Введение к работе
Актуальность. Одна из центральных проблем современной клинической цитологии опухолей связана с изучением возможностей количественных методов исследования кяетки-морфометрией,проточной цито-фяуорометрией,сканируацей микрофотометрией. В специальной литературе до настоящего времени неполно отражены вопросы, касающиеся количественных параметров клеток при доброкачественных заболеваниях и раке молочной «левы, легкого, лимфосаркомах. Работы, в данном направлении проводились лишь отдельными авторами [Гасюк А. П. .1982; Даниленко R И.. 1983; Гакина К П. ,1985;Baak J.P.A. и соавт. ,1983.1985; Komltowski D. и соавт. .1985.1989;Marchevsky А. и соавт. ,1988;Sugiura Т. соавт. ,19881 и детально не раскрыли:возможности морфомотрии для уточнения степени выраженности предраковой пролиферации эпителия молочной железы;сведения о раэрешагаей способности метода при определении степени дифференцировки клеток рака молочной железы, легкого и улучшении цитологической диагностики отдельных морфологических вариантов рака и лимфосарком. Практически отсутствует в отечественной литературе данные об информативности и достоверности морфометрических параметров для оценки рецепторного статуса опухоли,степени выраженности лучевого и лекарственного патомор-фозе,количественных параметров первичной опухоли и ее метастаиов, прогноза заболевания.
Нельзя не признать,что несмотря на более чем двацатилетнвю историю применения метода проточной цитометрии в клинической цитологии [Петрова А. С. и соавтр. ,1977;3убрихина Г. Н. и соавт.. 1989;Dittrich V. .Gohde V. ,1969;Barlotfie а , и соавтр. ,1978; 1980; 1083; 1985; Melared M.R. и соавтр. ,197В; Laeruun O.D. и соавтр. ,1981;Hedley D. и ссавтр. ,1984;1987;1991;Fallenlus А. 1986; Cornel Hsse С. J. и соавтр. ,1987;Kaillonieml О. -Р. и соавтр. ,
1987; 1988; Koss L.G. и соавтр. ,1989;Volm U. И ссавт. .1985.1988] ДО настоящего времени многие вопросы при исследовании пролиф-ратквной активност.. и плоидности доброкачественных заболеваний и рака моюч-;:ой железы и легких остается недостаточно изученными, и,судя по данным литературы, носят противоречивый характер.
Морфологические особенности неходжинскшг лимфоы деот возюк-ность предположить, что из-ва различия в размерах клеток и ядер, собенностях структуры хроматина,испольасзэниэ шрфоштрш и модифицированного метода сканирующая микрофотометрии позвали с большей степенью достоверности проводить по иазкаа-отпечаткзм лнифэ-узлов дифференциальную цитологическую диагностику вариантов лк*|э-саркои и продвинуться с помощью комплекса "ДЬтва-ШІ-Здектро-ника 60-рубин Ц-201-EC-iOil-BC 1045" В решении проблем 6ST0U2T2S" зации цитологических исследований.
Существует и необходимость нэ основе количественного анализа углубленно изучить морфологические и биологические особенности клеток данных новообразований не только для улучшения их цитохо-гической диагностики,но и расширения возможностей цитологического метода при определении прогноза заболевания.
На основании изложенного, представляется актуальным исследовать данную проблему на достаточном обьеме клинического цитологического материала у больных раком молочной еэлезы,легкого и лимфосаркомами,как одних из ведущих локализаций в структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями в СССР.
В связи с этим.ДЕЛШ настоящгй работы является создание с почющью количественных методов исследования Сднка параметров клеток для последующего использования его для объективизации я улучшении дифференциальной цитологической диагностики, прогноза заболевания и автоматизации цитологических исследований.
Для достижения поставленной цели ревались следующие ЗМ1Ш;
1. Изучить.ыорфометрические и проточно цитометрические характеристики клеток и оценить возмояность использования полу-ченнных показателей для объективизации и улучшения цитологической диагностики доброкачественных 8або-евания, рака молочной гэлезы. . 2. Разработать на основании полученных количественных характеристик клеток возможные алгоритмы распозиования степени выраженности пролифэративных изьенений эпителия и клеток рка молочной делезы.
d. Исследовать при раке молочной гглезы различие морфометричес-кзп и проточно цитоштрических параметров клеток в зависимости, от локализации,стадии,морфологической формы, уровня рецепторов стероидных гормонов и степени дифференцировки клеток опухоли. Сравнить количественные параметры клетск первичной oL/холи и метастазов.
-
Проаналкзкровать изменение количественных показателей (ыорфо-метрическнтс и содержания ДНК) s процессе лечений больных с целью объективной оценки лучевого и лекарственного патоиорфоза.
-
Выявить признаки или совокупность количественных признаков, имеющих прогностическое значение у больных при раке молочной жл*-эа
-
изучить количественные параметры клеток новообразований /->г-кого и определить их значимость для уточнения степени дифференцировки опухоли и улучшения цитологической диагностики низко-
. дифференцированных аденокарцином,зпидермоидного рака и недифференцированного!, мелкоклеточного и крупноклеточного) рака. 8. Виявить возможности морфометрического метода для дифференциальной цитологической диагностики морфологических вариантов
находкинских лимфом.
9. Определить значение модифицированного метода сканирующей микрофотометрии для возможной автоматизации цитологической диагностики отдельных вариантов лимфосарком.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА исследования заключается в том,что на основании коулексного изучения создан банк количественньг показателей клеток новообразований молочных желез,легких и лимфосарком и разработана классификация ДНК-гистограмм.
Показано,что комплекс количественных параметров клеток объективно и точно указывает степень дифференцировки опухоли.
Выявлено,что количественные параметры клеток опухоли и ее размер не связаны между собой прямо пропорционально.
Установлена закономерность ь изменениях количественных показателей в зависимости от гормонального статуса опухоли.
.Доказано,что полиморфизм клеток и ядер,размеры ядер при диплоидном раке достоверно меньше,чем в анеуплоидных новообразованиях.
Выявлено,что метастатические клетки анеуплоидных новообразований менее дифференцированы и с большей пролифєративной активностью,чем клетки первичных опухолей и диплоидных метастазов.
Использование специальных толстых игл (или трепана) дало возможность изучать параметры клеток опухоли в динамике,до и после лечения, что позволило объективизировать 'степень выраженности постлучевого и лекарственного патоморфоза.
Уст ловлено,что количественные параметры клеток опухоли могут служить дополнительными критериями отбора больных раком молочной железы для назначения лучевой и лекарственной терапии с адриамицином.
Впервые показана ценность модифицированного метода сканируюодгй микрофотометрии в комплексе с ЭВМ для возможной автоматизации начального этапа цитологической диагностики лимфосарком.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Использование в качестве дополнительных критериев количественных параметров клеток и разработанных на их основе алгоритмов,повышает точность цитологической диагностики* -степени выраженности пролиферативных изменений эпителия.высокодиф-ференцированного рака молочной иелезн,морфологических вариантов низкодиференцированного и недифференцированного река легкого и лимфосарком.
Отработаны методики проведения проточной цитсФлуорометрии сразу после получения материала (с помопыо детергента тритон Х-100),черев 2-3 дня или позднее (после фиксации клеток) и на материяяе.иэ хранившихся годами парафиновых блоков,что дает возможность post factum /становить плоидность к пролиферативную активность опухоли.
Установлено,что морфометрические и проточно цитометрические показатели иьзеют достаточную дискриминантную силу.для точного определения степени дафференцировки опухоли.
Показано,что диплоидные опухоли хулк поддается лучевой терапии, чем ане,гплоидные. При химиотерапии с адриамицином плоидность опухоли не влияет на патоморфоз.но он более выражен в диплоидных и анеупло-идных новообразованиях с. низким числом клстлк я "". Дя.?? митетичес-кого цикла (<7Z).
Основные морфометрические и проточно цитометрические параметры в сочетании или в отдельности могут быть использованы в качестве объективных дополнительных показателей прогноза при раке молочной железы.
ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ. Результаты исследований внедрены в практику в ряде клинических отделений БОНД АМН СССР, используются в лекциях на кафедре лабораторной диагностики ЦОЛИУВ VD СССР. Имеется 4 акта о внедрении в практику результатов диссертацией-
юй работы.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ состоялась 5 июня 1991 года на совместной научной конференции лабораторий клинической цитологии,клинико-диагностической, клинической радиоиммукологии, патологической анатомии опухолей человека с прозектурой,отделений опухолей молочных желез,диагностического Шй КО ВОНЦ АМН СССР,лаборатории морфологических исследований НИИ Лазерной медицины УЗ СССР.
Основные положении диссертации доложены на: I Республиканской конференции врачей-лаборантов ЛатЕ. ССР.г. Рига, 1984г.; III Всесовз-иом совещании по проточной цитометрии.г. Ленинград, 1886г.; III Респуб- . ликанском съезде враче й-лаборантов БССР, г. Минск, 1986г.; IV Всесоюзной конференции "Современные методы морфологического исследования в теоретической и практической онкологии, г. Тбю.лси, 1988 г.; III Республиканской научно-технической конференции "Автоматизация цитологических исследований",г. Киев, 1988 г.;международном симпозиуме "Проблемы клинической энзимологии",г. Ужгород, 1989 г.; симпозиуме "Гематологические и цитологические исследования в клинической лабораторной вкагностике", г. Ивантеевка., 1 аэп г..
фрагменты диссертационной работы были удостоены премии Ленинского комсомола по науке за 1987 год.
ПУБЛИКАЦИИ: по теме диссертации опубликовано 18 научных работ, получено положительное решение на заявку К 4673292/14(035452) с просьбой выдать авторское свидетельство на изобретение.
СТРУКТУРА И ОБЬЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на VaScTp. машинописного текста.состоит из введения,обзора литературы,описания материалов и методов исследования,5 глав результатов собственных исследований,раздела обсуждения результатов и заключения, выводов, указателя литературы. Работа киэгтривовапа ЗГрисун-кдмчи 54 таблицами. Список литературы включает 504 источнике^из них
JtO.2 отечественных.
