Введение к работе
Актуальность темы. Среди онкологических заболеваний сельскохозяйственных животных, лейкоз крупного рогатого скота занимает одно из первых мест как по частоте, так и по тяжести процесса. Заболевание широко распространено во многих регионах Мира и наносит большой экономический ущерб животноводству, в результате треждевремениой выбраковки и убоя животных, недополучения продуктов животноводства, ограничений племпродажи и реализации молока, затрат связанных с диагностическими и ветеринарно-санитарными /ероприятиями.
В результате интенсивных исследований, проводившихся во мно
гих странах й!ира был выделен и идентифицирован этиологический"
агент этого заболевания - вирус лейкоза крупного рогатого скота
IВЛКРС), изучены его биохимические,- антигенные, биологические
звоцства. Разработаны эффективные методы серологической диагнос
тики С Van der Maaten. , 1974; Miller J. м. 1976; Van бег
(aaterJ980; Залихов A.$., 1976), которые являются основой современных методов профилактики заболевания и оздоровления неблагополучных по лейкозу хозяйств (Крикун В.А. и др. 1984; Шишков'В.П. і др. 1986; Нахмансон В.М., 1980; Гулюкин М.й. 1988).
Для получения препаративных количеств вируса лейкоза и его
штигенов вначале использовали переживающие культуры лимфоцитов
;рови больных лейкозом животных ( Miller j. н. , 1969).
Однако, продукция вируса и вирусных антигенов в переживающих культурах клеток была слабой, а большое .количество обломков разрушенных клеток, присутствующих в этих культурах, существенно затруд-шло выделение специфического антигена, получение перевиваемых :иний клеток, хронически инфицированных ВЛКРС, позволило устранить іяд недостатков свойственных для переживающих культур лимфоцитов, 'еревиваемые монсслойные культуры клеток более интенсивно продуцируют вирус и растворимые вирусные антигены, позволяют получать юлыние количества вирусных препаратов с меньшими затратами
Van o'er Master, , fuller O.K. , 1976; Крикун В. A.
др., 1976). Кроме того, перевиваемая линия клеток хронически нфицнрованная ВЛКРС является субстратом для поддержания штамма ируса в лабораторных условиях.
Однако, получение перевиваемых, хронически инфицированных ЛКРС культур клеток связано с большими трудностями. 3 литературе
описано всего несколько таких линий клеток. Таким образом, в Мире существует несколько штаммов ВЖРС, поддерживаемых в хронически инфицированных перевиваемых культурах клеток. Вместе с тем геномы ретровирусов подобно другим РНК~содержащим вирусам подвержены высокой вариабильности. Поэтому изучение штаммовых различий ВЖРС является необходимым условием разработки эффективных, средств иммунодиагностики и иммунопрофилактики лейкоза крупного рогатого скота.
В связи с этим работа, направленная на изучение оптимальных условий выделения и поддержания вируса лейкоза крупного рогатого скота в культурах клеток является актуальной.
Цеди и задачи исследования. Целью работы являлся поиск оптимальных условий выделения и поддержания новых изолятов вируса лейкоза крупного рогатого скота в лабораторных условиях в первичных и перевиваемых культурах клеток.
Для достижения намеченной цели, мы разделили работу на три части, при выполнении каждой из которых предстояло решить следующие задачи:
-
Определить оптимальные условия вделения вируса лейкоза крупного рогатого скота в первичных культурах лейкоцитов.
-
Провести сравнительное изучение чувствительности первичных моносдойных культур клеток различного происхождения и их субкультур к ВЛКРС.
-
Изучить чувствительность перевиваемых линий клеток различного происхождения к ВЖРС.
-
Разработать условия воспроизведения хронической инфекции ВЛКРС в перевиваемых линиях клеток с целью поддержания новых изолятов вируса в лабораторных условиях.
Научная новизна. Изучена чувствительность первичных и перевиваемых культур клеток различного происхождения к ВЛКРС и условия воспроизведения хронической инфекции в процессе их пассирования.
Дана сравнительная характеристика чувствительности первичных и перевиваемых культур клеток различного происхождения к ВЛКРС.
Установлено, что вирусом лейкоза крупного рогатого скота могут заражаться как эпителиоподобные, так и фибробластоподобные культуры клеток, полученные из различных органов и тканей различных видов животных.
Более стабильно хроническая инфекция ВЖРС воспроизводится в процессе пассирования первичных культур клеток овечьего и бычьего происхождения.
Определены условия, при которых наиболее стабильно воспроизводится инфекция ВЛКРС в перевиваемых культурах клеток.
Практическая ценность. Результаты сравнительного изучения чувствительности первичных и перевиваемых культур клеток различного происхождения к ВЛКРС позволяют рекомендовать первичные культуры клеток из селезенки и легкого плода коровы и овцы в качестве индикаторных клеток для выявления ВЖРС в биологических материалах в тесте синцитиеобразования.
Отработана методика воспроизведения ВЖРС инфекции на пер-'вичных культурах клеток, позволяющая поддерживать вновь выделенные изоляты ВЖРС в процессе субкультивирования клеток.
Поддержание вновь выделенных в различных регионах изолятов ВЖРС в культурах клеток позволяет изучать их антигенные и биологические особенности, что имеет важное значение при разработке иммунологических методов диагностики и борьбы с этой инфекцией.
Разработка метода воспроизведения хронической инфекции ВЛКРС в культурах клеток может быть использована для получения новых перевиваемых линий клеток - продуцентов вируса и вирусных антигенов, в качестве дополнительных источников вируса и вирусных антигенов или для замены используемых в настоящее время линий клеток в случае их утраты или снижения их продуктивности.
По результатам выполненной работы на защиту выносятся следующие основные положения:
-
Сравнительная характеристика чувствительности первичных и перевиваемых культур клеток различного происхождения к ВЛКРС.
-
Выявление первичных и перевиваемых культур клеток, в которых вирус лейкоза индуцирует образование синцитиев для использования их в тесте синцитиеобразования.
-
Условия воспроизведения хронической инфекции ВЖРС в первичных и перевиваемых культурах клеток с целью поддержания вновь выделенных изолятов ВЛКРС в лабораторных условиях.
Апробация работы. Результаты работы были доложены и обсуждены на отчетных конференциях МГАВМиБ. СІ993, 1994 гг.), на межкафедральном совещании МГАВМиБ СІ996 г.) и заседаниях Ученого совета МГАВМиБ.
Публикации. По теме диссертации опубликована одна статья.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы.
