Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I . Современные аспекты лечения язв роговицы (обзор литературы) 9
1.1. Эпидемиология язвенных поражений роговицы 9
1.2. Современная фармакотерапия язв роговицы 11
1.2.1. Специфическая терапия 12
1.2.2. Патогенетическая терапия 16
1.2.3. Хирургическое лечение язв роговицы 22
1.2.3.1. Методы локального воздействия 22
1.2.3.2. Лечебная кератопластика 24
1.3. Применение цитокинов в офтальмологии 28
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования 34
2.1. Характеристика экспериментальных исследований 34
2.2. Характеристика гистологических исследований 37
2.2.1. Подготовка материала для световой микроскопии 38
2.2.2. Методы окрашивания препаратов 39
2.3. Характеристика клинических исследований 40
2.4. Методы статистической обработки 42
ГЛАВА III. Результаты собственных исследований 43
3.1. Результаты экспериментальных исследований 43
3.2. Результаты клинических исследований 54
Заключение 65
Выводы 70
Практические рекомендации 70
Список использованной литературы 72
- Эпидемиология язвенных поражений роговицы
- Хирургическое лечение язв роговицы
- Характеристика экспериментальных исследований
- Характеристика клинических исследований
Введение к работе
Одной из актуальных проблем современной офтальмологии является проблема лечения гнойных язв роговицы, что связано с ростом частоты данной патологии и особой тяжестью течения заболевания, приводящего к значительному снижению зрения, а нередко и к гибели глаза [8, 37, 70, 82].
Широкое применение антибактериальных препаратов на современном этапе обусловило изменение этиологической структуры гнойных поражений роговицы с возрастанием удельного веса условно-патогенной микрофлоры [77, 79, 149, 152]. Частыми возбудителями бактериальных язв роговицы (более 80% всех случаев) являются: Staph, aureus, Staph, epidermidis, Pseud, aeruginosa. Наиболее агрессивный возбудитель — синегнойная палочка, вызывающая бурное течение язвы с последующей перфорацией роговицы и развитием эндофтальмита [48, 90, 97, 134].
В настоящее время очевидны серьезные негативные последствия традиционной антибактериальной терапии: развитие дисбактериоза и присоединение грибковой инфекции, рост числа антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов, развитие аллергических реакций [7, 15, 35, 36, 41, 75, 85, 150]. Трудности лечения язв роговицы в значительной степени связаны и с тем, что в 30-44,8% случаев не удается выделить возбудителя заболевания, и лечение проводится эмпирически, с учетом клинической картины.
Неудовлетворенность результатами традиционной фармакотерапии, высокая частота развития осложнений обусловливают поиск и разработку новых методов лечения язв роговицы.
В публикациях последних лет [43, 49, 53, 54, 125, 144] появились сообщения об участии цитокинов в регуляции воспалительных и регенераторных процессов в тканях глаза. Цитокины, вырабатываемые,
5 преимущественно, мононуклеарами крови, представляют собой единую самостоятельную систему регуляции функций организма, обеспечивающую развитие защитных реакций и поддержание гомеостаза при внедрении патогенов и нарушении целостности тканей [33, 112, 141, 142]. На местном уровне цитокины ответственны за все последовательные этапы развития адекватного ответа на внедрение инфекционного агента, обеспечение его удаления, а также восстановление структуры поврежденной ткани [87, 88, 111, 121, 139, 15'5, 186,207].
Все выше изложенное и определило тактику наших научных исследований.
Цель исследования — повышение эффективности комплексного лечения язв роговицы с помощью локального применения аутологичных мононуклеаров крови.
Задачи исследования
В эксперименте на крысах изучить влияние инстилляций аутологичных мононуклеаров крови на течение язвы роговицы.
Выявить и изучить в эксперименте на крысах морфологические особенности воспалительно-репаративных процессов при моделированной язве роговицы на фоне инстилляций аутологичных мононуклеаров крови.
Исследовать клиническую эффективность локального применения аутологичных мононуклеаров крови в комплексном лечении больных с язвой роговицы.
Провести сравнительный анализ эффективности комплексного лечения больных язвой роговицы с применением аутологичных мононуклеаров крови и традиционной терапии.
Научная новизна
На экспериментальной модели гнойной язвы роговицы у крыс разработан метод локального применения аутологичных мононуклеаров крови, что позволило предложить его для клинического применения.
Установлено, что на фоне применения аутологичных мононуклеаров крови при язвах роговицы у крыс значительно уменьшается продолжительность и выраженность воспаления, а также ускоряется очищение язвенного дефекта от некротических масс.
Выявлено, что инстилляции аутологичных мононуклеаров крови на фоне традиционного лечения экспериментальной язвы роговицы у животных способствуют быстрой смене клеточных фаз в очаге воспаления и активизируют процесс регенерации поврежденной роговицы.
Показана значительная клиническая эффективность локального применения аутологичных мононуклеаров крови в комплексном лечении больных с гнойной язвой роговицы.
Практическая значимость
Результаты экспериментальных исследований позволили получить дополнительные данные о патоморфологии язвенных поражений роговицы, а также об участии мононуклеарных клеток крови в воспалительно-регенераторных процессах при стромальных дефектах роговицы.
Разработан и внедрен в клиническую практику комплексный метод лечения больных с гнойной язвой роговицы, включающий инстилляции аутологичных мононуклеаров крови на фоне традиционного лечения. Предложенный метод лечения характеризуется высокой эффективностью, обеспечивая стабильные клинико-функциональные результаты и уменьшая число осложнений данного заболевания. Получен патент РФ на изобретение № 2324488 от 21.11.2006 г. «Способ лечения язв роговицы».
Основные положения, выносимые на защиту
Локальное применение аутологичных мононуклеаров крови в сочетании с традиционным лечением экспериментальной язвы роговицы у крыс обеспечивает быстрое купирование экссудативно-деструктивного воспаления и активизирует репаративную регенерацию в патологическом очаге.
Инстилляции аутологичных мононуклеаров крови в комплексном лечении больных с гнойной язвой роговицы способствуют ранней эпителизации дефекта и препятствуют грубому рубцеванию в зоне повреждения, обеспечивая высокие клинико-функциональные результаты.
Включение в комплексное лечение пациентов с гнойной язвой роговицы инстилляции аутологичных мононуклеаров крови существенно уменьшает число осложнений заболевания.
Внедрение результатов работы в практику
Разработанный метод комплексного лечения гнойных язв роговицы внедрен в клиническую практику офтальмологической клиники Сибирского государственного медицинского университета (СибГМУ) (г. Томск) и офтальмологического отделения городской больницы № 1 (г. Томск).
Результаты экспериментальных и клинических исследований используются в программе лекционного курса и практических занятий на кафедре офтальмологии СибГМУ.
Апробация работы
Основные материалы диссертации доложены и обсуждены :
на заседании Томского областного общества офтальмологов (2007 г., 2008 г.);
на VIII и IX Международном конгрессе молодых ученых «Науки о человеке» (Томск, 2007 г., 2008 г.);
на юбилейной студенческой конференции студенческого научного общества им. Н.И. Пирогова (Томск, 2007 г.);
на научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы офтальмологии» (Москва, 2007 г.);
на научно-практической конференции «Современные методы диагностики и, лечения заболеваний роговицы и склеры» (Москва, 2007 г.);
на научной конференции, посвященной 80-летию НГИУВА «Современные проблемы диагностики и лечения заболеваний глаз» (Новокузнецк, 2007 г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 18 научных работ, в том числе 4 в изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования РФ для публикации. Получен патент РФ на изобретение «Способ лечения язв роговицы» № 2324488 от 21.11.2006 г.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 96 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 8 таблицами, 15 рисунками. Библиографический список содержит 216 источников, из них 159 отечественных и 57 зарубежных авторов.
Эпидемиология язвенных поражений роговицы
Язвы роговицы относятся к числу наиболее тяжелых заболеваний глаз, трудно поддающихся лечению и приводящих к значительному снижению или потере зрения [70, 85, 86]. По опубликованным данным [20, 82, 85, 187], в 8-9% случаев патологический процесс завершается анатомической гибелью глаза, в 17% выполняется энуклеация в связи с безуспешностью лечения, в 23-25% наблюдается осложненное течение заболевания. Ежегодно в мире регистрируется 1,5-2,0 миллиона случаев монокулярной слепоты вследствие язвенного поражения роговицы. Эпидемиологические исследования последних лет выявили отрицательные тенденции в динамике роста численности язв роговицы, что связано с увеличением количества экзогенных факторов риска [21, 70, 85, 86]. К ним относятся: 1. Нарушение режима ношения контактных линз - установлена роль данного фактора в развитии 27-42% всех бактериальных кератитов и 85-86% акантамебных кератитов [37, 85, 86, 197]. Непосредственными причинами развития язвенного поражения роговицы являются: недостаточная обработка контактных линз (40%), длительное применение линз дневного ношения (17%), микротравма роговицы во время одевания и снятия линз (15%), использование изношенных, деформированных линз (25%), повышенная чувствительность к химическим растворам для обработки линз (3%) [151, 210]. 2. Травма роговицы — в том числе инородными телами, химическими, термическими и лучевыми факторами, при этом развитие бактериальных кератитов наблюдается в 23,7%, кератомикозов — в 17,5%, герпетических кератитов - в 10,5% [32, 37, 75, 76]. 3. Синдром «сухого глаза» - поражение роговицы происходит на фоне умеренного или значительного снижения слезопродукции и стабильности прекорнеальной слезной пленки [6, 18, 21, 22, 23, 34, 46, 58, 66, 67, 104, 105, 128]. При этом изъязвление роговицы наблюдается в 9% случаев, рецидивирующие эрозии — в 36,4% [19, 20, 21, 67, 104, 105]. 4. Хирургические вмешательства на роговице — в частности, кераторефракционные (кератотомия, фоторефракционная кератэктомия, кератомилез in situ) и реконструктивные операции вследствие нарушения регенерации структур роговой оболочки [102, 117, 118, 119, 160, 163, 167, 181,189,192]. 5. Необоснованно длительная местная терапия кортикостероидами, антибиотиками, анестетиками [18, 77, 117, 153]. Согласно статистике [50,75,82], в 27,6% язва роговицы является первичной и в 30,2% - вторичной, возникающей, как правило, на фоне герпетического кератита.
По данным В.А. Шаимовой [148], на долю бактериальной язвы роговицы приходится 47,3% всей воспалительной патологии роговой оболочки. Среди микрофлоры встречается как патогенная - 63%, так и условно-патогенная - 15,7% [14, 151]. Патогенная флора представлена, преимущественно, Pseud, aeruginosa - 40-42% и Staph, aureus — 21-24%; условно-патогенная - Staph, epidirmidis — 5-6%, и E. coli — 10-12% [2, 8, 14, 40, 151]. Однако в 30-44,8% случаев не удается выделить возбудителя, что существенно затрудняет, а, нередко, и снижает эффективность лечения [8, 86, 152].
Кроме того, в настоящее время отмечается рост численности антибиотикорезистентных возбудителей. Так, например, к широко применяемому гентамицину число устойчивых штаммов достигает 63,6%; к тетрациклинам и аминогликозидам — 20-40% [79, 85, 86, 134]. Необходимо отметить, что в последние годы появились данные о нарастании устойчивости возбудителей к антибиотикам хинолоновой группы [2, 40, 79, 149, 191,213]. По результатам проведенных в США исследований [213] число штаммов стафилококка, устойчивых к ципрофлоксацину, возросло до 35%.
Неблагоприятным с эпидемиологической точки зрения является также преобладание среди возбудителей грамотрицательных штаммов, в том числе синегнойной палочки [79, 85, 90, 106, 134]. По данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ), соотношение грамположительных и грамотрицательных возбудителей за последние 5 лет изменилось с 81,8/18,1% до 51,4/48,6% [79, 82].
Хирургическое лечение язв роговицы
Рост частоты язв роговицы среди общего числа ее воспалительных заболеваний, преобладание в микрофлоре грамотрицательных штаммов, в точ числе и синегнойной палочки, а также увеличение количества антибиотикорезистентных возбудителей за последние десятилетия в значительной степени обусловливают малую эффективность консервативного лечения данной патологии. В настоящее время патогенетически обоснованным является комплексный подход к лечению язвенных поражений роговицы, заключающийся в раннем сочетанном применении различных микрохирургических воздействий со средствами специфической фармакотерапии [50, 72, 110, 116, 137]. Методы локального воздействия Микродиатермокоагуляция при данном заболевании выполняется с помощью различных электродов в непрерывном или импульсном режимах [48, 50, 55]. При этом особое внимание уделяется «сглаживанию» краев язвы и осторожному удалению некротических участков, что в последующем облегчает эпителизацию. После процедуры на роговицу накладывается мягкая контактная линза либо мазевая повязка. Механизм действия микродиатермососкоба связан с бактерицидным и вирусоцидным эффектами вследствие прицельной коагуляции пораженной роговичной ткани. В отличие от гальвано- и термокоагуляции процесс заживления роговицы после диатермокоагуляции происходит значительно быстрее, а формирующийся рубец морфологически является менее грубым [48, 50, 55].
Криоаппликация представляет собой троекратное нанесение аппликаций с суммарной экспозицией до 30 секунд при поверхностных и до 1 минуты при глубоких язвах роговицы [50]. Во втором случае с целью избежания осложнений, в частности, перфорации, криоаппликации наносятся только на края язвы. Механизм лечебного действия данной процедуры связан с механическим разрушением и удалением некротизированной ткани, а также со стимулирующим эффектом низкой температуры на процессы регенерации роговицы [50].
Аргонлазеркоагуляция основана на использовании лазерного излучения с длиной волны 488-514 нм [50, 147, 159]. При этом выходная мощность излучения в плоскости роговицы варьирует от 0,1 до 0,8 Вт, экспозиция составляет 0,1-0,5 секунд. Количество лазераппликаций составляет от 10 до 30 на сеанс, количество сеансов — 1-4 в зависимости от площади и глубины поражения роговицы, а также динамики заболевания.
Механизм терапевтического воздействия аргонлазеркоагуляции связан с бактерицидным и вирусоцидным эффектами, обусловленными высокой (до 80-100С) температурой в очаге коагуляции роговичной ткани. Кроме того, данная методика обладает рядом преимуществ перед традиционными способами коагуляции, а именно: строгое дозирование и контролируемость, меньшая травматичность, бесконтактность и возможность проведения процедуры без инстилляционной анестезии [147, 159].
Согласно результатам экспериментальных и клинических исследований [60, 61], перспективным является применение эксимерных технологий на основе 193 нм излучения для локальной коагуляции язв и послойного удаления некротизированной ткани роговицы. При проведении процедуры необходимо учитывать клиническую форму заболевания и стадию процесса. Так, например, при язве, локализующейся в пределах передней трети толщины роговичной стромы, рекомендуется выполнение полной кератонекрэктомии [61, 163]. При более глубоких изъязвлениях, захватывающих до Уг- толщины стромы роговицы, целесообразно проведение частичной кератонекрэктомии. Кроме того, в обоих случаях необходимо учитывать исходное состояние поверхности изъязвления.
Преимуществами эксимерлазерной кератэктомии являются микронная точность вмешательства и атравматичность для окружающих тканей [61, 163]. Лечебная кератопластика Лечение заболеваний роговицы методом кератопластики связано с именами таких известных ученых, как A. Hippel (1877), Е. Fuchs (1901), А. Elschnig (1908-1913). Выдающийся вклад в решение проблемы пересадки роговицы сделан В.П. Филатовым и его учениками (1934-1937): разработан и внедрен в клиническую практику основной метод кератопластики — частичная сквозная пересадка роговицы, предложен новый хирургический инструментарий и т.д. Основной целью лечебной кератопластики при язвах роговицы является удаление патологического участка и закрытие дефекта с помощью различных материалов: донорских и консервированных роговицы, склеры, конъюнктивы и т.д. [56, 71, 93, 101, 116, 133, 176, 193, 196]. По технике пересадки роговицы различают полную (тотальную) и частичную, а также сквозную и послойную кератопластику [14, 56, 73, 74, 116, 126, 150, 193]. Кроме того, разработана методика межслойной пересадки роговицы, когда после расслоения стромы вокруг фистулы в средних слоях перекрывают фистульных ход с помощью трансплантата [63]. При обширных изъязвлениях роговицы, сопровождающихся выраженной деструкцией, показано проведение эпикератопластики по Н.А. Пучковской. Методика представляет собой послойную пересадку донорской роговицы со склеральными лоскутами [28, 103, 113]. При этом виде кератопластики не производится целенаправленного послойного иссечения пораженных слоев роговицы, а выполняется осторожный соскоб ее нежизнеспособной поверхностной ткани (эпителий, передняя пограничная мембрана, поверхностный слой стромы). После этого тотальный послойный трансплантат роговицы со склеральным ободком фиксируется к эписклере больного глаза, и склеральная часть трансплантата покрывается конъюнктивой.
Характеристика экспериментальных исследований
Выполнена серия экспериментов на 48 половозрелых крысах-самцах породы Wistar массой 250 г, полученных из вивария СибГМУ. Перед экспериментом всех животных выдерживали на протяжении недельного карантинного срока в условиях вивария на обычном пищевом режиме. Язву роговицы у животных моделировали посредством одномоментного интрастромального введения монокультуры Staph, aureus (штамм 209 Р) в сочетании с полной деэпителизацией роговицы [16]. Под эфирным наркозом каждому животному выполнялась деэпителизация роговицы обоих глаз и интрастромально вводилось 0,1 мл изотонического раствора хлорида натрия, содержащего культуру Staph, auteus из расчета 2 млрд. микробных тел на 1,0 мл. Лечение начинали на 3-й сут. после инфицирования роговицы и развития экссудативно-деструктивного воспаления (рис. 1). В зависимости от способа лечения животные были разделены на 2 группы: - основную (п=24) — животным данной группы, наряду с инсталляциями раствора ципролета 6 р. в д., проводили инстилляции аутологичных мононуклеаров крови с аналогичной частотой. В ходе лечения инстилляции мононуклеаров повторяли 4 раза с интервалом 3 дня. - контрольную (п=24) — животным выполнялись только инстилляции раствора ципролета с частотой 6 р. в д. Процедуру выделения мононуклеаров проводили на базе Центральной научно-исследовательской лаборатории СибГМУ (директор — д.м.н., профессор А.Н. Байков). Рис. 2. Экспериментальная язва роговицы. Состояние переднего отрезка глаза животного на 3-й сутки после инфицирования роговицы, до начала лечения.
Мононуклеарные клетки из крови экспериментального животного выделяли методом фракционирования в градиенте плотности на разделяющем растворе фиколл-верографин [25, 29]. Принцип метода заключается в том, что лейкоциты, нанесенные на эту смесь, центрифугируют, и клетки, имеющие различную удельную плотность, разделяются. Мононуклеары остаются на поверхности градиента, а эритроциты и гранулоцити оседают на дно пробирки (рис. 2). Кровь, взятую в количестве 4,0-5,0 мл, помещали в стерильную пробирку, содержащую 1,0 мл раствора гепарина. Гепаринизированную кровь разводили в 2 раза изотоническим раствором хлорида натрия. Полученная суспензия наслаивалась на 3,0 мл смеси фиколла-верографина (12 частей 9% фиколла и 5 частей 33,9% верографина с плотностью 1,067-1,077 г/мл). Соотношение объемов градиента и разделяемой суспензии составляло 1:3-1:4. До центрифугирования После центрифугирования Рис. 3. Схема разделения гранулоцитов и мононуклеаров крови на градиенте плотности К - кровь ФГ - смесь фиколла-гипака П - плазма М - интерфазный слой мононуклеаров ЭГ - осадок эритроцитов и гранулоцитов Пробы центрифугировали при комнатной температуре в течение 15 мин при 800 g (2000 об/мин). После центрифугирования интерфазный слой, содержащий мононуклеары и располагающийся между плазмой и градиентом, забирался пастеровской пипеткой. Добавлялся 1,0 мл физиологического раствора, и полученная суспензия вновь центрифугировалась в течение 7 мин при 400 g (1500 об/мин) для отмывания полученных мононуклеаров.
Чистота мононуклеаров, полученных на градиенте фиколл-верографин, составляла 96-98%. Жизнеспособность клеточного материала оценивали в тесте с трипановым синим следующим образом. Предварительно на основе раствора Рингера готовили 0,1% раствор эозина. Далее готовили 0,1% раствор трипанового синего на основе дистиллированной воды. К капле клеточной суспензии добавляли 1-2 капли свежей смеси растворов, приготовленных ранее красителей, взятых в равных объемах. Полученную смесь помещали в камеру Горяева. При подсчете клеток процент окрашенных (погибших) элементов составлял 1,5-2%, что не превышало допустимое (не более 3%) количество. Общая продолжительность экспериментов составила 19 суток. В ходе экспериментов проводили наружный осмотр, биомикроскопию, флюоресцентную пробу, фоторегистрацию. Забор материала производили на 3, 6, 9, 12, 15 и 19 сутки от начала эксперимента. После эфирного наркоза декапитировали по 4 животных из экспериментальных групп. Выполнялась энуклеация обоих глаз. Все исследования во время экспериментов и взятие материала осуществляли в одно и тоже время суток - с 15 до 17 часов.
Характеристика клинических исследований
Гематоксилин Вейгерта готовился непосредственно перед окрашиванием смешиванием равных объемов основных растворов Вейгерта (первого и второго). Первый раствор Вейгерта: в 100 мл 96% спирта растворялся 1,0 г гематоксилина; второй раствор: 4,0 мл 29% раствора хлорида железа сливали с 1,0 мл крепкой хлористоводородной кислоты и добавляли 95 мл дистилированной воды. При смешивании растворов приливали второй раствор к первому. Раствор пикрофуксина: к 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты прибавляли 5-10 мл 1% водного раствора кислого фуксина. Из дистилированной воды срезы переносили в гематоксилин Вейгерта на 2-5 мин., затем ополаскивали в дистилированной воде и помещали в водопроводную воду на 10 мин. После срезы переносили в пикрофуксин на 1-2 мин., быстро (5-10 с) споласкивали в дистилированной воде и очень быстро проводили их через 96% спирт. Затем срезы просветляли в ксилоле 5-10 мин. и заключали в канадский бальзам. Характеристика клинических исследований Клинический раздел работы выполнен на базе офтальмологического отделения городской больницы № 1 (г. Томск). Пациенты с язвенным поражением роговицы в зависимости от метода лечения были распределены на 2 группы: основную и контрольную.
Основная группа пациентов представлена 66 больными (66 глаз) с язвой роговицы различной степени тяжести. При этом тяжелый патологический процесс наблюдался у 43 человек (65,1%), средней тяжести — у 23 человек (34,9%). Степень тяжести заболевания определялась в соответствии с предложенной системой бальной оценки клинических признаков [1, 37, 127]. Сроки обращаемости больных составляли от 1 до 3-4 дней. Пациентам данной группы, наряду с традиционным консервативным лечением (системное и местное применение антибактериальных и/или противовирусных препаратов, противовоспалительных и противоаллергических средств, а также назначение дезинтоксикационных и метаболических препаратов), выполнялись инстилляции в конъюнктивальную полость аутологичных мононуклеаров периферической крови. Мононуклеары выделяли методом фракционирования в градиенте плотности по указанной выше методике. Чистота мононуклеаров составляла 96%, жизнеспособность клеточного материала в тесте с трипановым синим находилась в пределах 97-98%. Полученную клеточную взвесь после добавления 3,0 мл изотонического раствора хлорида натрия инсталлировали в конъюнктивальную полость больного глаза с частотой 6-8 раз в день.
В процессе лечения процедуру повторяли 2-3 раза с интервалом 3-4 дня в зависимости от степени тяжести заболевания и динамики клинической картины. Контрольная группа представлена 60 больными (60 глаз) с язвой роговицы, которым проводилась традиционная фармакотерапия. При этом тяжелый патологический процесс наблюдался у 38 пациентов (63,4%), средней тяжести — у 22 пациентов (36,6%). Сроки обращаемости больных составляли от 1 до 4 дней. Пациентам обеих групп проводили общеофтальмологическое обследование, включавшее визометрию, периметрию, биомикроскопию переднего отрезка глаза, обратную бинокулярную офтальмоскопию, эхобиометрическое исследование, определение чувствительности роговицы, исследование мазков конъюнктивы, флюоресцентную пробу, фоторегистрацию. Визометрия проводилась по стандартной методике с использованием таблиц Сивцева-Головина, при остроте зрения меньше 0,1 - с помощью счета пальцев на разном расстоянии, при светоощущении - с использованием источника света для определения светопроекции. Периметрия проводилась на полусферическом периметре объектом белого цвета величиной 1 см в диаметре. Данные, полученные по 8 меридианам, суммировались.
Для осмотра переднего отрезка глаза применялась щелевая лампа ЩЛ-2 и щелевая лампа фирмы Karl Zeiss - Yena. Биомикроскопия проводилась согласно методикам, описанным Н.Б. Шульпиной. Осмотр заднего отрезка глаза проводился с помощью налобного бинокулярного офтальмоскопа с линзой +20,0 Д. Обратная офтальмоскопия выполнялась в условиях медикаментозного мидриаза. В качестве мидриатиков использовались: S.Tropicamidi 1%, S. Mesatoni 1%. Состояние внутриглазных структур глаза оценивали с помощью эхоофтальмометра ЭОС-22. Исследование мазков конъюнктивы проводили в бактериологической лаборатории ММЛПУ Городская больница № 1 г. Томск (гл. врач — СМ. Кирютенко).
