Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 9
1.1 Роль микроорганизмов, как про- и пребиотических компонентов при разработке кормовых добавок 9
1.2 Особенности культивирования пробиотических микроорганизмов 29
1.3 Применение энтеросорбентов в ветеринарии 34
2 Материалы и методы исследований 42
3 Результаты исследований и их обсуждение 56
3.1 Состав, технология получения и оценка качества пробиотической кормовой добавки Трилактосорб 56
3.2 Изучение жизнеспособности микрофлоры, входящей в состав пробиотической кормовой добавки Трилактосорб 68
3.3 Оценка общего титра штаммов-пробионтов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб 70
3.4 Оценка токсикологического и раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб 71
3.4.1 Определение токсичности на стилонихиях 72
3.4.2 Определение острой токсичности на лабораторных животных 73
3.4.3 Определение хронической токсичности на лабораторных животных и птице 75
3.4.4 Определение кожно-резорбтивного и раздражающего свойства 81
3.4.5 Оценка антибактериальной и кислотообразующей активностей штаммов-пробионтов 84
3.5 Изучение фармакологических свойств пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в перепеловодстве 89
3.5.1 Морфологические и биохимические показатели крови птиц 89
3.5.2 Влияние на пищеварение 92
3.5.3 Мясная продуктивность, развитие внутренних органов и качество мяса перепелов 95
3.5.4 Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса перепелов 103
3.6 Эффективность использования пробиотической кормовой добавки Трилактосорб 107
3.7 Экономическая эффективность применения кормовой добавки Трилактосорб 113
Заключение 118
Выводы 138
Предложения производству 140
Список использованной литературы 141
- Применение энтеросорбентов в ветеринарии
- Изучение жизнеспособности микрофлоры, входящей в состав пробиотической кормовой добавки Трилактосорб
- Оценка токсикологического и раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб
- Морфологические и биохимические показатели крови птиц
Введение к работе
Актуальность темы. Концепцией развития птицеводства, разработанной Министерством сельского хозяйства РФ на период до 2020 г. предусмотрено увеличение производства мяса птицы в стране до 4,5 млн. т. Это требует внедрения инновационных технологий в содержании и кормлении птицы. Развитие биотехнологии в создании новых высокоэффективных ветеринарных препаратов и функциональных кормовых добавок для ветеринарии открывает широкие перспективы повышения уровня реализации генетического потенциала сельскохозяйственных птиц(Антипов В. А., 2008; Кошаева О. В., 2003).
Одним из перспективным направлений в птицеводстве является перепело-водство, главная задача которого обеспечение населения качественным и экологически безопасным мясом и яйцом, обладающим высокими диетическими свойствами (Скворцова Л. Н., 2010; Лысенко Ю. А., 2012; Петенко А. И., 2012).
Между тем, одним из сдерживающих факторов дальнейшего развития птицеводства, в частности перепело вод ства, являются дисбактериозы, которые в первую очередь вызваны нарушением микробного биоценоза желудочно-кишечного тракта. Нормальное соотношение микроорганизмов играет важную роль в обеспечении иммуностимулирующей, витаминосинтезирующей, ферментативной и других функций организма птиц (Башкиров О. Г., 2003; Каблу-чеева Т. И, 2006; Петенко А. И. и др, 2012).
Данная проблема приобретает особую остроту еще и потому, что Россия, вступив в ВТО, должна, как и страны ЕС исключить использование антибиотиков в рационах птиц. Мировой опыт свидетельствует, что в решении этих проблем большее значение имеет использование препаратов и добавок микробиологического направления. Попадая в организм хозяина они, вытесняя из кишечника патогенные микроорганизмы за счет секреции антибиотических веществ, не влияют на представителей нормальной кишечной микрофлоры и способствуют нормализации процессов пищеварения (Ермакова Т. И., 2006; Каб-лучеева Т. И., 2006; Гудзь Г. П., 2008; Петенко А. И., 2012).
Кроме того, применение сорбентов обеспечивает снижение токсического действия органических поллютантов, которые содержатся в кормах, полученных с нарушением технологии производства (Овчинников А. А., 2005; Семе-ненко М. П., 2008; Крюков Н. И., 2011).
Таким образом, разработка и внедрение биотехнологических препаратов и добавок, альтернативных кормовым антибиотикам - является актуальным в решении важной народнохозяйственной проблемы обеспечения населения России экологически безопасной продукцией птицеводства.
В соответствии с темой № 12: «Разработка и научное обоснование способов получения и использования экологически безопасных функциональных кормовых и пищевых концентратов и добавок на основе ресурсосберегающих биотехнологий: высококалорийные концентраты и добавки; микробиологические добавки и биопрепараты», диссертационная работа является частью тема-
тического плана НИОКР, утвержденных ученым советом ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» на 2011-2015 гг. (№ госрегистрации 01201153631).
Цель работы - изучить токсикологические и фармакологические свойства комплексной кормовой добавки Трилактосорб, а также определить эффективность её использования в мясном перепеловодстве.
В соответствии с целью исследований были поставлены следующие задачи:
дать характеристику составу, технологии изготовления и контролю качества кормовой добавки Трилактосорб;
определить жизнеспособность микроорганизмов, входящих в состав кормовой добавки Трилактосорб в процессе хранения;
изучить антагонистические и кислотообразующие свойства штаммов-пробионтов кормовой добавки Трилактосорб;
определить токсикологическое и раздражающее действие комплексной кормовой добавки Трилактосорб;
исследовать фармакологические свойства кормовой добавки Трилактосорб на перепелах при разных схемах её использования;
установить влияние кормовой добавки Трилактосорб мясную продуктивность перепелов, качество получаемой продукции;
разработать экономически эффективную схему применения кормовой добавки Трилактосорб в промышленном перепеловодстве.
Научная новизна. Впервые разработана кормовая добавка Трилактосорб на растительной основе с сорбирующими свойствами (СТО 9291-010-00493209-14). Изучены ее основные токсикологические и фармакологические свойства. Установлено влияние кормовой добавки Трилактосорб на физиолого-биохимические показатели организма перепелов, сохранность поголовья, мясную продуктивность и качество мясной продукции. Изучено влияние добавки Трилактосорб на пищеварение перепелов. Предложена производству схема применения кормовой добавки Трилактосорб в мясном перепеловодстве. По результатам исследований получен патент РФ на изобретение № 2498608.
Практическая значимость. Полученные в результате изучения фармакологических и токсикологических свойств кормовой добавки Трилактосорб данные могут быть использованы в перепеловодческих хозяйствах для повышения жизнеспособности птиц, экономически эффективного получения высококачественной мясной продукции.
Разработаны технические условия к кормовой добавке Трилактосорб (СТО 9291-010-00493209-14). Руководителем государственного управления ветеринарии Краснодарского края утверждены «Рекомендации по использованию пробиотической кормовой добавки Трилактосорб в перепеловодстве».
Основные положения, выносимые на защиту:
- состав, технология получения и контроль качества кормовой добавки
Трилактосорб;
антагонистические и кислотообразующие свойства добавки Трилактосорб;
токсикологическое и раздражающее действие добавки Трилактосорб;
фармакологические свойства различных схем использования кормовой добавки Трилактосорб в перепеловодстве;
физиолого-биохимические показатели организма перепелов после применения Трилактосорба;
сохранность перепелов, продуктивность, качество получаемой мясной продукции при применении добавки Трилактосорб;
экономическая эффективность использования кормовой добавки Трилактосорб в мясном перепеловодстве.
Апробация работы. Материалы научно-исследовательской работы доложены и обсуждены на: VI Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (Краснодар, 2012); Конференции по итогам научно-исследовательской работы за 2012 г. (Краснодар, 2013);IV Международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Молодежь и аграрная наука XXI века: проблемы и перспективы» (Курск, 2013); Международной научно-практической конференции «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (Московская обл., 2013); X Международной научно-практической конференции «Прикладные научные разработки - 2014» (Прага, 2014).
Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 12 научных статей, из которых пять в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ: «Ветеринария Кубани» - 2, «Труды Кубанского государственного аграрного университета» - 2, «Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета» - 1.
Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, заключение, выводы, предложения производству, список использованной литературы и приложение. Работа изложена на 168 страницах машинописного текста и содержит 28 таблиц, 15 рисунков, а также в себя включает 4 приложения. Список использованной литературы содержит 239 источника, из которых 26 на иностранном языке.
Применение энтеросорбентов в ветеринарии
Создание и широкое внедрение в ветеринарную практику кормовых добавок на основе живых микробных культур или продуктов их метаболизма является важной и актуальной задачей современной биологической науки [12; 33; 34; 80; 145; 159].
Пробиотические кормовые добавки разнообразного спектра действия стали неотъемлемой частью современных рационов. Они используются для балансировки, повышения усвояемости питательных веществ, снижения токсичности и бактериальной обсемененности кормов. Одна из основных целей разработки и использования кормовых добавок - улучшить продуктивность и сохранность сельскохозяйственной птицы. Такой же цели служат про- и пребиотики, которые используются для улучшения здоровья пищеварительного тракта птицы. Последние в свою очередь способствуют восстановлению позитивной микрофлоры и стимулируют ее размножение в кишечнике, повышают переваримость питательных веществ корма. Введенные пробиотические штаммы бактерий взаимодействуют с микрофлорой кишечника, адсорбируют метаболиты, оказывающие положительное действие на активность иммунной, гормональной, пищеварительной систем организма-хозяина [3; 7; 9; 11].
Современное промышленное птицеводство направлено на получение максимальной продуктивности птицы при минимальных затратах. Продуктивность птицы напрямую зависит от качества и количества, применяемого комбикорма [146].
Сбалансированный рацион - это рацион, снабжающий всеми питательными веществами, необходимыми для суточных потребностей организма птицы, а также энергией, обеспечивающей протекание жизненных про цессов. Для того чтобы его оптимизировать по всем питательным веществам, макро- и микроэлементам сейчас активно применяют кормовые добавки, которые в свою очередь повышают усвояемость корма, что стимулирует рост и продуктивность [18; 34; 64; 86].
На данном этапе основным сырьем для получения кормовых добавок являются:
Кормовые аминокислоты. Метионин, лизин и треонин - основные аминокислоты, которые должны входить в состав рациона. Причем последние две являются незаменимыми лимитирующими аминокислотами. В растительных кормах данные аминокислоты содержатся в незначительных количествах, поэтому в рационах птицы их часто вводят дополнительно в состав премиксов. Метионин в организме является основным источником серы, а также участвует в регуляции белкового и жирового обмена. Это особенно важно при смене оперения у птицы, когда резко возрастает потребность в этой аминокислоте.
Минеральные элементы и витамины. Их дефицит в составе комбикормов причиняет существенный урон птицеводству. Их нехватка в организме птицы приводит к снижению иммунитета, продуктивности, ухудшению качества мяса и яиц, резкому уменьшению массы птицы и сохранности. Высока потребность в минеральных веществах и витаминах у молодняка птицы, находящегося в процессе интенсивного роста. Необходимо учитывать, что минеральные элементы и витамины в организме птицы не образуются, а поступают только извне за счет кормовых добавок.
Адсорбенты микотоксинов - кормовые добавки, содержащие органические и минеральные вещества с высокой сорбционной способностью. Их основной функцией является связывание микотоксинов за счет чего происходит их адсорбция, контроль за ростом микроскопических грибов в кормах и их компонентов зерновых. Такие специальные кормовые добавки являются наиболее эффективным подходом в профилактике и лечении мико-токсикозов, снижающих продуктивность и приводящих к гибели птицы. ? Антиоксиданты - кормовые добавки, предназначенные для предотвращения окисления жиров в кормовом сырье и комбикормах, содержащие питательные белковые вещества и минеральные добавки. Такие корма характеризуются высокой стабильностью компонентов, что позволяет избежать окисления кормов, вследствие чего увеличивается усвоение питательных веществ корма и улучшается вкусовые качества корма, что в конечном итоге приводит повышению привесов птицы.
Ингибиторы плесени - кормовые добавки, состоящие из органических и неорганических кислот и их солей, применяемые для предотвращения поражений кормового сырья микотоксинами и плесневыми грибками. Зараженность кормов грибами приводит к синтезу большого количества токсинов, что приводит к снижению продуктивности и конверсии корма, вызывая отравления в поголовье.
Про- и пребиотики - необходимые компоненты кормовых добавок. Пробиотики - препарат, содержащий микроорганизмы, которые оказывают благоприятное воздействие на организм птицы путем улучшения микробного баланса в кишечнике. В основном представлены бифидо- и лактобакте-риями, бациллами, и редко дрожжами. Пребиотики - добавки, содержащие органические субстраты (инулин, галактоолигосахариды, лактулоза, фибро-гам, резистентные крахмалы, полидекстроза и др.), стимулирующие развитие естественной микрофлоры кишечника. Комбинация про- и пребиотиков называется - синбиотиком. Такой комплекс оказывет взаимно усиливающее действие на физиологические процессы и функции обмена веществ в организме птицы.
Изучение жизнеспособности микрофлоры, входящей в состав пробиотической кормовой добавки Трилактосорб
В условиях производства птица содержались в металлических клетках. Ярус состоял из трех секций, каждая из которых рассчитана на 30 голов. Система поения – ниппельная, к которым производственная птица имела постоянный свободный доступ. Раздача кормов механическая: в первую неделю перепелята получали комбикорма 3 раза в сутки, а далее – 2 раза. Влажность воздуха, температура, освещенность помещения выдерживались в соответствии с требованиями ВНИТИП [77]. Перепела в опытные периоды потребляли комбикорма, сбалансированные по основным питательным и биологически активным веществам в соответствии с возрастными нормами. Продолжительность производственного опыта составила 42 дня.
Динамику живой массы лабораторных животных и перепелов в каждой группе изучали путем индивидуального взвешивания еженедельно. Прирост живой массы определяли за весь период выращивания (42 дня). Абсолютный среднесуточный прирост рассчитывали по формуле [77]: Пабс = (Мк – Мн) / Д, где: Пабс. – абсолютный среднесуточный прирост, г; Мк – живая масса особи в конце периода эксперимента, г; Мн – живая масса особи в начале периода эксперимента, г; Д – количество дней эксперимента, дни. Ежедневно проводили контроль за сохранностью и падежом поголовья. Сохранность рассчитывали в процентах от начального поголовья по отдельным периодам выращивания и за весь период в целом.
Потребление кормов и кормовых добавок птицей в каждой группе рассчитывали ежедневно с первого дня и в течение всего эксперимента. По полученным данным вычисляли затраты кормов на одну голову и 1 кг прироста живой массы птицы (конверсия).
Для изучения мясной продуктивности в 42-х дневном возрасте проводили контрольный убой и анатомическую разделку птиц из каждой группы. До убоя перепелов выдерживали на голодной диете в течение 12 часов. Учет вели по следующим показателям: живая масса птицы перед убоем, масса потрошеной тушки, масса грудных, ножных и остальных мышц, масса печени, сердца, мышечного желудка, железистого желудка и кишечника.
О состоянии и качестве мяса перепелов, после употребления ими кормовой добавки, судили по результатам ветеринарно-санитарной экспертизы. Послеубойную ветеринарно-санитарную экспертизу мяса вынужденно забитых перепелов и проведение её физико-химических исследований (реакции на пероксидазу, с сернокислой медью и формалином, определение количества летучих жирных кислот) осуществляли согласно утвержденной документации [138]. Определение кислотности (pH) мяса птиц изучалось на приборе Иономер pH-метр И-500, согласно ГОСТ Р 51478-99 [56]. Изучение органолептических показателей проводили по ГОСТ Р 51944-2002 [57], упитанности согласно ГОСТ Р 54673-2011 [59]. Микробиологическую загрязненность мяса перепелов изучали по мазкам-отпечаткам с поверхности тушек, а также более глубоких слоев мышц согласно ГОСТ Р 50396.1-92 [54]. Дегустационную оценку мяса перепелов осуществляли согласно рекомендациям ВНИТИП [77].
Для изучения переваримости и использования питательных веществ комбикорма контрольных и опытных групп перепелов проводился балансо вый опыт в период с 35 по 42 сутки выращивания птицы, согласно методики ВНИТИП [77].
Химический анализ кормов и продуктов вторичного метаболизма пти цы проводили по следующим методикам: отбор проб по ГОСТ 26712-94 [49]; определение влаги ГОСТ 13496.3-92 [43], сухого остатка – ГОСТ 26713-85 [50], сырого протеина – ГОСТ 13496.4-93 [44], сырого жира – ГОСТ 13496.15-97 [41], сырой золы – ГОСТ 26226-95 [47], сырой клетчатки ГОСТ 13496.2-91 [42], кальция – ГОСТ 26570-95 [48].
Для изучения морфологических и биохимических показателей крови подопытных групп лабораторных животных и перепелов во время контрольного убоя производили забор крови в специальные пробирки с антикоагулянтом и с активатором свертывания.
Изучение морфологических показателей крови мышей проводили на анализаторе Medonic CA 620. Определение морфологических показателей крови перепелов осуществляли в камере с сеткой Горяева. Гемоглобин птиц измеряли на анализаторе НemoCue Hb 201+.
Биохимические показатели сыворотки крови лабораторных животных и птиц изучали на полуавтоматическом анализаторе Stat fax 1904 Plus. Определяли уровень общего белка, альбуминов, содержание мочевины, холестерина, фосфора, кальция, активность аланинаминотрансфераз (АлАТ) и аспар-татаминотрансфераз (АсАТ). Подсчет глобулинов осуществляли на спектрофотометре Unico 2800 UK/VIS по методике определения белковых фракций в сыворотке крови. В качестве дополнительного показателя белкового обмена рассчитывали альбумин-глобулиновый коэффициент.
Изучение химического состава мышечной ткани перепелов проводили следующими методами: отбор проб осуществляли по ГОСТ 9792-73 [52], определение содержания влаги – ГОСТ 9793-74 [53], определение содержания жира – ГОСТ 23042-78 [45], определение количества белка – ГОСТ 25011-81 [46]. Согласно рекомендациям ВНИТИП [77] определяли ин декс качества мяса птиц путем отношения количества белка к жиру. Энергетическую ценность мышц перепелов рассчитывали по формуле ВНИТИП:
Аминокислотный состав мышц перепелов изучался на полуавтоматическом приборе «Капель – 105» методом капиллярного электрофореза. Белки для электрофореза гидролизовали кислотным способом.
Уровень токсических элементов (мышьяка, свинца, кадмия и ртути) в анализируемых образцах мышечной ткани перепелов определяли методом атомно-абсорбционной спектрометрии с электротермической авторизацией химических элементов на спектрометре «Квант-Z.ЭТА». Метод основан на минерализации продукта смесью кислот и реагентов-окислителей, проведении реакций элементов в полученном растворе-минерализате, отгонки летучего соединения потоком аргона в разогретую кварцевую кювету-атомизатор и измерении доли токсического элемента атомно-абсорбционным методом по величине атомного поглощения на резонансной длине волны.
Для изучения титра лакто- и бифидобактерий в кишечнике подопытных перепелов, после использования кормовых добавок, во время контрольного убоя (в возрасте 42-х дней) отбирали содержимое слепых отростков и прямой кишки для микробиологических исследований. Из отобранного материала путем последовательных разведений готовили пробы, которые затем переносили на чашки Петри с заранее приготовленной питательной средой: МРС (для лактобактерий) и модифицированная печеночная среда Блаурокка (для бифидобактерий). Отбор проб материала, выделение и идентификация бактерий кишечника птиц осуществлялась согласно методическим рекомендациям «Выделение и идентификация бактерий желудочно-кишечного тракта животных» [110].
Расчеты экономической эффективности использования кормовой добавки Трилактосорб на перепелах проводили с учетом стоимости его расхода, потребленного комбикорма на один кг прироста живой массы птицы и сохранностью поголовья. При этом учитывали фактическую стоимость комбикормов и цену продукции перепеловодства в период проведения испытаний. Все результаты проведенных исследований обрабатывали методом вариационной статистики [92]. Различие расценивалось как достоверное при Р 0,05.
Оценка токсикологического и раздражающего действия пробиотической кормовой добавки Трилактосорб
Кормовая добавка Трилактосорб (СТО 9291-010-00493209-14) является инновационной разработкой кафедры биотехнологии, биохимии и биофизики ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет». Добавка представляет собой сухую смесь, состоящей из трех видов термофильных молочнокислых культур (Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus del bruеckii subsp. bulgaricus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634), выращен ных на соевом растительном сырье с применением минерального сорбента. Культуры предоставлены ФГБНУ «Всероссийский научно исследовательский институт молочной промышленности» г. Москва. В 1 г готового продукта содержится не менее 1,0 108 КОЕ микроорганизмов. Благодаря уникальному компонентному составу добавка проявляет сорбирующие и антитоксические свойства, а присутствующая в ней микрофлора способна максимально приживаться в желудочно-кишечном тракте перепелов, в связи с физиологическими особенностями данного вида сельскохозяйственной птицы.
Используемые в кормовой добавке Трилактосорб компоненты выполняют определенные функции. Так как молочнокислая флора является естественным представителем микробного биоценоза желудочно-кишечного тракта, она нормализует баланс кишечной микрофлоры в сторону полезных микроорганизмов. Попадая в организм хозяина, молочнокислые микроорганизмы продуцируют органические кислоты, которые в свою очередь снижают рН среды, в результате чего происходит ингибирование роста и развития патогенной микрофлоры. Продукты переработки сои, в частности окара, используемая в составе добавки Трилактосорб содержит клетчатку, белок, макро-, микроэлементы и витамины [163]. Питательная ценность окары определяется белковой составляющей, комплексом олигосахаридов и поли-56 ненасыщенных жирных кислот. Научные исследования показали наличие в соевых олигосахаридах бифидогенных свойств, что положительно влияет на микрофлору кишечного тракта. Следует отметить, что соевая окара содержит как заменимые, так и незаменимые аминокислоты, а по аминокислотному окара близка к показателям ФАО/ВОЗ и обладает значительной степенью усвояемости [158]. Присутствующий в добавке сорбент минерального происхождения (вспученный вермикулит) обладает высокими ионообменными свойствами, что позволяет ему отдавать в легкоусвояемой форме ионы магния, калия, кальция, натрия и т. д., а также обеспечивает выведение радионуклидов и других токсических элементов из организма. Совокупность всех компонентов кормовой добавки Трилактосорб говорит о её высоких лечебно-профилактических и питательных свойствах.
Культуры, входящие в состав комплексной кормовой добавки Трилак-тосорб применяются при производстве молочных продуктов на территории РФ и за рубежом, а также включены в список микроорганизмов с документально подтвержденной историей безопасного применения в пищевых продуктах (Бюллетень Международной Молочной Федерации № 377/2002). Согласно санитарным правилам (СанПин 1.2.731-99) используемые культуры относятся к микрофлоре непатогенной для организма человека.
Используемая в добавке микрофлора входит во Всероссийскую коллекцию промышленным микроорганизмов, включенной Постановлением Правительства РФ от 24.06.1996 г. № 725-47 в «Перечень коллекций, депонирующих для государственных нужд микроорганизмы, культивируемые клетки растений и соматические клетки позвоночных». Микроорганизмы выделены из естественных или производственных источников без применения генных модификаций, идентифицированы и паспортизованы в установленном порядке.
Рисунок 6 - Микропрепарат чистой культуры Str. thermophilus. Увеличение 1500. Streptococcus thermophilus В-2894 (термофильный cтрептококк) - сильный кислотообразующий компонент молочнокислых заквасок, способный к развитию и кислотообразованию при температурах свыше 50 С. Представляет собой гомоферментативный, факультативно-анаэробный, термофильный, грамположительный кокк. Интервал температуры роста составляет 15,0-55,0 С; оптимум - 40,0-46,0 С. Предельная кислотность достигаемая в молоке - 110,0-120,0 Т. В микропрепарате культура имеет круглую, овальную и сферическую формы, размером (0,5-0,7) (0,7-1,0) мкм и представлена одиночно, парно или цепочками различной длины (бусы) (рисунок 6).
Lactobacillus debrueckii subsp. bulgaricus В-6543 (болгарская палочка) -сильный кислотообразующий компонент молочнокислых заквасок, способный к развитию и кислотообразованию при температурах свыше 50 С. Представляет собой термофильные, гомоферментативные, факультативно-анаэробные, грамположительные, не образующие спор палочки правильной формы. Интервал температуры роста составляет 20,0,0-55,0 С; оптимум -40,0-45,0 С. Предельная кислотность достигаемая в молоке-200,0-350,0 Т. В микропрепарате культура представлена крупными палочками с закругленными концами, размером (0,8-1,5) (2,0-20,0) мкм, расположены одиночно, цепочки различной длины, часто зернистые (рисунок 7).
Lactobacillus acidophilus В-8634 (ацидофильная палочка) - сильный кислотообразователь, антагонист патогенной и технически вредной микрофлоры. Представляет собой термофильные, гомоферментативные, факультативно-анаэробные грамположительные неспорообразующие палочки правильной формы. Интервал температуры роста составляет 20,0-55,0 С; оптимум - 37,0-45,0 С. Предельная кислотность, достигаемая в молоке -180,0-300,0 Т. В микропрепарате культура представлена крупными прямыми палочками размером (0,6-1,5) (3,0-40,0) мкм, расположенные одиночно, парно или в виде коротких цепочек (рисунок 8). Рисунок 8 - Микропрепарат чистой культуры Lbc. acidophilus.
Для получения соевого молока и окары, как основы для производства кормовой добавки Трилактосорб использовали сою сорта Альба. Соевое зерно тщательно промывали водой, заливали 3-4 частями воды по отношению к массе сухого зерна и оставляется при температуре 16-17 С на 12-14 часов. Разбухшие зерна вновь промывали водой, размалывали на дробилке и вальцах, с добавлением воды (из расчета 0,5 литра на 1 кг сухого зерна). Затем массу пропускали через вальцы. К размолотой массе добавляли воду температурой 20 С из расчета 6 частей воды на 1 часть сухого зерна. Массу размешивали с водой, и выдерживали 30 мин, после чего фильтровали через сито с отверстиями, диаметр которых равен 0,2 мм. После фильтрования получали нерастворимый соевый остаток (окару) и суспензию (молоко). Затем соевое молоко и окару автоклавируют для разрушения антипитательных веществ и дальнейшего засева культуры.
Для получения кормовой добавки Трилактосорб использовали сухие бактериальные концентраты трех видов молочнокислых микроорганизмов {Streptococcus thermophiles В-2894, Lactobacillus delbruеchi subsp. bulgarwus В-6543, Lactobacillus acidophilus В-8634). Бактериальную культуры каждого микроорганизма, содержащая 1 ЕА жизнеспособных клеток, совместно акти визировали в 1,0 л соевого молока в течение суток при температуре 4042 С. Далее в стерильных условиях от массы стерилизованной питательной среды (соевой окары) засевали на неё 10,0 % активизированной культуры. Засев микрофлоры на указанную питательную среду осуществляли при температуре 3840 С, что способствует снижению температурного «шока» микроорганизмов. В процессе выращивания температуру субстрата повышали на 4-5 С/ч, доводя до температуры не менее, чем до 5052 С. Культивирование при данной температуре проводили в течение 67 ч, что позволяет ускорить процесс выращивания микроорганизмов, а кроме того, при последующем вводе микрофлоры в виде добавки в организм хозяина обеспечивает их высокую жизнеспособность [126]. По истечению данного времени для снижения влажности субстрата и придания будующей пробиотической добавке сорбирующих и антитоксических свойств, от массы питательной среды, методом ступенчатого смешивания, вводили 10,0 % минерального сорбента (вспученный вермикулит – ТУ 5712-001-76685354-09), что обеспечивало его равномерное распределение в смеси. Затем, для достижения необходимой массовой доли влаги смесь подсушивали в течение 24 ч при температуре 4042 С, что обеспечивало максимальное сохранение жизнеспособных клеток. Высушенную массу измельчали и упаковывали.
Морфологические и биохимические показатели крови птиц
Изучение фармакологических свойств кормовой добавки Трилактосорб осуществляли на перепелах породы фараон мясного направления, оценивая их основные процессы обмена веществ, а также хозяйственные показатели, полученные в процессе выращивания данного вида птицы на производстве. Испытания проводились в КФХ «Пуклич Р. М.», Республика Адыгея.
Для подбора оптимальной дозы использования кормовой добавки Три лактосорб был проведен первый научно-хозяйственный опыт в производственных условиях. Для этого методом групп-аналогов было сформировано четыре группы перепелов по 90 голов в каждой: контрольная группа в рационе птиц присутствовал только основной полноценный ком бикорм, рекомендованный ВНИТИП; 1-я опытная группа с основным ра ционом в течение всего периода выращивания задавали перепелам Трилакто сорб в дозе 0,2 % к массе корма; 2-я опытная группа – в комбикорм добавля ли Трилактосорб в дозе 0,5 % на массу корма; 3-я опытная группа – перепела получали комбикормом с Трилактосорбом в дозировке 1,0 % на массу корма. Продолжительность научно-хозяйственного эксперимента составила 42 дня. Изучение морфо-биохимического статуса крови живого организма имеет огромное значение не только в диагностике различных заболеваний, но и позволяет выявить влияние новых препаратов и добавок на его состояние в целом. В этой связи, в возрасте 42-х дней проводили забор крови у перепелов из каждой исследуемой группы для изучения их морфологических и биохимических показателей после использования различных доз кормовой добавки Трилактосорб. Результаты морфо-биохимических показателей крови перепелов представлены в таблице 14.
Результаты изучения отдельных показателей общего анализа крови птиц, после использования различных доз кормовой добавки Трилактосорб показали, что в 1-й опытной группе, которая получала добавку в дозе 0,2 % к массе корма, количество эритроцитов было больше, чем в контрольной группе на 1,83 %. При этом, статистически достоверная разница по данному показателю была выражена во 2-й и 3-й опытных группах, в 1,0 мл крови которых содержание эритроцитов было значительно выше, чем в контроле на 7,32 и 8,54 % (P 0,05). Аналогичная тенденция наблюдалась при изучении гемоглобина в крови опытных птиц. Так, во 2-й и 3-й опытных группах содержание гемоглобина было достоверно выше, чем в контрольной группе на 18,32 и 20,03 % (P 0,05). По содержанию в крови тромбоцитов достоверных отличий в разрезе групп не наблюдалось, однако, была выражена незна чительная тенденция к его увеличению в 1-й, 2-й и 3-й опытных группах по сравнению с группой контроля на 1,14; 5,34 и 4,49 %. Положительные данные были получены при изучении белых кровяных телец крови (лейкоцитов) опытных групп. Так, содержание лейкоцитов в опытных группах было незначительно ниже, чем в контрольной группе на 0,27; 2,89 и 3,71 % Полученные результаты свидетельствуют о том, что использование Трилактосорба способствует стимулированию образования красных клеток крови, насыщенности их гемоглобином, что приводит к нормализации уровня кислорода в организме и ускорению окислительно-восстановительных процессов, при отсутствии тех или иных патологических и воспалительных изменений, о чем говорят данные анализа лейкоцитов.
Изучение биохимических показателей сыворотки крови перепелов свидетельствовало о положительном влиянии кормовой добавки Трилактосорб на процесс обмена веществ в организме птиц. Так, наблюдалось статистически достоверная стимуляция обмена белков в организме 2-й и 3-й опытных групп по показателю общего белка в сыворотки крови, содержание которого было выше, чем в группе, которая не получала добавок, на 17,34 и 17,78 % (P 0,05). Одним из значительных показателей метаболизма белков в организме является белковый коэффициент (отношение альбумина к глобулину), повышение которого выявлено в опытных группах, получавших добавку в дозах 0,5 и 1,0 % к массе комбикорма и было больше, чем в контроле на 13,04 и 11,59 %. Наблюдалось достоверное понижение (P 0,05) во 2-й и 3-й опытных группах в сыворотке крови холестерина по отношению к контрольной, соответственно, на 3,99 и 3,72 %, что говорит о распаде в организме перепелов избытка жиров, энергия которых используется на интенсивный рост птиц. О физиологически нормальной работе печени и сердца свидетельствовали данные активности в сыворотки крови опытных групп аланинамино-трансферазы и аспартатаминотрансферазы, значение которых находилось в пределах нормы. Наблюдалась незначительная тенденция в опытных группах к снижению уровня АСТ по отношению к контрольной группе на 3,07; 4,31 и 4,62 %, а АЛТ, соответственно, на 0,68; 1,58 и 3,15 %. Следует отметить, что было выявлено статистически достоверное увеличение в сыворотке крови 2-й и 3-й опытных группах по сравнению с контролем содержания кальция на 10,21 и 8,76 %, а также фосфора на 7,79 и 8,66 % (P 0,05).
Таким образом, использование кормовой добавки Трилактосорб в дозах 0,5 и 1,0 % к массе корма способствовало стимуляции метаболизма и энергии в организме перепелов, повышению иммунитета, что в целом обеспечивало птице опытной группе более высокую продуктивность и жизнеспособность.
