Введение к работе
Актуальность проблемы. Вирус рака молочной железы мышей (MMTV) является одним из хорошо изученных ретровирусов В типа. Предполагается, что у человека механизмы развития опухолей МЖ во многом схожи с мышиной моделью вирусного канцерогенеза.
В геноме, человека были найдены нуклеотидные последовательности с различной степенью гомологии с MMTV (M.Ono et al.. 1986; F.May etal.. 1986; O.Faff etal., 1992), что может являться основой экспрессии сіелков человека, иммунолог'ически родственных белкам этого ретровируса. Косвенным указанием на синтез подобных антигенов у человека является также активность клеточного и гуморального иммунного ответа. Суммируя известные данные' можно заключить, что белки человека, иммунологически родственные по крайней мере одному из белков MMTV - гликопро-теиду оболочки gp52 MMTV, выявляются в тканях РМЖ. и ассоциированы с канцерогенезом эпителия МЖ (A.Dion et al, 1976; И.Н.Крюкова, Е.А.Комарова, 1980; P.levlne ef. al., 1980; I.Keydar et al.. 1982). Экспрессия же антигенов, родственных р27 MMTV (структурному белку нуклеоида ретровируса), связывалась исследователями с пролиферативными процессами в эпителии ММ, но не РМЖ (A.Tsubura et al., 1986; I.Kryukova et al.. 1981; s.Zotter et al., 1980). До настоящего времени не известно, ограничена ли экспрессия белков человека, родственных MMTV, клетками эпителия МЖ. Попытки обнаружить подобные антигены в сыворотках крови принесли как положительные (M.Muller et al., 1972), так и отрицательные результаты (P.Zangerle et al.. 1977; J.Hendrlck et al., 1978). До настеящего времени также остается открытым вопрос о специфичности антител к белкам MMTV, выявляемых как при РМЖ. так и в небольшом проценте случаев в сыворотках крови здоровых доноров (С.В.Литвинов, 1980; M.Hoshlno. L.Dmochowskl. 1973; S.WHkln et al., 1980; M. Tomana et al.. 1981; S. Zotter et al., 1981; A.S.Dion et al., 1987). .Кроме того не исследовалась экспрессия антител к структурным белкам других ретровирусов при РМЖ.
Таким образом, к настоящему моменту белки человека, иммунологически родственные структурным белкам MMTV. ' изучены НЄ7 достаточно и исследование экспрессии таких белков, а также иммунного ответа на них как фактора риска развития РМЖ, продолжает оставаться актуальным.
- г -
Цела и задачи исследования. Целью настоящего исследования было исследование антигенов человека, иммунологически родственных структурным белкам MMTV и гуморалвного иммунного ответа на них. а также изучение ассоциации их с РМЖ.
В связи с этим были поставлены следующие задачи:
-
определение особенностей гуморального иммунного .твета на белки, иммунологически родственные белкам MMTV, в зависимости: а) от особенностей возникновения и развития РМЖ - в группе больных РМЖ, б) от факторов риска возникновения данного заболевания - в группе здоровых доноров;
-
определение специфичности антител к структурным белкам MMTV - р27 и gp52 - в группах здоровых доноров и больных РМЖ;
-
определение частоты обнаружения антител, к белкам других ретровирусов в сыворотках крови больных РМЖ:
-
изучение возможности связывания антигенов, родственных MMTV. и антител к ним в циркулирующие иммунные комплексы;
-
выделение белков человека, иммунологически родственных структурным белкам MMTV. их физико-химическая и иммунохимичес-кая характеристика;
-
изучение возможности экспрессия антигенов, родственных MMTV, в лимфоцитах человека.
Научная новизна. Впервые, методом иммуноблоттинга была показана специфичность направленности гуморального иммунного ответа на р27 MMTV у здоровых доноров, на gp52 - у больных РМЖ и в "группе риока". Впервые показано, что антигены, иммунологически родственные белкам MMTV, и антитела против них формируют циркулирующие иммунные комплексы в сыворотках крови больных РМЖ. Методом аффинной хроматографии были выделены и охарактеризованы антигены, родственные белкам MMTV. с молекулярными массами 60 и 68 кД. Методом иммуноблоттинга впервые показано, что такие антигены экспрессируются в лимфоцитах человека: как в Т-, так и В-лимфоцитах - у больных РМЖ; только в В-лимфоцитах - у здоровых доноров. Впервые было показано, что gp52 и р27 (продукты генов env и gag MMTV, соответственно) имеют общие антигенные детерминанты.
Практическая ценность. У 72% больных РМЖ и у 41% клинически здоровых женщин с наследственным фактором риска заболевания- РМЖ методом ELISA были выявлены антитела к MMTV, по сравнению с 5% здоровых доноров. Были получены данные, указы-
- З -вающие. что для уточнения диагноза РМЖ, а также для выявления группы риска важно определение специфичности антител к gp52 MMTV методом иммуноблоттинга.
У всех обследованных больных РМЖ, но не с другими локализациями опухолей, была выявлена экспрессия белков с мол.массой 60 и 68кД, иммунологически родственных MMTV, как в Т-. так и в В-лимфоцитах, тогда как у здоровых доноров - в 21% случаев и только в В-лимфоцитах.
Представленные исследования дают теоретическую основу для разработки диагностических тестов на РМЖ.
Апробация диссертации. Материалы диссертации были представлены на VIII Int.Congress of Immunology, 1992 (Будапешт, Венгрия); II и III Int.Conference "AIDS, Cancer and Human Retroviruses", 1993. 1995 (Ст.-Петербург, Россия); XXI Meeting of the European Tumor Virus Group. 1995 (Иннсбрук, Австрия).
Диссертация апробирована на совместной научной конферен-. ции лабораторий: Иммунологии онкогенных вирусов. Вирусного канцерогенеза. Иммунохимии, Молекулярной биологии вирусов и Регуляции клеточных и вирусных онкогенов 12 марта 1996 г.
Объем и структура работы. Материал диссертации изложен на 148 страницах машинописного текста и состоит из Введения. Обзора литературы, описания Материалов и методов. Результатов собственных исследований. Обсуждения и Выводов. Работа иллюстрирована 25 рисунками и 16 таблицами. Библиографический указа-, твль содержит ссылки на 213 отечественных и зарубежных работ.
