Конструирование нового многокомпонентного пробиотика и использование его в комплексной терапии хеликобактер-ассоциированных заболеваний [Электронный ресурс] Белова Ирина Викторовна

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Обзор литературы 11

1.1. Пробиотики 11

1.1.1. Современное представление о составе, свойствах и оздоравливающем эффекте пробиотиков 11

1.1.2. Принципы конструирования бактерийных препаратов 20

1.2. Хеликобактер-ассоциированные заболевания и место бактерийных препаратов в их лечении 27

Глава 2. Материалы и методы 42

2.1. Штаммы бактерий и их характеристика 42

2.2. Питательные среды и препараты, использованные в работе 45

2.3. Методы, использованные для характеристики биологических свойств штаммов 46

2.3.1. Изучение уровней и спектра антибиотикорезистентности методом серийных разведений на твердой и жидкой среде 46

2.3.2. Изучение антагонистической активности методом отсроченного антагонизма 47

2.4. Изучение биологических свойств готового препарата 48

2.5. Характеристика групп наблюдения при проведении клинических испытаний созданного препарата 49

2.6. Методы оценки клинической эффективности. 50

2.6.1. Методы клинических исследований 50

2.6.2. Бактериологическое исследование фекалий 51

2.6.3. Анкетирование 52

2.7. Статистическая обработка полученных результатов 53

Глава 3. Конструирование нового пробиотика 54

3.1. Результаты изучения антагонистической активности лактобацилл и бифидобактерий 54

3.2. Результаты изучения спектров и уровней антибиотикорезистентности штаммов-продуцентов 64

3.3. Подбор композиции штаммов для нового многокомпонентного пробиотика 70

3.4. Совершенствование состава питательной среды для выращивания штаммов-продуцентов 74

3.4.1. Сравнительная характеристика питательных сред по ростовым свойствам штаммов-продуцентов 74

3.4.2. Подбор оптимальной концентрации витамина С в среде 77

3.5. Изучение сроков годности готового препарата 81

Глава 4. Результаты клинической апробации препарата . 83

4.1 Оценка эффективности включения пробиотика в схему лечения язвенной болезни в стадии обострения 83

4.2 Оценка эффективности включения пробиотика в схемы реабилитационной терапии больных после ушивания перфоративных язв двенадцатиперстной кишки и желудка 90

Заключение 96

Выводы 106

Список литературы 107

Приложения

• Современное представление о составе, свойствах и оздоравливающем эффекте пробиотиков
• Штаммы бактерий и их характеристика
• Результаты изучения антагонистической активности лактобацилл и бифидобактерий
• Оценка эффективности включения пробиотика в схему лечения язвенной болезни в стадии обострения

Введение к работе

Актуальность проблемы.

Для современного периода характерно чрезвычайное многообразие неблагоприятных факторов, воздействующих на организм человека: нерациональное, неполноценное питание, постоянные психоэмоциональные нагрузки, экзогенные повреждающие вещества химической и физической природы (токсичные соединения в воде, воздухе, пище, канцерогены, электромагнитные излучения и т.д.). Это приводит к значительным нарушениям в состоянии здоровья людей: к истощению адаптационных и компенсаторных механизмов, нарушению обмена веществ, развитию различных форм заболеваний и сокращению продолжительности жизни. Множество клинических синдромов и патологических состояний могут быть связаны с изменениями состава и функций микрофлоры, которая является мишенью воздействия многих факторов окружающей среды (И.Н. Блохина, В.Г. Дорофейчук, 1979; В.Н. Красноголовец, 1989; Г.И.Гончарова, 1991). Поскольку частота распространения дисбактериозов в России достигает 90%, необходимо применение средств, восстанавливающих нормальную микрофлору (В.М. Бондаренко, А.А.Воробьев, 2004; Е.М. Горская, 1994; В.И. Покровский, O.K. Поздеев, 1999).

В настоящее время во многих странах мира, в том числе и в России, разрабатываются и все более широко внедряются в медицинскую практику пробиотики на основе живых микроорганизмов (в монокультуре или в комбинации). Они являются наиболее используемыми средствами коррекции нарушений микробной экологии человека. Хотя первоначально эти препараты и продукты разрабатывались преимущественно с целью повышения колонизационной резистентности хозяина для профилактики и лечения традиционных инфекционных заболеваний кишечника, в последнее время перечень показаний к их применению в клинической практике

существенно расширился (К.Я. Соколова, И.В. Соловьева, 1999; Б.А. Шендеров, 2001; Н.М. Грачева, В.М. Бондаренко, 2004).

В литературе имеются данные об антагонистической активности лактобацилл по отношению к хеликобактериям. Использование различных штаммов лактобацилл и бифидобактерий как в схемах с антибиотиками, так и без них приводит к элиминации хеликобактерий из организма и выраженной клинической эффективности «экологической» терапии гастритов и дуоденитов (В.М. Бондаренко, А.А. Воробьев, М.Л. Гершанович и др., 2004; М.-Н. Cocormier, V. Lievin, M.-F. Bernet-Camarad, et al., 1997). Интерес к данной проблеме не случаен, так как хеликобактериоз является наиболее распространенной хронической бактериальной инфекцией человека, колонизируя 50-60% всего населения земли. У большинства людей заражение происходит в молодом возрасте, до 20 лет.

H.pylori - это необычный патоген. У большинства зараженных лиц клинические проявления болезни не развиваются в течение всей жизни, хотя при исследовании слизистой оболочки желудка выявляется хронический гастрит. Число пациентов с язвенной болезнью и раком желудка составляет: менее 1% от общего числа инфицированных. Нормальное состояние слизистой оболочки желудка у людей, зараженных H.pylori встречается еще реже. Таким образом, в абсолютном большинстве случаев инфицирование H.pylori ограничивается развитием хронического активного гастрита, который относительно редко переходит в другие заболевания (В.В. Чернин, В.М. Червинец, В.М. Бондаренко и др.,2004). При язвенной болезни H.pylori обнаруживается в 70-80% случаев язвы двенадцатиперстной кишки и 50-60% _: случаев язвы желудка (Е.С. Рысс, Э.Э. Звартау, 1998; В.А. Исаков, И.В. Домарадский, 2003; L.A. Noach, G.N. Tytgat, 1994).

Признание этиологической роли H.pylori в развитии язвенной болезни, широкая распространенность хеликобактериозов привело к использованию в их терапии комплекса антибактериальных препаратов широкого спектра действия, что, без сомнения, является показанием к применению

пробиотиков в схемах лечения этих заболеваний. Расширение сферы применения пробиотиков связано как с выявлением новых позитивных эффектов у известных пробиотиков, так и с разработкой новых препаратов со специфическими лечебно-профилактическими характеристиками (А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров, 2002). Потребность в дальнейших исследованиях фундаментального характера для создания пробиотиков связана с тем, что остается еще много неясного в механизмах их действия: несмотря на многочисленные исследования, механизмы иммуномодулирующего действия микроорганизмов раскрыты не полностью, по-прежнему актуальны вопросы «приживляемости» пробиотических штаммов в организме человека и многие другие. В целях повышения эффективности пробиотиков ведутся исследования прикладного характера, направленные, в основном, на поиск новых штаммов, обладающих более выраженной антагонистической активностью к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам (с учетом выраженной изменчивости последних); на создание композиций из вновь отобранных штаммов, обладающих синергетическим действием; на изучение устойчивости выбранных штаммов к антибактериальным препаратам (Н.А. Глушанова, 2003; В.М. Лахтин, В.В. Поспелова и др., 2004), поскольку назрела необходимость одновременного назначения антимикробных средств с бактериотерапией (данные литературы последних лет свидетельствуют о том, что старая тактика лечения дисбактериоза — сначала антибиотик, потом препараты нормофлоры малоэффективна); наряду с усовершенствованием способов и технологий лиофильного высушивания пробиотических препаратов ведутся работы по конструированию и производству жидких форм, обладающих большей биологической активностью. Однако, проблема создания жидкого пробиотика с достаточно большим количеством живых микробных клеток и длительным сроком хранения, который можно применять параллельно с антибактериальными средствами, по-прежнему актуальна.

Цель работы:

Конструирование нового многокомпонентного пробиотика на основе лакто- и бифидобактерий и изучение его эффективности в комплексной терапии хеликобактер-ассоциированных заболеваний (на примере язвенной болезни двенадцатиперстной кишки и язвенной болезни желудка).

Задачи исследования:

1. Изучить антагонистические свойства штаммов лакто- и бифидобактерий в отношении тест-культур и свежевыделенных патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

2. Определить антибиотикорезистентность штаммов лакто- и бифидобактерий к наиболее часто используемым антибиотикам (в том числе к средствам эрадикационной терапии Н.руїогі-инфекции).

3. На основе изученных свойств подобрать штаммы-продуценты для создания комплексного бактерийного препарата, отвечающего всем-требованиям, предъявляемым к препаратам-пробиотикам.

4. Разработать схему приема нового пробиотика "LB-комплекс." параллельно с антибиотиками с учетом антибиотикорезистентности штаммов, входящих в препарат и фармакокинетики противомикробных средств базисной терапии.

5. Изучить эффективность предложенной схемы на примере хеликобактер-ассоциированных заболеваний.

Научная новизна.

6. На модифицированной гидролизатно-молочной основе сконструирован многокомпонентный жидкий пробиотик «LB-комплекс» из штаммов лакто- и бифидобактерий с высокими антагонистическими свойствами.

7. Штаммы, входящие в «LB-комплекс» обладают устойчивостью к широкому кругу антибактериальных средств, в том числе к препаратам с антихеликобактерной активностью. Композиция подобранных

штаммов позволяет использовать препарат с большим числом антибиотиков по сравнению с отдельными штаммами. 3. Обоснована целесообразность включения «LB-комплекс» в схемы лечения язвенной болезни. Положения, выносимые на защиту

8. Многокомпонентный пробиотик «LB-комплекс» обладает устойчивостью к широкому кругу антибактериальных средств за счет свойств штаммов-продуцентов, входящих в состав препарата.

9. Применение «LB-комплекса» совместно с антихеликобактерной терапией необходимо проводить с учетом фармакокинетики отдельных антибиотиков.

10. Включение «LB-комплекса» в схемы антихеликобактерной терапии позволяет повысить эффективность эрадикации H.pylori, снизить активность и выраженность гастрита, восстановить эубиоз толстого кишечника при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

Научно-практическая значимость работы

Результаты исследования позволили сконструировать новый

многокомпонентный жидкий пробиотик, зарегистрированный как

биологически активная добавка к пище (регистрационное удостоверение

№003452.Р.643.04.2002)

Разработана и утверждена документация ТУ 9291 - 002 - 01966979-02 и

ТИ к ТУ 9291 - 002 - 01966979-02 на него.

Получено разрешение на производство препарата. Налажен

лабораторно-производственный выпуск «LB-комплекса».

Препарат широко апробирован при разных нозологических формах

заболеваний, в том числе и при язвенной болезни.

Отработана оптимальная схема использования "LB-комплекса" в курсе антихеликобактерной терапии.

Внедрение результатов работы в практику.

Разработана и утверждена в Министерстве здравоохранения РФ нормативно-техническая документация на препарат.

Налажен лабораторно-производственный выпуск препарата.

«LB-комплекс» широко применяется в лечебно-профилактических учреждениях Нижнего Новгорода и области: в Городской клинической больнице №5, в Гастроэнтерологическом центре отделенческой больницы ст. Горький-Сортировочный, в санатории им. ВЦСПС, в детской городской больнице №27 «Айболит», в детской городской больнице №1, в областном противотуберкулезном диспансере и др.

Общие принципы конструирования пробиотиков, перспективы их совершенствования, показания к применению и эффективность использования пробиотиков в клинической практике представлены в книге для практического врача «Диагностика и биокоррекция нарушений антиинфекционного гомеостаза в системе «Мать-дитя»» (2004).

. 11

Современное представление о составе, свойствах и оздоравливающем эффекте пробиотиков

«Пробиотики», «пробиотические продукты» - это живые микроорганизмы или ферментированные ими продукты, которые оказывают благотворный эффект на здоровье человека и животных. Наибольший интерес к пробиотикам и пробиотическим продуктам возник в 60-70-е годы XX века, когда ухудшение экологической обстановки, формирование множественной антибиотикорезистентности бактерий вследствие чрезмерно широкого применения антибиотиков повлекли за собой нарушение микробиоценозов, человека и животных.

Чаще всего пробиотики изготавливают на основе микроорганизмов -представителей нормальной микрофлоры, поскольку из литературы известно, что они оказывают многоплановое влияние.на защитные, адаптационные и обменно-трофические механизмы организма, необходимые для поддержания и сохранения гомеостаза. Защитные функции нормальная микрофлора выполняет за счет прямого и опосредованного антагонизма по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, предотвращая колонизацию слизистых оболочек открытых биологических систем и препятствуя проникновению микробов, микробных токсинов и ксенобиотиков во внутреннюю среду организма (В.В. Бережной, С.А. Крамарев, В.Ю Мартынюк, 2002; И.Н. Блохина, В.Г. Дорофейчук, 1979; А.А. Ленцнер, Х.Л. Ленцнер, 1988; Б.В. Пинегин, В.Н. Мальцев, В.М. Коршунов, 1984; Б.А. Шендеров, 1998а; R. Freter, M.E.N. De Marias, 1995; Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкин, С.С. Афанасьев, В.В. Поспелова, 2002). ;

Аутофлора стимулирует созревание механизмов общего и местного иммунитета и поддерживает «рабочее» состояние специфических и неспецифических, гуморальных и клеточных механизмов иммунитета, таких как синтез иммуноглобулинов, комплемента, лизоцима, цитокинов, повышение секреторной концентрации неспецифических факторов иммунитета и их антибактериальную активность (Н.М. Грачева, Н.Д. Ющук, Р.П. Чупринина и др., 1999; А.В. Григорьев, В.М. Бондаренко, Н.А. Абрамов и др., 1997; S. Salminen, Е. Salminen, 1997; И.Б. Куваева, 1976; Л.Г. Зайцева, Е.И. Васильева, Е.М. Горская и др., 1991; З.Н. Вихирева, 1983; В.М. Бондаренко, В.Ф. Учайкина, А.О. Мурашева и др., 1994; А.А. Воробьев, Е.А. Лыкова, 1999; Н.Н. Мальцева, М.М. Шкарупета и др., 1992; D. Van der Waaij, 1984,1985,1988).

Нормальная микрофлора способна снижать риск возникновения злокачественных новообразований и, в частности, рака толстой кишки и рака молочной железы (Е. Renner, 1998; Б.А. Шендеров, 19986). Детоксикационный, антимутагенный и антиканцерогенный эффекты нормальной микрофлоры реализуются в тесной взаимосвязи с обменно-трофической функцией микроорганизмов (Б.А. Шендеров, 1998а; 19986).

К функциям нормальной микрофлоры кишечника относятся антагонистическое, антирахитическое, антиаллергическое и антихолестеринемическое действие и ее белково- и витаминно-синтетические свойства (эндогенный синтез витаминов Вь Вг, В5, Вб, В12, РР, К, С, Н и незаменимых аминокислот (А.А. Воробьев, Е.А. Лыкова, 1999; О.В. Чахава, Е.М. Горская, С.З. Рубан, 1982; Л.Г. Перетц, 1955; Т. Yaeshima, 1996; В.М. Бондаренко, Б.В. Боев, Е.А. Лыкова, А.А. Воробьев, 1998). Отмечено благоприятное влияние кишечной микрофлоры на процесс всасывания, обмена и утилизации кальция, железа, витаминов Д и Е, поступающих с пищей (И.Б. Куваева, 1976; И.Б. Куваева, Т.В. Воробьева, 1965; С.Д. Митрохин, Т.А. Богданова, Б.А. Шендеров, 1991).

Кроме уже перечисленных функций известно, что микрофлора является хранилищем микробных плазмидных и хромосомных генов (Ю.В. Лобзин, В.Г. Макарова, Е.Р. Корвякова, СМ. Захаренко, 2003; Б.А. Шендеров, 1998а). Микробный пейзаж определенных биотопов организма человека, характеризующийся относительным постоянством и индивидуальными различиями формируется, начиная с рождения, на протяжении ряда лет (И.Н. Блохина, В.Г. Дорофейчук, 1979; Л.А. Леванова, В.А. Алешкин, А.А. Воробьев и др., 2001). Видовой состав нормальной аутофлоры толстой кишки представлен разнообразными анаэробными и аэробными микроорганизмами: бифидобактериями, лактобациллами, сапрофитными кишечными палочками, бактероидами (В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, 2003; А.Я. Веселов, 1998; В.Г.Дорофейчук, 1980; А.П. Красильников, 1994; Ю.В.Лобзин, В.Г. Макарова, Е.Р. Корвякова и др., 2003; А.А. Ленцнер, Х.П. Ленцнер, 1988; Б.А. тендеров, 1987; Б.А. Шендеров, 1998а; Д.С. Янковский, 2003). Заслуживает внимания информация о новых видах различных бактерий и их соотношениях не только полостной, но и пристеночной микрофлоры (Н.В. Верховцева, Г.А. Осипов, 2004). Уточняется роль и функции отдельных бактериальных метаболитов - лектинов разной природы, катионных антимикробных пептидов, аминов и др. (В.М. Лахтин, М.В. Лахтин, В.В. Поспелова, 2004; В.М. Лахтин, В.В. Поспелова, М.В. Лахтин, и др., 2004; Г.И. Новик, Н.И. Астапович, Й. Кюблер и др., 2004). Выявлена связь биологически активных веществ микробной природы, выделяемых из культуральной жидкости с общебиологическими реакциями человеческого организма (сон, аппетит, настроение, циркадные циклы), а также с механизмами приживления бактерий к слизистым и иммунологическими реакциями (Б.А. Шендеров, 19986).

Все вышеизложенное свидетельствует о том, что в современных условиях жизни пробиотики служат важным и необходимым инструментом защиты человека, в первую очередь, от дисбактериозов желудочно-кишечного тракта, наиболее часто возникающих как следствие нерациональной антибиотикотерапии, перенесенных кишечных заболеваний, длительного применения нестероидных противовоспалительных препаратов, цитостатической терапии, неправильного питания, стрессов. С.А.Шевелева с соавторами (С.А.Шевелева, И.Б.Куваева, Н.Р.Ефимочкина, 2002) предложили классифицировать пробиотические продукты по их целевому назначению с учетом функциональных свойств, пищевой и биологической ценности, требований к безопасности и разделили все пробиотики на две группы: - продукты массового потребления, служащие в первую очередь для удовлетворения потребностей в пищевых веществах и энергии, обогащенные про- и пребиотическими факторами, различными макро- и микронутриентами для питания здоровых людей и защиты микроэкокомплекса организма от неблагоприятных воздействий; - продукты диетические - с направленной функциональной активностью для профилактического и лечебного питания, на основе культур-продуцентов со специфическими физиолого-биохимическими эффектами и с модифицированным составом, удовлетворяющим специфическим потребностям лиц, для которых они предназначаются.

Термин «пробиотики» в буквальном переводе означает «для жизни». Впервые термин «пробиотик» был предложен D.M. Lilly с соавтором (DM. Lilly, R.H. Stilwell, 1965), как антоним антибиотика для обозначения микробных метаболитов, обладающих способностью стимулировать рост каких-либо микроорганизмов.. R.B. Parker (R.B. Parker, 1974) использовал, этот же термин для обозначения микробных препаратов, обладающих способностью регулировать микробную экологию кишечника. Позднее R.Fuller (R. Fuller, 1989; 1995) назвал пробиотиками любые препараты из живых микроорганизмов, оказывающие при введении в организм хозяина благотворный эффект за счет коррекции кишечной микрофлоры (Б.А. Шендеров, 19986). Дифференцированное назначение пробиотических препаратов в зависимости от возраста и заболевания можно расценивать как дополнение к стандартному комплексу лечения и профилактики инфекционно-воспалительных заболеваний, нарушения микробиоценозов и заболеваний, связанных с нарушением обмена веществ (R. Fuller, 1995; К.С. Ладодо, 1996; К.Я. Соколова, И.В. Соловьева, 1999; Т.Ш. Шарманов, К.С. Ладодо, 1982). Доказана эффективность препаратов, содержащих представителей нормальной микрофлоры, при восстановлении нарушенного микробиоценоза и лечении заболеваний урогенитального тракта, ротовой полости, не только при местном, но и пероральном применении (И.Н. Блохина, К.Я. Соколова, 1986; В.М. Коршунов, 1995; G.W.. Elmer,. G.M. Surawicz, L.V. McFarland, 1996). По мнению L. Chaitov (L. Chaitov, 1990) более широкое использование пробиотиков для этих целей должно способствовать уменьшению применения антибиотиков и химиопрепаратов, что особенно актуально ввиду растущей устойчивости микроорганизмов к антибиотикам.

Штаммы бактерий и их характеристика

В исследовании использовали 52 штамма лактобацилл из коллекции института, в том числе L.plantarum 8RA-3, L.plantarum 38, L.paracasei subsp.paracasei 37, L.fermentum 39, L.feiTnentum 90C-4, разрешенные ГИСК им. Тарасевича в качестве производственных, а также штаммы бифидобактерий: B.bifidum 1, B.bifidum 791, тоже разрешенные в качестве производственных, предоставленные нам сотрудниками Московского при совместных исследованиях по конструированию кисломолочного бифилакта (ФС 42-0054-00; Инструкция по приготовлению кисломолочного бифилакта на молочных кухнях № 11-14/6-33, утвержденная МЗ СССР от 27.03.87; Инструкция по приготовлению молочных смесей на молочных кухнях системы здравоохранения №4724-88, утвержденная МЗ СССР от 28.11.88). Описание штаммов представлено в таблице 2.

У 52 из вышеперечисленных штаммов лактобацилл изучены уровни и спектры антибиотикорезистентности к 8 антибактериальным препаратам из групп пенициллинов, фениколов, аминогликозидов, тетрациклинов, хинолонов, рифампицинов, сульфаниламидов. Кроме того, у 4 штаммов лактобацилл и у бифидобактерий дополнительно изучена устойчивость к 7 антихеликобактерным средствам из групп пенициллинов, тетрациклинов, макролидов, нитроимидазолов и висмутсодержащих препаратов.

Основной характеристикой штаммов бактерий-продуцентов пробиотиков, проявляющих свой лечебный эффект при чрезмерном заселении желудочно-кишечного тракта патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, является их антагонистическая активность. При изучении антагонистических свойств 50 штаммов лактобацилл использованы эталонные штаммы (S.flexneri 170, S.flexneri 337, S.sonnei 5063, E.coli 157, S.aureus 209, P.mirabilis H-237, P.vulgaris 177) и свежевыделенные культуры патогенных микроорганизмов и условно-патогенных бактерий, наиболее часто выделяемых из кишечника больных с разнообразными дисфункциями желудочно-кишечного тракта (всего 97 штаммов) (характеристика штаммов представлена в таб. 3). Коллекция свежевыделенных штаммов условно-патогенных бактерий создана в лаборатории микробиоценозов и конструирования пробиотиков ННИИЭМ при обследовании различных групп больных, в том числе с язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки. Культуры патогенных микроорганизмов были предоставлены практическими врачами-бактериологами Объединения детской поликлиники № 49 Приокского райздравотдела города Н.Новгорода.

При изучении лизоцимной активности слюны и желудочного сока использован штамм Micrococcus lysodeikticus.

Для выращивания культур лактобацилл использовали питательные среды МРС - жидкую (МРС-1), полужидкую с 0,15% агара (МРС-2), твердую, содержащую 2% агара (МРС-4).

Для выращивания культур бифидобактерий использовали гидролизатно-молочную среду (ГМС) и среды Блаурокк (полужидкую и твердую).

Чувствительность лактобацилл к антибактериальным препаратам определяли на твердой среде МРС-5 с 1,5% агара и в жидкой среде МРС-1. Изучение антибиотикорезистентности бифидобактерий проводили методом серийных разведений в жидкой среде ГМС.

Исследование антагонистической активности лактобацилл проводили на среде МРС-5, бифидобактерий - на твердой среде Блаурокка (А.А. Ленцнер и др., 1964).

При проведении клинических испытаний пробиотика у больных язвенной болезнью врачи-терапевты назначали лекарственные средства, применяемые в схемах антихеликобактерной терапии, принадлежащие к разным фармакологическим группам (препараты висмута, ингибиторы протонной помпы, блокаторы гистаминовых рецепторов, антибиотики).

В программу реабилитации больных после ушивания перфоративных язв двенадцатиперстной кишки и желудка кроме стандартных эрадикационных препаратов были включены природные лечебные факторы (сульфатно-кальциево-магниевая минеральная вода «Горьковская №2» и Шатковская лечебная грязь).

Результаты изучения антагонистической активности лактобацилл и бифидобактерий

Поскольку механизм действия пробиотиков основан на конкурентных взаимоотношениях между облигатными представителями нормальной микрофлоры и патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, пробиотические штаммы должны быть активными продуцентами метаболитов, снижающих колонизационный потенциал и подавляющих рост указанных бактерий. К этим метаболитам относятся органические кислоты, прежде всего молочная, перекись водорода, лизоцим, бактериоцины и некоторые другие. Протективный эффект лактобацилл определяется не только наличием, но и совокупностью их антагонистических свойств, поскольку микроорганизмы, обладающие способностью продуцировать несколько антимикробных субстанций, имеют лучшие шансы для выживания в экосистеме хозяина, поэтому проверка штаммов на наличие антагонистической активности считается необходимым этапом работы по отбору производственных штаммов для пробиотиков. Исследования антагонизма штаммов-продуцентов in vitro экстраполируют с тем эффектом, который они могут оказывать на местную кишечную микрофлору in vivo. Степень проявления этого признака у микроорганизмов может широко варьировать.

Ранее в лаборатории была создана коллекция штаммов лактобацилл, проведена их идентификация на основе изучения биохимических свойств, изучена антагонистическая активность к большому набору патогенных и условно-патогенных бактерий, антибиотикорезистентность к наиболее часто используемым в практике антибактериальным препаратам. У некоторых штаммов были изучены адгезивные свойства (А.Ю. Лихачева, 1992). Было показано, что антагонистические свойства лактобацилл обусловлены не только образованием органических кислот, но и продукцией других антибиотических субстанций. Из исследованных штаммов лактобацилл, выделенных из пищеварительного тракта человека, только 26,9+6,1% культур продуцируют лизоцим и лишь один штамм - перекись водорода. В 1993 году Министерство Здравоохранения Российской Федерации утвердило государственную коллекцию лактобацилл при ННИИЭМ (приказ ГКСЭН МЗ РФ №37 от 23.04.1993). В состав коллекции вошли штаммы, утвержденные ГИСК им. Л.А.Тарасевича в качестве производственных - L.fermentum 90-ТС-4, L.fermentum 39, L.plantarum 8RA-3, L.plantarum 38, L.paracasei subsp.paracasei 37, которые являются основой таких известных бактерийных препаратов как «Лактобактерин сухой» и «Бифилакт кисломолочный». Эти препараты сконструированы несколько десятилетий назад и успешно применяются до сих пор. Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ РФ наряду с Московским НИИЭМ являются пионерами в области конструирования отечественных пробиотиков. В ННИИЭМ разработан первый отечественный препарат из лактобактерий. Первая документация в форме технических условий (ТУ 42.14.12-75) была утверждена в 1975 г. В дальнейшем ТУ были заменены на фармстатьи (ФС 42-252-ВС-89, ФС 42-3256-96, ФС 42-0054-00). В течение всего этого срока проводилось совершенствование технологии приготовления этого препарата, вводились новые штаммы. В настоящее время ведутся исследования по совершенствованию препаратов из микроорганизмов семейства Lactobacillaceae.

За долгий срок существования бактерийных препаратов на основе лактобацилл постоянно ведется динамическое наблюдение за сохранением всех полезных свойств составляющих их штаммов-продуцентов.

Известно, что наблюдается регулярная смена видов возбудителей острых кишечных инфекций и других условно-патогенных микроорганизмов, вызывающих различные воспалительные заболевания, поэтому мы изучили антагонистические свойства штаммов лактобацилл из созданной в лаборатории коллекции к свежевыделенным культурам патогенных и условно-патогенных бактерий, являющихся этиологическим фактором инфекционных заболеваний.

Была изучена ингибирующая активность 47 штаммов лактобацилл 9 видов в отношении 11 культур патогенных и условно-патогенных энтеробактерий, обладающих комплексом факторов патогенности, 4 культур золотистого стафилококка, 2 культур синегнойной палочки и 1 культуры Alcaligenes faecalis. Результаты представлены в таблицах 6 и 7.

Как видно из указанных таблиц, в соответствии с критериями оценки степени выраженности антагонизма, подробно описанных в материалах и методах, большинство изученных штаммов лактобацилл (94,2+3,2 %) независимо от видовой принадлежности, обладают высокой или очень высокой степенью антагонистической активности в отношении представителей родов Salmonella, Klebsiella, Proteus, Escherichia, Pseudomonas, Alcaligenes, Staphylococcus. Только три штамма (L.paracasei subsp. paracasei, L.confusus, L.helveticus) имеют средние показатели антимикробных свойств. Наиболее выражена антагонистическая активность у представителей родов L.fermentum и L.plantarum. Все 9 штаммов L.fermentum имеют очень высокую степень антагонистической активности в отношении изученных представителей родов Salmonella, Proteus, Pseudomonas, Alcaligenes, Staphylococcus, энтеропатогенных штаммов Escherichia. В отношении видов рода Klebsiella L.fermentum обнаруживает высокую степень ингибирующей активности. Все 15 штаммов L.plantarum очень высокоантагонистичны в отношении стафилококков, синегнойной палочки, протеев и энтеропатогенных штаммов кишечной палочки. В отношении клебсиелл и сальмонелл 3/4 штаммов L.plantarum обладают очень высокой антагонистической активностью, остальные — высокой. Отмечены штаммовые колебания антагонистических свойств лактобацилл, принадлежащих к видам L.paracasei subsp. paracasei, L.rhamnosus, L.brevis.

Оценка эффективности включения пробиотика в схему лечения язвенной болезни в стадии обострения

Поскольку механизм действия пробиотиков основан на конкурентных взаимоотношениях между облигатными представителями нормальной микрофлоры и патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, пробиотические штаммы должны быть активными продуцентами метаболитов, снижающих колонизационный потенциал и подавляющих рост указанных бактерий. К этим метаболитам относятся органические кислоты, прежде всего молочная, перекись водорода, лизоцим, бактериоцины и некоторые другие. Протективный эффект лактобацилл определяется не только наличием, но и совокупностью их антагонистических свойств, поскольку микроорганизмы, обладающие способностью продуцировать несколько антимикробных субстанций, имеют лучшие шансы для выживания в экосистеме хозяина, поэтому проверка штаммов на наличие антагонистической активности считается необходимым этапом работы по отбору производственных штаммов для пробиотиков. Исследования антагонизма штаммов-продуцентов in vitro экстраполируют с тем эффектом, который они могут оказывать на местную кишечную микрофлору in vivo. Степень проявления этого признака у микроорганизмов может широко варьировать.

Ранее в лаборатории была создана коллекция штаммов лактобацилл, проведена их идентификация на основе изучения биохимических свойств, изучена антагонистическая активность к большому набору патогенных и условно-патогенных бактерий, антибиотикорезистентность к наиболее часто используемым в практике антибактериальным препаратам. У некоторых штаммов были изучены адгезивные свойства (А.Ю. Лихачева, 1992). Было показано, что антагонистические свойства лактобацилл обусловлены не только образованием органических кислот, но и продукцией других антибиотических субстанций. Из исследованных штаммов лактобацилл, выделенных из пищеварительного тракта человека, только 26,9+6,1% культур продуцируют лизоцим и лишь один штамм - перекись водорода. В 1993 году Министерство Здравоохранения Российской Федерации утвердило государственную коллекцию лактобацилл при ННИИЭМ (приказ ГКСЭН МЗ РФ №37 от 23.04.1993). В состав коллекции вошли штаммы, утвержденные ГИСК им. Л.А.Тарасевича в качестве производственных - L.fermentum 90-ТС-4, L.fermentum 39, L.plantarum 8RA-3, L.plantarum 38, L.paracasei subsp.paracasei 37, которые являются основой таких известных бактерийных препаратов как «Лактобактерин сухой» и «Бифилакт кисломолочный». Эти препараты сконструированы несколько десятилетий назад и успешно применяются до сих пор. Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ РФ наряду с Московским НИИЭМ являются пионерами в области конструирования отечественных пробиотиков. В ННИИЭМ разработан первый отечественный препарат из лактобактерий. Первая документация в форме технических условий (ТУ 42.14.12-75) была утверждена в 1975 г. В дальнейшем ТУ были заменены на фармстатьи (ФС 42-252-ВС-89, ФС 42-3256-96, ФС 42-0054-00). В течение всего этого срока проводилось совершенствование технологии приготовления этого препарата, вводились новые штаммы. В настоящее время ведутся исследования по совершенствованию препаратов из микроорганизмов семейства Lactobacillaceae.

За долгий срок существования бактерийных препаратов на основе лактобацилл постоянно ведется динамическое наблюдение за сохранением всех полезных свойств составляющих их штаммов-продуцентов.

Известно, что наблюдается регулярная смена видов возбудителей острых кишечных инфекций и других условно-патогенных микроорганизмов, вызывающих различные воспалительные заболевания, поэтому мы изучили антагонистические свойства штаммов лактобацилл из созданной в лаборатории коллекции к свежевыделенным культурам патогенных и условно-патогенных бактерий, являющихся этиологическим фактором инфекционных заболеваний.

Была изучена ингибирующая активность 47 штаммов лактобацилл 9 видов в отношении 11 культур патогенных и условно-патогенных энтеробактерий, обладающих комплексом факторов патогенности, 4 культур золотистого стафилококка, 2 культур синегнойной палочки и 1 культуры Alcaligenes faecalis. Результаты представлены в таблицах 6 и 7.

Как видно из указанных таблиц, в соответствии с критериями оценки степени выраженности антагонизма, подробно описанных в материалах и методах, большинство изученных штаммов лактобацилл (94,2+3,2 %) независимо от видовой принадлежности, обладают высокой или очень высокой степенью антагонистической активности в отношении представителей родов Salmonella, Klebsiella, Proteus, Escherichia, Pseudomonas, Alcaligenes, Staphylococcus. Только три штамма (L.paracasei subsp. paracasei, L.confusus, L.helveticus) имеют средние показатели антимикробных свойств. Наиболее выражена антагонистическая активность у представителей родов L.fermentum и L.plantarum. Все 9 штаммов L.fermentum имеют очень высокую степень антагонистической активности в отношении изученных представителей родов Salmonella, Proteus, Pseudomonas, Alcaligenes, Staphylococcus, энтеропатогенных штаммов Escherichia. В отношении видов рода Klebsiella L.fermentum обнаруживает высокую степень ингибирующей активности. Все 15 штаммов L.plantarum очень высокоантагонистичны в отношении стафилококков, синегнойной палочки, протеев и энтеропатогенных штаммов кишечной палочки. В отношении клебсиелл и сальмонелл 3/4 штаммов L.plantarum обладают очень высокой антагонистической активностью, остальные — высокой. Отмечены штаммовые колебания антагонистических свойств лактобацилл, принадлежащих к видам L.paracasei subsp. paracasei, L.rhamnosus, L.brevis.

Похожие диссертации на Конструирование нового многокомпонентного пробиотика и использование его в комплексной терапии хеликобактер-ассоциированных заболеваний [Электронный ресурс]

Микробиологический мониторинг патогенов гнойно-воспалительных заболеваний в хирургических отделениях и отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационареПодсвирова Ирина Александровна

Конструирование рекомбинантных белков для диагностики и терапии онкологических заболеванийСыркина, Марина Сергеевна

Радиобиологическое и дозиметрическое обоснование радионуклидной терапии заболеваний щитовидной железыЛипанова, Наталья Николаевна

Роль окислительного стресса и глутатион-зависимых процессов в развитии клеточной лекарственной устойчивости и при терапии ряда заболеванийКалинина Елена Валентиновна

Анатомическое обоснование клинического применения комплексного способа лапароскопической лимфотропной антимикробной терапии воспалительных заболеваний придатков маткиСеменченко Сергей Иванович

Роль полиморфизма генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков в предрасположенности к атопическим заболеваниям и гепатотоксичности противотуберкулезной терапииМакарова, Светлана Ивановна

Современная методология диагностики и терапии аллергических и аллергопаразитарных заболеваний.Дрынов, Георгий Игоревич

Генетические факторы при сердечно-сосудистых заболеваниях: идентификация генов кандидатов и фармакогенетика терапии бетаксололомБровкин, Алексей Николаевич

Паразитарные заболевания собак при разных типах содержания и назначения и усовершенствование терапии гельминтозов Будовской Андрей Владимирович

Особенности иммунного ответа при кожных заболеваниях, ассоциированных с герпетической инфекцией, и разработка подходов к их терапииПотапова Людмила Анатольевна