Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 9
1.1 Иммунная система и иммунитет 9
1.2 Особенности иммунной системы птиц 12
1.3 Влияние пробиотиков на организм животных 34
2 Собственные исследования 46
2.1 Материал и методы исследования 46
2.2 Результаты собственных исследований 51
2.2.1 Рост массы тела и органометрические показатели тимуса, фабрициевой сумки и селезёнки при применении пробиотиков 51
2.2.2 Морфологические изменения органов иммунной системы цыплят при применении пробиотиков 55
2.2.3 Морфологические показатели крови при применении пробиотиков 83
Обсуждение полученных результатов 89
Выводы 101
Практические предложения 101
Библиографический список 105
- Особенности иммунной системы птиц
- Влияние пробиотиков на организм животных
- Рост массы тела и органометрические показатели тимуса, фабрициевой сумки и селезёнки при применении пробиотиков
- Морфологические показатели крови при применении пробиотиков
Введение к работе
з 1
Актуальность темы. Одной из самых доходных и постоянно увеличивающих объёмы производства отраслей сельского хозяйства является птицеводство Эффективность промышленного птицеводства достигается за счет исключения сезонности производства, интенсификации последнего посредством механизации большинства технологических процессов, применения инновационных технологий выращивания, направленных на получение продукта в кратчайшие сроки В таких условиях возрастают экстремальные воздействия на птицу, поскольку по мере повышения продуктивности она становится все более чувствительной к неблагоприятным факторам внешней среды (Кондрахин И П ,1983, Карпуть И М , 1989; Абрамов С С и соавт, 1990, Литвина Л А и соавт ,2000, Кузнецов СИ, Хохлов Р Ю , 2006).
При содержании птицы в таких условиях происходит снижение нестіецифической резистентности и устойчивости организма, особенно молодняка, к действию неблагоприятных факторов окружающей среды, что приводит к росту заболеваемости, увеличению инфекционных, аллергических, аутоиммунных и других патологий В последние годы для сохранения эффективности птицеводства при интенсивном производстве разрабатываются различные способы коррекции защитных свойств организма птиц (Малик НИ, 1999, Бессарабов БФ, 2001, Маннапова РТ, 2001; Шайхулов PP., 2002, Кирилова ЮВ, 2002; Егоров ИД, 2003, Каримов ШФ„ 2003, Sefton Т, 1991, Macfarolane G Т. et al, 2003) Для увеличения жизнеспособности молодняка сельскохозяйственной птицы в ветеринарной медицине с лечебно-профилактической целью применяют различные биологически активные вещества Особого внимания заслуживают пробиотики, действие которых адекватно сложившимся в процессе эволюции механизмам защиты макроорганизма от патогенных воздействий внешней среды (Ребров А Я, 1992; Смирнов В. В, 1997, Литусов Н. В. с соавт, 1997, Шендеров Б А, 1998, Смирнов В В , 1998, Панин А Н , 2002, Спасов А А, 2003, Blomberg L et al, 1993, Fedorka-Cray P J et al, 1999)
Перспективы практического использования пробиотиков в птицеводстве в первую очередь связаны с регулированием микробиологических процессов в пищеварительном тракте, устранением дисбактериозов, профилактикой и лечением заболеваний желудочно-кишечного тракта алиментарной и инфекционной этиологии (Тараканов Б В , 2000; Панин А Н., 1999-2002; Малик Н И , 2002, Девришов Д А с соавт, 1996, Бессарабов Б Ф. с соавт., 1996; Топурия Л Ю, 1997, Клименко В В с соавт., 1999, Маннапова Р. Т с соавт, 2001, Бовкун Г Ф, 2003, Gibson G R. Et al, 1995, Hofacre С. 1 Et al, 1998) Применяются пробиотики и как стимуляторы роста, с целью уменьшения отхода молодняка (Тихомирова А с соавт, 1987, Бессарабов Б с соавт, 1996; Зинченко Е.В., Панин А.Н, 2000, Бовкун Г, 2002, Егоров И , 2003, Первова А , 2003, Sefton Т , 1990)
Под действием пробиотиков происходит стимуляция лимфоидного аппарата, синтеза иммуноглобулинов, увеличение уровня комплемента, усиление активности макрофагов и лизоцима и снижение проницаемости сосудисто-тканевых барьеров для токсических продуктов (Харитонов Л В , Обрывков В А , Спасская Т А ,1999, Шардаков В И., Хапугин В Г. Клименко В В. с соавт.,1999; Маннапова Р Т, Шилов
С О , 2001, Машеро В А , 2004)
Для адекватной оценки состояния иммунной системы и выявления иммунодефици гных состояний необходимо, наряду с изучением продуктивных показателей птицы, исследовать морфологические изменения в тимусе, фабрициевой сумке и селезёнке Исследование этих трех органов даст полную информацию относительно уровня как клеточного и гуморального иммунитета, так и общего состояния иммунной системы Очень важен возраст птицы, в котором берутся образцы тканей Так микроскопические исследования фабрициевой сумки имеют наибольшее значение в течение первых трех недель жизни Но рассматривать развитие одного из центральных органов иммунитета птиц вне связи с ростом и развитием других органов иммунитета и эндокринной системы было бы неправильным Поэтому размеры и функциональную активность бурсы следует сравнивать с анатомическими и физиологическими характеристиками таких органов как тимус, селезёнка, гонады и т д (Болотников И А, Конопатов Ю В , 1993)
Исходя из вышесказанного, для нашего исследования мы выбрали тимус, фабрициеву бурсу и селезёнку как индикаторов состояния иммунной системы птиц при применении пробиотиков, так как в настоящее время нет полной картины функционирования иммунной системы у птицы в условиях направленного применения пробиотических препаратов
Цели и задачи исследования Целью нашей рабвты является изучение функциональной морфологии центральных и периферических органов' иммунной системы цыплят при применении пробиотиков «Алифт-П» и «Бифинорм».
В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи-
Изучить влияние пробиотиков на рост и развитие цыплят
Провести органометрические исследования тимуса, фабрициевой сумки, селезёнки при применении пробиотиков
Установить гистологические, гистохимические и гистометрические показатели структурных элементов тимуса, фабрициевой сумки, селезенки при применении пробиотиков
Определить морфологические показатели крови цыплят при применении пробиотиков
Научная новизна настоящей работы заключается в том, что впервые комплексно исследованы центральные (тимус и фабрициева сумка) и периферические (селезёнка, кровь) органы иммунитета цыплят на фоне применения пробиотиков «Алифт-П» и «Бифинорм», которые имеют разный микробиологический состав Дана подробная гистологическая, гистохимическая и морфометрическая характеристика этих органов Исследованы динамики живой массы и сохранности, функциональной морфологии центральных и периферических органов иммунитета и крови, при введении в рацион пробиотиков «Алифт-П» и «Бифинорм» В результате показано, что данные препараты в применяемых дозах не оказывают патогенного воздействия на организм птицы. Дано морфологическое обоснование процессов, происходящих в органах иммунной системы цыплят при применении пробиотиков Комплекс изменений, обнаруженных в органах иммунной системы при введении в рацион пробиотиков, даёт основание для их научно обоснованного использования при выращивании птицы
Практическая значимость работы Полученные показатели функциональной
морфологии центральных и периферических органов иммунной системы, а также результаты морфологических исследований крови свидетельствуют о том, что пробиотики «Алифт-П» и «Бифинорм» положительно влияют на процессы развития организма птицы Выявленный комплекс иммуноморфологаческих изменений поможет в дальнейшем раскрыть механизмы подавления или усиления иммунитета у промыщленно-разводимой птицы при воздействии биологически-активных веществ. Полученные результаты могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных и зооинженерных факультетах, при написании учебников, учебных пособий и монографий
Основные положения, выносимые на защиту
Динамика живой массы цыплят при применении пробиотйков «Алифт-П» и «Бифинорм»
Органометрические показатели органов иммунной системы цыплят тимуса, фабрициевой сумки, селезёнки при применении пробиотйков «Алифт-П» и «Бифинорм»
Результаты гистометрии, гистологические и гистохимические изменения структурных элементов тимуса, фабрициевой сумки, селезёнки при применении пробиотйков «Алифт-П» и «Бифинорм»
Изменения морфологических показателей крови птицы при применении пробиотйков «Алифт-П» и «Бифинорм»
Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на Всероссийской Научно-практической конференции «Повышение эффективности и устойчивости развития агропромышленного комплекса» (Уфа, 2005), на научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов, посвященной 60-летию Великой Победы «Молодежная наука и АПК проблемы и перспективы» (Уфа, 2005), на научно-практической конференции «Инновации молодых ученых - развитию АПК России» (Великие Луки, 2006), на 1 Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Молодые ученые в реализации приоритетного национального проекта «Развитие АПК» (Уфа, 2006), на расширенном заседании кафедры акушерства, патанатомии и хирургии Башкирского государственного аграрного университета (протокол №9 от 12 апреля 2007 года)
Публикации Положения диссертационной работы достаточно полно отражены в 6 научных статьях, в том числе в двух публикациях в рецензируемых научных журналах «Российский ветеринарный журнал Сельскохозяйственные животные» и «Сельскохозяйственная биология»
Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 125 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список
Работа содержит 36 рисунков, 6 таблиц, 1 график Список литературы включает 191 источник, в том числе 42 зарубежных
Особенности иммунной системы птиц
В иммунной системе птиц различают центральные и периферические органы. К центральным органам относятся: эмбриональный желточный мешок, костный мозг, тимус и фабрициева сумка, а к периферическим -селезёнка, железа Гардера, слёзная железа, дивертикул Меккеля, миндалины слепых кишок, лимфоидная ткань пищеварительного тракта, лёгких и кожа (White R.L., 1981; Olah I. et al.,1984; Болотников И.А. и др., 1993; Красочко П.А. и др., 2005).
Как считает Б.Л. Гладков (1988-1990), такая разбросанность лимфоидной ткани объясняется тем, что у кур, из-за отсутствия лимфатических узлов, вещества, обладающие свойством антигенов, фиксируются вблизи мест проникновения - в органах пищеварения и дыхания - с последующим развитием ответной реакции в виде активной пролиферации лимфоидных клеток. Если же антиген проникает в кровь, то он элиминируется и фиксируется главным образом в селезенке. Общее количество лимфоидной ткани у птиц достигает 1% от массы тела.
Экспериментально установлено, что у птиц дифференцировка и созревание лимфоцитов контролируются двумя органами - тимусом и фабрициевой сумкой. В тимусе созревают и дифференцируются Т-лимфоциты. В фабрициевой сумке - В-лимфоциты. Такую раздвоенность иммунной системы птиц подтвердил J. Ivanyi (1972) при использовании антисывороток против Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов. Удаление одного из органов (тимуса или бурсы) после вылупления с последующим облучением позволили выявить две клеточные системы в периферических тканях селезенки и кишечника (Cooper М., 1966; Glick В., 1981; Олейник Е.К., 1982; Коляков Я.Е., 1986). У млекопитающих фабрициевой сумки нет. Её аналогами являются лимфоидные образования - миндалины, аппендикс, пейеровы бляшки в кишечнике, а также костный мозг и лимфатические узлы (Регеу, 1970; Герберт У.Д., 1974; Коляков Я.Е., 1988).
Тимус (вилочковая железа) - лимфоэпителиальный орган, представляющий собой эволюционное приобретение позвоночных животных. У всех беспозвоночных он отсутствует даже в зачаточной форме (Галактионов В.Г., 1995). Возникновение и развитие тимуса у позвоночных животных является ключевым событием в эволюции иммунной системы.
Существуют данные о том, что чем лучше и быстрее происходит развитие тимуса, тем устойчивее организм к инфекциям (Миллер Д. и др., 1967; Ивановская Т.Е., Сорокин А.Ф., 1978; Пилипенко М.Е. и др., 1978; Болотников И.А., Конопатов Ю.В., 1987). Молодая птица с хорошо развитым тимусом лучше растет и более жизнеспособна (Крок Г.С., 1962; Вракин В.Ф., Сидорова М.В., 1984; Женихова Н.И., 2006). Тимус является «информационным центром» иммунной системы, так как именно в этом органе осуществляется пролиферация, дифференцировка и миграция Т -лимфоцитов, их разделение на отдельные классы Т-клеток, а также происходит активная секреция биологически активных веществ.
Первые сведения о формировании иммуногенеза и участии в нем тимуса относятся к 60-м годам двадцатого столетия. Именно в этот период работами Д. Миллера с соавт. (1967) и Ф. Бернета (1971), была установлена особая роль вилочковои железы в иммунитете. Было доказано, что именно в ней дифференцируются Т-лимфоциты и осуществляется продукция ряда биологически активных веществ - гормонов тимуса (Абдурахимова Т.Д., 1991; Никитенко A.M., 1987; Петров Р.В., 1990; Торбек Н.Э., 1995; Хаитов P.M., 2000). Преобладающими клеточными элементами тимуса авторы считают лимфоциты и среди них три самостоятельных типа лимфоцитов: Т-хелперы, Т-эффекторы (киллеры) и Т-супрессоры, направляющих течение иммунного ответа. Каждый из этих типов лимфоцитов имеет свой набор поверхностных аллоантигенов. При созревании предшественников Т-лимфоцитов происходит изменение некоторых компонентов лимфоцитарной мембраны и эндокринного звена железы (Никонова М.Ф., 1987; Новых А.А., 1987; Олейник Н.К., 1990; Landsberger N., 1987; Le Douarin N.M. et al. 1984). Гормоны тимуса завершают функциональное созревание Т-лимфоцитов, повышают секрецию ими цитокинов. Родоначальницей всех клеток иммунной системы является кроветворная стволовая клетка. Из лимфоидных стволовых клеток образуются предшественники Т- и В-клеток, которые служат источником Т-и В-популяций лимфоцитов. Т-лимфоциты развиваются в тимусе под влиянием его гуморальных медиаторов (тимозин, тимопоэктин, тиморин и др.). В дальнейшем тимусзависимые лимфоциты расселяются в периферических лимфоидных органах и трансформируются. Ті - клетки локализуются в периартериальных зонах селезенки, слабо реагируют на действие лучистой энергии и являются предшественниками эффекторов клеточного иммунитета, Т2 - клетки накапливаются в перикортикальных зонах лимфоузлов, высокорадиочувствительны и отличаются антигенреактивностью.
Зачатки тимуса появляются на 5-7 сутки эмбрионального развития, а в начале второй недели инкубации в мезенхиме органа удаётся обнаружить гемоцитобласты (Kendall N.M., 1980; Селянский В.М. 1986; Берсенева Е.В., 2004). Источником развития вилочковой железы служит эпителиальный материал третьего глоточного кармана, который прорастает в мезенхиму в виде трубок и вскоре уплотняется. Формируя тяжи эпителиальных клеток, тимус этого периода напоминает по строению эндокринную железу (Долгова М.Л., 1990; Кемилева 3., 1984; Merida Velasco J.A. et al. 1986). Местные компоненты тимуса формируются из третьего глоточного кармана (эктодерма) с участием третьей жаберной щели (энтодерма). Некоторые авторы считают, что тимусные эпителиальные клетки (ТЭК) являются по преимуществу производными энтодермы, в то время как другие исследователи полагают, что эпителий глубоких слоев коры тимуса происходит из энтодермы, а эпителий субкапсулярной зоны коры и мозгового слоя - из эктодермы (Ярилин А.А. и др., 1991; Кветной И.М. и др., 2005). Важную роль в развитии тимуса играет нервный гребень, имеющий эктодермальное происхождение (Wijngaert F.P. et al., 1984) Удаление нервного гребня приводит к дефектам развития тимуса и ряда других органов. Клетки нервного гребня мигрируют в зачатки тимуса. Производными нервного гребня являются миоидные клетки тимуса, и, как полагают (Meintlein R. et al., 2000), секреторные ТЭК (преимущественно субкапсулярные и медуллярные). Соединительнотканные элементы тимуса, как и клетки костно-мозгового происхождения, возникают из мезодермы (Ноздрачёв А.Д. и др., 2001; Кветной И.М. и др., 2005).
Формирование эпителиальной закладки тимуса завершается у птиц к 9-м суткам эмбрионального развития. Затем происходит заселение закладки предшественниками Т-лимфоцитов из печени эмбрионов в виде нескольких, импульсных миграционных актов. У птиц этот процесс детально изучен благодаря удобной экспериментальной модели с пересадкой зачатков тимуса кур эмбрионам перепёлки и наоборот. Установлено, что заселение происходит в виде трёх волн на 6-8,12-14 и 18-21 сутки (Кветной И.М. и др., 2005; Ярилин ААидр., 1991).
Влияние пробиотиков на организм животных
Пробиотиками называют микроорганизмы, которые используются в виде живых культур в кормах для животных, продуктах питания и фармацевтических препаратах (Reuter G., 2001). Термин «пробиотики» был впервые введён D.M. Lili и R.H. Stillwell в 1965 (как антоним антибиотикам) для описания веществ, продуцируемых одними протозойными микроорганизмами и оказывающих стимулирующее действие на другие. Позже термин был испльзован для кормовых добавок, которые показывали положительный эффект на животных, влияя на кишечную микрофлору (Parker R.B., 1974, Fuller R., 1989). M.Vanbelle et al. (1990) определяют понятие "пробиотик" как антоним антибиотиков, т.е. "промотор жизни". Ещё в начале XX века И.И. Мечников (1907) выдвинул гипотезу о том, что содержащиеся в кисломолочных продуктах бактерии позитивно влияют на здоровье человека. Fuller R. (1989) определил пробиотики как пищевые добавки из микороорганизмов, которые выгодно влияют на жизнедеятельность хозяина. Принимая во внимание все вышеупомянутые определения, некоторые авторы считают, что они далеко не исчерпывающие и требуют корректировки с учётом последних знаний о механизмах действия пробиотиков (Simon О., Breves G. 2000; Reutor G., 2001). Понятие «пробиотики» в последнее время было расширено, и в него вошли также препараты на основе мёртвых микроорганизмов и продуктов их обмена веществ. Сюда же относятся все препараты, которые влияют на колонизацию микроорганизмами слизистых оболочек и кожных покровов макроорганизма и тем самым улучшают микробное и ферментное равновесие или стимулируют иммунные механизмы (Jansen G. J., Van Der Waaij D., 1995; Reutor G., 2001). В отличие от антибиотиков пробиотики - это не микробные продукты обмена веществ, обладающие избирательным действием, а микроорганизмы, которые в силу своих антагонистических свойств выполняют биорегулятивную роль в заселении пищеварительного тракта (Gedek В., 1993,1994).
Классификация пробиотиков. Микроорганизмы, используемые в качестве пробиотиков, делятся на 4 группы: бактерии, продуцирующие молочную кислоту - Bifidobacterium, Lactobacillus, Enterococus, -неспорообразующие; аэробы - спорообразующие бактерии рода Bacillus; анаэробы - спорообразующие бактерии рода Clostridium; дрожжи.
Шендеров Б.А. (1998) разделяет препараты, применяемые для коррекции микробиоценозов кишечника, на 6 групп: препараты, содержащие монокультуры живых микроорганизмов представителей кишечника; препараты, содержащие комплекс живых микроорганизмов; препараты, содержащие субстанции, которые при оральном введении стимулируют развитие индигенной флоры, и прежде всего бифидо- и лактобактерий; препараты, содержащие монокультуры или комплекс микроорганизмов и субстанций стимулирующих приживление, рост и размножение; препараты, содержащие генно-инженерные штаммы микроорганизмов; препараты, содержащие помимо микроорганизмов и стимулирующих субстанций другие соединения, влияющие на функции клеток органов и тканей.
К первой группе - монокомпонентным пробиотикам - относятся препараты, содержащие живые бактерии, относящиеся к представителям нормальных симбионтов: Бифидумбактерин, Лактобактерин, АВК, «Бифинорм», Галлиферм, Лактоамиловорин, Ромакол, Стрептоэколакт, Фитобактерин и другие. В группу поликомпонентных препаратов, включающих несколько микроорганизмов, входят Лаком, Лактицид, Саратовская-3, Стрептобифид, Интестивит, Фагосан, Биосан, Бифацидобактерин, Бифидумбактерин и другие. К комбинированным относятся Апилак, Реалак, Бактонеотим, Иммунобак и т.д. Рекомбинантный или генно-инженерный пробиотик - Ветом 1.1, который представляет собой штамм Bacillus subtilis, несущий клонированные гены, контролирующие синтез альфа-интерферона (Ноздрин Г.А., Ефанова Н.В., 1995; Смирнов В.В., 1998; Сотникова О.А., Семенов Д.Е., 2000; Сидоров М.А., Субботин В.В., Данилевская Н.В., 2000; Тараканов Б.В., Николичева Т.А., 2001; Эрнст Л.К., 2002).
Применение многовидовых композиций в составе пробиотиков предпочтительнее, т.к. их сложный видовой состав наиболее полно соответствует естественному составу нормальной кишечной микрофлоры (Панин А.Н., Малик Н.И., 2001). Кроме того, препараты, содержащие два или несколько видов бактерий, могут иметь более широкий спектр действия против различных инфекционных кишечных заболеваний (Зинченко Е.В., Панин А.Н., 2000). Но при использовании пробиотиков, в состав которых входит несколько видов живых микроорганизмов, существует опасность того, что один вид будет угнетать рост других (Тимошко М.Л., 1983).
Данный широкий перечень пробиотиков свидетельствует о большом научном и практическом интересе к данной проблеме. Во всем мире продолжается работа по созданию новых более эффективных препаратов. В настоящее время накоплен обширный фактический материал, касающийся проблем создания пробиотиков у нас в стране (Смирнов В.В., Рева О.Н., Вьюницкая В.А., 1995; Новик Г.И., Высоцкий В.В., 1995; Куваева И.Б., 1999; Панин А.Н., 1998, 2000; Тараканов Б.В., Николичева Т.А., 2000; Зинченко Е.В., Панин А.Н., 2000; Панин А.Н., Малик Н.И., 2001; Плохушко Е.Н., Ларионов Н.В. с соавт., 2002).
По биологическому состоянию, в котором пребывают клетки, пробиотические препараты делятся на сухие и жидкие. В сухих препаратах клетки находятся и глубоком анабиозе, что достигается путем лиофильной или контактно-сорбционной сушки субстрата с живыми активными клетками. В жидких препаратах клетки микроорганизмов остаются постоянно активными.
Высушенные культуры способны достаточно долго храниться (до одного года) и не очень требовательны к кратковременным изменениям температурных условий хранения. Но есть у них и существенный недостаток - после процесса лиофилизации или высушивания бактерии ослаблены и плохо приживаются в кишечнике, поэтому для их перехода от анабиоза к активному физиологическому состоянию требуется 8-Ю ч.
Жидкие препараты имеют ряд преимуществ перед сухими: бактерии находятся в активном состоянии и способны к колонизации желудочно-кишечного тракта уже через 2 часа, после попадания в организм; кроме бактерий они содержат продукты их жизнедеятельности - незаменимые аминокислоты, органические кислоты, вещества, стимулирующие выработку интерферона. К недостаткам жидких пробиотиков относится необходимость строгого соблюдения температурных режимов и небольшой срок хранения: 1-3 мес.
Установлено что при пероральном применении препаратов среднее необходимое количество микроорганизмов лежит в пределах 107-109 КОЕ. Необходимо принять во внимание что микробы, естественной средой обитания которых является кишечник, производят в последнем весь комплекс своих обменных процессов в полной мере (например Enterococcus faecium) и воздействуют на макроорганизм отлично от спор почвенных бактерий (Bacillus spp.), которые сначала в процессе микробиоза попадают в среду обитания, которую они не заселяют в естественных условиях. Поэтому все нижеперечисленные механизмы положительного воздействия присущи пробиотическим микроорганизмам не в одинаковой степени (Simon О., Breves G., 2000).
Рост массы тела и органометрические показатели тимуса, фабрициевой сумки и селезёнки при применении пробиотиков
Динамику морфометрических показателей органов иммунитета цыплят опытных и контрольной групп, отобранных методом рандомизации изучали на 1-е, 15-е и 30-е сутки эксперимента. Внутренние органы взвешивали и отбирали пробы для дальнейших морфологических исследований. Кусочки органов фиксировали в жидкости Карнуа, заливали в парафин, готовили и окрашивали срезы.
Для изучения морфологических изменений, происходящих в органах в процессе опыта, наряду с микропоказателями - изменениями на тканевом и клеточном уровнях - изучали также такие макропоказатели, как масса и размер органа, по сравнению с ростом массы тела. По данным показателям можно сделать предварительные выводы о наличии или отсутствии изменений в органах в процессе проводимых опытов.
Результаты изучения массы органов цыплят представлены в таблицах 2 и 3. Показательным в изучении развития органов иммунитета является анализ изменения их массы в процессе развития, а также отношение последней к массе организма в целом. По результатам исследования видно, что опытные группы к двухнедельному возрасту превышают показатели контрольной по общей массе изученных органов иммунитета на 8,3% - 13,1%. Процентное отношение массы органов иммунитета к живой массе цыплёнка до двухнедельного возраста увеличивается пропорционально во 2-ой группе, получавшей пробиотик «Бифинорм» и составляет 1,24%, при начальном отношении 1,25% в суточном возрасте.
Наибольший показатель по массе тела у цыплят первой опытной группы, которые превышают вторую опытную и контрольную группу на 8,6% и 22,7% соответственно (Р 0,05). К месячному возрасту органы иммунитета цыплят контрольной группы показывают наибольшее значение в группах (1% от массы тела), несмотря на наименьший весовой показатель. Причина этого та же, что и в предыдущий период - меньшая масса тела. Наибольшее значение по весу органов иммунитета у цыплят второй группы - 3,30±0,4 г, что составляет 0,91% массы тела - это наименьший процентный показатель в группах. Однако живая масса цыплят этой группы наибольшая. По полученным результатам можно сделать вывод, что процентное отношение массы органов иммунитета цыплят к массе тела имеет тенденцию к уменьшению в процессе роста и развития организма. При введении в рацион пробиотических препаратов изменяется динамика процентного отношения органов иммунитета к массе тела.
В таблице 3 представлены показатели изменения массы отдельных органов иммунитета, а также относительна их масса к массе тела в %. В суточном возрасте у цыплят наибольшая абсолютная и относительная масса принадлежит тимусу. Фабрициева сумка и селезёнка равны по массе в этом возрасте. К 15-суточному возрасту наблюдается заметный рост тимуса, что иллюстрируют показатели абсолютной массы. Наибольшие показатели здесь принадлежат опытным группам 0,65±0,1 г и 0,72±0,09 г (в первой и второй группах соответственно). Таблица 3 Органометрические показатели органов иммунитета цыплят Возраст, суток Группа Тимус Фабрициева сумка Селезёнка я н2 ь Я 2 о й н оо 5О SО а я н2 8 8 2 О ГСн о8 3 о g 8я н2 8 IS 1 Относитель-ня$г мясса % 1 сутки Суточные 0,34±0,03 0,79 0,1 0,23 0,1 0,23 15 суток 1 группа «Алифт-П» 0,65±0,1 0,46 0,57±0,04 0,4 0,24±0,03 0,17 2грппа «Бифинорм» 0,72±0,09 0,59 0,56±0,10 0,46 0,25±0,02 0,2 группа Контроль 0,61±0,1 0,56 0,52±0,15 0,48 0,21±0,05 0,19 30 суток 1 группа «Алифт-П» 1,97±0,21 0,57 0,48±0,05 0,14 0,83±0,06 0,24 2грппа «Бифинорм» 1,97±0,03 0,54 0,40±0,01 0,11 0,93±0,03 0,26 группа Контроль 1,93±0,03 0,59 0,50±0,05 0,15 0,83±0,08 0,23 - критерий достоверности (при Р 0,05) К 30-м суткам эксперимента цыплята первой опытной группы догоняют по массе вторую группу, их показатели равны. Контрольная группа отстаёт по массе тимуса на 2% (Р 0,05). Притом относительная масса тимуса снижается к середине эксперимента, по сравнению с суточным возрастом на 41,7% в первой группе, 25,3% во второй и 29,1% в контрольной группе, и держится примерно на том же процентном уровне в общем, изменяя показатели по группам. Изменения относительной массы не соотносятся с тенденциями, проявляющимися в изменении абсолютной массы, так как динамика прироста массы тела не одинакова во времени в опытных и контрольной группах.
Масса фабрициевой сумки увеличивается к 15-м суткам эксперимента во всех группах, с наибольшим показателем в первой группе «Алифт-П» -0,57±0,04 г, и наименьшим в контроле - 0,52±0,15 г. Примечательно, что к 30-м суткам экспериментов значения массы фабрициевой сумки как абсолютные, так и относительные, снижаются по сравнению с предыдущим измерением во всех трёх группах. Наиболее резко процесс снижения проявляется во второй группе «Бифинорм» и составляет 28,6%, в первой и контроле - 15,8% и 3,8%) соответственно. Относительная масса органов значительно снижается - в 2,9 («Алифт-П»), 4,2 («Бифинорм») и 3,2 (контроль) раза.
Показатели массы селезёнки цыплят на начало эксперимента составляют в среднем 0,1 г, что соответствует 0,23% массы тела. К 15-м суткам экспериментов масса селезёнки увеличивается в 21-25 раз, однако прирост массы тела был значительнее и относительные показатели снижаются по сравнению с началом эксперимента во всех трёх группах. К 30-м суткам эксперимента абсолютная масса органа достоверно значительно увеличивается, возростает и относительная масса, достигнув значений начала опыта 0,23%) - в контроле и превышая его в опытных группах - 0,24% «Алифт-П» и 0,26% «Бифинорм». По результатам изучения изменения абсолютной и относительной массы органов иммунитета цыплят при применении пробиотических препаратов можно сделать следующие выводы. При применении пробиотических препаратов масса органов иммунитета достоверно превышает таковую в контроле (тимус, фабрициева сумка в 15- и 30-суточном возрасте) или же остаётся на том же уровне (селезёнка в 30-суточном возрасте). Причём в некоторых случаях увеличение массы органов иммунитета в опытных группах идёт пропорционально с увеличением массы тела (тимус, селезёнка). Уменьшение массы органов связанное с возрастными процессами протекает интенсивнее также в опытных группах. Например, фабрициева сумка у 30-дневных цыплят группы «Бифинорм».
Морфологические показатели крови при применении пробиотиков
Для изучения влияния пробиотических препаратов на морфологические показатели крови цыплят (табл. 5), в 15-ти и 30-суточном возрасте у 10 птиц из каждой группы брали пробы крови, используя метод декапитации.
В 2-недельном возрасте количество лейкоцитов у цыплят 1-й группы меньше на 31,3% и на 35,5% во 2-й группе по сравнению с контролем. К 30 суткам количество лейкоцитов в контрольной группе снизилось на 5,6%, а в опытных группах повысилось на 15,2%» (1 группа) и 22,5% (2 группа). Однако, этот показатель в контроле больше, чем в группах, получавших пробиотики «Алифт-П» и «Бифинорм», на 14,2 и 11,8% соответственно (Р 0,05).
Выраженные изменения морфологических показателей крови . между опытными и контрольной группами подтверждает и лейкоцитарная формула. Относительное соотношение клеток белой крови дает возможность выявить протекающие в организме птицы процессы, а абсолютные значения показывают динамические изменения клеток лейкоцитарного ряда.
В 2-недельном возрасте выражена разница относительного количества лимфоцитов. Соотношение больших, средних и малых лимфоцитов в 1-й группе 1:1,1:0,5, во 2-й группе - 1:1,7:1, в контрольной - 1:2,6:2,5. Количество больших лимфоцитов в опытных группах находится на уровне 10,10-11,34 тыс/мл, а количество средних и малых лимфоцитов в крови контрольных цыплят, составляет 25,99 и 25,29 тыс/мл (больше, чем в 1-й группе на 52,91 и 76,12%, во 2-й группе на 35,32 и 57,14%).
В месячном возрасте повышение общего числа лейкоцитов в опытных группах характеризуется повышением количества главным образом средних и малых лимфоцитов. Количество же больших лимфоцитов незначительно (на 6,19%) повысилось во 2-й группе, а в 1-й группе и контроле снизилось на 22,66 и 20,30%, соответственно. Соотношение больших, средних и малых лимфоцитов в 1 -й, 2-й и контрольной группах составило соответственно -1:2,3:1,9; 1:1,8:1,7; 1:2,6:3,4.
При подсчете псевдоэозинофилов, из-за их небольшого количества, мы не дифференцировли их на юные, палочкоядерные и сегментоядерные. Свою основную функцию эти клетки выполняют при воспалении и инвазии, которые не были зарегистрированы в ходе эксперимента. В 15-суточном возрасте показатели общего количества псевдоэозинофилов в 1-й группе и контроле одинаковы и превышают аналогичный показатель 2-й группы в 2 раза. К месяцу соотношение клеток между группами имеет обратную пропорцию: 2-я группа превышает 1-ю и контроль в среднем в 1,25 раза. Разница между контролем и 1-й группой недостоверна (Р 0,05).
Показатели количества базофилов и миелоцитов являются недостоверными, так как их обнаружили у одной или двух птиц из групп.
По результатам исследования установили, что количество эритроцитов у цыплят 1-й группы в 15-суточном возрасте меньше, по сравнению с птицей 2-й группы на 26,9% и контролем на 32,4%. Количество гемоглобина у цыплят 1-й группы незначительно меньше, чем во 2-й группе (4,3%), а разница с контролем недостоверна. Цветной показатель цыплят 1-й группы превышает 2-ю группу и контроль на 22,2 и 27,8% соответственно (табл. 5).
К 30-суточному возрасту сохраняется низкое количество эритроцитов у цыплят 1-й группы по отношению к птице других групп. Этот показатель ниже 2-й группы на 32,8% и контроля на 30,4%. Наряду с незначительным превышением количества гемоглобина (Р 0,05), цветной показатель в этой группе превышает аналогичные показатели во 2-й группе на 30 % и на 34% в контроле. Разница этих показателей между группой, получавшей препарат «Бифинорм», и контрольной, как в 15-суточном, так и месячном возрасте недостоверна.
Изменение количества тромбоцитов в крови цыплят имеет прямо противоположное направление по сравнению с количеством эритроцитов. Разница этого показателя между цыплятами 2-й группы и контролем в 15-ти и 30-суточном возрасте недостоверная, а птица 1-й группы превышает 2-ю группу и контроль соответственно на 56,7 и 37,7% в 2-недельном возрасте, и на 27,5 и 23,3% в месячном. Для выяснения связи гематологических показателей с морфометрическими показателями центральных органов иммунитета, вычисляли коэффициент корреляции между последними (табл. 6). В результате, по нашим данным, на протяжении всего опыта наибольшая корреляционная зависимость по опытным группам и контролю наблюдается между количеством лейкоцитов и показателями величины коркового и мозгового слоев в тимусе и фабрициевой сумке. Примечательно, что в опытных группах эта зависимость в большинстве случаев обратная, а в контрольной группе прямая. Степень зависимости высокая на протяжении всего опыта, но наибольшая отмечена в 15-суточном возрасте.
Зависимость других показателей от морфометрических параметров центральных органов иммунитета изменялась неравномерно в течение опыта. Так количество гемоглобина в 15-суточном возрасте показало высокую зависимость для всех морфометрических параметров тимуса второй опытной группы «Бифинорм», а также для морфометрических параметров фабрициевой сумки той же группы и в 15-ти и в 30-суточном возрасте. В 30 суточном возрасте высокая обратная зависимость отмечается в группе «Алифт-П». В других группах тесная зависимость отмечена между некоторыми морфометрическими показателями и содержанием гемоглобина. Например, для толщины капсулы и мозгового слоя тимуса первой опытной группы «Алифт-П» в 15-суточном возрасте, толщиной капсулы фабрициевой сумки во всех трёх группах в 15-суточном возрасте.
Содержание эритроцитов показало неравномерную зависимость от морфометрических параметров в течение опыта. Отметим наличие тесной зависимости между показателями тимуса и количеством эритроцитов для 15-дневных цыплят контрольной группы, в 30-суточном возрасте кроме контроля.
