Введение к работе
з Актуальность проблемы.
Поражения роговицы составляют свыше 25% всех заболеваний органа зрения. >говичная травма отмечается в 40 - 75% всех повреждений глаза (Гундорова Р.А. и авт., 1986, и др.). На долю роговичнои слепоты приходится около 10% слепоты в двитых странах и 30% - в развивающихся (Майчук Ю.Ф., 1991).
Лечение эрозий и язв роговицы различного генеза (послеожоговых, авматических, нейротрофических) является серьезной медицинской проблемой ( iterson С.А., 1993; Каспаров А.А. 1995, 1998; Гундорова Р.А., 1996, 1999; Ченцова В., 1996, 2000; Анджелов В.О. 1997; Казаченко М.А. 1997; Майчук Ю.Ф., 1997; '99; Полунин Г.С., 1997, 2000; Краснов ММ. 1998; Dodson J.W. 1984; Варданян Р., 2000; Капитонов Ю.А. 2000; Романова И.Ю. 2001, и др.). Язвенные процессы в іговице нередко сопровождаются обширными и глубокими повреждениями руктур глаза, ведущими к стойкому ухудшению зрения на одном или обоих азах. Нарушение трофики и регенерации - один из важных компонентов .тогенетического механизма эрозий и язв роговицы. Снижение рецепторной оруженности клеточных мембран, нарушение основных ферментативных аимодействий, снижение продукции цитокинов способствует усилению структивных изменений пораженных тканей, замедлению внутри- и внеклеточных сстановительных процессов, что в конечном итоге приводит к удовлетворительным структурным и функциональным результатам (К.П. Кашкин, 98; Ю.Ф.Майчук, 1990, и др.).
При эрозиях и язвах роговицы глубокие патологические изменения, зникающие на клеточном и субклеточном уровне, затрагивают прежде всего ителиально - стромальные слои, что приводит к нарушению процессов диффузии эсмоса, отеку стромы, угнетению синтеза кератоцитов и замедляет восстановление лостности и прозрачности. Поэтому проблема восстановления физиологического меостаза и стимуляции регенерации на клеточном уровне не теряет своей туальности.
Предложено большое количество терапевтических и хирургических методо лечения дефектов роговицы. Традиционная терапия включает обычно применени препаратов этиопатогенетической направленности: ингибиторов протеа: антибиотиков, стимуляторов репаративной регенерации, витаминов. Однако, аналг данных литературы показывет, что, несмотря на разнообразие применяемы терапевтических и хирургических методов лечения, нередко не удается добитьс стойкой эпителизации роговицы. Поэтому проблема поиска новых способе стимуляции регенерации роговицы, эффективных и коммерчески доступны; гипоиммуногенных, не требующих применения консервантов, остается крайк актуальной (И.Р. Варданян, 2000; R.A. Levinson, 1976; R.R. Prister, 1978, и др.).
Адекватным дополнением к традиционным способам стимуляції восстановительных процессов при серьезных нарушениях репаративно регенерации роговицы может стать использование культивированных фетальны клеток (ФК) эпителия и кератобластов роговицы человека, способны генерировать пролиферативные сигналы и сигналы цитодифференцировю мигрировать в зону дефекта, обладающих низкой антигенной активность* продуцирующих ростовые факторы, цитокины и тканевые гормоны, и сохраняющк биологические характеристики неизменными в течение длительного времени (Г7 Сухих, 1996; B.C. Репин, 1999; R.R. Prister, 1978, и др.). Проблема восетановлені физиологического гомеостаза, нормализации цитокиновых воздействий, активаци клеток, повышения их рецепторной вооруженности и усиления митотическс активности, не теряет своей актуальности.
Цель исследования - изучить в эксперименте воздействие культивированных: vitro фетальных клеток эпителия и кератобластов роговицы человека на процесс заживления эпителиально-стромального дефекта роговицы.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Разработать и экспериментально апробировать оптимальную дозу и спосс введения культивированных in vitro фетальных клеток эпителия кератобластов роговицы человека.
-
Создать экспериментальную модель эпителиально-стромального дефекта роговицы для изучения воздействия фетальных клеток.
-
Провести клинико-экспериментальную и морфологическую оценку воздействия фетальных клеток роговицы на процессы регенерации роговицы.
-
Изучить механизм воздействия фетальных клеток роговицы на регенерацию поврежденной роговицы кролика с помощью иммуногистохимических исследований.
-
На основании результатов клинико-экспериментальных, морфологических и гистохимических исследований обосновать эффективность воздействия культивированных in vitro фетальных клеток на процессы заживления эпителиально-стромального дефекта роговицы кролика.
Для осуществления цели и решения поставленных задач проведено 5 серий экспериментальных исследований на 86 кроликах (172 глаза). Научная новизна и практическая значимость работы.
-
Впервые в офтальмологии разработан и экспериментально апробирован комбинированный способ введения культивированных in vitro фетальных клеток эпителия и кератобластов роговицы человека в виде инсталляций и субконъюнктивальных инъекций.
-
Экспериментально определена оптимальная рабочая доза вводимой суспензии ФК.
-
На модели эпителиально-стромального дефекта роговицы кролика клинико-экспериментальными методами показана эффективность воздействия ФК на репаративные процессы в роговице.
-
Морфологическими исследованиями доказано стимулирующее воздействие ФК эпителия и кератобластов роговицы человека на процессы пролиферации и дифференцировки эпителия и кератобластов роговицы кролика.
-
Впервые с помощью иммуногистохимических методов изучен механизм действия ФК эпителия и кератобластов роговицы человека.
6 Впервые предложен метод фетотерапии заболеваний роговицы, получены: патент и 1 положительное решение о выдаче патента.
Учитывая возможность постоянно располагать донорским материалол поддерживать запас ФК в виде культуры, а также эффективность и простот способа введения, предложенный метод фетотерапии может найти применение клинической практике при заболеваниях роговицы, связанных с дисфункцие клеток эпителия и стромы, замедлением репаративной регенерации, а также дл предупреждения образования грубых бельм роговицы. Своевременное применена данного метода лечения может уменьшить потребность в радикальны хирургических вмешательствах.
Положения, выносимые на защиту. 1.Впервые предложен метод стимуляции регенерации роговицы путе комбинированного введения культивированных фетальных клеток эпителия кератобластов роговицы в виде инсталляций и субконъюнктивальных инъекци Выработана оптимальная доза введения.
2.Выявлено, что ФК роговицы человека оказывают в эксперименте выражение противовоспалительное и регенеративное действие на процесс заживлеш эпителиально-стромального дефекта экспериментальных животных и в отдаленнь сроки ведет к более совершенным процессам перестройки новообразование стромальной ткани.
3.Морфологическими методами доказано стимулирующее воздействі культивированных in vitro ФК на все фазы раневого процесса при заживлені эпителиально-стромального дефекта роговицы кролика.
4.Результаты иммуногистохимических исследований показали, что ускорен] процессов регенерации эпителиально-стромального повреждения происходит результате реализации неспецифического механизма действия ФК, обусловленно: воздействием цитокинов, факторов роста, тканевых гормонов, продуцируемі фетальными клетками. Апробация работы.
Основные положения работы доложены: на научно-практической конференции НИИ ГБ им. Гельмгольца «Современные лазерные технологии в диагностике и чении повреждений органа зрения и их последствий» (Москва, 1999); на Ученом вете МНИИ ГБ им. Гельмгольца (Москва, 1999); на VII Съезде офтальмологов ссии (Москва, 2000); на научно-практической конференции МНИИ ГБ им. льмгольца «Теоретические и клинические исследования как основа дикаментозного и хирургического лечения травм органа зрения» (Москва, 2000); Юбилейной Всероссийской научно-практической конфренции, посвященной 100-гию Московского научно-исследовательского института им. Гельмгольца [осква, 2000). Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 2 в зубежных изданиях. Получен 1 патент на изобретение: «Способ лечения 5олеваний роговицы» № 2157675 от 20.10.2000.; и положительное решение о даче патента «Способ лечения дефектов роговицы» по заявке №: 2000102601 от . 02. 2000.
Структура и объем работы.
Диссертация изложена на 133 страницах, состоит из введения, 5 глав, слючения и выводов, практических рекомендаций, приложения и блиографического указателя. Содержит 20 таблиц, 34 рисунка. Список гературы включает 155 работ отечественных и 42 иностранных авторов. Работа выполнена в отделе травматологии, глазного протезирования и инструктивной хирургии (руководитель отдела - доктор мед. наук, проф. Р.А. ндорова) Московского НИИ глазных болезней им. Гельмгольца (директор -ктор мед. наук, проф. A.M. Южаков), в Институте биологической медицины и Научном центре акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН г. Москвы іректор - член корр. РАМН, проф. Г.Т. Сухих).
Выражаю благодарность научному руководителю - д.м.н. Е.В. Ченцовой и учному консультанту - проф. Г.Т. Сухих; сотрудникам Московского НИИ ГБ им. льмгольца: отдела травматологии, реконструктивной хирургии и глазного
протезирования (руководитель отдела - доктор мед. наук, проф. Р.А. Гундорова) отдела патологической анатомии и гистологии (под рук. проф. И.П. Хорошиловоі Масловой); сотрудникам Института биологической медицины, в частности, отде.1 лаборатории клинической иммунологии (директор - член корр. РАМН, проф. Г.' Сухих) за практическую помощь при выполнении работы.
![Применение соединений, влияющих на уровень азота в тканях глаза, в комплексной терапии увеита в эксперименте [Электронный ресурс]](/i/i/4442/185412.png "Применение соединений, влияющих на уровень азота в тканях глаза, в комплексной терапии увеита в эксперименте [Электронный ресурс] Перова Татьяна Сергеевна")
