Введение к работе
Актуальность исследования
Злокачественные заболевания довольно часто сопровождаются выпотом в плевральную и брюшную полости. У мужчин но частоте обнаружения опухолевых клеток в экссудатах первое место занимает рак легкого (49%), затем лейкозы и злокачественные лимфомы, включая лимфогранулематоз (21%), рак органов пищеварительного тракта (7%) н мочеполовой системы (6%). У женщин плевральные и перптопсальные экссудаты встречаются в 2 раза чаще, особенно при прогрессировашш рака молочной железы (37-50%) и яичников (20%), реже при злокачественных лимфомах (8%о) и раке органов пищеварительного тракта (4%).
С учетом гистологической структуры первичной опухоли выпоты в плевральную и брюшную полости диагностируют, главным образом, при метастазах железистого рака: у мужчин - в 66% и у женщин - в 82% наблюдений. При плоскоклеточном раке достаточно редко возникают метастатические экссудаты: при раке легкого - у 4% мужчин и у 2% женщин; при опухолях неэпителиальной природы - в 22% и 14% наблюденніі соответственно (Глузман Д.Ф., 2003).
Цитологическое исследование является единственным методом диагностики злокачественной природы экссудата, достоверность которого составляет от 64 до 96% (Климанова З.Ф., 1965; Долгов В.В., Шабалова И.П. и соавт., 2006; Shidham V.B., Atkinson B.F., 2006).
Первым аспектом проблемы при исследовании экссудатов является трудность дифференциальной диагностики реактивно-воспалительных, метастатических выпотов и мезотелиомы. Причиной затруднений трактовки клеток как злокачественных является, главным образом, наличие в жидкости реактивно измененных мезотелиальных клеток. При поздних стадиях онкологического заболевания опухолевые клетки в экссудате не удается обнаружить у всех пациентов, что обусловлено особенностями опухолевого
1 ' !
процесса в каждом конкретном случае и пределом цитологического метода при использовании рутинных окрасок.
На ранних этапах метастазирования трудно обнаружить клетки рака в экссудатах, вместе с тем установление распространенности опухолевого процесса до появления его клинических признаков имеет большое значение для правильного выбора тактики лечения. До последнего времени выявление опухолевых клеток осуществлялось только традиционными методами световой микроскопии, которые часто оказываются малоэффективными.
Другим аспектом проблемы при исследовании экссудатов является установление первичного источника метастазирования. По данным ряда исследователей, при использовании только цитоморфологических критериев адекватная диагностика возможна при раке молочной железы - у 78%, при аденокарциноме легкого - у 42% и при раке яичников - у 46% больных (Глузман Д.Ф. и соавт., 2003). От решения всех поставленных проблем во многом зависит правильный выбор метода лечения больного и благоприятный исход заболевания.
Перечисленные сложности удается преодолеть с помощью
современных иммуноморфологических методик: иммуноцитохимии
иммунопероксидазной (ИЦХ) и иммунофлуоресцентной (ФИЦХ), а также лазерной проточной цитофлуориметрии (ПЦФ).
Цель исследования
Цель исследования - совершенствование цитологической диагностики плевральных и перитонеальных экссудатов с использованием современных иммуноморфологических методик для установления характера экссудата, выявления единичных опухолевых комплексов и определения первичной локализации опухоли.
Задачи исследования
Разработать дифференциально-диагностические цитологические и иммуноцитохимические критерии реактивного экссудата с пролиферацией клеток мезотелия и специфического метастатического экссудата.
Выявить морфологические и иммуноцитохимические особенности экссудатов при различной локализации первичной опухоли.
3. Уточнить возможности цитологического и иммуноцитохимнческого методов в определении гистогенеза первичной опухоли при нсвыявленном первичном очаге.
4. Изучить возможности иммуноцитохимнческого исследования в определении малочисленных опухолевых комплексов в экссудатах.
5. Определить значимость методик лазерной проточной цитофлуориметрии и флуоресцентной иммуноцитохимии при исследовании экссудатов.
Научная новизна
Впервые в результате комплексного исследования экссудатов из серозных полостей с применением таких современных методик цитологической диагностики, как иммуноцитохимия и лазерная проточная цитофлуориметрия, стало возможным объективно охарактеризовать клеточный состав выпота, определить роль и значение в уточнении характера жидкости. Современные высокотехнологичные методики обнаруживают малочисленные опухолевые комплексы в экссудате на ранних этапах метастазирования, не выявляемые рутинным цитологическим исследованием, а также снижают гипердиагностику опухолевого процесса. Использование комплекса иммуноцитохимических маркеров позволяет уточнить источник метастазирования при неустановленном первичном опухолевом очаге. Показана высокая эффективность и быстрота флуоресцентной иммуноцитохимии экссудатов при срочных интраоперационных исследованиях с целью уточнения распространенности опухолевого процесса.
Практическая значимость
Проведенное исследование позволило разработать и внедрить в клиническую практику иммуноморфологические методы исследования экссудатов, в том числе иммуноцитохимию иммунопероксидазным методом и флуоресцентную иммуноцитохимию, уточнить значимость лазерной проточной цитофлуориметрни при исследовании плевральных и перитонеальных эксудатов.
Выявление малочисленных опухолевых комплексов с помощью применяемых современных методов увеличивает на 15% число наблюдений с доказанной диссеминацией опухоли по серозным оболочкам, следователыго, более точно определяет истинную распространенность опухолевого процесса.
ИЦХ исследование экссудатов с целью выявления локализации первичной опухоли устанавливает ее гистогенез с достоверностью 92,6%, что предопределяет дальнейшее обследование и целенаправленное лечение пациентов.
Внедрение в практику Разработанные методики исследования экссудатов (ИЦХ, ФИЦХ и ПЦФ) используют в отделении онкоцитологии ФГУ «МНИОИ им П.А. Герцена Росмедтехнологий»
Апробация работы Апробация проведена на заседании межотделенческой конференции ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росмедтехнологий» 05 ноября 2009г. Результаты исследования доложены на VI Всероссийской конференции молодых ученых в Москве (2007г.), на научно-практической конференции «Лабораторная диагностика при специализированной и экстренной медицинской помощи» в Москве (2008г.), на Расширенном Пленуме Центрального Совета Ассоциации клинических цитологов в г. Черноголовка Московской области (2008г.).
Структура и объем работы
