Введение к работе
Актуальность темы: Иммунная система организма играет решающую роль в противоопухолевой защите организма С Г. И. Абе-лев., 1982 ; Г. И.Дейчман и др. ,19833. Оценка состояния иммунной системы у человека стала возможной с 1972 г. когда G.Jondall обнаружил специфический маркер Т-лимфоцитов - рецептор для эритроцитов барана. Этот рецептор определялся методом Е-розеткообразования. В-лимфоциты человека определяли по экспрессии поверхностью Ig. Обнаружение рецептора для эритроцитов барана открыло новое направление в иммунологии - оценка иммунологического статуса. В течении десятилетнего периода проводились исследования иммунной системы у онкологических больных, показавшие снижение иммунного ответа у больных, коррелирующее с тяжестью заболевания [ Кадагидзе 3. Г. и др., 1979; Барышников А.Ю. и др., 1989]. Оценка иммунного статуса также использовалась для мониторинга проводимой иммунокоррекции [Купин В.И. и др. , 1990 ; Трапезников НЕ и др. , 1978 ].
Революционный переворот в клинической иммунологии произвела биотехнология, в частности гибридомная технология. С помощью методов гибридомной технологии, предложенной в 1975 г. ныне Нобелевскими лауреатами Roller и Melstein, можно производить моноклональные антитела (ЫКА), которые по своей надежности не уступают чистейшим химическим реагентам Абелев Г. И., 1982]. Исследования по гибридомной технологии развивались очень бурно и за полтора десятилетия разработано большое количество МКА против различных дифференцировочных и опухолеассо-циированных антигенов. МКА против некоторых групп антигенов исследованы международным сообществом ученых и они объеденены
- 4 -б группы сцепления, так называемые кластеры дифференцировки. Хорошо изучены ЫКА против дифференцировочных антигенов гемопо-этических клеток человека, которые используют для иммунофено-типирования лейкозных клеток. Эти МКА и антигены включены на международных рабочих совещаниях в кластеры дифференцировки CD. Создание кластеров дифференцировки помогло лучше ориентироваться в многообразии МКА против дифференцировочных антигенов.
В России работы по получению МКА против опухолеассощшро-ванных антигенов были начаты в конце 70-х годов сотрудниками Онкологического научного центра РАМЕ За короткий срок были получены МКА против альфафетопротеина, раковоэмбрионального антигена, различных лейкозоассоциированных антигенов. Полученная панель МКА постоянно пополняется новыми ЫКА, разрабатываемыми в различных учревдениях страны.
Исследования по получению МКА против специфических антигенов Т-лимфоцитов и субпопуляций Т-клеток начаты в России лишь в конце 80-х годов. Были получены МКА против обше-Т-клеточных антигенов CD5, CD7, CD2, CD4 антигенов Т-хелперов и CD8 Г-суп-рессоров [Барышников А. Ю. и др., 1988, 1989; Филатов А. В. и др., 1988, 1989].
Важным показателем состояния иммунной системы является определение активированных лимфоцитов. Это также возможно сделать с помощью МКА, т. к. на поверхности активированных клеток появляются рецепторы к ингерлейкинам, трасферрину, факторам роста и г. д. В связи с этим актуальным является получение МКА к активационным антигенам.
Диссертационная работа выполнена в рамках темы ГКНТ.
Целью настоящей диссертационной работы было получение и характеристика МКА против акгивационных антигенов CD71 и CD25.
В соотвествии с поставленной целью были определены следующие задачи:
-
Провести отбор МКА к антигенам CD25 и CD71.
-
Определить молекулярную массу антигенов.
-
Определить экспрессию антигенов на различных клетках крови и перевиваемых клеточных линиях.
-
Провести сравнительное изучение полученных МКА и их известных аналагов.
-
Исследовать МКА в функциональных гестах.
-
Оценить возможности применения полученных МКА в онкологической практике.
Научная новизна.
Впервые в России получены и охарактеризованы МКА против рецептора интерлейкина-2 (антиген CD25), экспрессированного на активированных интерлейкин-2-зависимых клетках. МКА выявляют новый эпитоп антигена CD25, Показано, что МКА IСО-105 не отличаются по своей реактивности от зарубежных аналогов, однако в большей степени блокируют связывание с рецептором интерлейкина -2, чем другие МКА. МКА иммунопрещгаитирут антиген с молекулярной массой 55 000 дальтон. МКА IСО-105 блокируют пролиферацию интерлейкин-2-зависимых клонов, а также реакцию бластрансформации лимфоцитов на ФГА.
Получены МКА IC0-92 против антигена CD71 (рецептор трансферрина). МКА IC0-92 иммунопреципитируют антиген с молекулярной массой 95 000 дальтон. МКА реагируют с активированными лимфоцитами и не взаимодействуют с другими типами клеток.
Научно-практическое значение:
В результате проделанной работы создана панель отечественных МКА, позволяющая оценивать состояние иммунной системы организма человека. Охарактеризованные МКА переданы для промышленного выпуска в Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ РСФСР и в НПЦ "МедБиоСпектр". Выпускаемые этими предприятие ММ IСО-105 и IC0-92 широко используются в различных научных и клинических учреждениях СНГ. Создание и внедрение в практику МКА позволило отказаться от закупки дорогостоящих импортных аналагов, что имеет огромное экономическое значение.
Апробация работы: полученные результаты доложены на II Всероссийской конференции по'направлению "Генная и клеточная инженерия" , г. Пущино-на-Оке ,1992 г., и на III Всероссийской конференции по направлению "Генная и клеточная инженерия ", г. Москва , 1993 г. Апробация диссертации состоялась на объединенной конференции лаборатории экспериментальной диагностики опухолей , лаборатории по созданию нетоксичных иммуномодулято-ров НИИ ЗДиТО ОНЦ РАМН , клинико-радиоиммунологической лаборатории НИИ КО ОНЦ РАМН 7 апреля 1995 года.
ОБЪЕМ'И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 110 стр. машинописного текста Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 3 глав собственных исследований, обсуждения, выводов. Библиографический указатель включает 111 источников литературы. Диссертация иллюстрирована таблицами и рисунками.
