Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Современные синтетические среды для хранения спермы хряков в охлажденном состоянии 7
1.2. Влияние различных факторов на живучесть сперматозоидов хряков в охлаждённом состоянии 11
1.3. Основные повреждающие факторы при глубоком замораживании спермы хряков 14
1.4. Способы повышения устойчивости сперматозоидов хряков к глубокому замораживанию 23
1.5. Современные синтетические среды для глубокого замораживания спермы хряков 31
2. Методика исследований 34
3. Результаты исследований 47
3.1. Изучение защитного влияния различных антиоксидантов на сперму хряков, сохраняемую в охлаждённом состоянии 47
3.1.1. Влияние антиоксиданта кверцетина на живучесть спермы хряков при 4и16С 47
3.1.2. Анализ защитного влияния на охлаждённую сперму хряков эфира поливинилового спирта с фенозаном 50
3.1.3. Изучение влияния сукцината хитозана на живучесть охлаждённой спермы хряков 51
3.1.4. Выяснение защитного влияния антиоксидантов ИХФГАН
при хранении спермы хряков в охлаждённом состоянии 53
3.2. Результативность осеменения свиней охлаждённой спермой, разбавленной усовершенствованной ГХЦС средой
с бычьим сывороточным альбумином и тиольным соединением 58
3.3. Разработка синтетической среды для глубокого замораживания спермы хряков 62
3.3.1. Выявление оптимальных соотношений веществ, входящих в состав усовершенствованной среды для замораживания спермы хряков 62
3.3.2. Влияние синтетических антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов хряка к замораживанию 69
3.3.3. Изучение криозащитного влияния тиольных соединений 74
3.3.4. Анализ криозащитного влияния сухого соевого лецитина 76
3.3.5. Устойчивость сперматозоидов хряка к замораживанию при использовании метилового эфира глицерина и других заменителей глицерина 79
3.3.6. Результативность осеменения свиней при использовании
для замораживания спермы усовершенствованной среды 82
4. Обсуждение результатов 83
5. Выводы 92
6. Практические предложения 94
7. Список литературы
- Влияние различных факторов на живучесть сперматозоидов хряков в охлаждённом состоянии
- Способы повышения устойчивости сперматозоидов хряков к глубокому замораживанию
- Анализ защитного влияния на охлаждённую сперму хряков эфира поливинилового спирта с фенозаном
- Выявление оптимальных соотношений веществ, входящих в состав усовершенствованной среды для замораживания спермы хряков
Введение к работе
Актуальность работы. Одним из важных технологических вопросов в свиноводстве является улучшение воспроизводства стада путём использования искусственного осеменения. Искусственное осеменение животных является высокоэффективным методом улучшения породных и продуктивных качеств животных путём использования высокоценных племенных производителей. Важным фактором, определяющим результативность искусственного осеменения свиней, является совершенствование методов хранения спермы хряков в охлаждённом и замороженном состоянии.
При технологической обработке спермы, разбавлении её синтетическими средами и хранении в охлаждённом и замороженном состоянии происходят заметные структурные и биологические повреждения сперматозоидов, что значительно снижает их фертильность. Поэтому весьма актуальной задачей является применение более современных технологических разработок, способствующих повышению биологической полноценности криоконсервированной спермы хряков. Кроме того, необходима разработка синтетических сред для спермы хряков, позволяющих сохранять биологическую полноценность сперматозоидов при хранении в охлаждённом состоянии в течение 5-7 дней.
Причины снижения фертильности охлаждённой и замороженной спермы хряков до настоящего времени окончательно не выяснены. Одной из них является активация процессов перекисного окисления липидов при криоконсервации спермы. В этой связи проводятся исследования по повышению защитных свойств синтетических разбавителей для этого вида животных, путём введения в их состав различных натуральных или синтетических антиоксидантов, а также других биологически активных веществ. Поэтому разработка более совершенных синтетических сред для хранения спермы хряков в охлаждённом и глубоко замороженном состоянии
путём использования новых БАВ представляет значительный научный и практический интерес.
Цель и задачи исследований. Целью данной работы является изучение защитного влияния различных антиоксидантов при хранении спермы хряков в охлаждённом и замороженном состоянии, а также разработка усовершенствованной среды для замораживания их спермы.
Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:
изучить влияние различных антиоксидантов на подвижность и живучесть сперматозоидов хряка, сохраняемых в охлаждённом до 4 или 16С состоянии;
выяснить результативность осеменения свиней охлаждённой спермой, сохраняемой в усовершенствованной ГХЦС среде с бычьим сывороточным альбумином и тиольным соединением;
разработать новую синтетическую среду для глубокого замораживания спермы хряков;
проанализировать влияние различных антиоксидантов на криоустойчивость сперматозоидов хряка при замораживании в новой среде;
изучить возможность замены желтка куриного яйца в составе разбавителей для криоконсервации семени хряка на сухой соевый лецитин;
выяснить криопротективное влияние при замораживании спермы хряков монометилового эфира глицерина и других заменителей глицерина.
Научная новизна исследований. Впервые изучено влияние ряда синтетических и натуральных антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов хряка к хранению в охлажденном состоянии. Выяснена результативность осеменения свиней охлаждённой спермой, сохраняемой при 16С в течение 3-5 дней с использованием усовершенствованной ГХЦС среды. Усовершенствована синтетическая среда для глубокого
замораживания спермы хряков. Проведено сравнительное изучение влияния различных антиоксидантов на криоустойчивость спермы хряков при замораживании. Впервые изучена возможность замены желтка куриного яйца в составе сред для криоконсервации спермы хряков на сухой соевый лецитин. Проанализирована эффективность замораживания спермы хряков с монометиловым эфиром глицерина и другими заменителями глицерина.
Практическая значимость. Введение в состав усовершенствованной синтетической ГХЦС среды для хранения спермы хряков в охлаждённом до 16С состоянии бычьего сывороточного альбумина и тиольного соединения способствует повышению результативности осеменения свиней и продолжительности хранения спермы. Разработанная синтетическая среда для глубокого замораживания спермы хряков позволяет стабильно получать после оттаивания подвижность сперматозоидов в пределах 40-45%. Введение в состав усовершенствованной синтетической среды для глубокого замораживания спермы хряков восстановленного глутатиона способствует повышению подвижности и живучести оттаянных сперматозоидов.
Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на:
Международной научной конференции: «Прошлое, настоящее и будущее зоотехнической науки», ВИЖ Дубровицы, 2004 г.;
Учёных Советах ВНИИплем, 2004-2006 гг.;
Расширенной межотдельской конференции ВНИИплем, 2007г.
Публикации по результатам исследований. По теме диссертации опубликовано 6 статей.
Объём работы. Диссертация изложена на 112 стр. машинописного текста и включает 23 таблицы. Состоит из введения, обзора литературы, методики исследований, собственных результатов, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы включает 188 источников, в том числе 109 на иностранном языке.
Влияние различных факторов на живучесть сперматозоидов хряков в охлаждённом состоянии
Важным моментом для хранения разбавленной спермы сельскохозяйственных животных в условиях холодильника при 2-4С было открытие защитного действия желтка куриного яйца против холодового удара сперматозоидов (Милованов В.К., 1962). Было установлено, что защитным действием против холодового шока сперматозоидов обладают фосфолипиды и липопротеиды желтка. По мнению Платова Е.М. (1973), фосфолипиды желтка, адсорбируясь на поверхности сперматозоидов, образуют с мембраной не гидрофобные, а ионные или водородные связи. При этом, положительное действие желтка лучше проявляется в растворе электролитов по сравнению с неэлектролитами.
По мнению Кононова В.П. (1982) и Ерохина А.С. (1989), криозащитное действие желтка на сперматозоиды животных объясняется его разупорядочивающим действием на липиды плазматических мембран половых клеток.
Немецкими исследователями было установлено, что введение бычьего сывороточного альбумина в состав среды для хранения охлаждённой спермы хряков, способствует увеличению времени живучести сперматозоидов вне организма, ингибирует реакцию капацитации и защищает их акросому (Waberski D. е.а.,1989). Сравнительное испытание действия бычьего сывороточного альбумина, свиного сывороточного альбумина и овальбумина на подвижность и сохранность акросом у сперматозоидов хряка при 15С показало, что бычий сывороточный альбумин оказывает более высокое защитное действие.
По мнению других исследователей, бычий сывороточный альбумин способствует повышению оплодотворяющей способности сохраняемой спермы хряков (Weitze K.F. e.a., 1987) и оказывает антиокислительное влиянии на мембранные структуры сперматозоидов (Upreti G. e.a., 1995).
Имеются сообщения, что довольно дорогостоящий бычий сывороточный альбумин в составе сред для спермы хряков можно успешно заменить на поливиниловый спирт (Rewell S., 1990).
Одной из причин снижения фертильности охлаждённой спермы хряков может быть активация процесса перекисного окисления липидов в сохраняемой сперме.
Для ингибирования процесса ПОЛ в охлаждённой сперме хряков предлагается использовать в составе сред различные натуральные и синтетические антиоксиданты (Нарижный А.Г., 1995; Ерохин А.С. и др., 1998; ToniolliR., 1996).
Введение в состав синтетической среды для хранения охлаждённой спермы хряков синтетического жирорастворимого антиоксиданта бутил-окси-толуола, способствовало увеличению живучести сперматозоидов вне организма (Bamba K.,Cran D.G., 1992).
Имеются сообщения о положительном влиянии на живучесть сперматозоидов хряка при 16С различных фракций кокосового молока (TonioUi R. e.a., 1996). Более выраженным защитным эффектом обладала фракция кокосового молока, содержащая индол-3-уксусную кислоту.
По мнению исследователей (Freitas V., Ferreira-Nunes J., 1994), это соединение обладает антиокислительным действием на сперматозоиды, защищает их акросомы и повышает фертильность.
Использование в составе среды для хранения охлаждённой до 18-20С спермы хряков тиолового соединения унитиола, позволило на 76% увеличить абсолютный показатель живучести сперматозоидов и значительно повысить оплодотворяемость свиноматок (Прокопцев В. М. и др., 1974).
С целью исключения возможности микробной загрязнённости спермы и уменьшения вероятности гинекологических осложнений у свиноматок, в состав разбавителей спермы необходимо вводить антимикробные препараты.
Нарижный А.Г. с сотрудниками (2000г) изучали действие препаратов ГАМП и полиген, на микрофлору семени хряков. Санирующие препараты вводили в дозах 300 и 600 мкг/мл среды. Было установлено, что эти препараты в испытанных дозах проявляют высокое бактерицидное действие на микрофлору спермы. Более эффективным оказался препарат полиген. В сперме с добавлением полигена, проб с содержанием до 500 микробных тел/мл было 57-75%, а при использовании ГАМП—37-47%.
Проводились исследования по ультразвуковой обработке спермы животных (Вишневский В.И., 1975; 1988). Изучение действия ультразвука на кристаллизацию растворов полиэтиленоксида и глицерина, замороженных с разными скоростями показало, что в ультразвуковом поле кристаллы льда растут более разветвлёнными. С увеличением скорости замораживания и повышением концентрации криопротектора кристаллизация становится мелкоструктурной.
При анализе подвижности сперматозоидов быков после воздействия ультразвука выяснилось незначительное влияние на данный показатель (Вишневский В.И., 1988). Но при этом на 25-30% увеличился абсолютный показатель живучести половых клеток.
Эксперименты по изучению подвижности сперматозоидов хряка после воздействия ультразвукового сонографа не установили положительного воздействия данной обработки (Brass К., 1987).
В литературе приводятся данные об изучении воздействия электрического и магнитного поля на сперму хряков (Masuda Н. е.а., 1995). Например, обработка спермы хряков магнитным полем в 20 Гаусс, способствовала незначительному повышению подвижности сперматозоидов при их хранении в охлаждённом до 4-20С состоянии.
Способы повышения устойчивости сперматозоидов хряков к глубокому замораживанию
Важным моментом в разработке способа глубокого замораживания спермы животных является открытие защитного действия глицерина на сперматозоиды быков и петухов (Polge С. е.а., 1949; Polge С, Rowson L., 1952).
Опыты со спермой хряков показали, что только глицерин, эритрил, ксилитол, ацетамид и диметилсульфоксид улучшают выживаемость сперматозоидов при замораживании (Paquignon М., 1985).
Но более высоким криозащитным действием на сперматозоиды хряков обладает глицерин (Wilmut I., Polge С, 1972; Salamon S. е.а., 1973).
Изучение влияния этиленгликоля и диэтиленгликоля не выявило их заметного защитного влияния при замораживании спермы хряков (Сердюк СИ., Беликов А.А., 1972).
Совместное введение в состав среды для замораживания спермы хряков глицерина, диметилацетамида и ДМСО оказало более высокое защитное действие (Dalrymple I.R., Macpherson I.W., 1969; Hahn R. е.а., 1974).
Анализ криозащитного действия на сперму хряков 63 различных протекторов показало более высокую эффективность глицерина (Graham E.F., Crabo B.G., 1972).
Сообщается о положительном влиянии на криоустойчивость спермы хряков эфира полиэтиленгликоля с полиненасыщенными жирными кислотами (Кичева М. и др., 1989).
Но, несмотря на положительное действие глицерина при замораживании, было установлено, что он может оказывать и негативное действие на оплодотворяющую способность половых клеток хряка (Neville W.I.e.a., 1970; Graham E.F.e.a, 1972). Глицерин способен подавлять дыхательную активность в сперматозоидах хряка (Sandford L.M.e.a.,1972).
Кроме того, он способствует повреждению акросом в половых клетках хряка (Jones R.C.,1973) и утечке ряда внутриклеточных ферментов (Crabo B.G. е.а., 1970; Bower R. е.а., 1973).
При повышении концентрации глицерина в среде до 5%, снижается оплодотворяющая способность даже свежеразбавленной спермы хряка (King G.I., Macpherrson I.W., 1967).
Ряд исследователей полагает, что антифертильное действие глицерина связано с его осмотическими эффектами (Смирнов И.В., Елец А.3.,1972; Смирнов И.В., 1976).
Введение в состав среды для спермы хряков 0, 1, 2, 3, 4 и 5% глицерина позволило получить после замораживания-оттаивания 5, 8, 16, 23, 25 и 22% подвижных сперматозоидов, а оплодотворяемость ооцитов составила соответственно 18, 27, 50, 15, 8 и 21% (Wilmut I., Polge С.,1971). Оптимальными были концентрации 2-4% глицерина.
Проведены опыты по добавлению глицерина в состав среды в разное время до замораживания. При этом показано, что введение глицерина сразу при разбавлении спермы или после её охлаждения до 0С позволило получить опоросы у 5 из 12 свиней и у 4 из 12 маток, соответственно (Osinovo О., Salamon S., 1976).
Сообщается о возможности замораживания спермы хряков и без добавления глицерина в состав среды (Graham Е.е.а., 1971; Polge С, 1976).
Но большинство исследователей считают, что оптимальной концентрацией глицерина в разбавленной сперме хряка является 2-3% (Кононов В.П.,1983; Pursel V., Johnson L.,1975; Larsson K.,1978; Paquignon M. 1985).
Другим важным событием в области замораживания спермы животных является открытие защитного действия против холодового шока сперматозоидов желтка куриных яиц (Phillips Р.Н., Lardy Н.А.,1940), после чего он стал использоваться в составе разбавителей спермы.
Криозащитное действие в основном оказывают липопротеиды желтка (Платов Е.М., 1973; Милованов В.К. и др., 1988; Kampachmidt R.F. е.а., 1953).
С использованием метода флуоресцентных меток было выяснено, что яичный желток соединяется с плазматической мембраной довольно непрочной связью и может быть удалён при отмывании сперматозоидов (Watson P.F., 1975).
Позднее было установлено с помощью ЭПР-спектроскопии, что защитное действие желтка на сперматозоиды животных может быть обусловлено его разупорядочивающим действием на липиды в плазматических мембранах (Кононов В.П., 1982; Ерохин А.С. и др., 1989).
Повышение концентрации желтка в среде для спермы хряков с 7,5 до 22,5%, улучшало подвижность сперматозоидов после оттаивания, но при этом снижалась их живучесть (Visser D., Salamon S., 1974).
Некоторые исследователи установили, что более высоким криозащитным действием на сперматозоиды хряка обладают липопротеины низкой плотности, выделенные из желтка куриных яиц (Foulkes I., 1977).
Поэтому некоторые авторы используют при замораживании спермы хряка супернатантную фракцию центрифугированного желтка (Graham Е. е.а., 1971; Pursel V., Johnson L., 1975). Защитным действием при замораживании спермы хряка обладает комплекс таких фосфолипидов, как фосфатидилсерин и холестерин (Moore Н., Hibbitt К, 1977). Криозащитным действием обладают не только фосфолипиды или липопротеиды куриного желтка, но и его белковая фракция (Iida I., Adachi I., 1966).
Анализ защитного влияния на охлаждённую сперму хряков эфира поливинилового спирта с фенозаном
Данный антиоксидант был синтезирован в Институте химической физики г.Москва и используется для хранения криоконсервированных образцов донорской крови. Мы решили изучить влияние различных дозировок данного препарата на живучесть сперматозоидов хряков при 16С.
Результаты наших опытов представлены в таблице № 3.
Проведённые эксперименты показали, что эфир поливинилового спирта с фенозаном не оказал положительного влияния на подвижность и живучесть сперматозоидов хряков, сохраняемых в охлаждённом состоянии.
Экспериментально установлено, что хитозан представляет собой N-диацетилированную форму хитина, обладает сорбционными, антибактериальными и антиоксидантными свойствами.
В связи с тем, что защитное влияние хитозана на сперму хряков не изучалось, мы решили выяснить влияние данного препарата на подвижность и живучесть сперматозоидов хряков при 4 и 16С.
Данные по изучению влияния хитозана на живучесть сперматозоидов хряка в ГХЦС среде представлены в таблице № 4.
Из таблицы № 4 видно, что хитозан в концентрациях 1,25-5 мг/мл среды заметно снизил абсолютный показатель живучести сперматозоидов при обеих температурах хранения. Остальные изученные дозы препарата также не оказали положительного влияния на живучесть сперматозоидов хряков в ГХЦС среде.
Анализ живучести сперматозоидов хряка при разбавлении спермы ГХЦ средой показан в таблице № 5.
Как видно из данных таблицы № 5, хитозан в концентрациях 0,62-0,5 мг/мл среды, оказал отрицательное влияние на живучесть сперматозоидов. Особенно это характерно при хранении спермы при 16С. Все остальные концентрации хитозана не оказывали положительного влияния на живучесть сперматозоидов хряка в ГХЦ среде при обоих температурных режимах.
Из данных таблицы № 7 видно, что все изученные антиоксиданты в оптимальных концентрациях способствовали повышению живучести сперматозоидов хряка при 16С.
Более высоким защитным эффектом обладали антиоксиданты ИХФГАН-2 и ИХФГАН-3 в концентрациях 0,015-0,002 мг/мл. Так, при концентрации ИХФГАН-3, равной 0,004 мг/мл и 0,008 мг/мл, живучесть сперматозоидов повысилась по сравнению с контролем на 12,9 и 12% соответственно.
Меньшим защитным эффектом обладал антиоксидант № 1. Его защитное действие проявилось только при концентрации 0,002 мг/мл. В этой группе живучесть сперматозоидов по сравнению с контролем была выше на 7,5%.
Анализ защитного действия антиоксидантов при хранении спермы хряка в охлаждённом до 4С состоянии суммирован в таблице № 8.
Из таблицы № 8 видно, что все три антиоксиданта в определённых концентрациях способствовали увеличению живучести сперматозоидов хряка при 4С.
Оптимальные концентрации всех антиоксидантов в составе среды находились в пределах 0,002-0,008 мг/мл. При данных концентрациях всех антиоксидантов ИХФГАН живучесть сперматозоидов повышалась на 14-19% по сравнению с контролем.
В связи с тем, что при изучении защитного влияния на охлаждённую сперму хряков было установлено более высокое защитное влияние антиоксиданта ИХФГАН-3, мы решили выяснить действие данного препарата на оплодотворяющую способность спермы хряков.
С этой целью нами были проведены опыты по искусственному осеменению маток спермой, сохраняемой с оптимальной дозировкой данного антиоксиданта (0,004 мг/мл) в течение 24 и 72 часов при температуре 16С. Результаты данного эксперимента приведены в таблице № 9. -Р 0,05
Результаты таблицы № 9 свидетельствуют, что введение в состав ГХЦС среды для хранения охлаждённой спермы хряков антиоксиданта ИХФГАН-3 оказало отрицательный эффект на фертильность спермы. После 24 часов хранения спермы с данным препаратом опоросилось на 25% меньше свиноматок по сравнению с контролем.
В предыдущих экспериментах, проведённых в лаборатории криобиологии и физиологии размножения животных ВНИИплем было установлено, что добавление в состав ГХЦС среды оптимальной концентрации бычьего сывороточного альбумина и тиольного соединения, значительно улучшает живучесть и подвижность сперматозоидов хряка, сохраняемых при 16С (Пухтинов О.Н.,2004).
На основании лабораторных исследований была предложена усовершенствованная ГХЦС среда, содержащая: вода дистиллированная -1000 мл; глюкоза - 60 г; трилон-Б - 3,7 г; бикарбонат натрия - 2 г; бычий сывороточный альбумин -2 г; тиольное соединение - 0,02 г; полиген - 0,3 г.
Однако, данная среда не была изучена в практических условиях по результативности искусственного осеменения моток спермой, сохраняемой в этой среде при 16С в течении 3-5 суток.
Поэтому, в задачу наших исследований входило проведение производственного эксперимента по изучению результативности искусственного осеменения маток охлаждённой спермой, сохраняемой в данной среде при 16С в течение 24, 72 и 120 часов.
Эксперименты были проведены на свинокомплексе «Мордовский бекон» в Республике Мордовия. Свиноматок искусственно осеменяли дважды в течение эструса спермой, разбавленной усовершенствованной ГХЦС средой и сохраняемой при 16С в течение 1-5 суток. В контроле свиноматок осеменяли спермой таких же сроков хранения, но разбавленной обычной ГХЦС средой без добавления бычьего альбумина и тиольного соединения.
Выявление оптимальных соотношений веществ, входящих в состав усовершенствованной среды для замораживания спермы хряков
Актуальной задачей в свиноводстве остаётся дальнейшее совершенствование синтетических сред для глубокого замораживания семени хряков.
К настоящему времени разработаны различные среды для замораживания спермы хряков (Кононов В.П.,1983; Корбан Н.В.,1988; Нарижный А.Г.,1995; Larsson К. е.а.,1977; Pursel V., Johnson L.,1975; WestendorfP. е.а.,1975).
Но основным недостатком многих сред является то, что большое число сперматозоидов погибает в процессе замораживания-оттаивания и результативность искусственного осеменения свиней замороженной спермой всё ещё остаётся не достаточно высокой и стабильной.
Для повышения криоустойчивости спермы хряков предложено использовать различные антиоксиданты в составе разбавителей спермы (Гуськов А.М.,1997; Нарижный А.Г. и др.,1995).
Поиск более эффективных препаратов для защиты сперматозоидов хряка от чрезмерной пероксидации липидов при замораживании представляет несомненный научный и практический интерес.
В связи с этим, целью нашей работы в данном разделе диссертации было совершенствование синтетической среды для хранения спермы хряков в глубокозамороженном состоянии путём использования различных криопротекторов и антиоксидантов.
В качестве неэлектролита за основу среды мы взяли глюкозу. В качестве веществ, оказывающих буферное действие, были использованы трис-(оксиметил)-аминометан и трилон-Б.
В первом эксперименте мы выясняли влияние различных соотношений изотонических растворов данных соединений на подвижность и живучесть сперматозоидов хряка при 37С. Результаты этого опыта суммированы в таблице № 12.
Затем, на основании этих лабораторных исследований, нами были отобраны 7 вариантов смесей изучаемых компонентов, которые обеспечивали наиболее высокую живучесть сперматозоидов хряков при 37С. После чего, была проверена эффективность этих вариантов сред при замораживании спермы хряков. Результаты этих опытов показали, что наиболее оптимальным вариантом была среда № 44, которая содержит: вода дистиллированная- 100 мл; глюкоза- 1,32 г; трис-(оксиметил)-аминометан 0,4 г; трилон-Б - 2,8 г. После этого мы уточнили защитное влияние разных концентраций глицерина в составе данной среды. При этом сперму хряков перед замораживанием разбавляли этой средой в соотношении 1:1.
Влияние разных концентраций глицерина в составе усовершенствованной среды на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов хряков
Концентрация глицерина всреде, % Число опытов Подвижностьспермиев дозамораживания,% Подвижностьспермиевпослеоттаивания, % Абсолютныйпоказательживучестиспермиев при37С, усл.ед. -Р 0,01 Эксперименты показали (таблица № 13), что оптимальной концентрацией глицерина, обеспечивающей высокую подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов, является 5-6% глицерина.
Анализ влияния разных концентраций желтка куриного яйца показал, что оптимальной концентрацией в составе усовершенствованной среды является 20-25 мл желтка на 100 мл среды (таблица №14).
Концентрацияжелтка в среде,мл/100млсреды Число опытов Подвижностьспермиев дозамораживания,в% Подвижностьспермиевпослеоттаивания,в% Абсолютныйпоказательживучестипри 37С,усл.ед.
Таким образом, в результате лабораторных экспериментов нами была разработана синтетическая среда для замораживания спермы хряков, состоящая из следующих компонентов: 1. Вода дистиллированная —100 мл
Известно, что в сперме животных, при криоконсервации могут индуцироваться процессы перекисного окисления липидов, что способствует повреждению мембранных структур сперматозоидов, ДНК и других биомолекул. В результате этого может снижаться оплодотворяющая способность замороженной спермы (Наук В.А., Гуськов А., 1983; Aitken R.e.a.,1989).
Поэтому во многих странах мира проводятся эксперименты по изучению возможности снижения пероксидации липидов при замораживании спермы хряков, путём введения в состав разбавителя различных натуральных и синтетических антиоксидантов (Кононов В.Г., Нарижный А.Г.,1985; Watson P.F.e.a., 1995).
В задачу наших исследований входило изучение защитного влияния различных синтетических антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов хряка к глубокому замораживанию при использовании нашей усовершенствованной ГХЦС среды. Эксперименты были проведены с использованием спермы хряков крупной белой породы.
