Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время трудно представить себе лбласть биологии и медицины, которых не нашли бы применения моноклональные антитела (МКА). Наиболее впечатляющими результатам их использования являются достижения в области идет фикадни поверхностных поверхностных антигенов клеток различных лшшй днфферешщровки, нормальны и опухолевых, включая кроветворные стволовые клетки клетки системы мононуклеарных фагоцитов,Т-,В- и К-лимфоцитов ( Материалы международных рабочих сове щапий по диффереицировочным антигенам лейкоцитов человека, 1993). Не менее значимыми являются иссле дования по изучению характеристики и типировапшо антигенов гистосовместпмости системы БЬА.(Манько В.М.) Накоплен также опыт в использовании монокло нальных антител с терапевтической целью в онколо гических клиниках ряда зарубежных стран (Takahashi T.,1991;Taoraoto К., Kokunai.,1990), МКА используютс: как "средство доставки" химиотерапевтическнх агентов, либо токсинов к опухолевым клеткам (Morgan A.G., Beatty S. et al. 1990; Pastan J., WiUinghamM.C1986; Manske J.M., Buchbaum D.J., Hanna D.E.,1990).
Одпой из основных проблем химиотерапии опухолки является отсутствие селективного действия которое распространяется не .только на опухолевые клетки, но и на нормальные быстропролнферирующие ткани ( костный мозг, эпителий кишечника и др ).
Перспективным нодходом преодолевающим этот недос таток,япляется направленная доставка цитостатика к опу холевым клеткам-мншеням - векторная химиотерапия. Это позволяет, с одной стороны, существенно ПОВЫСИТЬ селективность и эффективность терапии, а с другой стороны, уменьшить нежелательные побочные эффекты на неопухолевые клетки и ткани ( Johnson C.S., Chang М.,1988; Baldwin R.W., Byers V.S.,1986).
Другим аспектом применения МКА в клиничес коп практике является использование МКА в качестве нммунодепрессантов при трансплантации органов ( Чими школ К.А., Барышников А.Ю.1993; Ross R.E.,Jeter Е.К., Stuart R.K.,1990), а также использование МКА для экстракорпоральной очистки костного мозга от злокачест венных клеток при аутотрансплантациях костного мозга у больных как ыиело-н лимфопролифератиными заболева ниями,так п солидными опухолями ( Favrot М., Philip Т., 1985; Ramsey J.,Kiss J.E.,Sacher R.A.1992).
В настоящее время в лечении как гематологи ческих, так п онкологических больных значительную роль играет трансплантация костного мозга. Учитывая трудности в подборе HLA- идентичных доноров костного мозга и проблемы, вызываемые реакцией " трансплантант против хозяина" ( РТПХ), естественным является интерес исследователей к возможностям трансплантации аутоло гпчного костного мозга. Одной нз проблем, возникающих при аутотрансплаптации костного мозга, является необзео димость развития эффективных методов очистки коетно го мозга от резидуальных злокачественных клеток. Предложено большое количество различных способов " счистки" костного мозга: физических, химических. фармакологических, иммуно логических. В зарубежных
клиниках среди иммунологических методов "отшсткн" костного мозга от злокачественных клеток, наиболее часто используется реакция комплемент-зависимого лизиса опухолевых клеток. Комплемент-связывающие МКА являются необходимым реагентом для осущес твленпя этой реакции. Основным недостатком этого метода является то, что его можно исполг ковать только с комплемепт-связывающнми МКА, а также то, что необходимо присутствие "хорошего" комплемента.
В последние годы в нашей стране открылось несколько отделений, где осуществляется трансплантация костного мозга как метод лечения гематологических и онколоіяческих больных. Однако, очистка костного мозга от злокачественных клеток еще ь.е воптл і в прак тпк5г этих отделений. Это объясняется невозможностью использовать методики очистки костного мозга и реаген ты, применяемое за рубежом, по экономическим сообра Зі\ ниям.
В отечествеягой специальной лптератупе мы не встретили далпьк о подобном прямепешш МКА создан пну в нашей страде. В связи с этим возникает несбхо димоеть комплексного исследозашш отечественных МКА. имеющих, с одной стороны рецептор к компле :.іепту ,с другой стороны .связывающихся с рецепторами, ьредетавленпымп па поверхности опухолевых клеток и, следовательно, способных осуществлять комплем^нт-зави;.-инып лизис опухолевых клеток,т.е."очистку" кост пою і'іо-.ча.
! U ли к задачи ко следования. ті,ельіо настоящей рабочы чг.ччло;-* гиипроваиие комнлемент-зависплых MkA -r'ptifj ИКС) и обоснование возможности нх псполь ?№ч\\"\ л.='< '.ушї'.кп косоного мезга от злокачественных
б клеток, а также оценка степени деконтаминации кост ного мозга от Т-бластаых клеток при использовании "коктейля" исследуемых MICA. В соответствии с постав ленной целью нами решались следующие задачи:
-
изучение экспрессии поверхностных антигенов к МКА ИКО-46, ИКО-59, ИКО-60, ИКО-90 на фракци ях клеток периферической крови и костного мозга здоровых лиц, а также па клетках линии Yuiket
-
изучение экспрессии поверхностных антигенов к МКА ИКО-46, ИКО-59, ИКО-60 , ИКО-90, ИКО-1 и ИКО-10 на клетках-иредшественниках грапуломопо цитопоэза в норме.
-
изучение влияния исследуемых МКА на функ циональнуїо активность лимфоцитов, в частности.па способность лимфоцитов к бласттрансформации на фктогемагонотинин.
-
пзучепЕе способности исследуемых МКА в "коктейле" к деконтаминацпи костного мозга от клеток острого лнмфоблаетного лейкоза путем комплемевт-завпсимого лизиса бластных клеток.
Научная новизна. Впервые комплексно изучены обхцелейковдхтаряые МКА серии ИКО <ТЖО-46,ИКО-59,ЙКО-60),а также МКА ИКО-90,паправлепные протиі аптЕгена CD3. Изучена экспрессия поверхностных антиг нов к характеризуемым МКА на клетках крови н костпо го мозга здоровых доноров, а также на клетках лпнии Yurltet в цктотоксической комплемент-зависимой реак цел. Изучена экспрессия антигенов к данным МКА па клетках-предтествепниках грануломононоэза здоровых доноров, показано отсутствие антигенов к этим МКА на клетках КОЕ-ГМ.Изучено влияние этих МКА как изолп розанпо,так и в сочетании с комплементом, па реакцию
бласттрансформацин лимфоцитов на фктогемаг глютятш (ФГА), показана способность ИКО-90 в сочетания с ком плементом частично тормозить реакцию бласттранс формации лимфоцитов на ФГА. Изучена возможность "коктейля" данных МКА к кої^шлемент-завнскмому лизису Т-бластов, показана неспособности» "коктейля" данных МКА к полной п надежной декоптампнацпп костного мозга от лейкозиых Т-клеток ллшш Yurket Однако,доказана принципиальная возможность использо палия данных МКА в "коктейлях" для очистки костного мозга от злокачественных клеток.
Практическое значение. Охарактеризованные МКА нашла свое применение для тогупофеиотяпи ровання лкмфопролнфератявшых заболеваний, обще лейкоцитарные МКА. применяются для днфференциа льной дкггяостнкп лго-іфопролпфератіпдаьіх заболеваяяй и эпителиальных опухолей. Показано отсутствие экспрес спи антигенов, выявляемых тестируемыми МКА, на поверхности стволовой клетки.а ,следопательио,нр*л годность данных МКА для очистки костного мозга от зло качественных клеток. Также показана недостаточность "коктейля" данных МКА для очистки костного мо^га от Т-бластоз н необходимость дальнейших исследований в этом направлении.
На защяту выносятся следующие положения: 1. МКА ИКО-46, ИКО-59, ИКО-60 таизляют общелейкоцптарпый антиген,который представлен па лейкоцитах периферической крови (гранулоцитах, моноцитах,лимфоцитах) н,отч^стгг,на клетках костного мозга. На іиеткдх-предшеетзептгках аитягеи,вкявдяе'мый МКА ИКО-46,ИКО-59,ИКО-60, не экспрессирован.
-
МКА ИКО-90 выявляют поверхностный анти ген на лимфоцитах периферической крови и на части клеток костного мозга. На клетках-предшестоенниках граруломоноцптопоэза не экспрееснруется антиген к МКА ИКО-90.
-
МКА ИКО-4б,ИКО-59Д1КО-60 в сочетании с комплементом не влияют на реакцию бласттрансфор мании лимфоцитов па фитогемагглютинин. МКА ИКО-90 и комплемент частично тормозят реакцию бласттранс формации лимфоцитов на ФГА. МКА ИКО-90 без добавления комплемента не вызывают торможения РБТЛ на ФГА.
-
Коктейль МКА ИКО-46ДІКО-59.ИКО-60 и ИКО-90 с последующим добавлением комплемента не способен полностью очищать костный мозг от Т-бластов в 100% случаев,однако, принципиально эти МКА пригод пы для очистки аугологичного костного мозга от злока чественр^к клеток.
Структура диссертации. Диссертация изложена
![Морфофункциональная характеристика ядрышкового аппарата клеток при фоновых, предраковых и злокачественных заболеваниях [Электронный ресурс]](/i/i/4501/181097.png "Морфофункциональная характеристика ядрышкового аппарата клеток при фоновых, предраковых и злокачественных заболеваниях [Электронный ресурс] Бобров Игорь Петрович")
