Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Литературный обзор 12
1.1. Иммунологические аспекты трансплантации органов 12
1.1.1. Отбор донора и реципиента 13
1.1.2. Реакция отторжения трансплантата 15
1.2. Циклоспорин А - препарат выбора при трансплантации почки 18
1.2.1. Механизм действия циклоспорина 22
1.2.2. Фармакокинетика циклоспорина 24
1.2.3. Влияние ЛС на уровень CsA в крови 28
1.2.4. Фармакодинамические и фармакинетические особенности препаратов на основе циклоспорина.А 29
1.2.5. Использование CsA в комбинированной тройной иммунодепрессивной терапии 30
1.2.6. Побочные эффекты и клиническая безопасность CsA 31
1.2.7. Внепочечные токсические эффекты CsA 36
1.2.8. Мониторинг биохимических и общеклинических показателей 44
1.3. Математические модели фармакокинетики и биокинетики 49
1.4. МДА как маркер проявления токсического воздействия на организм 52
1.5. Определение CsA в биоматериале методом ФПИА 54
1.6. Определение CsA в препарате «Консупрен» 56
1.6.1. ИдентификацияСБА в препарате «Консупрен» 56
1.6.2. ВЭЖХ как метод количественного определения CsA в препарате «Консупрен» 59
Глава 2. Объекты и методы исследования 60
2.1. Объекты исследования 61
2.1.1. Критерии включения больных в исследование 61
2.1.2. Схема приема препарата Консупрен и других лекарственных средств во время проведения исследования 62
2.1.3. Длительность проведения исследования и оценка эффективности лечения препаратом Консупрен 63
2.1.4. Демографические характеристики больных, включенных в исследование 64
2.2. Методы исследования 66
2.2.1. Физикальное обследование 66
2.2.2. Мониторинг лабораторных показателей 66
2.2.3. Мониторинг концентрации CsA в крови 67
2.2.4. Определение МДА в плазме крови 71
2.2.5. Опрделение подлинности CsA в препарате методом ИК-спектрофотометрии 73
2.2.6. Количественное определение CsA в препарате Консупрен методом ВЭЖХ 74
Глава 3. Результаты и их обсуждение 80
3.1. Оценка биохимических и общеклинических показателей 80
3.1.1. Выживаемость трансплантата и пациента 80
3.1.2. Побочные эффекты 80
3.1.3. Оценка нефротоксического эффекта препарата «Консупрен» 81
3.1.4. Оценка гепатотоксического эффекта 84
3.1.5. Влияние препарата «Консупрен» на уровень липидов в крови пациентов 89
3.1.6. Влияние препарата «Консупрен» на концентрацию глюкозы 94
3.1.7. Влияние препарата «Консупрен» на водно-электролитный баланс 98
3.1.8. Общеклиническое исследование крови 102
3.2. Терапевтический лекарственный мониторинг 111
3.2.1. Дозирование препарата и его концентрация в крови 111
3.3. Кинетические характеристики биохимических показателей 116
3.4. МДА - как новый диагностический маркер токсичности 122
3.5. Методики идентификации и количественного определения
содержания CsA в препарате «Консупрен» 124
3.5.1. Методика идентификации CsA в препарате 124
3.5.2. Количественное определение CsA в препарате 126
Выводы 130
Список литературы
- Циклоспорин А - препарат выбора при трансплантации почки
- Математические модели фармакокинетики и биокинетики
- Демографические характеристики больных, включенных в исследование
- Влияние препарата «Консупрен» на уровень липидов в крови пациентов
Введение к работе
Актуальность исследования
С того момента, как в 1954 г была произведена первая успешная пересадка почки, трансплантация органов позволила значительно увеличить продолжительность жизни и повысить качество жизни больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности. Сегодня в мире ежегодно производится около 25 тыс. пересадок почки [Шумаков В.И.,1999г].
До внедрения в клиническую практику иммунодепрессивных препаратов трансплантацию органов проводили очень редко в связи с острым отторжением трансплантата в первые дни и недели после пересадки. Начало применения циклоспорина (CsA) 1983 г. произвело революцию в трансплантологии: выживаемость трансплантатов почки в первый год после операции повысилась на 30-35%. Несмотря на появление в 90-х годах новых иммунодепрессантов, препараты циклоспорина продолжают оставаться ключевым звеном в проведении иммуносупрессивной терапии при трансплантации органов [Danovitch G., 1997].
На фармацевтическом рынке России в настоящее время присутствуют как оригинальный препарат "Сандиммун - Неорал" ("Новартис", Швейцария), так и его дженерики - "Панимун - Биорал" ("Панацея", Индия) и "Консупрен" ("Галена", Чехия). При несомненных достоинствах давно применяемого оригинального препарата у него есть один существенный недостаток - высокая стоимость. Поэтому все большее распространение в клинической практике получают дженериковые препараты на основе циклоспорина (CsA). Применение данной группы ЛС не только необходимо, но и жизненно важно для больных после трансплантации органов. В связи с этим перед фармацевтической химией и фармакологией стоит задача оценки эффективности и безопасности дженериковых препаратов на основе CsA.
В последнее время на российском рынке фармацевтических препаратов одной из самых серьезных проблем стало появление большого числа фальсифицированных лекарственных средств. В области трансплантологии жизненно важных органов, в том числе и почек, необходимым условием успешного функционирования трансплантата и выживания пациента является медикаментозное проведение иммунодепрессивной терапии. Поэтому проблема некачественных препаратов представляет реальную угрозу для жизни людей. Актуальной задачей фармацевтической химии является адаптация упоминаемых в НТД методик к реальным условиям идентификации и количественного определения циклоспорина в ЛП.
Появление клинических симптомов повреждения печени, почек и других органов-мишеней характеризуется значительной индивидуальной вариабельностью и продолжительным индукционным периодом проявления токсических повреждений, вызванных высокими начальными дозами CsA [Keown Р.А., 1992]. Это создает значительные трудности при оценке адекватности проводимой терапии. В связи с этим поиск новых диагностических маркеров и их кинетических характеристик для выявления ранней, бессимптомной токсичности является чрезвычайно актуальной проблемой.
Известно, что интенсификация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) является одним из основных проявлений нарушений обменных процессов и повышений эндогенной интоксикации организма [Karatas F., 2002]. Поэтому среди маркеров токсичности могут быть продукты ПОЛ, в частности, малоновый диальдегид (МДА).
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования является оценка безопасности и эффективности применения нового препарата "Консупрен" на основе циклоспорина А в течение шести месяцев у больных после аллогенной трансплантации почки.
Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Провести терапевтический лекарственный мониторинг нового лекарственного препарата "Консупрен" (Чехия) в капсулах у больных после аллогеннои трансплантацией почки методом ФПИА.
Определить изменение биохимических показателей крови у больных на фоне приема препарата «Консупрен» - нефротоксичности (креатинин, мочевина), гепатотоксичности (ACT, АЛТ), липидного обмена, водно-электролитного баланса, общего клинического анализа крови и мочи.
Провести оценку биокинетических параметров (k)? t1/2, C0j CL, D/C) отдельных биохимических констант и общеклинических показателей крови для прогнозирования правильности лечения.
Провести сравнительный анализ биохимических и фармакокинетических показателей препарата "Консупрен" с препаратом "Панимун-Биорал" (Индия).
Подтвердить впервые обнаруженную возможность использования МДА в крови в качестве диагностического маркера для выявления ранней, бессимптомной токсичности организма при иммунодепрессивной терапии СуА.
Адаптировать к условиям основного эксперимента методов идентификации и количественного определения CsA, которые упоминаются в зарубежной НТД без детализации.
Научная новизна
Впервые проведена оценка эффективности и безопасности нового на отечественном фармацевтическом рынке препарата "Консупрен", как основного иммунодепрессивного средства при аллогеннои трансплантации почки.
Определено влияние CsA на биохимические и общеклинические показатели крови у больных в пост трансплантационный период (шесть месяцев) после АТП.
Разработаны кинетические подходы для прогнозирования изменений биохимических и общеклинических показателей, позволившие оценивать правильность проведения терапии.
Доказана возможность использования содержания малонового диальдегида в сыворотке крови как нового диагностического маркера для выявления ранней бессимптомной токсичности организма при применении препаратов на основе циклоспорина.
Методики определения подлинности и количественного определения CsA, упоминаемые в зарубежной НТД без детализации, адаптированы к условиям основного эксперимента.
Научно-практическая значимость результатов исследования
Представленный в работе материал позволяет использовать новый на российском фармацевтическом рынке препарат "Консупрен" в качестве основного иммунодепрессивного средства при проведении трансплантации органов.
Выявленные изменения биохимических и общеклинических показателей крови позволят врачам быстро и безошибочно осуществлять коррекцию нежелательных побочных эффектов при проведении терапии данным ЛС.
Используемые кинетические подходы по контролю изменений биохимических и общеклинических показателей крови позволят прогнозировать состояние больных в первые 6 месяцев после проведенной трансплантации.
По изменению содержания биохимических маркеров, в частности, впервые использованному нами МДА, осуществлять оптимальное
дозирование препарата в соответствии с индивидуальными возможностями организма.
Адаптированные к условиям основного эксперимента методики
идентификации и количественного определения CsA в препарате
"Консупрен" позволят контролировать качество, проводить
фармацевтический анализ ЛС и воспрепятствовать использованию фальсифицированных лекарственных препаратов.
Внедрение в практику
Заключительные результаты проведенного исследования об эффективности и безопасности нового препарата "Консупрен" были направлены в Научный центр экспертизы и государственного контроля лекарственных средств (приложение к письму - от 26.07.2001 №291-22/91).
Результаты исследования внедрены в учебный процесс (специальность фармацевтическая химия) кафедры фармацевтической и токсикологической химии медицинского факультета РУДН:
1. Акт внедрения в учебный процесс №3 методики определения
критериев качества ЛС - безопасности и эффективности препаратов на
основе циклоспорина, от 21.03.2003.
Акт внедрения в учебный процесс №4 методики математического моделирования эффективности фармакотерапии при лечении препаратами на основе циклоспорина, от 21.03.2003.
Акт внедрения в учебный процесс №5 методики идентификации и количественного определения препаратов на основе циклоспорина, от 21.03.2003.
Положения, выносимые на защиту
Результаты терапевтического лекарственного мониторинга нового препарата "Консупрен" (Чехия) в капсулах на основе циклоспорина
(с использованием метода ФПИА) у больных после аллогенной трансплантации почки;
Результаты контроля изменений биохимических показателей крови у больных на фоне приема препарата "Консупрен" нефротоксичности (креатинин, мочевина), гепатотоксичности (ACT, АЛТ), липидного обмена (холестерин, триглицериды, ЛПВП, ЛПОНП, ЛПНП, холестериновый индекс атерогенности), водно-электролитного баланса (Na+, К+, Mg"+, СГ, Са +), общеклинического анализа крови;
Результаты оценки биокинетических характеристик процессов восстановления значений до физиологической нормы для биохимических и общеклинических показателей;
Результаты сравнительного анализа биохимических и фармакокинетических показателей дженериковых препаратов "Консупрен" (Чехия) и "Панимун-Биорал" (Индия);
Обоснование возможности использования МДА в крови как нового диагностического маркера для выявления ранней, бессимптомной токсичности организма при применении иммунодепрессивной терапии циклоспорином у больных после аллогенной трансплантации почки;
Результаты адаптации к условиям основного эксперимента методик идентификации (ИК-спектрофотометрия) и количественного определения (ВЭЖХ) CsA в препарате "Консупрен".
Апробация работы. Результаты исследований были доложены на межкафедральной конференции (кафедры биохимии, фармацевтической и токсикологической химии) медицинского факультета РУДН; на II Всероссийском съезде по трансплантологии и разработке искусственных органов (Москва 2002); на IX и X Российском конгрессе «Человек и
лекарство» (Москва 2002, 2003 гг.); на ежегодной конференции «Национальные дни лабораторной медицины России» (Москва 2002). Публикации. По результатам диссертации опубликовано 10 работ. Объем и структура работы. Диссертация изложена на 150 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и библиографического указателя, включающего 170 источников. Работа иллюстрирована шестью рисунками и 35 таблицами.
Циклоспорин А - препарат выбора при трансплантации почки
Существует несколько способов преодоления трудностей, возникающих на пути пересадки органов: 1) лишение трансплантата антигенных свойств путем уменьшения количества (или полной ликвидации) чужеродных антигенов гистосовместимости (HLA), определяющих различия между тканями донора и реципиента; 2) ограничение доступности HLA-антигенов трансплантата для распознающих клеток реципиента; 3) подавление способности организма реципиента распознавать пересаженную ткань как чужеродную; 4) ослабление или блокирование иммунного ответа реципиента на HLA антигены трансплантата; 5) снижение активности тех факторов иммунного ответа, которые вызывают повреждение тканей трансплантата.
Несмотря на то, что основной задачей является обеспечение у реципиентов иммунологической толерантности, необходимой для нормального функционирования инородной ткани (например, пересаженной почки), основным методом предотвращения отторжения и лечения пациентов является иммуносупрессия [17].
Прогресс в области пересадки органов был достигнут в большой степени благодаря достижениям в области иммуносупрессии в течение последних 50 лет. В 1950 году полное облучение считалось единственным доступным методом для подавления иммунитета и больные либо умирали от апластической анемии и генерализованной инфекции (в случае достаточной дозировки для предупреждения отторжения), либо у них происходило отторжение пересаженного органа, если дозы облучения являлись недостаточными. Вначале в качестве иммунодепрессантов использовались те же средства, которые применяли как цитотоксические агенты при лечении злокачественных опухолей. Первым препаратом такого рода, использовавшимся в иммунологии, был 6-меркаптопурин. В 1960 году его токсичность была снижена при введении в молекулу имидазольной группы(азатиоприн) [4, 24]. Другим широко применяемым препаратом этой группы остается циклофосфамид. Такие препараты объединяет общий принцип действия: вмешиваясь в синтез предшественников нуклеиновых кислот, они в итоге нарушают процесс репликации ДНК, что приводит к гибели клетки в момент ее деления [21].
Таким образом, иммунодепрессанты первого поколения неизбирательно повреждают все делящиеся клетки, как злокачественные клетки, так и лимфоциты, вступившие в иммунный ответ. Этим объясняется наличие большого количества побочных эффектов, а также неспецифичность действия: они нарушают процессы гемопоэза, обновление тканей, вызывают опустошение лимфоидной ткани, подавляют все формы иммунного ответа, в том числе защиту от инфекций [14].
Существенным достижением на пути совершенствования иммунодепрессантов явилось создание препарата циклоспорина А. В 1970 году ученые из фармацевтической компании «Сандоз Фарма ЛТД» (Швейцария) в Базеле выделили 2 вида почвенных грибов, которые продуцировали циклоспорин. И только один из этих грибов был селектирован в культуру для получения циклоспорина в производственных масштабах путем ферментации, это был вид Tolypocladium inflatum. В 1972 году Борел обнаружил, что экстракт данного гриба обладает сильнейшим иммунодепрессивным эффектом. В 1976 году исследования, проводимые по всему миру подтвердили данный эффект циклоспорина и через 2 года были начаты первые клинические испытания данного препарата [34].
Согласно действующей в настоящее время классификации иммунодепрессивных средств [143], выделяют несколько групп препаратов: - ингибиторы интерлейкина-2 (подавляют продукцию или блокируют его действие): циклоспорин А, такролимус, рапамицин; - ингибиторы цитокинового гена экспрессии: кортикостероиды; - препараты, оказывающие цитотоксическое действие: циклофосфамид, хлорамбуцил; - ингибиторы пуринового или пиримидинового синтеза: азатиоприн, микофенолят мофетил; - препараты, блокирующие поверхность Т-лимфоцитов, участвующих в процессе отторжения: поликлональные и моноклональные антитела.
Циклоспорин А представляет собой циклический декапептид с метилированными остатками и наличием необычного нинеонового аминокислотного остатка [40]: цикло{-[(28, 3R, 4R, 6Е)-3-гидрокси-4-метил-2-метиламиноокт-6-еноил]-Ь-2-аминобутаноил -метилглицил-М-метил-Ь-лейцил-Ь-валил- метил-Ь-лейцил-Ь-аланил-В-аланил-Ы-метил-Ь-лейцил-Ы-метил-Ь-лейцил-М-метил-Ь-валил-} [24].
Математические модели фармакокинетики и биокинетики
Количественная оценка результатов мониторирования может быть проведена на основе биологической (биохимической) кинетики .
Биокинетические исследования позволяет приблизить к выяснению молекулярных механизмов, влияющих на скорости процессов, выявить лимитирующие стадий. Составной частью биокинетики является количественное описание протекания биологических процессов во времени при использовании молекулярных представлений и базовых законов физической и химической кинетики. Строгие количественные законы описывают поведение каждого вещества в организме. В настоящее время биокинетические исследования особенно хорошо проводятся с использованием лекарственных веществ. Раздел биокинетики, связанный с изучением кинетических закономерностей поведения лекарственных средств в организме, называется фармакокинетикой. Таким образом, биокинетика — это наука, изучающая на молекулярном уровне закономерности развития биологических процессов в системах in vitro, живых органах и тканях, клеточных популяциях [9].
Основным понятием фармакокинетики является камера (compartment). Камера представляет собой ограниченный в пространстве объем жидкости (ткани), при этом концентрация лекарственного вещества во всех пространственных точках данной камеры предполагается одинаковой. Объем камеры также предполагается практически постоянным и не меняющимся с течением времени.
Камерное представление организма является модельным, упрощенным. Оно основано на учении о гистогематических барьерах Л.С. Штерн. В качестве камер могут выступать кровь, лимфа, межтканевая жидкость и жидкость естественных анатомических областей.
В простейшем случае предполагают наличие только одной камеры. Такие фармакокинетические модели называются однокамерными. При этом предполагается, что лекарственное вещество введено в камеру одномоментно, а скорость его выведения пропорциональна количеству вещества, находящегося в данный момент в камере. Тогда согласно закону действующих масс: dm/dt = -keim , (1) где т — масса лекарственного вещества; ке]— константа элиминации (выведения) лекарственного вещества [18]. Чем больше константа скорости элиминации, тем быстрее лекарственное вещество выводится из организма, тем меньше время его действия. Очевидно, что: т=т0 exp f-keitj, (2) где т0 - начальная масса лекарственного вещества. Следует заметить, что в реальных фармакокинетических исследованиях часто измеряют не массу лекарственного вещества, а его концентрацию. Предполагая условный (кажущийся) объем камеры V постоянным, связь между массой и концентрацией вещества С запишется следующим образом: m=VC. Тогда уравнение (1)можно представить следующим образом: dVC/dt = V(dC/dt) = -ke,VC; dC/dt = -kelC; а уравнение (2)можно преобразовать в: С = С0 ехр [-ке{], (3) где С0 — начальная концентрация лекарственного вещества. Прологарифмировав уравнение (3), получаем: In С = In С0- ке, t (4)
Таким образом, в случае простейшей однокамерной модели зависимость концентрации лекарственного вещества от времени в полулогарифмических координатах является линейной. При этом тангенс угла наклона равен константе скорости элиминации, а ордината точки пересечения прямой с осью абсцисс - начальной концентрации лекарственного вещества.
Определив С0 и т0, рассчитывают кажущийся объем Vd распределения лекарственного вещества. Кажущийся объем является важнейшим параметром фармакокинетической модели. Если при введении в кровь Vd составляет менее 5% всего объема организма, то лекарственное вещество находится только в крови. Если Vd составляет от 5 до 100% объема организма, то лекарственное вещество распределяется по органам и тканям. Если превышает 100% от объема организма, то происходит накопление и концентрирование лекарственного вещества в тканях.
Исходя из кажущегося объема распределения лекарственного вещества рассчитывают величину клиренса: a = kel v
Клиренс характеризует суммарную эффективность систем выведения (элиминации) ЛВ из организма легкими, кожей, печенью, почками и т.д. Уменьшение величины клиренса свидетельствует о серьезных изменениях в функционировании систем организма и о накоплении в организме токсичных продуктов метаболизма.
Таким образом, параметры фармакокинетических моделей (константы скоростей, клиренсы, объемы распределения, периоды полувыведения препаратов), а также внемодельные характеристики фармакокинетики (площади под кривыми, средние времена удерживания и прохождения лекарственных веществ) описывают разные стороны одного процесса: взаимодействия лекарства и организма. Это многогранный процесс, складывающийся из множества составляющих, куда входят характеристики поглощения препаратов, их распределения в ткани и органы, метаболизма и выведения из организма. Все эти процессы взаимосвязаны и взаимозависимы. Поэтому, описывая некоторые из них, мы в неявной форме учитываем и другие.
Демографические характеристики больных, включенных в исследование
Мониторинг лабораторных показателей. Мониторинг лабораторных показателей проводился за день до операции, затем через 3,5, 7, 10, 14 дней после операции, а затем на 4,7, 10, 13, 19, 24 недели.
Общий анализ крови. Измерение проводилось на приборе Cell-Dyn 1700 фирмы «Abbott» по следующим показателям: гемоглобин, гематокрит, эритроциты, лейкоциты (с определением лейкоцитарной формулы), тромбоциты. Данный прибор является автоматическим и требует 200 мкл для проведения анализа.
Биохимические показатели крови: Измерение показателей проводилось на приборе Hitachi-917. В процессе проведения мониторинга измерялись следующие показатели: креатинин, мочевина, аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (ACT), щелочная фосфатаза (ЩФ), общий билирубин, общий белок, глюкоза, триглицериды, холестерин. Также были определены уровни магния, кальция, фосфора. Данный прибор является автоматическим и требует 5 мл для проведения анализа.
Показатели ионного обмена: Измерение показателей проводилось на приборе Easy Lyte фирмы «Medica». Были определены показатели натрия, калия и хлора. Данный прибор является автоматическим и требует 500 мкл крови для проведения анализа.
Анализ мочи: Измерение проводилось на приборе Hitachi-917. При проведении мониторинга определялся уровень рН, белок, глюкоза, креатинин мочи, уробилиноген. Прибор является автоматическим и требует 20 мл мочи для проведения анализа. Тест на беременность: проводится у женщин детородного возраста за день до проведения операции. Проведение мониторинга измерения концентрации циклоспорина в крови пациентов после АТП.
Проведение лекарственного мониторинга циклоспорина в крови больных проводилось методом флуоресцентно-поляризационного анализа (ФПИА) на приборе TDx/FLx фирмы «Abbott». Взятие образца крови для анализа осуществлялось за 5 минут до приема очередной дозы препарата. При исследовании фармакокинетики препарата, уровень CsA в крови больных также измеряли через 1, 2, 4 и 6 часов после приема очередной дозы.
Прибор TDx/FLx представляет собой полностью автоматизированную систему, используемую для измерения концентраций лекарственных средств в сыворотке крови. Эта система состоит из автоматического анализатора, набора реагентов, стандартов и контро л ей для различных лекарств.
Система TDx/FLx предназначена для количественного определения лекарственных веществ в цельной крови или в плазме [122] и для проведения скрининга в химико-токсикологическом анализе [150]. Принцип метода ФПИА - гомогенный конкурентный метод иммуноанализа, основанный на двух принципах: конкурентного связывания белков и флуоресцентной поляризации.
Конкурентное ингибирование белков, как и в других методах иммуноферментного анализа, происходит по принципу "антиген - антитело".
В качестве антигенов выступает определяемое вещество — в данном случае циклоспорин (CsA), содержащийся в биологическом объекте и комплекс CsA-метка (содержащийся во флаконе Т диагностического набора фирмы «Abbot»). В качестве метки используется молекула флуоресцеина. CsA и CsA -метка конкурируют за ограниченное число антител (фирма «Abbot» в своем наборе использует мышиные моноклональные антитела -флакон S диагностического набора). Следует также отметить, что комплекс CsA-метка при возбуждении линейно-поляризационным светом, флуоресцирует со степенью поляризации обратно пропорциональной ее скорости вращения. Несвязанный с антителом комплекс CsA-метка имеет очень маленький размер, и соответственно скорость его вращения очень высока и поэтому поляризация этого комплекса принимается за ноль. При связывании со своими специфическими антителами, вращение метки замедляется, так как молекула антител имеет значительно больший размер по сравнению с молекулой комплекса CsA-метка, а соответственно поляризация излучаемого света, когда CsA-метка связывается - возрастает. Не меченые молекулы циклоспорина, присутствующие в исследуемом биологическом объекте, конкурируют с CsA-меткой за ограниченное число центров связывания антител и наблюдаемая поляризация флуоресценции метки, будет иметь значение где-то между той, что была для свободной и связанной метки [150].
Если образец содержит высокую концентрацию циклоспорина, то наблюдаемое значение поляризации будет близко к тому, которое имеет свободный комплекс CsA-метка, т.е. значение будет низким. Если образец содержит низкую концентрацию циклоспорина, то значение поляризации будет близко к тому, что имеет связанная метка, т.е. значение будет высоким.
Влияние препарата «Консупрен» на уровень липидов в крови пациентов
Показатели липидного обмена у больных, принимавших препарат «Консупрен» при измерении данных через три и шесть месяцев после начала приема препарата. Анализируя вышеизложенное можно сделать выводы:
1) при применении препаратов, основным действующим веществом которых является Циклоспорин происходит нарушение липидного обмена - и как доказали наши исследования уже через месяц после начала приема препарата у 77% больных уровень холестерина превышает пределы нормы;
2) нарушение липидного спектра происходит прежде всего за счет увеличение ЛГШП, увеличение уровня которых приводит к увеличению риска развития патологии со стороны сердечнососудистой системы;
3) пациентам, принимающим Циклоспорин показано применение препаратов группы статинов уже с первого месяца после проведенной АТП.
Глюкоза является одним из важнейших компонентов крови, ее количество в крови отражает состояние углеводного обмена в целом. Зная о таком побочном эффекте циклоспорина, как способность нарушать содержание глюкозы в крови, а следовательно и протекание всего углеводного обмена. Одной из главных задач в нашем исследовании был постоянный контроль уровня глюкозы в крови.
За день до проведения трансплантации почки всем больным был сделан контрольный биохимический анализ крови. В результате проведенного анализа было установлено, что у 57,7% больных уровень глюкозы находился выше нормы {норма содержания глюкозы в крови - не выше 6 ммолъ/л [28]). При этом процент больных, у которых наблюдался сахарный диабет I типа, равнялся 11,5%.
Дальнейший мониторинг содержания глюкозы в крови больных показал, что: - к 10 дню после проведенной АТП процент больных, у которых уровень глюкозы превышал нормальные показатели снизился до 46,1%; - к 4-й недели количество больных с гипергликемией снизилось до 38,5%; - к шестому месяцу количество больных имеющих повышенное содержание глюкозы в крови увеличилось до 42,3%. Здесь необходимо отметить, что процент больных, которые с самого начала страдали гипергликемией равен 26,9%.
У 15,4% из этой группы больных (4 человека) изначально наблюдался нормальный уровень глюкозы в крови. И, именно у этой группы больных мы можем наблюдать стойкое увеличение содержания глюкозы в крови, вызванное действием циклоспорина.
Результаты изменения содержания глюкозы (ммоль/л) в крови больных, принимавших «Консупрен» (п = 26) ДНИ ОписаниеКоличеств.данных 1 3 5 10 14 28 49 70 91 133 168 Среднее ".63 7.69 7.16 6,77 6,78 6.54 6.51 6.86 7.09 7.29 6.88 Стандарт, отклонение 3,64 2,77 2,78 2,54 2,82 2,86 2,44 2,82 2,98 3,29 2,49 Стандарти.ошибкасреднего 0,71 0,54 0,55 0,49 0,55 0,56 0,48 0,55 0,58 0,65 0,49 Медиана 6,40 6,95 6,45 6,10 5,80 5,45 5,65 5,95 5,65 5,75 5,90 Минимум 3,20 5,00 4,50 4,20 4,00 3,60 3,20 3,20 3,90 4,20 3,00 Максимум 16,70 16,20 18,80 15,80 14,00 14,80 11,80 15,00 15,50 17,8 11,5 t, сут Рис.3.7. Содержание глюкозы в крови после АТП в течениепервых 6-ти мес. Заштрихованная область - физиологическая норма При сравнении данных показателей между группой больных, получавших препарат Консупрен и группой больных, получавших препарат Биорал, было установлено, что статистически значимых различий средних значений между сравниваемыми группами нет. Таблица 3.15. Сравнение содержания глюкозы в крови (ммоль/л) в группах больных, принимавших препараты «Консупрен» и «Панимун-Биорал» (М±т) ПРЕПАРАТЫ 3 месяц 6 месяц N (М±т) % больных N (М±т) % больных Консупрен 26 7,09±0,58 38,5 26 6,88±0,48 42,3 Биорал 21 5,13±0,11 23,8 21 6,53±0,61 33,3 - % больных - доля пациентов, у которых содержание глюкозы находилось выше нормы. Таким образом, проведенный мониторинг глюкозы показывает: % больных, у которых через 6 месяцев после начала приема препарата развивается состояние стойкой гипергликемии примерно одинаков в обоих группах пациентов, получавших препараты на основе CsA. И в данном случае мы можем подтвердить тот факт, что все препараты циклоспорина способны вызывать развитие сахарного диабета у 10-20% больных, длительно принимающих данные препараты. Больные, у которых обнаружилось стойкое состояние гипергликемии должны находится под более бдительным контролем врачей, как группа риска развития сахарного диабета.
Сравнительные данные биохимических показателей (мочевина, холестерин, глюкоза) в группах пациентов, принимавших препараты «Консупрен» и «Панимун-Биорал» через три и шесть месяцев после начала приема препаратов. 3.1.7. Влияние препарата «Консупрен» на водно-электролитный баланс.
Для контроля за водно-электролитным балансом в течение 6 месяцев после АТП мы измеряли концентрации калия и натрия в сыворотке крови. Почечный механизм регуляции натрия - самый важный фактор в поддержании натрия в плазме. Многие причины гипо- и гипернатриемии связаны с нарушением функции почек.
Норма содержания натрия в сыворотке равна 135-145 ммолъ/л [28]; Норма содержания калия в сыворотке равна 3,5 — 5,1 ммолъ/л [28].
При проведении мониторинга было установлено, что: - на 14-й день после АТП у 15,4% больных, принимающих препарат «Консупрен», происходит снижение концентрации натрия ниже нормы, а уже к 4 недели содержания натрия достигает нормы и в дальнейшем у всех больных не выходит за пределы нормальных показателей; - на 14-й день после АТП у 34,6% больных происходит увеличение концентрации калия выше нормы; - к 19-й недели количество больных с гиперкалиемией снижается до 23%; - к 24-й недели после АТП процент больных, имеющих концентрацию калия в сыворотке выше пределов нормы, составляет 19,2%.
