Введение к работе
Актуальность исследований. Лейкоз крупного рогатого скота -хроническое инфекционное лимфопролиберативное заболевание, наносящее значительный экономический ущерб народному хозяйству. Этиологический агент - вирус лейкоза крупного рогатого скота (ЕЗІРС) является экзогенным ретровирусом и принадлежит совместно с Т-клеточными лимфотроп-ными вирусами-человека С fffl»V-I иЙТііУ-2) и Т-лимфотропннм вирусом, обезьян (STL V ) к одному подсемейству On СО V І "Ш7«-( SCtCjCUa. Khtf 1985; ЬцІПЦ it ai. , 1980; lUttmarin At ai , 1980).
Заболевание характеризуется персистентным лимфоцитозом и развитием Б-клеточных лимфом после длительного инкубационного периода (AoulKaitt ttul, 1964; Qh^bdCL^itui, 1984).
Экономические потери, связанные с преждевременной выбраковкой
« y*cev, т-.:~~~шХ, с недополучением продуктов животноводства, с огра
ничениями племпродажи и реализации молока, а также с потерями, свя
занными с диагностическими и оздоровительными мероприятиями в небла
гополучных по заболеванию хозяйствах выдвигают лейкоз крупного рога
того скота по значимости на одно из первых мест среди инфекционных
заболеваний. ., _
Выделение BJIKPC (.МІ.ихгХ ttaL, 1969) изучение его биологических и биохимических свойств позволило разработать аффективные методы серологической диагностики, которые являются основой современных методов оздоровления неблагополучных хозяйств и профилактики заболевания (
Шишков Ь.П. и др., 1966). В настоящее время проводлтея интенсивны исследования по создании средств специфической профилактики лейкоза {ШІиііГОІ , 1983; OlUrrtCt ЙГОІ. l984i<&t(m6ltuK 1987; JlkcUia ztOX, 1988). Изготовление диагностикумов и вакцинных препаратов сталкивается с трудностями, связанными с получен.-.ем необходимого количества вируса я вирусных антигенов, истотником которых являются перевиваемые культуры клеток хронически инфицированные EJKPJ
(VancUi Maakv ,іїіШхI, и-в; бгажъ . Feueг хэ7б;
Крикун В.А. и др., 1979). Используемые, до настоящего времени, на
2 биофабриках традиционные методы ВуЛЬтйвиреваНйй «Лвтвк в стационарныз и вращающихся флаконах не уД0М&?Є6рягі? ВОЭ возрастающей потребности в вирусных антигенных препаратах, Поэтому актуальной задачей являета разработка более эффективнее и экономичных способов крупномасштабноГ( культивирования клеток и условий, позволяющих увеличивать репликацию вируса и продукции вирусных антигенов в культурах. Наиболее перспективным методом крупномасштабного культивирования клеток является высокотехнологичный метод ікршзивания клеток на микроносителях (Ш), позволяющий вьіраїцивать большие количества клеток и получать высокоактивные биологические продукти*
Цель и задачи исслалов^^. Цель» настоящей работы является сравнительное изучение оообшштей хронической инфекции ВЛКРС в монослойной и псевдосуспеняионной культурах перевиваемых клеток и определение оптимальных условий выращивания линии клеток на микроносителях для накопления гликопротеидного антигена.
В соответствии с целью работы были обставлены следующие задачи:
-
Изучить динамику репликации ВЛШЗ И продукции растррримях вирусных антигенов в монослойной и пеєвдбсубпенаионной культурах клеток.
-
Изучить влияние стимулирующих препаратов Нв рдётовнё л вирус-продуцирующие параметры перевиваемой линии клеток в ПбЄ8ДеуПвИИИ" ной культуре.
-
Провести сравнительную оценку и выбрать оптимальные типы микроносителей для псевдосуспензионного культивирования клеток FL^-li1
-
Определить оптимальные режимы культивирования хронически инфицированной ЕЯКРС перевиваемой линии клеток JLK- Ы\ на микроносителях.
Научная новизна. Определена динамика репликации EJ3CPC и продукции гликопротеидного антигена в монослойных и пеевдосуспбнзионных культурах клеток -fLK - &Ц/ на микроносителях.
Определено влияние типа синтетических сред и их сочетания на пролиферативную активность клеток ^FUk. - &UV » репликацию ВЛКРС и продукцихГвирусного антигена.
Установлено влияние сывороточного фактора питательной среды на пролиферативную активность клеток и возможность частичной замены сыворотки эмбрионов коров сывороткой овец без снижения продуктивное* культур клеток-FU k -&LV . ' .
Дана оценка влияния стимулируюіцих препаратов на рост клеток, репликацию вируса и продукцию вирусных антигенов в псевдосуспензисн-ной культуре клеток.
Определены оптимальные режимы культивирования хронически инфици
рованных ВЛКРС перевиваемых клеток-FLVC-6LV- на-МН,-позволяющие
экономить дорогостоящие компонента питательной среды при накоплении ВЛКРС и его растворимых антигенов.
Практическое значение работы. Результаты сравнительного исследования различных типов микроносителей, позволяют рекоу.ендопать отечественные коллагеновыё микроносители полигональной формы ВИ-3 для крупно-«асіггїбнсго культивирования хронически инфицированных ВЛКРС перевивавше клеток FLK.--6LV 7 для промышленного производства антигенных препаратов ВЛКРС.
Данные о возможности использования препаратов влияющих на рост к продуктивность перевиваемой линии клеток -FLKr 6 LV и разработка зпткмальных режимов культивирования хронически инфицированных ВЛКРС іеревиваемьос клеток в псевдосуспензионных культурах на отечественных № позволят экономить дорогостоящие компоненты питательной среды при скоплении ВЛКРС и его растворимых антигенов при промышленном произ-аодстве диагностикумов и вакцин.
На эаадту выносятся следуюіцие основные положения:
-
Преимущества коллагеновых микроносителей полигональной формы ЗИ-3 отечественного производства для культивирования хронически инфи-деровонной ВЛКРС перевиваемой линии клеток TL.K- &LV
-
Стимулирующее действие инсулина, ДЫСО, глюкозы и ФГА на проли-[еративнуп и продуктивную активность перевиваемой линии клеток
і псевдосусгензионных культурах на Ш.
3. Репин культивирования хронически инфицированной ВЛКРС переви
ваемой линии клеток -fLU-bLV в псевдосуспензионных культурах на №
ітечественного производства, позволяющий экономить дорогостоящие
!Омпоненты питательных сред при накоплении ВЛКРС и его растворимых
іити генов.
Апробация работы, ллтериалы диссертации доложены на научно-іетодической межвузовской конференции по подготовке кадров для зарубежных стран ІМВА, І9І*3 г.) и заседаниях Ученого совета МВД.
Публикации. По теме диссертации опубликованы 2 статьи.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введенні, обзора итературы, собственных исследований, обсуждения результатов ь, выводов.
