Введение к работе
Актуальность проблемы'. В последние годы благодаря значительным достижениям в области генетики, молекулярной и клеточной биологии обозначились новые перспективные подходы к биотерапии злокачественных новообразований. Такие известные факты, как спонтанный регресс злокачественной опухоли, нередко весьма значительная продолжительность безрецидивного периода после ее хирургического удаления, многократно доказанная на различных моделях сенсибилизация лимфоцитов больного к опухолевым клеткам и способность лизировать их. по крайней мере in vitro, убедительно свидетельствуют в пользутого, что иммунная система играет важную роль на некоторых этапах патогенеза опухоли (Хансон К. П. и соавт., 1996; Nestle F.O., DummerR, 1998; Houghton AN. etal., 2001; JagerE. etal., 2003). Это положение является отправной точкой для различных новейших молекулярно-биологических приемов воздействия на клеточный и гуморальный иммунитет онкологических больных. Поэтому особенно активно разрабатываются методы, направленные на активацию естественного противоопухолевого иммунитета (методы активной специфической иммунотерапии), втом числе вакцинотерапия. В отличие от профилактических вакцин против инфекционных агентов, для которых индукция нейтрализующего гуморального иммунитета является наиболее значимым звеном, основное направление противоопухолевой вакцинации сфокусировано на развитии антиген-зависимого Т-лимфоцитарного ответа (Pardoll DM, 1998). По литературным данным, одним из эффективных способов генерации специфического противоопухолевого иммунитета является создание вакцин на основе аутологичных модифицированных опухолевых клеток (Моисеенко В.М., 2000; Барышников А.Ю., 2002, Xu М. et al., 2000). Модификация опухолевых клеток используется для усиления ихиммуно-генности, что позволяет индуцировать клоногенную пролиферацию эффекторных клеток и/или усиливать уже существующий противоопухолевый иммунный ответ. В качестве одного из наиболее перспективных молекулярно-биологических подходов к созданию противоопухолевых вакцин рассматривается введение в опухолевую клетку генов некоторых цитокинов (ИЛ-2, 7, 12; ГМ-КСФ и др.). После блокады пролифе-ративных способностей облучением такие модифицированные клетки могут в течение месяца существовать в организме, продуцируя цитокины, стимулирующие противоопухолевый иммунитет (Киселев С.Л. и соавт., 2000). Одним из подобных агентов для вакцинотерапии опухолей считается недавно выделенный и клонированный
оУ^ЖІ
белокТад 7(KiselevS.I_etal_, 1998; Lann S. etal, 2001). Еще одним достаточно перспективным направлением повышения иммуногенности считается введение в процессе вакцинации аутологичными опухолевыми клетками лимфокинов и их индукторов для привлечения и активации иммунокомпетентных клеток, таких как ИЛ-1,2 и др. (Salgaller М L, 2000) В ряде клинических исследований установлено, что методы вакцинотерапии наиболее эффективны при лечении больных диссеминированной меланомои кожи и метастатическим раком почки При этом результаты сопоставимы с современной химио-иммунотерапией (Моисеенко В М, 2001; Vile R etal, 1996; Kawai К, 2002). Однако до настоящего времени такие подходы всё еще не имеют широкого применения в клинической практике из-за трудоемкости процессов приготовления вакцин и их высокой стоимости.
В связи с вышеизложенным разработка и оптимизация методов усиления противоопухолевого иммунитета с помощью аутологичных противоопухолевых вакцин с адъювантом и генетически модифицированных опухолевых клеток представляется актуальной научно-практической задачей.
Цель и задачи исследования. Цель работы - улучшение результатов лечения больныхдиссеминированной меланомои кожи и метастатическим раком почки на основе усовершенствования методов получения аутологичных модифицированных и немодифицированных вакцин. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Апробировать различные методы получения культур опухолевых клеток из операционного материала больныхдиссеминированной меланомои кожи и метастатическим раком почки.
Выявить оптимальные условия культивирования опухолевых клеточных линий путем подбора необходимого набора питательных сред и их компонентов.
Оптимизировать процесс модификации опухолевых клетокдля повышения их иммуногенности, используя невирусные методы трансфекции.
Оптимизировать различные методы консервации опухолевых клеточ-ныхлиний, предназначенныхдля приготовления соответствующих вакцин, без потери антигенное в процессе длительного курса лечения больных.
5. Оценить эффективность и токсичность аутологичных вакцин с адъювантом ИЛ-ір и вакцин на основе аутологичных опухолевых клеток, модифи-
цированных геном tag 7, влечении больныхдиссеминированной меланомой
кожи и раком почки
Научная новизна. Впервые проведен сравнительный анализ различных методов получения кпеточных культур из опухолевых клеток больныхдиссеминиро-ванной меланомой и метастатическим раком почки, иххранения и усиления иммуно-генности после различных методов модификации.
Впервые представлены клинические данные по оценке эффективности и токсичности вакцин, полученных на основе аутологичных опухолевых клеток, трансфе-цированных геном tag 7v\ вакцин, полученных на основе аутологичных опухолевых клеток в сочетании с адъювантом ИЛ-1р.
Практическая значимость работы. Приготовление вакцин является, по существу, производством лекарственного препарата, что требует выработки четких технологических условий по оптимизации и стандартизации процессов их приготовления в соответствующем клиническим требованиям санитарном режиме В результате данного комплексного экспериментально-клинического исследования сформулированы рекомендации по стандартизации получения аутологиччых противоопухолевых вакцин на основе модифицированных и немодифицированных опухолевых клеток
Апробация работы Результаты исследования обсуждались на нзучных конференциях НИИ онкологии им проф Н Н Петрова, материалы диссертации были доложены на обществе онкологов Санкт-Петербурга и Ленинградской области; на I Всероссийской научно-практической конференции «Биотерапия рака» (Москва, 2002), на Международной конференции «Проблемы онкоиммунологии научные и прикладные аспекты» (Киев, 2003), на Международном форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2003). По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ.
Объем и структура работы Диссертация изложена на /j
![Оценка эффективности использования рекомбинантного интерлейкина-2 у больных диссеминированной меланомой кожи и распространенным раком почки [Электронный ресурс]](/i/i/4598/208819.png "Оценка эффективности использования рекомбинантного интерлейкина-2 у больных диссеминированной меланомой кожи и распространенным раком почки [Электронный ресурс] Новик Алексей Викторович")
![Место профилактической лимфаденэктомии в комплексном лечении меланомы кожи туловища и конечностей [Электронный ресурс]](/i/i/4386/193630.png "Место профилактической лимфаденэктомии в комплексном лечении меланомы кожи туловища и конечностей [Электронный ресурс] Ахметов Ильяс Рафкатович")
