защитную реакцию как воспаление.
Суммарные характеристики влияния вобэнзима на степень и интенсивность физиологических репаративных процессов при воспалении и изучаемые параметры представлены на рис. аод иктъсС[ж 1ш) Чспо СОЭ(им) М№гх10-2п) ГДДдок) ГОЮЯы ЦЖ контроллингактные ) ИДдА (плацебоконтроль) D АдА+вобензим
Влияние вобэнзима на некоторые маркеры воспаления при адъювантном артрите у экспериментальных животных После ведения вобэнзима у крыс 4-й серии на фоне улучшения показателей общего состояния животных (увеличение двигательной активности, восстановление волосяного покрова, передвижение на четырёх лапах, появление более свободных и безболезненных движений) установлено снижение количественных показателей признаков местного воспаления опытных коленных суставов (табл. 7, см. раздел 4.5).
После завершения введения животным 4-й серии полиферментного препарата «Вобэнзим» наблюдалось статистически значимое, отчётливое уменьшение окружности опытных суставов по сравнению с животными 2+3-й серии (плацебо-группа) (Р(2+3)-4 0,02). Однако, несмотря на энтеральное введение вобэнзима, окружность сустава у животных 4-й серии всё же была в 1,6 раза больше, чем у здоровых крыс (Pw 0,001) (рис.12).
Местная накожная температура в подколенной ямке опытных суставов крыс с АдА после внутреннего применения полиферментного препарата существенно не изменилась в сравнении с 2+3-й серией (Р(2+з)-4 0,1). Она продолжала оставаться повышенной на 3,0С по сравнению с здоровыми животными 1-й серии (Pi-4 0,001).
Из изложенного следует, что полиферментный препарат оказал выраженное противоотёчное действие на опытные суставы и практически не изменил их накожную температуру. В таблице 8 (с.75) показано изменение гематологических показателей у крыс с АдА после введения вобэнзима внутрь.
Как следует из данных, представленных в таблице 8, рис.12 ,нами обнаружено статистически достоверное снижение СОЭ у животных 4-й серии по сравнению с результатами, полученными у крыс 2+3-й серии (Р(2+з)-4 0,01). Однако в 4-й серии СОЭ оставалось повышенным по сравнению со здоровыми животными в 1,5 раза (Рі_4 0,01).
По завершении введения вобэнзима у крыс 4-й серии наблюдалось статистически достоверное снижение уровня лейкоцитов по сравнению с 2+3-и Серией (Р(2+з)-4 0,05), ХОТЯ И НЄ ДОСТИГ урОВНЯ КОНТРОЛЬНОЙ Серии (Рі-4 0,001). Число эритроцитов в крови животных 4-й серии достоверно увеличилось по сравнению с крысами 2+3-й серии (Р(2+зн 0,001), однако оно не достигало показателей 1-й серии (Pi-4 0,001).
Таким образом, после введения вобэнзима внутрь наблюдалось улучшение гематологических показателей. Однако ни один из этих параметров не изменился до уровня показателей здоровых животных в контрольной серии (Рм 0,01, Рм 0,001, Pi.4 0,001 соответственно).
У крыс, получавших вобэнзим внутрь, установлено снижение в крови содержания МДА по сравнению с плацебо-контролем (2+3-й серией) (Р(2+зм 0,001), что являлось маркёром улучшения метаболических процессов, в частности, ПОЛ (табл.9, с.74-75). Однако этот показатель был выше, чем у здоровых животных (Pi_4 0,01) (рис.12).
О выраженности влияния вобэнзима на уменьшение воспалительно-деструктивных процессов в структурах опытных коленных суставов крыс мы судили по уровню содержания в сыворотке крови ГАГ, определяемых как по уроновым кислотам, так и по гексозам (табл. 10, с.75-76).
У животных 4-й серии наблюдалась отчётливое улучшение данных показателей по сравнению с их величинами в 2+3-й серии по уроновым кислотам (Р(2+з)-4 0,001) и нормализация содержания ГАГ по гексозам (Рі.4 0,5) (рис.12) . Это может свидетельствовать о недостаточном противовоспалительном действии вобэнзима в случае использования его в отдельности, вне комбинации с другими средствами.
Напряжённость иммунологических и иммунопатологических процессов у здоровых и иммунизированных животных определялась по уровню ЦИК в сыворотке крови.
Как следует из данных таблицы 11, показатель ЦИК у животных с АдА в 4-й серии был статистически достоверно ниже в сравнении с 2+3-й серией (Р(2+з)-4 0,01). Однако он продолжал оставаться в 2 раза выше, чем в контрольной серии (Рі_4 0,001) (рис.12). Из изложенного можно заключить, что вобэнзим отчётливо снижал напряжённость иммунологических реакций у крыс сАдА, но его изолированное применение, без других препаратов, не приводило к нормализации выраженности иммунологических процессов у экспериментальных животных с экспериментально вызванным артритом.
Макроскопически СО была несколько утолщена и разрыхлена по сравнению с нормальной однако, кровоизлияний на её поверхности не было и суставной выпот отсутствовал в 100% случаев. СХ, также как и у животных 2+3-й серии, на фоне гладкой поверхности имел шероховатые очаги повреждения, располагавшиеся по краям суставных поверхностей.
Микроскопически выявлялись все вышеописанные ПП, характерные для животных 2+3-й серии, но степень их выраженности и частота встречаемости были значительно меньше. Так, пролиферация сииовиоцитов и очаги некроза с наложением фибрина выявлялись лишь у 57,14% крыс, а очаги резорбции коллагеновых волокон были единичными и занимали меньшую площадь. Снижение воспалительной клеточной инфильтрации гистиоцитами, лимфоцитами и плазмоцитами (Р(2+з)-4 0,001; Р(2+з)-4 0,001; Р(2+з)-4 0,01 соответственно) сопровождалось уменьшением в 2,07 раза числа функционально активных клеток (32,86±0,95%; Р(2+з)-4 0,001) и увеличением числа фибробла-стов (Р(2+з)-4 0,001), установленным в 100% случаев (табл.12). Влияние вобэн-зима на изменение клеточного состава и морфологические признаки поражения представлено на рис.13. При этом сумма баллов 1111 СО была значительно меньше, чем у животных 2+3-й серии (табл. 13). Сумма баллов ПП СХ была также снижена. В СХ выявлялось очаговое разволокнение поверхностной зоны с уменьшением количества хондроцитов. Число дистрофически изменённых хрящевых клеток было меньше, чем в 2+3-й серии (32,15±0,21%; Р(2+з)-4 0,001), а их патологическая регенерация имела место в пяти случаях.
