Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы
2.1. Роль бактерий рода Sen-atia в инфекционной патологии человека 9
2.2. Факторы патогенности бактерий рода Serratia 15
3. Материалы и методы исследования 27
4. Собственные исследования
4.1. Морфологические и культуральные свойства, ультраструктурные строения и контакты между клетками клинических штаммов бактерий рода Serratia, выделенных от больных гнойно-воспалительными и кишечными инфекциями 43
4.2. Антибиотикорезистентность бактерий рода Serratia 47
4.3. Характеристика некоторых факторов вирулентности бактерий рода Serratia in vitro .
4.3.1. Адгезивные свойства бактерий рода Serratia 49
4.3.2. (а-, энтеро-, тиолзависимые) гемолитические активности бактерий рода Serratia 51
4.3.3. Лецитиназная активность клинических штаммов Serratia 55
4.3.4. ДНК-азная активность бактерий рода Serratia 57
4.4. Персистентные свойства бактерий рода Serratia 59
4.5. Комплексная оценка патогенности клинических штаммов бактерий рода Serratia in vivo.
4.5.1. Плантарный тест на беспородных белых мышах 61
4.5.2. Петля тонкого кишечника кролика 62
4.5.3. Интраназальное заражение беспородных белых мышей 64
4.5.4. Протистоцидная активность 65
4.6. Генетическая природа некоторых факторов
патогенности клинических штаммов бактерий рода Serratia 66
5. Заключение 74
6. Выводы 89
7. Список литературы 90
Приложения...
- Роль бактерий рода Sen-atia в инфекционной патологии человека
- Факторы патогенности бактерий рода Serratia
- Морфологические и культуральные свойства, ультраструктурные строения и контакты между клетками клинических штаммов бактерий рода Serratia, выделенных от больных гнойно-воспалительными и кишечными инфекциями
- Характеристика некоторых факторов вирулентности бактерий рода Serratia in vitro
Введение к работе
В связи с неблагополучной экологической ситуацией и нерациональным применением антибактериальных препаратов в практике, в последние годы наблюдается тенденция увеличения частоты выделения условно-патогенных грамотрицательных бактерий, в частности бактерий рода Ser-ratia, при инфекциях различной локализации (1, 8, 79, 80,192).
Бактерии рода Serratia достаточно широко распространены в природе: их обнаруживают в воде, почве, пищевых продуктах, а в последние десятилетия они часто стали выделяться от здоровых и больных людей, животных (87).
Представители вышеуказанных микроорганизмов в ходе эволюции приобрели способность при попадании в организм человека не только выживать, но и наносить ему вред (5, 84).
Бактерии рода Serratia часто являются причиной гнойно- воспалительных, урологических, гинекологических и кишечных заболеваний (94, 95). Также инфекционные процессы, вызванные этими бактериями, нередко развиваются у детей раннего возраста, онкологических больных, и являются причиной внутрибольничных инфекций (89, 91, 96).
Способность бактерий рода Serratia размножаться в макроорганизме и вызывать инфекционный процесс зависит от наличия у бактерий ряда факторов, определяющих их адгезивную, колонизирующую, цитотоксиче-скую и энтеротоксическую активности возбудителя. В связи с этим изучение этих факторов может позволить разработать критерии этиологической значимости, основанные на изучении указанных биологических характеристик возбудителей и улучшить диагностику инфекций, вызванных бактериями рода Serratia (84). К сожалению, недостаточно изучена роль отдельных поверхностных структурных элементов бактериальной клетки Serratia и факторов, обуславливающих патогенность клинических изолятов, в частности их адгезивная, энтеротоксигенная, гемолитическая, ДНК азная, лецитиназная активности и персистентный потенциал микроорганизмов.
Исходя из вышеизложенного, проведение комплексных исследований, направленных на изучение факторов патогенности, тесным образом связных с этиологической значимостью выделяемых штаммов бактерий рода Serratia, является весьма актуальным.
Цель исследования. Изучить биологические свойства клинических штаммов бактерий рода Serratia, выделенных от больных с инфекционными процессами различной локализации.
Задачи исследования:
1. Изучить частоту встречаемости бактерий рода Serratia при кишечных, урологических инфекциях и гнойно-воспалительных заболеваниях хирургического профиля, и их устойчивость к наиболее широко применяемым в практике антибиотикам.
2. Изучить культуральные, морфологические свойства и ультраструктуру клеток бактерий рода Serratia.
3. Выяснить частоту проявления адгезивной, гемолитической (а-, энтеро-, тиолзависимый гемолизин), лецитиназной, ДНК-азной, антилизоцимной, антиинтерфероновой, антикомплементарной, LT-энтеротоксигенной активностей у штаммов бактерий рода Serratia, выделенных от больных с кишечными, урологическими и гнойно- воспалительными заболеваниями.
4. Дать биологическую характеристику бактерий рода Serratia на различных моделях экспериментальной инфекций.
5: Изучить природу генетических детерминант некоторых факторов патогенности бактерий рода Serratia. НАУЧНАЯ НОВИЗНА.
С помощью электронного микроскопа описаны морфологические особенности бактерий рода Serratia и изучены взаимоотношения между бактериальными клетками Serratia в колониях. Выявлено два типа контактов: плотное слипание и образование перемычек на уровне наружных мембран. У клинических штаммов, обладающих высокой адгезивной активностью, по периметру клеток обнаружены реснички. У двух клинических штаммов Serratia выявлена способность к синтезу холероподобного термолабильного энтеротоксина.
Определен широкий спектр антибиотикоустойчивости у клинических штаммов бактерий рода Serratia.
Получены новые данные о распространении а- гемолитической, ти-олзависимой, энтерогемолитической, антиинтерфероновой, антикомплементарной, антилизоцимной, ДНК-азной, лецитиназной активностей клинических штаммов Serratia.
У штаммов, выделенных при кишечных инфекциях, обнаружена способность к синтезу гемолизина нового типа - энтерогемолизина, формирующего на кровяном агаре с 5% кровью барана зоны двойного лизиса и вызывающего накопление геморрагической жидкости в петле тонкого кишечника кролика.
Среди клинических штаммов бактерий рода Serratia выделены два штамма: S. odorifera и S. marcescens, обладающие комплексом факторов патогенности. Штаммы депонированы в ГНИСК им. Л.А. Тарасевича под №№275, 268 соответственно и запатентованы № 2003138265/13 (041348), № 2003133683/13 (036133) для использования в качестве эталонных культур при изучении биологических свойств бактерий рода Serratia. ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Среди клинических штаммов Serratia выделены культуры, обладающие факторами патогенности, что свидетельствует о их роли в инфекционной патологии человека.
Из числа клинических штаммов Serratia отобраны культуры, обладающие комплексом факторов патогенности, депонированные в коллекции живых культур Государственного Научно - исследовательского института стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича для использования в качестве эталонных культур.
Полученные в процессе диссертационной работы результаты используются в учебном процессе кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Башкирского государственного медицинского университета и в бактериологических лабораториях г. Уфы, Стерлитамака и Ишимбая.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ
Материалы работы представлялись на научных конференциях Башкирского Государственного Медицинского Университета (2002, 2004); на III конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2003); Республиканской Конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука-2003»; Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии», ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, (Уфа, 2004); на 69-й межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых (Курск, 2004); На конференции, посвященной 10-летию НПЦ лечения дисбактериозов НИИ иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия МЗ РФ». (Челябинск, 2004).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ и получено 2 положительных решения на изобретения. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы и приложения. Работа изложена на 112 страницах машинописного текста, содержит 4 таблицы, 21 рисунок.
Список литературы включает 198 источников (88 отечественных и 110 зарубежных авторов).
Роль бактерий рода Sen-atia в инфекционной патологии человека
Название рода Serratia было дано B.R. Davis и W. Ewing (1957). Название рода связывают с именем итальянского физика XVIII века Serafino Serrati.
Современным представлениям род Serratia является представителем семейства Enterobacteriaceae и согласно IX изданию определителя Берджи (1997) включает 10 видов: S. entomophila, S. ficaria, S. fonticola, S. grimesii, S. liquefaciens, S. marcescens, S. odorifera (2 биогруппы), S. plymuthica, S. proteamaculans, S. rubidaea (67).
Внутриродовые различия бактерий рода Serrata разделяют по отношению к реакции Фогеса-Проскауера, по расщеплению лактозы, адонита, арабинозы, сорбита, цитрата Симонса, лезиндекорбоксилазы, аргининде-карбоксилазы, рафинозы, дезоксирибонуклеазы, липазы, а- метил- D- глю-козиды, сахарозы, D-ксилозы, мелибиозы, дульцита, целлобиозы, L- рам-нозы, использовании малоната, орнитиндекорбоксилазы, гидролиза желатины и пигментообразованию (таблица №1) (67)
Многие представители условно-патогенных энтеробактерий являются причиной гнойно- воспалительных, урологических, гинекологических и кишечных заболеваний, а так же причиной внутрибольничных инфекций (6, 77, 78, 79). По данным В.И. Покровского (1985 г.) от внутрибольничных инфекций, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, ежегодно страдает свыше 2 миллионов жителей России. Так, по данным СВ. Прозоровского с соавт., (1991). (77, 78) внутрибольничные инфекции, вызываемые условно-патогенными микроорганизмами регистрируются у 18% госпитализированных больных и 3% из них погибают. В реанимационных отделениях в 30% случаев пневмоний, 25% инфекций мочевыводящих путей, 16% септицемии и в 8% хирургических раневых инфекций, а также в 86% случаев причиной пролежней у тяжелобольных являются условно-патогенные микроорганизмы (44, 49, 51,156). Особенно высока смертность среди детского населения. При этом, дети и люди пожилого возраста представляют группы риска(23, 47, 64).
В последние годы все чаще появляются сообщения, где авторы отмечают тенденции нарастания инфицирования бактериями рода Serratia, и показывают о том, что бактерии рода Serratia могут быть причиной развития гнойно- воспалительных, урологических, кишечных, токсико - септических и внутрибольничных инфекций (32, 73, 79).
Бактерии рода Serratia часто являются этиологическим фактором при воспалительных процессах почек и мочевыделительной системы и инфекционный процесс может протекать в виде ассимптомной бактериурии, пиелонефрита и уросепсиса (160).
Данные литературы последних лет свидетельствуют о том, что бактерии рода Serratia является причиной кишечных инфекций (80). При сравнении выявления Serratia в фекалиях больных острыми кишечными инфекциями и здоровых людей показано, что у больных они встречаются чаще 13,1% против 2,1% у здоровых (87).
Бактерии рода Serratia часто выделяются от больных с воспалительными процессами респираторного тракта. Эти микроорганизмы вызывают инфекционные процессы практически во всех отделах дыхательной системы, включая асимптомную локализацию в ротоглотке, хронический бронхит, пневмонию и эмфизему легких (131).
Бактерии рода Serratia, так же играют этиологическую роль в возникновении гнойно-воспалительных процессов, при этом часто выделяются из клинического материала хирургических больных, отягощают заживление ран и усиливают вредное действие, другой патогенной микрофлоры (51,98,99,174). Бактерии рода Serratia нередко вызывают посттравматические остеомиелиты (106, 194), воспаления глаз (107, 117, 128, 156, 178), описаны случаи спорадических и эпидемических вспышек менингитов (49, 134).
В последние годы особую актуальность приобретает внутриболь-ничные инфекции, вызываемые бактериями рода Serratia (109, 114, 150). Основной причиной внутрибольничного сепсиса вызываемого данными микроорганизмами являются инфицированные внутривенные катетеры, лекарственные растворы для внутривенного введения, кровь и препараты крови для переливания и гнойные раны (129, 137, 154, 174, 188). В урологических отделениях причиной инфицирования бактериями рода Serratia явились мочевые катетеры, цистостомы и нефростомы (103). Нередко описаны случаи инфицирования больных в отделениях гемодиализа (100, 101, 113,135).
Отмечается возрастание роли бактерий рода Serratia в акушерских стационарах, в том числе при гнойно-септических заболеваниях у новорожденных (172, 173). Известно, что инфекции новорожденных, вызываемые условно-патогенными бактериями, как правило, развиваются в результате заражения в родовспомогательных учреждениях (139, 149). В акушерском стационаре бактерии рода Serratia выделяются в среднем у 17,8% новорожденных и взрослых, 6,5% проб с объектов внешней среды. Данная культура часто выделяется из полости носа и кожных покровов у новорожденных детей и с грудной железы кормящих матерей. При сравнении результатов обследования людей в различных отделениях было установлено, что в отделении интенсивной терапии в акушерских стационарах частота обнаружения бактерий рода Serratia достигала до 35,5%, в то время как в физиологическом и обсервационном отделениях - 13,7% (8).
Факторы патогенности бактерий рода Serratia
Ряд исследователей (Бондаренко B.M. 1988г, Габидуллин З.Г. 1990г.) считают, что гемолитическая активность может быть основным фактором патогенности энтеробактерий и использована в качестве маркера этиологической значимости возбудителя (11, 37, 39, 88).
Н.Н. Нестерова (1975 г.) и И.В. Аверина (1974 г.) гемолитическую активность у бактерий семейства Enterobacteriaceae чаще обнаруживали у штаммов, выделенных от тяжелобольных, а В.Н. Дикий (44) связывает наличие гемолизина у бактерий с их вирулентностью, изучая флору у детей с пневмонией, отмечали уменьшение количества Е. coli при увеличении ге-молитически активных культур, в частности Proteus, Citrobacter (2, 44, 66). А.В. Пархоменко (68) установил наличие гемолитической активности у бактерий, выделенных от больных с кишечными расстройствами, у которых отмечалась высокая корреляция между уровнем гемолитической активности и вирулентностью.
Установлена роль а- гемолизина в развитии сепсиса, токсического отека легких, в поражении почек и нижних отделов мочевыводящих путей (105,166).
В настоящие время гемолизины обнаружены у широкого круга гра-мотрицательных и грамположительных микроорганизмов (11, 164, 175). У некоторых видов энтеробактерий и у бактерий рода Serratia, обнаружены белки, связанные с микробной клеткой или секретируемые во внешнюю среду, обладающие гемолитической активностью. Безусловно, что различного типа гемолизины, обнаруженные у разных видов энтеробактерий участвуют в токсическом действии возбудителей на макроорганизм и могут вызывать его гибель. Не менее важными являются и исследования, направленные на выяснение механизма молекулярного действия гемолизинов, связи гемолитической активности с цитолитической способностью (92, 168).
Патогенетическим механизмом всех гемолизинов является повреждающее воздействие на мембрану эритроцитов с последующим их лизисом.
Как известно, продукция гемолизинов детерминируется как хромосомными, так и плазмидными генами (111). Последние могут быть,представлены коньюгативными плазмидами различных групп совместимости, экспрессия которых возможна, и в штаммах кишечной палочки, сальмонелл, гафний, серраций. Указанные плазмиды обнаружены и у энтеробактерий и имеют массу от 62,2 до 190 МД. (124)
По молекулярной массе, физиологическим свойствам, биохимическим воздействиям, а также по иммунологическому родству гемолизины дифференцируются на несколько типов: а-, энтеро- и тиолзависимый гемолизин. Установлено, что способность синтезировать гемолизины разных типов обнаружена у протеев (Габидуллин 3. Г. 1990г.), морганелл (Гаши-мова Д. Т. 1995г.), цитробактер (Туйгунов М.М. 2003г.) и других бактерий.
Среди гемолизинов наиболее изученными являются а-гемолизины, которые обладают одновременно цитотоксической активностью. Авторы экспериментально доказали корреляцию гемолитической активности с вирулентностью. При этом показано, что для многих грамотрицательных бактерий продукция гемолизинов является плазмид- ассоциированным признаком (16).
Новый тип гемолизина- энтерогемолизин был обнаружен не только у энтеропатогенной кишечной палочки, но и у протеев, цитробактер, который обусловливал развитие диарейного синдрома (Габидуллин З.Г. 1990г., Гашимова Д.Т. 1995г., Туйгунов М.М. 2003г.). Авторами показано отсутствие иммунологической и генетической связи между а-гемолизином и энте-рогемолитической активностью у бактерий (36, 93).
Некоторое авторы показали, что у бактерий рода Serratia, гемолитическая активность, инактивируется протеазами. Указанная активность увеличивается при культивировании бактерий в условиях дефицита ионов железа. При этом отмечена высокая удельная гемолитическая активность S. marcescens в пересчете на 1 бактериальную клетку. Следует отметить, что Serratia давали отчетливую зону гемолиза на плотной среде, содержащей эритроциты барана.
Одним из механизмов длительной персистенции возбудителя является продукция бактериями секретируемых субстанций, инактивирующих факторы иммунитета, к которым относят антилизоцимную (АЛА), антиин-терфероновую (АИА) и антикомплементарную (АКА) активности (22, 24, 26, 27, 28).
Как известно, лизоцим или мурамидаза является широко распространенным ферментом макроорганизмов, защищающих их от инфекций. Указанный фермент расщепляет 1-4 гликозидные связи полисахаридной части ....-..,.. пептидогликана, при котором продукт ферментации пептидогликана, дисахарид N- ацетилглюкозамин и N- ацетилмурамовая кислота, утрачивает защитные для бактериальной клетки свойства, присущие муреину, что приводит к полному удалению клеточной стенки грамположительных или частичному ее разрушению у грамотрицательных микробов (25, 26). В ответ на лизоцим многие микроорганизмы приобрели способность к его инактивации, что получило название антилизоцимного фактора (АЛА). АЛА стабильно в 88- 100% случаях встречается у грамотрицательных бактерий (26), в частности были выявлены у протеев (Бухарин О. В. 1984г., Габидуллин 3. Г. 1990г.), морганелл (Гашимова Д. Т. 1995г.), цит-робактер (Туйгунов М. М. 2003г.).
В. М. Бондаренко с соавт. (12) установили, что у Kl. pneumoniae АЛА детерминируется плазмидой pAIz60 fi- типа с Mr 55- 60 мД. При этом плазмида pAIz60 наследуется и эффективно экспрессируется в бесплазмид-ные штаммы Shigella, Salmonella!, Klebsiella, Enterobacter, H. Aivei, Serratia, Y. pseudotuberculosis, Y. entericolitica.
Будучи важнейшим фактором неспецифической резистентности организма человека система интерферона является неминуемым барьером, с которым сталкиваются проникающие в макроорганизм агенты вирусной и невирусной этиологии (81).
Морфологические и культуральные свойства, ультраструктурные строения и контакты между клетками клинических штаммов бактерий рода Serratia, выделенных от больных гнойно-воспалительными и кишечными инфекциями
Морфологические и культуральные свойства, ультраструктурное строение и контакты между клетками клинических штаммов бактерий рода Serratia, выделенных от больных гнойно-воспалительными и кишечными инфекциями
При проведении исследований были использованы 148 клинических штаммов бактерий рода Serratia, среди которых 48,6% составляли штаммы, выделенные от больных с урологическими, 21,6% - гнойно-воспалительными хирургического профиля, 9,5%) - гинекологическими заболеваниями, 6,1% с кишечными инфекциями и 13,6% от практически здоровых людей. По биохимическим свойствам 43,9% штаммов принадлежали к виду S. odorifera, 29,1%) - S. marcescens, 21,6% - S. Hguefaciens, 4,1% - S. rubidaea и 1,3% - S. plymuthica (Рис. 1). Поскольку бактерии рода Serratia относятся к семейству Enterobacteriaceae, и способны синтезировать пигмент - продигиозин, оказалось, что из всего количества штаммов бактерий S. marcescens 15,5% синтезировали продигиозин.
Бактерии рода Serratia на поверхности универсальных плотных питательных сред растут с образованием характерных изолированных колоний, а в МПБ - вызывают равномерное помутнение с выпадением осадка к концу суточного культивирования. Штаммы. S. marcescens образуют пигмент красно-малинового цвета.
При посеве на полужидкий агар бактерии диффундировали в среду в течение суток. Исследования на подвижность методом «раздавленной» и «висячей» капли показалщ что бактериальные клетки обладали поступательными и маятникообразнымидвижениями.
На окрашенных препаратах по Рраму бактериальные: клетки представляли собой мелкие грамотрицательные палочки.
При электронно - микроскопическом изучении бактериальные клетки представляли собой палочки размерами длиной 1,1-1,3 мкм и шириной; 0,5-0;6 мкм окруженные перетрихиально расположенными жгутиками, которые имели различную толщину и длину (2x4 - 20 нм); Их количество» и место расположения: различны и неодинаковы у разных штаммов, среднее число жгутиков, колебалось в пределах от 6 до 50-60 (Рис. 2). Следует отметить, что на количество жгутиков определенное влияние оказывали используемые в:приготовлении препарата химические вещества: так при обработке препаратов раствором; уранилацетата наблюдали большую ломкость жгутиков, что соответственно резко уменьшало их количество.
Исследование структуры колоний бактерий рода Serratia показало, что между клетками внутри: колоний существуют контакты двух типов: плотное слипание клеток между собой и образование
Таким образом,. у изученных штаммах бактерий рода. Serratia было выявлено разнообразие морфологии, и ультраструктуры бактерий в процессе их роста.
Имеющиеся научные данные о множественной
антибиотикоустойчивости бактерий; рода Serratia не подвергается сомнению (159- 193). Тем не менее изменение и механизм развития лекарственной устойчивости культур Serratia. до настоящего времени остается не до конца выясненным.
В связи с этим интерес представляет изучение спектра антибиотикорезистентности; клинических штаммов бактерий рода Serratia, выделенных при урологических, гнойно- воспалительных, гинекологических, кишечных инфекциях и от здоровыхлюдей:
Спектр антибиотикоустойчивости? клинических штаммов Serratia изучали методом дисков и серийных разведений: левомицитину, карбенициллину, канамицину, стрептомицину, тетрациклину, эритромицину, клафорануі гентамицину, рифампицину, лизолину, ципробаю.
К ципробаю были чувствительными все выделенные культуры Serratia при гинекологических инфекциях, в 83%.- гнойно-воспалительных, в 62% - урологических..
Стрептомицин в 12% случаях действовал только на культуры Serratia- выделенные при урологических инфекциях. Данный препарат не действовал на штаммы, которые были выделены при гинекологических инфекциях, в 91% - случаях не эффективными отношении культур выделенных при гнойно- воспалительных, 90% - кишечных инфекциях.
Гентамицин обладал выраженным противомикробным действием на Serratia, которые были высеяны при урологических инфекциях - 62%, гнойно-воспалительных - 58%, гинекологических - 50%. Канамицин обладал активностью к бактериям рода Serratia, выделенных при гинекологических инфекциях в 50%, гнойно-воспалительных в 17%, урологических в 15%).
Клафоран был активным в 100% случаев к Serratia, выделенной от гинекологических и урологических больных, в 91%) - гнойно-воспалительных, в 42% - кишечных.
Лизолин оказывал противомикробное действие на Serratia, выделенных от гинекологических больных в 100% случаев, гнойно-воспалительных - в 62%, урологических - в 37%), кишечных - в 25%.
Ампициллин оказывал действие только в 8% к Serratia выделенных при гнойно-воспалительных процессах, из остальных источников штаммы не обладали чувствительностью к данному препарату.
Рифампицин обладал активностью в 11% к Serratia, выделенных при гнойно-воспалительных процессах, в остальных случаях действие данного препарата к возбудителю отсутствовал.
Тетрациклин действовал на Serratia, выделенных при гинекологических инфекциях в 47%, гнойно-воспалительных - в 16%, урологических- в 12% и кишечных - в 10%) случаях.
Карбенициллин обладал активностью в отношении к Serratia, выделенных при гинекологических инфекциях в 50%, гнойно-воспалительных - в 40%, кишечных - в 5% и урологических - в 4% случаях.
Левомицетин действовал на бактерии рода Serratia, выделенных при гинекологических инфекциях в 50%, кишечных - в 75%), гнойно-воспалительных - в 41% и урологических - в 25% случаях.
Характеристика некоторых факторов вирулентности бактерий рода Serratia in vitro
Учитывая, что нуклеиновые кислоты являются основным субстратом действия ДНК-аз и РНК- аз, понятен интерес исследователей к изучению этих ферментов, связанных с патогенностыо бактерий (Jacob S.L. et al., 1964, ledakisN. etal., 1974). Подтвреждением тому является, что некоторые представители семейства Enterobacteriaceae, выделенные от больных гнойно- воспалительными и острыми кишечными инфекциями, по сравнению с культурами изолированными из окружающей среды и от здоровых людей чаще обладают ДНК- азной активностью (Nassif X., 1987).
В этой связи мы изучили частоту встречаемости среди клинических штаммов бактерий рода Serratia, ДНК- азную активность.
В ходе проведенных нами исследований по изучению ДНК- азной активности было установлено, что из 148 штаммов 48 обладали ДНК-азной активностью, среди которых 37,6% штаммов проявляли высокую, 31,2% -среднюю, 31,2% - слабую активности (Рис. 14). Подавляющее количество бактерий с ДНК - азной активностью выделялось при хирургической патологии (41,7%) и от урологических больных (39,6%), доля выделенных микроорганизмов от здоровых составила 4,2% (Рис. 15). По видовой принадлежности штаммы распределились следующим образом: 39,6% - S. marcescens, 43,8% - S. odorifera, 16,6% - S. liquefaciens.
В дальнейшим была изучена корреляция ДНК - азной активности с их вирулентностью в опытах интраназального заражения белых мышей и на модели инфузорий туфелек. Анализ полученных результатов показал, что из 48 ДНК - аза активных штаммов 15 обладали вирулентностью, среди которых 46,7% проявляли высокую, 40,0% - среднюю и 13,3% — низкую ДНК - азную активность. Таким образом проведенные исследования показали, что ДНК- азная активность в комплексе с другими факторами патогенности может быть использована в качестве маркера оценки этиологической значимости клинических штаммов бактерий рода Serratia.
Были изучены и факторы персистенции, позволяющие возбудителю в целях самосохранения от бактерицидных факторов макроорганизма располагать средствами, направленными на инактивацию механизмов защиты: антилизоцимная (АЛА), антиинтерфероновая (АИА) и антикомплементарная (АКА) активности бактерий (22, 26, 24, 27, 28, 81).
Результаты исследований показали, что из 128 клинических штаммов АЛА обладали 69 культур, из них 40 были выделены от больных с урологическими, 17- хирургическими, 7- гинекологическими , 5-кишечными заболеваниями и 5 - от здоровых людей (таблица 3). Достоверность различий между штаммами, выделенными от больных и здоровых людей, составляет (Р 0,05).По биохимическим свойствам -41,9% культур относились к S. marcescens, 45,9% - S. odorifera, 12,2% - S. liquefaciens.
АИА обладали 53 культур, из них 22 штамма были выделены при урологических, 22 - хирургических, 6 - гинекологических, 3 - кишечных инфекциях и 4 - от здоровых людей (Р 0,05). По биохимическим свойствам 56,1% культур относились к виду S. odorifera, 35,1% - к S. marcescens и 8,8% - к S. liquefaciens.
АКА признак обеспечивает персистирование микробной клетки и характеризует способность инактивировать комплемент. Изучение частоты встречаемости АКА среди клинических штаммов бактерий рода Serratia, выделенных при различных инфекционных процессах, показало, что из 148 штаммов АКА обладали 53 клинических штаммов, среди которых 20 были выделены при урологических, 17 - хирургических, по 8 -гинекологических и кишечных инфекциях, 5 - от здоровых людей (Р 0,05).
Таким образом результаты данного раздела исследований, дают основание заключить, что клинические штаммы бактерии рода Serratia, выделенные от больных с различными инфекционными заболеваниями, чаще обладают персистирующими свойствами (АЛА, АИА, АКА), чем штаммы изолированные от здоровых людей (Р 0,05), что необходимо учитывать при оценке этиологической значимости бактерий рода Serratia.
