Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы. Экспрессия рецептора интерлейкина-6 в нормальных и опухолевых гемопоэтических клетках 7
ГЛАВА II. Характеристика больных и методы исследования 29
Результаты собственных исследований 37
ГЛАВА III. Экспрессия рецептора GP130 при мантийноклеточных лимфомах 39
ГЛАВА IV. Экспрессия а-цепей рецептора интерлейкина-6 при мантийноклеточных лимфомах 93
ГЛАВА V. Экспрессия и активация рецепторного комплекса GP130/GP80 при мантийноклеточных лимфомах 102
Заключение 121
Выводы 127
Список литературы 129
- Обзор литературы. Экспрессия рецептора интерлейкина-6 в нормальных и опухолевых гемопоэтических клетках
- Экспрессия рецептора GP130 при мантийноклеточных лимфомах
- Экспрессия а-цепей рецептора интерлейкина-6 при мантийноклеточных лимфомах
- Экспрессия и активация рецепторного комплекса GP130/GP80 при мантийноклеточных лимфомах
Введение к работе
Актуальность темы исследования
Успехи в лечении различных иммуноморфологических вариантов неходжкинских лимфом, достигнутые в последние годы, во многом обусловлены совершенствованием методов диагностики этих опухолей.
Иммуноморфологическая характеристика неходжкинских лимфом положена в основу самой последней классификации опухолей кроветворной и лимфоидной тканей Всемирной Организации Здравоохранения 2001 года [Jaffe E.S. et al., 2001]. Широкое внедрение в клиническую практику иммунологических методов обследования больных по существу позволило снять остроту дифференциально-диагностических проблем при различных вариантах периферических мелкоклеточных В-лимфом.
Вместе с тем в учении о неходжкинских лимфомах одной из сложных и до сих пор недостаточно изученных проблем остается мантийноклеточный вариант болезни, отличающийся своебразием клинических проявлений, а также морфологических, иммунологических и молекулярно-биологических характеристик опухолевых клеток.
В литературе название этого варианта лимфомы стало широко употребляться Европейскими и Американскими патологами только с 1992 года. Окончательно этот вариант опухоли обозначен сначала в Европейско-Американской классификации лимфоидных опухолей в 1994 году, а затем в классификации ВОЗ 2001 года.
До настоящего времени именно этот вариант периферической мелкоклеточной В-лимфомы является наиболее сложной клинической проблемой. Остаются не разработанными тактические и лечебные подходы. Кроме того, результаты лечения, в особенности отдаленные, большинством исследователей признаются неудовлетворительными, и они в значительной
4 степени уступают таковым при других вариантах мелкоклеточных
периферических В-лимфом.
Все эти обстоятельства служат основанием для проведения не только клинических, но и фундаментальных морфологических, иммунологических и молекулярно-биологических исследований. В этом плане одним из важных направлений признается изучение цитокинов семейства интерлейкина-6. Начиная с 1989 года, значение интерлейкина-6, как важного антиапоптотического ростового фактора, влияющего на пролиферативную активность опухолевых клеток, наиболее детально было изучено при множественной миеломе. Несколько позже появились первые обнадеживающие сообщения об успешном применении в клинике анти-интерлейкин-6 моноклональных антител (В-Е8).
Как известно, клетки мантийноклеточной лимфомы характеризуются яркой экспрессией молекулы gp80, являющейся а-рецептором интерлейкина-6. Это послужило основанием полагать, что рецептор интерлейкин-6 может играть важное значение в патогенезе мантийноклеточной лимфомы. В ряде работ, показано, что клиническое значение может иметь структурно-функциональное состояние рецептора молекулы интерлейкина-6. Таким образом, на основании изучения структуры рецептора можно оценить состояние активации под действием цитокинов, или отсутствие таковой.
Настоящая работа посвящена изучению клинического значения структурно-функционального состояния рецепторного комплекса (gpl30/gp80) к цитокинам семейства интерлейкина-6, при мантийноклеточных лимфомах.
Целью настоящей работы явилось изучение экспрессии и активации рецепторного комплекса (gp 130/80) интерлейкина-6 при мантийноклеточной лимфоме.
5 Для достижения поставленной цели необходимо было решить
следующие задачи:
Изучить экспрессию трансдуцерной молекулы gpl30 (|3-цепь рецептора интерлейкина-6) при мантийноклеточных лимфомах.
На основе использования набора моноклональных антител к эпитопам молекулы gpl30 (С, D, Н, G, А, В) отобрать наиболее информативные и наиболее полно выявляющие рецептор антитела.
3. Изучить экспрессию gp80 (а-цепь рецептора-интерлейкина-6) при
мантийноклеточной лимфоме.
4. На основе использования набора моноклональных антител к
эпитопам молекулы gp80 (М91, М5, М164, М195, М192) отобрать наиболее
информативные и наиболее полно выявляющие рецептор антитела.
5. Оценить экспрессию полного рецепторного комплекса
интерлейкина-б, включающего а- и р- цепи рецептора, при
мантийноклеточных лимфомах.
6. На основе эпитопной структуры gpl30 проанализировать
активационный статус молекулы при мантийноклеточных лимфомах.
Научная новизна
Впервые показана высокая частота экспрессии рецепторного комплекса gp 13 0/8 0 на опухолевых клетках при мантийноклеточных лимфомах. Частота экспрессии gpl30 составляет 90%, a gp80 выявляется реже - в 52% случаев. Показано, что альфа-цепи рецептора (gp80) ИЛ-6 выявляются только при наличии молекулы gpl30 на мембране клеток. В gp80-no3HTHBHbix случаях лимфом из клеток мантии фолликулов рецептор gpl30 в 100%) случаев находится в активированном состоянии, которое характеризуется наличием эпитопов С при отсутствии эпитопа А. В целом, при мантийноклеточных лимфомах активация всего рецепторного комплекса наблюдается в 65% случаев. Как правило, активационный фенотип молекулы gpl30 соответствует таковому, наблюдаемому в ходе перераспределения эпитопной
структуры молекулы под действием интерлейкина-6 (А1-В1-С+). В редких случаях эпитопная структура свидетельствует о том, что рецептор может активизироваться другими, нежели интерлейкин-6, цитокинами данного семейства.
Практическая значимость
При мантийноклеточных лимфомах установление экспрессии рецептора интерлейкина-6 (а-цепь) в 52% случаев является дополнительным подтверждением посткостномозгового происхождения опухолевых клеток. Экспрессия gp80 может иметь важное значение при проведении дифференциальной диагностики периферических лимфом и лимфом с иммунофенотипом клеток-предшественников.
Установление активированного состояния молекулы gpl30 при мантийноклеточных лимфомах свидетельствует о возможной ростовой, пролиферативной и антиапоптотической роли интерлейкина-6.
Поэтому клинические и иммунологические исследования, направленные на поиск методов нейтрализации биологической активности интерлейкина-6, являются патогенетически обоснованными.
Обзор литературы. Экспрессия рецептора интерлейкина-6 в нормальных и опухолевых гемопоэтических клетках
Последнее десятилетие ознаменовалось переходом от сравнительно морфологического метода диагностики лимфом к иммуноморфологическому. Повсеместное распространение получила Европейско-Американская классификация солидных опухолей (REAL) [Harris et al., 1994] и созданная на ее основе классификация ВОЗ 2001 года [Jaffe et al., 2001]. Это позволило повысить воспроизводимость и оценить клиническое течение и прогноз некоторых новых вариантов лимфом. К числу новых вариантов относится и мантийноклеточный вариант опухоли.
Этот вариант мелкоклеточной лимфомы, относившийся в ранее к лимфомам низкой или промежуточной степени злокачественности, как оказалось, характеризуется крайне неблагоприятным прогнозом [Mason D., et al., 1998] Общая пятилетняя выживаемость не превышает 30%.
К сожалению, приходится констатировать, что существующие на сегодняшний день подходы к лечению мантийноклеточных лимфом, включая высокодозную химиотерапию с трансплантацией аутологичных стволовых гемопоэтических клеток, не всегда являются эффективными. Необходимы новые, возможно, биотерапевтические подходы к лечению данной нозологической формы лимфом. Для реализации этих подходов необходимо более глубокое понимание биологических основ регуляции роста и дифференцировки злокачественных клеток, являющихся субстратом мантийноклеточных лимфом.
По иммунофенотипическим особенностям мантийноклеточные лимфомы относятся к CD5-no3HTHBHbiM лимфоцитарным опухолям, происходящим из периферических В-клеток. Считается, что нормальными аналогами этих клеток являются CD5-позитивные В-лимфоциты внутреннего края мантии фолликулов лимфатических узлов. Мантийноклеточная лимфома диагностируется иммуноморфологически. Кроме того, важными в установлении данного варианта лимфомы являются цитогенетические и молекулярно биологические исследования, направленные на выявление транслокации t(ll;14)(ql3;q32) и экспрессии белка циклина D1. Этот вариант лимфом характеризуется наиболее неблагоприятным прогнозом в сравнении с другими мелкоклеточными лимфомами. Отмечается более интенсивная экспрессия моноклональных IgM +/-IgD на мембране опухолевых клеток в сравнении с клетками В-ХЛЛ/лимфоцитарной лимфомы [Campo Е., Raffeld М., 1999; Tolksdorf G., Stein Н., et. al., 1980]. Одной из фенотипических особенностей лимфом из клеток мантии, отличающей их от других мелкоклеточных В-лимфом, является слабая экспрессия обще-В-клеточного антигена CD 19 [Ван Доген Ж.Б и др., 2002]. Этот признак лучше выявляется при применении метода проточной цитометрии, нежели иммуногистохимически. Экспрессия CD20, напротив, является более яркой в сравнении с лимфомой из малых лимфоцитов/В-ХЛЛ. Клетки являются CD 10- и bcl-6-негативными. По мнению ряда авторов, в большинстве случаев мантийноклеточных лимфом опухолевые клетки характеризуются наличием молекулы CD38 [Лорие Ю.Ю., 2003]. По данным ГУ РОНЦ РАМН невысокая экспрессия антигена CD38 на части опухолевых клеток выявляется лишь в 35% случаев мантийноклеточных лимфом, что незначительно отличается от частоты выявления данного антигена при В-ХЛЛ и фолликулярных лимфомах. Характерна экспрессия антигенов FMC-7 и CD43 [Chott А., 1999; Harris N.L., 1984; Swerdlow S. Н., 2003; Zoldan М.С., 1996; Zucca E., 1994; Zukerberg L.R., 1993]. Иммуногистохимическое окрашивание на CD21, CD23, CD35 выявляет рыхлую сеть фолликулярных дендритных клеток. По нашим данным, этот признак наблюдается в 70% случаев мантийноклеточных лимфом, причем фолликулярные дендритные клетки располагаются как в нодулях, так и в участках диффузного роста [Тахаев З.В., Пробатова Н.А. и др. 2002]. Во всех случаях лимфом из клеток мантии лимфоидных фолликулов наблюдается экспрессия белка BCL-2. Характерной является ядерная экспрессия циклина D1. Частота этого онкопротеина, по данным литературы, достигает почти 100% [De Boer CJ.et.al., 1995; Yang W.I. et.al., 1994; Zukerberg L.R. et.al., 1995]. В исследованиях, проведенных в РОНЦ РАМН, циклин D1 обнаружен у 85% пациентов с мантийноклеточными лимфомами. Этот признак имеет важное диагностическое значение в СБ5-негативных случаях. Экспрессия циклина D1 имеет самостоятельное диагностическое значение и может наблюдаться при отсутствии реаранжировки геяз, ВСЫ [Swerdlow S. Н. et. al., 2003]. Свое название мантийноклеточные лимфомы первоначально получили благодаря особому характеру роста. Поэтому первоначально их называли лимфомы зоны мантии. В дальнейшем было установлено, что характер роста опухолевых лимфоидных клеток (нодулярный, диффузный, смешанный) не является определяющим в диагностике мантийноклеточных лимфом: они могут быть диагностированы при любом характере роста на основании результатов иммунофенотипирования клеток биоптатов лимфатических узлов, а в случаях лейкемизации лимфомы на основании иммунофенотипирования клеток крови или костного мозга. Нормальным клеточным аналогом мантийноклеточных лимфом являются лимфоидные элементы внутреннего края мантии вторичных лимфоидных фолликулов лимфатических узлов -минорная фракция лимфоцитов, располагающаяся на границе мантийной зоны и светлого центра. Клетки с подобным иммунофенотипом отсутствуют в зародышевых центрах. Лимфома из клеток мантии фолликулов, так же как и лимфома из малых лимфоцитов/В-ХЛЛ относится к С05-позитивным В-клеточным лимфомам. Одним из важных иммунологических критериев при проведении дифференциального диагноза этих опухолей является экспрессия CD23. В классификации ВОЗ допускается слабая экспрессия CD23 на мембране опухолевых клеток при мантийноклеточной лимфоме. Это подтверждает высокую диагностическую специфичность наличие экспрессии CD5+ и отсутствие антигена CD23- для мантийноклеточных лимфом. В последние годы описаны CD23-позитивные лимфомы из клеток мантии фолликулов. Судя по литературным данным [Schlette Е., Fu К., et.al., 2003], CD23 позитивные мантийноклеточные лимфомы отличаются от классической лимфомы из клеток мантии, включенной в классификации REAL и ВОЗ. Так, CD23-позитивные мантийноклеточные лимфомы характеризуются в ряде случаев довольно благоприятным прогнозом, высокими уровнями лейкоцитов крови при лейкемизации опухоли (16,5 - 196,0 х 109/л, Me 60,3), возможностью отсутствия опухолевого компонента. Все это говорит о необходимости серьезной аргументации для включения CD23- и CD5 позитивных В-клеточных лимфом в группу мантийноклеточных, а не в группу В-ХЛЛ.
Экспрессия рецептора GP130 при мантийноклеточных лимфомах
Последнее десятилетие ознаменовалось переходом от сравнительно морфологического метода диагностики лимфом к иммуноморфологическому. Повсеместное распространение получила Европейско-Американская классификация солидных опухолей (REAL) [Harris et al., 1994] и созданная на ее основе классификация ВОЗ 2001 года [Jaffe et al., 2001]. Это позволило повысить воспроизводимость и оценить клиническое течение и прогноз некоторых новых вариантов лимфом. К числу новых вариантов относится и мантийноклеточный вариант опухоли.
Этот вариант мелкоклеточной лимфомы, относившийся в ранее к лимфомам низкой или промежуточной степени злокачественности, как оказалось, характеризуется крайне неблагоприятным прогнозом [Mason D., et al., 1998] Общая пятилетняя выживаемость не превышает 30%.
К сожалению, приходится констатировать, что существующие на сегодняшний день подходы к лечению мантийноклеточных лимфом, включая высокодозную химиотерапию с трансплантацией аутологичных стволовых гемопоэтических клеток, не всегда являются эффективными. Необходимы новые, возможно, биотерапевтические подходы к лечению данной нозологической формы лимфом. Для реализации этих подходов необходимо более глубокое понимание биологических основ регуляции роста и дифференцировки злокачественных клеток, являющихся субстратом мантийноклеточных лимфом.
По иммунофенотипическим особенностям мантийноклеточные лимфомы относятся к CD5-no3HTHBHbiM лимфоцитарным опухолям, происходящим из периферических В-клеток. Считается, что нормальными аналогами этих клеток являются CD5-позитивные В-лимфоциты внутреннего края мантии фолликулов лимфатических узлов. Мантийноклеточная лимфома диагностируется иммуноморфологически. Кроме того, важными в установлении данного варианта лимфомы являются цитогенетические и молекулярно биологические исследования, направленные на выявление транслокации t(ll;14)(ql3;q32) и экспрессии белка циклина D1. Этот вариант лимфом характеризуется наиболее неблагоприятным прогнозом в сравнении с другими мелкоклеточными лимфомами. Отмечается более интенсивная экспрессия моноклональных IgM +/-IgD на мембране опухолевых клеток в сравнении с клетками В-ХЛЛ/лимфоцитарной лимфомы [Campo Е., Raffeld М., 1999; Tolksdorf G., Stein Н., et. al., 1980]. Одной из фенотипических особенностей лимфом из клеток мантии, отличающей их от других мелкоклеточных В-лимфом, является слабая экспрессия обще-В-клеточного антигена CD 19 [Ван Доген Ж.Б и др., 2002]. Этот признак лучше выявляется при применении метода проточной цитометрии, нежели иммуногистохимически. Экспрессия CD20, напротив, является более яркой в сравнении с лимфомой из малых лимфоцитов/В-ХЛЛ. Клетки являются CD 10- и bcl-6-негативными. По мнению ряда авторов, в большинстве случаев мантийноклеточных лимфом опухолевые клетки характеризуются наличием молекулы CD38 [Лорие Ю.Ю., 2003]. По данным ГУ РОНЦ РАМН невысокая экспрессия антигена CD38 на части опухолевых клеток выявляется лишь в 35% случаев мантийноклеточных лимфом, что незначительно отличается от частоты выявления данного антигена при В-ХЛЛ и фолликулярных лимфомах. Характерна экспрессия антигенов FMC-7 и CD43 [Chott А., 1999; Harris N.L., 1984; Swerdlow S. Н., 2003; Zoldan М.С., 1996; Zucca E., 1994; Zukerberg L.R., 1993]. Иммуногистохимическое окрашивание на CD21, CD23, CD35 выявляет рыхлую сеть фолликулярных дендритных клеток. По нашим данным, этот признак наблюдается в 70% случаев мантийноклеточных лимфом, причем фолликулярные дендритные клетки располагаются как в нодулях, так и в участках диффузного роста [Тахаев З.В., Пробатова Н.А. и др. 2002]. Во всех случаях лимфом из клеток мантии лимфоидных фолликулов наблюдается экспрессия белка BCL-2. Характерной является ядерная экспрессия циклина D1. Частота этого онкопротеина, по данным литературы, достигает почти 100% [De Boer CJ.et.al., 1995; Yang W.I. et.al., 1994; Zukerberg L.R. et.al., 1995]. В исследованиях, проведенных в РОНЦ РАМН, циклин D1 обнаружен у 85% пациентов с мантийноклеточными лимфомами. Этот признак имеет важное диагностическое значение в СБ5-негативных случаях. Экспрессия циклина D1 имеет самостоятельное диагностическое значение и может наблюдаться при отсутствии реаранжировки геяз, ВСЫ [Swerdlow S. Н. et. al., 2003]. Свое название мантийноклеточные лимфомы первоначально получили благодаря особому характеру роста. Поэтому первоначально их называли лимфомы зоны мантии. В дальнейшем было установлено, что характер роста опухолевых лимфоидных клеток (нодулярный, диффузный, смешанный) не является определяющим в диагностике мантийноклеточных лимфом: они могут быть диагностированы при любом характере роста на основании результатов иммунофенотипирования клеток биоптатов лимфатических узлов, а в случаях лейкемизации лимфомы на основании иммунофенотипирования клеток крови или костного мозга. Нормальным клеточным аналогом мантийноклеточных лимфом являются лимфоидные элементы внутреннего края мантии вторичных лимфоидных фолликулов лимфатических узлов -минорная фракция лимфоцитов, располагающаяся на границе мантийной зоны и светлого центра. Клетки с подобным иммунофенотипом отсутствуют в зародышевых центрах. Лимфома из клеток мантии фолликулов, так же как и лимфома из малых лимфоцитов/В-ХЛЛ относится к С05-позитивным В-клеточным лимфомам. Одним из важных иммунологических критериев при проведении дифференциального диагноза этих опухолей является экспрессия CD23. В классификации ВОЗ допускается слабая экспрессия CD23 на мембране опухолевых клеток при мантийноклеточной лимфоме. Это подтверждает высокую диагностическую специфичность наличие экспрессии CD5+ и отсутствие антигена CD23- для мантийноклеточных лимфом. В последние годы описаны CD23-позитивные лимфомы из клеток мантии фолликулов. Судя по литературным данным [Schlette Е., Fu К., et.al., 2003], CD23 позитивные мантийноклеточные лимфомы отличаются от классической лимфомы из клеток мантии, включенной в классификации REAL и ВОЗ. Так, CD23-позитивные мантийноклеточные лимфомы характеризуются в ряде случаев довольно благоприятным прогнозом, высокими уровнями лейкоцитов крови при лейкемизации опухоли (16,5 - 196,0 х 109/л, Me 60,3), возможностью отсутствия опухолевого компонента. Все это говорит о необходимости серьезной аргументации для включения CD23- и CD5 позитивных В-клеточных лимфом в группу мантийноклеточных, а не в группу В-ХЛЛ.
Экспрессия а-цепей рецептора интерлейкина-6 при мантийноклеточных лимфомах
У 12 больных возможность идентификации gp80 оценили с помощью смеси МКА к 2 нефункциональным эпитопам молекулы gp80 - М91 и М5. Мы предполагали, что одновременное использование двух МКА повысит чувствительность обнаружения рецептора в случаях его слабой экспрессии на клетках. Частота выявления gp80 с помощью смеси МКА М91+М5 составила 33,3% (4 из 12). Пример отсутствия рецептора при ИГХ определении. Наблюдение 5. Диагноз - мантийноклеточная лимфома. Гистологическое описание - в лимфатическом узле диффузное разрастание небольших лимфоидных клеток с крупными и неправильной формы ядрами, низкой митотической активностью. С учетом данных иммуногистохимического исследования изменения следует квалифицировать как лимфому из клеток мантии. Иммунофенотипическое исследование включало стандартный набор маркеров, определяемых в ткани лимфатического узла по криостатным срезам. Эта панель включает определение CD45, В-клеточных антигенов CD19 и CD37; Т-клеточных антигенов CDla, CD4, CD5, CD7, CD8; макрофагально/гистиоцитарных антигенов CD 163, а также линейно не рестриктированных антигенов HLA-DR, CD38, CD23, CD 10. На клетках были экспрессированы диагностические маркеры лимфомы из клеток мантии фолликулов лимфатических узлов — CD19, CD37, CD5, HLA-DR. Экспрессия маркеров Т-лимфоцитов была органичена единичными сохранными Т-клетками (помимо CD7 и маркеров субпопуляций Т-клеток CD4 и CD8 на них были ярко экспрессированы антигены CD5). Клетки были позитивны по CD45. В ткани присутствовали отдельные разрозненные CD 163+ макрофаги. Экспрессия CD23, CD 10 полностью отсутствовала, что позволяло надежно исключить диагноз лимфомы из малых лимфоцитов/В-ХЛЛ и фолликулярной лимфомы. Яркая цитоплазматическая экспрессия CD38 обнаруживалась в единичных разрозненных и расположенных в виде скоплений плазмоцитах. Экспрессия рецепторного комплекса gpl30 проведена на основе эпитопов, не задействованных в передаче сигнала интерлейкина-6. Для определения gp80 использовали моноклональные антитела М91 и М5. Для идентификации gpl30 использованы антитела D2+C2. Экспрессия gp80 на клетках отсутствовала. Экспрессия gpl30 была мономорфной. Таким образом, по иммунофенотипу ИЛ-6Р лимфома соответствовала gpl30+gp80-. Состояние активации рецептора в данном случае оценено не было. Пример наличия рецептора (проточная цитометрия) Наблюдение 17. Диагноз - мантийноклеточная лимфома. Больной с выраженной спленомегалией. Диагноз установлен на основании иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови и костного мозга. На момент исследования крови - лейкоциты 164 х 109/л, лимфоциты 89%. Иммунофенотипирование проведено с использованием широкой панели МКА к антигенам Т-лимфоцитов (CDla, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8), В-лимфоцитам (CD19, CD37), линейно не рестриктированным и активационным антигенам (HLA-DR, CD38, CD23, CD 10, CD71), маркерам макрофагов CD163, стволовых клеток (CD34), эритробластов НАЕ-9, NK-клеток(С016+56). Не было случаев экспрессии эпитопов Ml64 и Ml82 на клетках при отсутствии реакции смеси МКА М91+М5. С другой стороны, в 1 из 2 М91 негативных случаев отмечена реакция МКА Ml 95. То есть эти МКА оказались более чувствительными в выявлении рецептора, чем смесь МКА М91+М5. Суммируя данные по использованию МКА к нефункциональным эпитопам gp80 (М91 или смесь М91+М5) для определения рецептора на мембране при мантийноклеточных лимфомах, можно отметить следующее. Антиген выявляется в 9 из 24 случаев - 37%. Это значительно ниже, чем при использовании всех 5 МКА к эпитопам молекулы gp80 (58,3%). Обнаружение мембранного рецептора gp80 на основе идентификации функционального эпитопа Ml64 при мантийноклеточных лимфомах. МКА М164 конкурируют с ИЛ-6 за связывание с молекулой gp80: добавление ИЛ-6 ведет к снижению связывания МКА и, напротив, добавление МКА Ml64 препятствует связыванию ИЛ-6 с клетками. Соответственно, МКА Ml 64 блокируют пролиферацию ИЛ-6-зависимых миеломных клеточных линий. На основании этих данных сделано заключение о том, что МКА Ml 64 распознают эпитоп молекулы gp80, вовлеченный во взаимодействие с ИЛ-6. Частота обнаружения рецептора gp80 с помощью МКА Ml64 составила 22,2% (2 из 9 наблюдений). Следует отметить, что еще в 2 из этих 9 случаев рецептор обнаруживался на мембране с помощью МКА к нефункциональным эпитопам М91 или М91+М5. Таким образом, в 50% случаев обнаружения на мембране клеток молекулы gp80 с помощью МКА к нефункциональным эпитопам экспрессия эпитопа Ml 64 отсутствует. Это одно из указаний на то, что в этих случаях рецептор может находиться в функционально активном состоянии. Обнаружение мембранного рецептора gp80 на основе идентификации функционального эпитопа М195 при мантийноклеточных лимфомах. МКА Ml95 конкурируют с ИЛ-6 за связывание с молекулой gp800: добавление ИЛ-6 ведет к снижению связывания МКА и, напротив, добавление МКА Ml95 препятствует связыванию ИЛ-6 с клетками. Соответственно, МКА Ml 95 блокируют пролиферацию ИЛ-6-зависимых миеломных клеточных линий. На основании этих данных сделано заключение о том, что МКА Ml95 распознают эпитоп молекулы gp80, вовлеченный во взаимодействие с ИЛ-6. МКА Ml95 распознают другой эпитоп в сайте взаимодействия ИЛ-6Р с ИЛ-6, нежели МКА Ml64.
МКА Ml95 выявляли рецептор gp80 на мембране лимфоцитов при мантийноклеточных лимфомах с максимальной частотой - 68,8% (11 из 16 наблюдений). Эпитоп Ml 95 выявлялся почти вдвое чаще, чем нефункциональные эпитопы (М91 или М91 + М5) - 68,8% и 37% соответственно. Не было ни одного из 7 случаев с экспрессией нефункциональных эпитопов, при которых бы отсутствовала на мембране клеток молекула М195.
Следовательно, МКА Ml95 не являются пригодными для оценки функционального состояния рецептора gp80. Возможность использования этих МКА для идентификации gp80 на мембране нуждается в дальнейшем изучении, так как частота положительной реакции достоверно превышает таковую с МКА к нефункциональным эпитопам молекулы gp80.
Экспрессия и активация рецепторного комплекса GP130/GP80 при мантийноклеточных лимфомах
В предыдущих главах нами показано, что частота обнаружения на мембране злокачественных лимфоцитов при мантийноклеточных лимфомах рецептора gpl30 составляет 84% (26 из 31 измерения), положительная экспрессия установлена у 24 из 28 больных (86%).
Аналогичные данные по gp80 были существенно более низкими - 54% (13 из 24) и 52% (11 из 21) соответственно.
В 2 случаях отсутствия на мембране gpl30 молекула gp80 также отсутствовала. Не было случаев экспрессии на мембране клеток а-цепей рецептора ИЛ-6 при отсутствие Р-цепей. Примеры отсутствия gp80 при экспрессии gpl30. Наблюдение 3. Диагноз - мантийноклеточная лимфома. Гистологически - лимфома мантийной зоны. Иммунофенотипическое исследование включало стандартный набор маркеров, определяемых в ткани лимфатического узла по криостатным срезам. Эта панель включает определение CD45, В-клеточных антигенов CD 19 и CD37; Т-клеточных антигенов CD la, CD4, CD5, CD7, CD8; макрофагально/гистиоцитарных антигенов CD 163, а также линейно не рестриктированных антигенов HLA-DR, CD38, CD23, CD 10. На клетках были экспрессированы диагностические маркеры лимфомы из клеток мантии фолликулов лимфатических узлов - CD 19, CD37, CD5, HLA-DR. Экспрессия маркеров Т-лимфоцитов была органичена единичными сохранными Т-клетками (помимо CD7 и маркеров субпопуляций Т-клеток CD4 и CD8 на них были ярко экспрессированы антигены CD5). Клетки были позитивны по CD45. В ткани присутствовали отдельные и скопления CD 163+ макрофагов. Экспрессия CD23 была ограничена округлыми скоплениями фолликулярных дендритных клеток. Экспрессия CD 10 полностью отсутствовала. Иммунофенотипические данные позволяли надежно исключить диагноз лимфомы из малых лимфоцитов/В-ХЛЛ и фолликулярной лимфомы. Яркая цитоплазматическая экспрессия CD38 обнаруживалась в единичных разрозненных плазмоцитах. Экспрессия рецепторного комплекса gp 130/80 проведена на основе эпитопов, не задействованных в передаче сигнала интерлейкина-6. Для идентификации gp80 использована смесь антител М91 и М5. Для идентификации gpl30 использована смесь антител С2 и D2. На клетках отсутствовала экспрессия gp80 - отрицательная реакция. Определялась мономорфная экспрессия gpl30 на клетках, скопления фолликулярных дендритных клеток характеризовались яркой экспрессией антигена. Таким образом, по иммунофенотипу ИЛ-6Р лимфома соответствовала gpl30+ gp80-. Состояние активации рецептора в данном случае оценено не было. Наблюдение 14. Диагноз - мантийноклеточная лимфома. Гистология: ткань миндалины с диффузным мономорфным инфильтратом из мелких лимфоцитоподобных клеток, которые инфильтрируют многослойный плоский эпителий. По гистологическим препаратам не представляется возможным дифференцировать лимфоцитарную лимфому (В-ХЛЛ) и лимфому зоны мантии. Иммуногистохимиччески подтвержден диагноз лимфомы из клеток мантии. Иммунофенотипическое исследование включало стандартный набор маркеров, определяемых в ткани лимфатического узла по криостатным срезам. Эта панель включала определение CD45, В-клеточных антигенов CD 19 и CD37, клеточных иммуноглобулинов А, М, G; Т-клеточных антигенов CDla, CD4, CD5, CD7, CD8; макрофагально/гистиоцитарных антигенов CD 163, а также линейно не рестриктированных антигенов HLA-DR, CD38, CD23, CD10. На клетках были экспрессированы диагностические маркеры лимфомы из клеток мантии фолликулов лимфатических узлов - CD 19, CD37, CD5, HLA-DR. Экспрессия маркеров Т-лимфоцитов была ограничена единичными сохранными Т-клетками (помимо CD7 и маркеров субпопуляций Т-клеток CD4 и CD8 на них были ярко экспрессированы антигены CD5). Клетки были позитивны по CD45. В ткани присутствовали единичные CD 163+ макрофаги. Экспрессия CD23 и CD 10 была отрицательной. Экспрессия CD38 была ограничена единичными плазмоцитами в ткани опухоли. Экспрессия рецепторного комплекса gp 13 0/80 изучена на основе эпитопов, не задействованных в передаче сигнала интерлейкина-6. Для идентификации gpl30 использованы антитела С2 + D2. На клетках присутствовал gpl30 - положительная реакция с МКА C2+D2. Идентификация gp80 у данного больного осуществлялась с использованием МКА М91+М5 и была отрицательной. Таким образом, по иммунофенотипу ИЛ-6Р лимфома соответствовала gpl30+gp80-. Функциональное состояние рецептора на основе эпитопной структуры оценено не было. Вместе с тем в 57,9% случаев обнаружения на мембране gpl30 ос-цепи рецептора таюке были экспрессированы на злокачественных клетках. Таким образом, в 11 из 21 случая (52%) мантийноклеточных лимфом, изученных на предмет экспрессии как gpl30, так и gp80, полная молекула рецептора а/р была экспрессирована на мембране клеток. Именно в этих наблюдениях имеет смысл обсуждать функциональное состояние рецептора, то есть его активацию. Из рассматриваемых 11 случаев лишь в 7 (63%) наблюдалась экспрессия нефункциональных эпитопов молекулы gp80, выявляемых МКА M91 или М91+М5. Еще в 4 случаях отмечена изолированная экспрессия эпитопа Ml 95 в сайте связывания интерлейкина 6 со специфическим рецептором (а-цепью) на мембране. В последних случаях оценка активации рецептора невозможна, так как отсутствует экспрессия эпитопов М91 (или М91+М5), Ml82, Ml 64. Вообще, сам факт изолированной экспрессии одного из эпитопов молекулы gp80 при отсутствии остальных эпитопов - это наблюдения, заслуживающие отдельного обсуждения. Вместе с тем, 4 случая изолированной экспрессии эпитопа Ml95 молекулы gp80 отнесены нами при анализе материала к gpSO-позитивным случаям, так как принадлежность эпитопа Ml95 к молекуле gp80 убедительно доказана в целом ряде работ.
Похожие диссертации на Экспрессия рецептора интерлейкина-6 при мантийноклеточных лимфомах
