Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 8
2.1. Эпизоотология криптоспоридиоза . 8
2.2. Методы лабораторной диагностики криптоспоридиоза. 15
2.3. Патогенез и клинические признаки заболевания. 20
2.4. Лечение криптоспоридиоза него эффективность 25
3. Собственные исследования 31
3.1. Материалы и методы 31
3.2. Результаты собственных исследований. 36
3.2.1. Распространение и динамика эпизоотического процесса при криптоспоридиозе телят в Саратовской области .36
3.2.2 Лабораторная диагностика криптоспоридиоза 51
3.2.3 Некоторые вопросы патогенеза заболевания 53
3.2.4 Обоснование создания и применения комплексного метода лечения криптоспоридиоза телят 63
4. Заключение. 88
5. Выводы 102
6. Практические рекомендации 105
7. Список литературы 106
8. Приложение. 121
- Эпизоотология криптоспоридиоза
- Лечение криптоспоридиоза него эффективность
- Распространение и динамика эпизоотического процесса при криптоспоридиозе телят в Саратовской области
- Обоснование создания и применения комплексного метода лечения криптоспоридиоза телят
Введение к работе
1. Актуальность теша. Проблема кишечных паразитарных заболеваний остается актуальной для ветеринаріш ввиду их высокий распространенности, отрицательного влияния на иммунный статус животных, что приводит к снижению продуктивности и качества сельскохозяйственной продукции. Зто особенно очевидно в отношении сельсБоэхозяйственных животных, испытывающих хронически недостаточное поступление энергии, белковых компонентов, а также витаминов и микроэлементов, выращивающихся в условиях с нарушениями зоогигиенических и ветеринарных норм содержания.
В ряду кишечных инвазий особое место занимает
криптоспоридиоз, который ' является типичным зоонозом.
Криптоспоридии обладают широкой хозяинной
специфичностью и способны циркулировать между животными и человеком. Из млекопитающих наиболее чувствительными к возбудителю являются телята до 30-дневного возраста, которые заболевают с выраженным клинический симптомом - диареей (Panciera R.J., Thomassen F.M., 1971; Msuten D.T. et ah, І974; Sanford S., Josephson G., 198 Heine J. et ah, 1984; Плорд Д., 1992).
Гастроэнтериты телят широко распространены. Это определяется целым комплексом этиологических факторов, начиная возбудителем заболевания и инфицированностью внешней среды, и заканчивая уровнем иммунитета молодняка крупного рогатого скота. В этой связи трудности диагностирования криптоспоридиоза обусловлены, в первую очередь, недостаточной изученностью распространения данной инвазии в нашей стране, развития болезни и характера воздействия криптоспоридии на организм хозяина, а также отсутствием универсальных методов диагностики, которые должны быть недорогими и простыми в выполнении и в то же время высокочувствительными по отношению к возбудителю. Еще одной проблемой стала разработка мер борьбы с криптоспоридиозом. Она обусловлена прежде всего особенностями жизненного цикла паразита и отсутствием
средств, блокирующих развитие возбудителя как в организме хозяина, таки в окружающей среде (Pavlasek I., 1974; Fisher О., 1983; Kim C.W., 1987; DatrvA. et al, 1989; Healey M.C. et al., 1995).
Цель и задачи исследования. Целью нашей работы стало
изучение некоторых вопросов эпизоотологии
критоспоридиоза телят в Саратовской области и изыскание средств терапии данной инвазии. Для достижения цели был поставлен ряд задач:
1. Провести диагностические исследования в скотоводческих
хозяйствах Саратовской области на наличие
криптоспоридиоза у телят в возрасте до 30 дней.
2. Усовершенствовать методы диагностики
криптоспоридиоза.
3. Изучить некоторые аспекты патогенеза и клинического
проявления заболевания.
4. Изучить терапевтическую эффективность препаратов
нитрофуранового ряда - фуракрилина и фуразонала при
криптоспоридиозной инвазии телят.
Научная новизна. Впервые на территории Саратовской области установлен возбудитель криптоспоридиоза телят -C.parvum. Впервые изучено распространение, сезонная и возрастная динамика заболевания у телят в Саратовской области. Получены новые данные по патогенезу болезни. Для лабораторной диагностики предложен модифицированный метод седиментации который позволяет в практических условиях выделить возбудителя заболевания, Установлено кокцидиостатическое действие фуракрилина и фуразонала на Cparrum - возбудителя криптоспоридиоза телят.
Практическая, ценность. Данные, полученные в ходе исследований, дают представление об особенностях эпизоотологии криптоспоридиоза телят в Саратовской области. Разработанный метод седиментации позволяет в практических условиях выделить возбудителя заболевания, а следовательно и поставить диагноз на криптоспоридиоз. Для лечения криптоспоридиоза телят предложены комплексные препараты на базе фуракрилина и фуразонала. Изучено
влияние фуракрилина и фуразонала на гематологические показатели больных криптоспоридиозоы телят.
Материалы, изложенные в диссертационной работе, могут быть использованы при написании соответствующих разделов учебных пособий, а также в учебной процессе.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на региональной научной конференции "Молодежь и наука на пороге XXI века"(Саратов, 1998) и на научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов Саратовского государственного аграрного университета, им. Н.И. Вавилова по итогам научно-исследовательской и учебно-методической работы за 1999 г.
Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано три научные работы и три находятся в печати.
Внедрение результатов исследования: Издан
информационный листок Саратовского межотраслевого территориального ЦНТЙ № 131-99, в котором отражен опыт борьбы с криптоспоридиозом телят.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, практических рекомендации, обоснованных данными, полученными в ходе исследовательской работы, и приложения. Объем диссертации составляет 125 страниц машинописного текста. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами и 3 рисунками. Список литературы включает 140 наименований, из них 72 иностранных и 68 отечественных.
Эпизоотология криптоспоридиоза
Криптоспоридиоз - протозойное заболевание позвоночных животных и человека, обычно протекающее в форме гастроэнтерита, при котором нарушается всасывательная функция кишечника, что ведет к значительному обезвоживанию организма.
В настоящее время в литературе описано около 30 видов хозяев кокцидий рода Cryptosporidium - это млекопитающие, птицы, рептилии, рыбы (Tyzzer Е.Е., і907; Tizzer Е.Е., і 912; Triffit M.S., і925; Tizzer E.E., і929; Slavin J., 1955; Jervis H.R. et at., 1966; Proctor S.J., Kemp R.L., І974; Imman L.R., Takeuchi A., 1979; Doster A.R., 1979; Iseki M., І 979 и др.).
Заболевание зарегистрировано более чем в 30 странах. Зараженность человека и животных криптоспоридиозом в разных регионах изучена неодинаково и часто зависит от уровня жизни населения и санитарного контроля. По данным Т.В.Бейер (1990), если в развитых странах экстенсивность инвазии взрослого населения колеблется от 0,6 до 7,3 %, то в развивающихся странах - от 3,2 до 13,1 %, Наиболее часто от криптоспоридиоза страдают дети. Так по данным R.Fayer et ai. (1986), в детских дошкольных учреждениях США зараженность детей этой инвазией в разных штатах достигает 31,1- 63,6 %.
По данным ниже перечисленных авторов, зараженность телят первого месяца жизни в различных странах колеблется в небольших пределах. Так, в США ооцисты криптоспоридий обнаружены у 26,5 % поголовья телят (Leek R., Fayer R., 1984), в Канаде - у 26 % (Sanford S., Josephson С, 1982), во Франции - 25 % (Pivont P. et al., 1984), в Дании -24,8 % (Henriksen S., Krogh Н., 1985), в Швейцарии - 28 %, в Западной Германии - 44 % (Fiedler Н.-Н., 1985), в Венгрии - 27 % (Nagy В., Pohienz J,, І982), в Чехословакии - 34,75 % (Zajisek D., 1986), в Индии - 13,8 % (Parasad К, et ah, 1989),
В нашей стране возбудители криптошоридиоза телят были обнаружены в 1983 году В„Ф„Никитиным и Й.Павласеком в хозяйствах Московской и Владимирской областей. В дальнейшем, в России криптоспоридиоз был зарегистрирован: в Ленинградской области, где зараженность телят колебалась в пределах 30 - 40 % (Пашкин П.И,, Лаковникова В.Е., 1988), в Горьковской области - 42,9 - 87,5 % (Горбов Ю.К., Цыряпкин Б.С., Цыганкова Н.М., 1984), в Свердловской - 53,34 % (Марышева СВ., 1990), в Башкирии - 21,7 - 42,3 % (Тайчинов У.Г., 1996), в Мордовии - 32,2 % (Васильева В А., Небайкина Л.А., І 995).
Несмотря на существующие отечественные литературные данные, распространение данной инвазии телят в такой обширной стране как Россия изучено недостаточно, а в Саратовской области этой проблемой не занимались вообще.
Криптоспоридиоз у телят вызывают два вида эймериидных кокцидий рода Cryptosporidium: С. parvum и С. muris. Морфологически ооцисты Cryptosporidium имеют сферическую или овоидную форму. Ооциста необычного строения, содержит четыре спорозоита, не заключенных в спороцисту. Размеры ооцист различных видов варьируют. Сравнительный анализ литературных данных по измерению ооцист Cryptosporidium у телят показал наличие значительного разброса по величине: от 3 до 5,4 мкм для С. parvum и от 5,6 до 8,4 мкм для С. muris (Tzipori S. et al., 1981; Reese N.C. et ai., 1982; Upton S. et al., 1985; Iseki M. et al., 1986 и др.). Такие вариации объясняются неизбежными погрешностями измерения, разным числом измерений, разными системами статистической обработки. И в то же время существует предположение, что более крупные ооцисты формируются при попадании в организм ранее не зараженного хозяина, когда имеется огромное число полноценных эпителиальных клеток (Бейер Т.В., Сидоренко Н.В., і993).
У телят местом локализации эндогенного развития криптоспоридий является задняя треть тонкой кишки на протяжении почти шести метров. Также паразиты встречаются в слепой кишке и даже в толстом кишечнике, но они не обнаружены в двенадцатиперстной кишке (Vitovec J., і984).
Развитие криптоспоридий происходит по схеме гомоксенного жизненного цикла. Ооцисты Cryptosporidium заглатываются теленком с водой или пищей. В кишечнике хозяина из ооцисты выходят четыре спорозоита и прикрепляются в зоне щеточной каемки энтероцитов. Принципиальная особенность проникновения спорозоитов состоит в том, что внедрившись в клетку они "застревают" в зоне плотного контакта энтероцитов у основания микроворсинок. Ближайшие к спорозоиту ворсинки начинают "вырастать навстречу" до тех пор, пока мембраны микроворсинок не сольются друг с другом. Пространство образованной вакуоли есть ни что иное, как внешняя среда по отношению к зараженной клетке. Наружная мембрана клетки продолжает нормально функционировать. Она способствует удержанию паразита в зоне щеточной каемки, что и позволяет признать криптоспоридий внутриклеточным, хотя и экстрацитоплазматическим паразитом (Бейер Т.В., 1989). Здесь совершается не менее двух генераций бесполого размножения. Затем образуются гамонты, из них гаметы (стадии полового размножения) и в дальнейшем происходит оплодотворение макрогаметы микрогаметой. Образованная зигота покрывается оболочкой и сразу становится зрелой ооцистой.
Этот процесс при экспериментальном заражении гнотобионтных телят, полученных на 270 - 274 сутки кесаревым сечением, протекает за 2 -3 суток и ооцисты обнаруживаются в экскрементах в такие же сроки - 48 -72 часа после заражения (Heine J. et ah, І984). При оральном заражении 2-7-дневных телят инкубационный период составляет в среднем 3,6 суток, выделение ооцист начинается через 4 дня после заражения (Pohjoia S., Lindlerg L., 1986). А при контактном заражении I-20-дневных телят этот период наиболее продолжительный и составляет 5 - 7 дней (Tzipori S., Smith М., Halpin С., і 983).
При спонтанном заражении ооцисты Cryptosporidium выявляют в фекалиях, начиная с 3-дневного возраста (Тайчинов У .Г., 1996). В среднем же этот процесс приходится на 4 - 6 день жизни теленка и продолжается в течение 2 - 15 дней (Schulz W. et al., 1983; Korinek J., Chroust EL, 1988; Hiepe T. et al., 1988). За это время количество зараженных животных неуклонно растет. По сообщению Т.В. Бейер и Н.В.Сидоренко (1988), наибольшая экстенсивность инвазии зарегистрирована у телят в возрасте 6 - і0 дней. У.Г.Тайчинов (1996) регистрировал максимальную зараженность в возрасте 6-15 дней. Зарубежные авторы приводят несколько иные цифры: K.Pasard et al. (1989) - 4 - 8 дней; SA.Henriksen, H.V.Krogh (1985) - 8 - 14 дней; W.Schulz et ai. (1983) - 7 - 18 дней; O.Fisher (1984) - 11 - 20 дней. В этот период экстенсивность инвазии может достигать 96,6 % (Korinek J., І 988). Затем экстенсивность инвазии начинает уменьшаться и к 24 дню жизни теленка, по данным У .Г.Тайчинова (1996), составляет 6,8 %, а к 30-дневному возрасту ооцисты Cryptosporidium в фекалиях не обнаруживаются. Зарубежные авторы, в частности SA.Henriksen (1985), сообщает, что все же 2 - 5 % телят к 1-2-месячному возрасту инвазированы. Таким образом, наиболее опасным периодом в распространении криптоспоридиоза телят является возраст до 1 месяца, когда заболевание вызывает вид C.parvum в виде тяжелой формы диареи (Литвинский В.П., і 992). В дальнейшем происходит постепенное повышение титров антител к C.parvum и телята становятся устойчивы к инвазии (Mosier D. et al.,1992). В более поздний период, а также у взрослых животных паразитирует другой вид - C.muris. Так, B.CAnderson (І982; і983) сообщает об обнаружении C.muris у 5 % трехлетних коров. Это же подтверждает N.Reese et ai. (1982), выявивший данный вид возбудителя у двухлетних коров и телят старшего возраста. У них C.muris вызывает легкую форму диареи (Upton S. et аі., і 985).
Лечение криптоспоридиоза него эффективность
Лечение криптоспоридиоза до сих пор является нерешенной проблемой медицины и ветеринарии, так как пока остается невыясненной исключительная толерантность эндогенных стадий криптоспоридий к химиотерапевтическому воздействию (Бейер Т.В., і990). Испробовано свыше 80 антимикробных агентов, включая кокцидиостатики и другие антипротозойные вещества, антибиотики широкого спектра действия и даже антгельминтики (Goidfarb J., Tanowitz Н., Grossman R. et ai.; 1982; Moon H.W., 1982; Schwartz A., Welch M.J., 1982; Fayer R., Ungar B.L.P., 1986; Campbell W.C., 1986; Petersen C, 1992 и др.). И каждое из них либо малоэффективно, либо вообще не оказывает влияния на течение инвазии. В настоящее время для борьбы с заболеванием применяются различные антибактериальные средства; вещества, нормализующие секреторную и моторную функции кишечника; солевые растворы и вещества, выравнивающие кислотно-щелочное равновесие; средства, повышающие иммунитет больных животных, диетотерапия.
Сведения об эффективности препаратов, которые испытывались при криптоспоридиозе телят, достаточно противоречивы. Опубликованы данные о хорошем терапевтическом действии ласалоцида, но в дозах, токсичных для животных (Ficher О., 1983; Hiepe Т., Jungmami R., Roffeis R.P., 1988), и спирамицина (Gray J., 1985), Однако, С A.Bruce (1981) не получил желаемого результата от лаеалоцида натрия и триметоприма при лечении телят, зараженных Cryptosporidium. A.Datry, M.Danis (1989) сообщают об отсутствии какого-либо действия спирамицина, эфлорнитина, норфлоксацина и т.п. на развитие криптоспоридий in vitro. M.SArrowood, L.. Xie, M.R.Hurd (1994) вносили в культуру клеток мадурамицин в дозе 0,5 мг/мл среды. Он оказался высокоэффективен в подавлении развития криптоспоридий ( более 99 % через 48 часов после внесения в культуру). M.C.Healey, S.Yang et аІ. (1995), L.Favennec, Е,-B.Martine (1994) свидетельствуют, что использование паромомицина в дозе І -2 г на 1 кг массы тела приводило к резкому снижению количества выделяемых ооцист, особо отмечая при этом малую токсичность препарата. Паразитостатическое действие арприноцида в дозе 0,5 и 1 мг/кг установил C.W.Kim (1987) в опыте на хомячках. То же подтвердили J.E.Rend и M.L.Hancock (1990) в эксперименте с подвергнутыми иммунодепрессии крысами. C.Petersen (1992) предлагает использовать при криптоспоридиозе азитромицин, кларитромицин, рокситромицин на фоне патогенетической терапии.
Сульфаниламидные препараты: сульфадимезин в дозах 30 - 40 мг/кг (Fisher О., І 983; Sutei Е., І 984), еульфаквиноксалин - 160 мг/кг (Nady В., Pohlenz J., 1982), норсульфазол в дозе 0,05 г/кг (Якубовский М.В., Лавор СИ., Мясцова ТЛ., 1992) при лечении телят не оказывают влияния на течение криптоспоридиоза.
В.И.Петренко, С.В.Марышева (1991) предложили для борьбы с инвазией использовать тримеразин и сульгин в комплексе с биологически необходимыми витаминами и аминокислотами, АТФ и гормонами, которые, по их данным, способствуют прекращению диареи при криптоспоридиозе телят,
Отечественные ученые (Горбов Ю.К. и др., 1984; Зароза В.П., і984; Тайчинов У.Г., і 996) использовали препарат нитрофуранового ряда -фуразолидон в сочетании с полимиксином, отмечая их умеренное действие на возбудителя.
В практике широко применяют в различных дозах кокцидиостатические препараты: химкокцид-7, фармкокцид, декоквинат и другие (Литвинский Я.П., Гутый В.И., 1989; Якубовский М.В. и соавторы., 1992; Васильева В.А., Небайкина Л.А., і995).
BJ.Andreus et аі. (і994) получили патент на лечение протозойных инфекций человека и животных с помощью комплексных солей бацитрацина, содержащих ионы бивалентного металла. Как наиболее эффективные, описаны соли цинка, которые не обладают мутагенными свойствами и малотоксичны. По данным авторов, препарат высокоактивен в отношении C.parvum.
Медикаментозные мероприятия при криптоспоридиозе носят временный и не всегда действенный характер, поэтому большое внимание уделяется вопросу иммунопрофилактики заболевания (Hiepe Т., і986). Специального внимания заслуживает опыт лечения больных криптоспоридиозом гипериммунным молозивом коров (Fayer R., Ferryman L.E., Riggs M.W., І989), Стельных коров за десять недель до рождения телят иммунизировали путем внутримышечной инъекции суспензии очищенных ооцист Cryptosporidium в дозе ІхіО5 или эксцистированных спорозоитов в количестве 4x106. Через две недели коров снова иммунизировали путем внутривенной инъекции антигенов в вымя. Молозиво собирали сразу после отела и хранили при температуре -20 С. Такое молозиво оказало положительный эффект, приостановив диарею на пятые сутки после начала лечения.
Протективный эффект молозива гипериммуных коров на течение инвазии у мышей, зараженных C.parvurn, отмечали R.Fayer, L.E.Perryman, M.W.Riggs (І 989). В опытах на телятах были получены данные о передаче пассивного иммунитета от гипериммунизированных коров-матерей (Fayer R., Andrews С. et al., і989). Так одной группе новорожденных телят скармливали молозиво от иммунизированных коров, а другой - от не иммунизированных матерей. При этом в первой группе диарея наблюдалась более короткий срок - 3 дня, а во второй группе - 5 дней. Выделение ооцист продолжалось соответственно 6 и 9 дней. Однако другие исследователи выявили зависимость результатов лечения от количества вводимых антител. J.Harp, D.Woodmansee (1989), изучая влияние антител молозива на чувствительность телят к заражению С. parvum, сделали вывод, что предварительное введение антител в титре 1:1024 не влияет на устойчивость к заражению, о чем судили по развитию диареи и обнаружению ооцист в экскрементах телят. Таким образом, вопрос о лечебном эффекте молозива гипериммунизированных коров до сих пор остается открытым.
В зарубежной литературе обсуждается вопрос об эффективности "фактора передачи" крупного рогатого скота при подавлении криптоспоридиоза у больных с иммунодефицитом (Chug Н.Н., Shaw D., Klesiur P., Saxon A., 1989). В частности, у телят с выраженной клинической формой криптоспоридиоза с помоодью "фактора передачи", изготовленного из брыжеечных лимфоузлов, подавить инвазию не удалось (Fayer R., Rlesiur P., Andreus С, і987).
Так как данная инвазия часто наблюдается у людей и животных с пониженным иммунитетом, то в схеме лечения часто используются иммуностимуляторы. Якутский НИИСХ в методических рекомендациях (1991) предлагает применять наряду с полимиксином, химкокцидом и фуразолидоном иммуномодуляторы: тимозин, тимолин, пентаксил и иммуноглобулины. О положительных результатах использования иммуностимуляторов в комплексе с сульфаниламидами при криптоспоридиозе телят сообщает М.В.Якубовский с соавторами (і 992). Вещества, стимулирующие иммунную систему организма, могут применяться и в чистом виде. Эффективность тимогена при данной болезни телят выявил В.ИЛоскот с соавторами (1992). Этот препарат обеспечивал улучшение состояния больных телят в течение 2-4 суток и способствовал резкому снижению выделения ооцист. Препарат оказывал положительное действие на клеточный и гуморальный иммунитет и нормализовал защитные функции больного организма. В опытах на мышах B.Koudela, J.Hermanik (і993) исследовали действие тимомодулина - эмбрионального экстракта тимуса теленка. При этом отмечалось более быстрое наступление пика инвазии и быстрое выздоровление. В тоже время H.Darban (1993) не обнаружил влияния тимозина на течение инвазии у мышей, зараженных C.parvum.
Распространение и динамика эпизоотического процесса при криптоспоридиозе телят в Саратовской области
Широкое распространение криптоспоридиоза среди телят, особенно новорожденных, регистрируется во всех регионах России, где проводились исследования такого характера. В Саратовской области это заболевание совершенно не изучено.
Мы осуществили эпизоотическое обследование 22 хозяйств 14 районов Саратовской области на наличие криптоспоридиоза у молодняка крупного рогатого скота. Основную работу проводили с телятами в возрасте до 30 дней. Зараженность телят изучали независимо от времени года. Для выявления заболевания в каждом случае проводили клиническую и копрологическую диагностику. В результате нами было обследовано 730 телят, принадлежащих различным хозяйствам Саратовской области. Распространение изучаемой инвазии отражено в таблице 1.
Приведенные в таблице і данные свидетельствуют о достаточно широком распространении криптоспоридиоза среди телят, принадлежащих хозяйствам нашей области. Экстенсивность инвазии варьирует от 18,18+1,75 % до 61,54+3,74 %. Из 22 обследованных хозяйств 19 (86%) являются неблагополучными по данному заболеванию. Всего выявлено 215 больных животных, что составляет 29,81+0,42 % от обследованного поголовья. Таким образом, впервые в Саратовской области зарегистрировано практически повсеместное распространение криптоспоридиоза телят.
При криптоспоридиозе интенсивность инвазии - понятие достаточно условное. Возбудитель заболевания - C.parvum имеет очень малые размеры (3 - 5,4 мкм), которые несоизмеримы с объемом исследуемого материала (I - 3 г), что затрудняет установление интенсивности заражения каждого животного. В своей работе мы определяли степень инвазированности животных по чувствительности метода, которым был выявлен возбудитель (Колосова Д.М., 1996). Для этого каждую индивидуально взятую пробу исследовали тремя методами различной чувствительности. Метод центрифугирования с дистиллированной водой в дальнейшем мы заменили модифицированным нами методом седиментации Красильникова (1970). Полученные данные представлены в таблице 3.
В процессе исследования мы выявляли различную степень зараженности животных. Интенсивность инвазии колебалась от слабой до сильной степени. Для более полного представления о динамике интенсивности инвазии у телят до месячного возраста, мы проводили каждые два дня исследования проб фекалий от 10 спонтанно инвазированных телят и определяли количество выделяемых ооцист в 1 г кала. Наблюдение осуществляли с момента первого выявления ооцист и далее в течение 30 дней. Полученные сведения приведены в таблице 4 и отражены графически на рис. 1.
В первый день наблюдений мы обнаруживали от 900 тыс. до 2,1 млн. ооцист в 1 г кала. В последующие девять дней происходило резкое увеличение количества ооцист Cryptosporidium. Максимальное их число (в среднем 28 млн. в 1 г фекалий) регистрировали спустя пять дней после начала наблюдения. Затем происходил некоторый спад репродукции паразита. На седьмой день наблюдений количество ооцист в 1 г фекалий составляло в среднем 20 млн. Далее следовал второй всплеск интенсивности инвазии (24,1 млн. ооцист), после чего, кривая количества выделяемых ооцист стала неуклонно снижаться: на одиннадцатый день исследований была на отметке 9,2 млн., на тринадцатый день - 3,7 млн., а в последующие дни соответственно - 900 тыс., (00 тыс., 50 тыс. Во время одиннадцатого по счету наблюдения, то есть через двадцать один день после начала исследования, ооцист Cryptosporidium в фекалиях телят обнаружено не было.
Нами установлено, что максимальное количество ооцист, выделяемых во внешнюю среду зараженными животными, наиболее часто приходится на 13 - 15 день их жизни. В данном возрасте организм теленка переживает второй иммунодефицитный период (Соколов А.П., 1991), который, вероятно, оказывает негативное действие на длительность выработки иммунитета против криптоспоридиоза. Как показано в таблице 4, продолжительность выделения ооцист у телят составляет около трех недель.
Экспериментально доказано (Бекере Р.Я., Зитаре И.К., 1989), что новорожденные телята в 2-3-дневном возрасте часто страдают гипопротеинемией с одновременной гипогамма-глобулинемией. Такие иммунные нарушения при заражении Cryptosporidium могут привести не только к носительству, но и к клинически выраженному заболеванию новорожденных телят уже в первую неделю жизни.
В.П. Урбан, И.Л. Найманов (1984) сообщают, что в ранний постнатальный период иммунитет у животных образуется слабый, неустойчивый и непродолжительный. Что и отражается на интенсивности и длительности проявления заболевания. Активный гуморальный иммунитет создается у новорожденных в результате контакта с антигеном. Но антитела у них образуются не сразу, так как плазмоциты (основные продуценты гамма-глобулина) появляются
Изменения интенсивности инвазии в зависимости от срока наблюдения лишь к 6-7-недельному возрасту, а полностью начинают функционировать, примерно в два месяца.
Самое раннее выделение ооцист возбудителя у новорожденных телят мы регистрировали, начиная с четвертого дня жизни при групповом содержании и с шестого дня жизни при индивидуальном клеточном содержании. Экстенсивность инвазии в это время составляла 12,64+0,39% и 10,1+0,3%, соответственно. К 7 - 10 дням зараженность резко возрастала (до 63,44+0,52 % при групповом и до 30,09+0,44 % при индивидуальном клеточном содержании). Затем в течение 4-10 дней у телят, содержащихся группами, экстенсивность инвазии (ЭИ) сохраняла достаточно высокие показатели, ее нижняя граница находилась на уровне 36,62+0,68 %. В этот же период животных, находящихся в индивидуальных клетках, на десятый день после рождения обычно переводят на групповое содержание. И уже спустя 2 -4 дня мы отмечали у этих телят вспышку заболевания. Пик ЭИ достигал 45,57 +0,48 %. Затем показатели экстенсивности инвазии стали снижаться, независимо от технологии содержания. И к 30 дню жизни животных зараженность плавно опустилась до отметки 17,18+0,59; 20,73+0,49 %. Для установления дальнейшего развития инвазии, нами были обследованы еще 30 телят в возрасте 31 - 40 дней. Показатели экстенсивности инвазии продолжали снижаться и составляли 5,56+1,27; 8,33+2,30 %. Возрастные колебания заболеваемости отражены в таблице 5 и рисунке 2.
Сроки заражения новорожденных телят находятся в прямой зависимости от технологии их содержания. Самое раннее выделение ооцист возбудителя при индивидуальном клеточном содержании отмечается на шестой день, то есть на два дня позже, чем при групповом. Пик заболеваемости приходится на вторую неделю жизни телят. Массовый характер болезни сохраняется, в среднем, до 20 - 21 дня, но уже к месячному возрасту большинство телят переболевает и заболевание регистрируется реже.
Обоснование создания и применения комплексного метода лечения криптоспоридиоза телят
В настоящее время признано, что терапия различных заболеваний должна быть комплексной и отвечать следующим требованиям:
1) лечение должно подражать естественному ходу освобождения организма от болезни и в тоже время соперничать с ним;
2) необходимо воздействовать на ведущее звено в патогенетической цепи заболевания;
3) при выборе метода лечения учитывать объем положительного действия того или иного средства в данном случае, так как организм больного представляет единое целое, а инфекционный процесс, происходящий в нем, подчиняется действию трех факторов: возбудитель, макроорганизм и окружающая среда;
4) следует повышать функцию защитно-охранительных механизмов;
5) необходимо влиять на сопричины заболевания.
Сложность лечения криптоспоридиозной инвазии обусловлена необычностью локализации паразита - внутри клетки, но обособленно, в цитоплазматичєской вакуоли. Кроме того, процесс споруляции у Cryptosporidium совершается еще при внутриклеточной локализации ооцист, что придает им особую устойчивость ко многим химическим и физическим факторам. Поэтому, несмотря на множество научных изысканий, борьба с Cryptosporidium до сих пор затруднительна.
Исходя из вышеизложенного, мы считали целесообразным разработать такой комплексный метод лечения, который мог бы достигнуть высокой терапевтической эффективности благодаря сочетанию этиотропного препарата с другими лечебными средствами, облегчающими течение заболевания и повышающими сопротивляемость больного организма. Краткая химическая и фармакологическая характеристика лекарственных препаратов
А. Нитрофураны. Основным действующим веществом в нашей схеме лечения стали препараты нитрофуранового ряда - фуракрилин и фуразонал, синтезированные в НИИ Химии Саратовского государственного университета имени Н.Г.Чернышевского. Выбор пал на эти препараты благодаря их высокой антибактериальной активности по сравнению с другими нитрофуранами, широко используемыми в ветеринарии (фуразолидон, фурадонин). Синтез фуракрилина и фуразонала технически прост и основан на доступном и экологически чистом сырье.
Фуракрилин растворим при комнатной температуре в воде (1:2000) и в изотоническом растворе хлористого натрия (1:900). Водные растворы фуракрилина не изменяются при длительном кипячении ( в течение I часа). Молекулярная масса фуракрилина невысока (233,18), что выгодно отличает его от многих антибиотиков и способствует лучшему проникновению через стенки кровеносных и лимфатических капилляров. Сроки хранения фуракрилина практически не ограничены. Основной раствор фуракрилина (1:1000) сохраняет свою активность в условиях хранения холодильника в течение года. Фуракрилин характеризуется исключительно широким спектром действия в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий. По данным создателей фуракрилина, этот препарат оказался более активным, чем все ранее известные препараты нитрофуранового ряда. Фуракрилин является для животных малотоксичным средством. При назначении внутрь однократно белым мышам его LDso составила і 922,5 мг/кг, LDioo = 3000 мг/кг. Максимальная терапевтическая доза препарата - 1000 мг/кг.
Образования устойчивых форм как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий к фуракрилину не установлено (Куликова Л.К., 1969).
Фуразонал действует антимикробно в широком диапазоне, распространяющемся как на грампозитивные, так и на грамнегатнвные бактерии. По фармакологическому действию на организм животных близок к фуракрилину, но менее токсичен (LDso = 2500 мг/кг).
Антимикробное действие фуракрилина и фуразонала определяется наличием фуранового и триазольного колец. Фуракрилин превосходит по антимикробному действию близкий к нему по химическому строению фуразонал в 5 - 25 раз. Оба препарата не обладают гемолитическими и кумулятивными свойствами. Активность нитрофуранов не снижается в присутствии крови, гноя, а также при изменении концентрации водородных ионов в пределах рН=6 - 8. Они не раздражают кожные покровы и слизистые оболочки. Лечебные дозы нитрофуранов не оказывают токсического действия на функции печени, почек, сердечно-сосудистой системы, кровь. В отличии от антибиотиков, они стимулируют иммунологическую реактивность организма. Таким образом, препараты нитрофуранового ряда -фуракрилин и фуразонал отвечают достаточно высоким требованиям при выборе лекарственных средств, что и позволило использовать их при выполнении нашей исследовательской работы с целью лечения криптоспоридиоза телят.
Б. Микроэлементы. Саратовская область по химическому составу почв отличается резкой мозаичностью. В почвах ее правобережной части, по сравнению с черноземной зоной, меньше меди, кобальта, цинка, йода и марганца. Почвы Левобережья сильно засолены. Они содержат в малых дозах марганец, цинк, медь и кобальт (Бабин Я А., Рудометкин Я.С., 1967). Микроэлементы содержатся в живых организмах в мизерных количествах, но имеют большое физиологическое значение: участвуют в обмене витаминов, аминокислот и других веществ. Содержание микроэлементов в организме животных зависит от количества их в растениях и питьевой воде, поэтому местные условия области уже предрасполагают к дефициту вышеперечисленных элементов.
