Введение к работе
Актуальность проблемы
Ревматоидный артрит (РА) - аутоиммунное заболевание неизвестной этиологии, типичным признаком которого является персистирующий синовит, симметрично поражающий периферические суставы и приводящий к деструкции суставного хряща с эрозированием подлежащей костной ткани. Являясь одним из наиболее распространенных хронических воспалительных заболеваний суставов, РА отличается склонностью к неуклонному прогрессированию, что существенным образом ухудшает не только качество жизни больного и членов его семьи, но и снижает трудо-' вые возможности общества, приводя к значительным экономическим потерям
В Российской Федерации ежегодно впервые регистрируется до 55 тыс случаев воспалительных ревматических заболеваний (РЗ) у взрослых и до 17 тыс случаев — у детей до 17 лет Среди регистрируемых нозологических форм РЗ в 2005 году в России показатель заболеваемости ревматоидным артритом (РА) у взрослых составил 240 на 100 000 человек (Насонов Е Л, 2007). Медико-социальная значимость РА обусловлена развитием заболевания и наступлением инвалидизации часто в молодом, трудоспособном возрасте. Причем, более половины пациентов с РА стойко теряют трудоспособность уже через 7-Ю лет от начала заболевания. Весьма тревожным является то обстоятельство, что инвалидизация наступает быстро (при ревматоидном артрите 50% больных становятся инвалидами П-й или 1-й группы в течение первых 3 лет от момента постановки диагноза) и практически не оставляет шансов на возвращение к трудовой деятельности (Насонов Е.Л, 2007, Кремлева О В , 2004)
Кроме того, необходимо иметь в виду, что РЗ в целом и РА в частности, обладают высокой стоимостью лечения, которая складывается из затрат, обусловленных длительным, в подавляющем большинстве случаев -пожизненным, медикаментозным лечением, а также эндопротезированием суставов, и многочисленных непрямых затрат.
Неизвестная этиология РА, отсутствие методов профилактики и недостаток фундаментальных исследований в изучении патогенеза заболевания определяют относительно низкую эффективность лечения больных данного профиля, а полное излечение больных РА считается весьма проблематичным Тем не менее, активные научные исследования в данном направлении продолжаются. В последнее десятилетие разработаны новые тест-системы для ранней диагностики заболевания, выявлены отдельные маркеры прогноза, генно-инженерным путем синтезированы лекарственные препараты нового поколения
Патогенез РА представляется весьма сложным, включающим в себя разнообразные звенья, воспалительные, дистрофические, аллергические, генетические, возможно, инфекционные, иммунологические, из которых наиболее изучены последние, и на их нормализацию направлено основное лечение больных По современным представлениям поражение соединительной ткани при РА является следствием не только развивающихся иммунопатологических нарушений, но и различных нарушений, связанных с метаболическими процессами, происходящими на клеточном или субклеточном уровнях, медиаторами которых являются ферменты Не ослабевает интерес к исследованию роли реакций свободнорадикального окисления в развитии РА. Образующиеся при этом заболевании активные формы кислорода (АФК) могут оказывать патогенное воздействие на биомолекулы и структуры клетки непосредственно либо инициируя процессы пере-кисного окисления липидов (ПОЛ), приводя к деградации коллагена, гиа-луроновой кислоты, повреждению соединительной ткани.
В этом аспекте представляются перспективными исследования, направленные на изучение эндогенных факторов, способствующих интенсификации свободнорадикального окисления и ПОЛ Одним из таких факторов является ксантиноксидаза (КО, ЕС 1.1 3 2) - фермент, действующий на заключительном этапе пуринового метаболизма, окисляющий ксантин и гипоксантин до мочевой кислоты Своеобразие действия этого фермента заключается в том, что он представляет собой как бы комплекс, функционирующий двояко* фермент может работать как оксидаза, и как дегидрогеназа По соотношению активности ксантиноксидазы и ксантин-дегидрогеназы можно судить о напряженности оксидантных и антиоксидантних процессов.
Согласно данным ряда авторов (Мартемьянов В Ф., 2006, Стажаров' МЮ , 2001) у больных РА наблюдается существенные изменения активности ряда ферментов пуринового метаболизма (ИМ) в сыворотке крови, которые коррелируют со степенью активности патологического процесса. Учитывая характерные иммунологические нарушения при аутоиммунных заболеваниях, можно предположить, что изменение энзиматической активности ряда ферментов пуринового метаболизма, в частности КО, может быть связано не только с влиянием окислительных процессов и метаболических нарушений, но также и с гиперпродукцией аутоантител (Ат) к данным энзимам. Определение антител к КО и выяснение их влияния на активность этого фермента у больных РА как с позиций диагностики активности и формы патологического процесса, изучения отдельных звеньев патогенеза заболевания, так и возможности коррекции нарушений антиоксидантного статуса, контроля эффективности проводимой терапии представляет собой актуальную задачу.
Цель исследования
Целью настоящего исследования является усовершенствование иммунологической диагностики, дифференциальной диагностики и объективизация контроля эффективности проводимой терапии у больных ревматоидным артритом путем исследования антителообразования к ксанти-ноксидазе с использованием иммобилизированной формы магнитоуправ-ляемого сорбента
Основные задачи исследования
1. Получить иммобилизированную форму КО, изучить ее физико-химические свойства
2 Адаптировать иммуноферментный метод анализа с использованием КО в качестве антигенной матрицы к изучению образования Ат к этому ферменту.
Изучить содержание антител к КО в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности, формы и характера течения заболевания
Изучить энзиматическую активность КО, КДГ и содержание Ат к КО в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности и формы заболевания; оценить возможность использования Ат к КО в качестве диагностического теста в дифференциальной диагностике РА, остеоартроза (ОА) и подагрического артрита (ПА).
На основе иммуноанализа изучить динамику антителообразования к КО у больных РА в процессе стационарного лечения, оценить возможность использования Ат к КО в качестве объективного критерия эффективности проводимой терапии
Научная новизна исследования
Впервые для иммунодиагностики РА разработан и применен в предложенном варианте иммуноферментного анализа метод с использованием иммобилизированной формы КО, подобраны оптимальные условия era постановки. В сыворотках крови больных РА обнаружены Ат к КО Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных Ат в сыворотке крови здоровых лиц, больных ОА и подагрическим артритом
Выявлено, что концентрация антител к КО у больных РА коррелирует с активностью патологического процесса, а наличие висцеральных проявлений сопровождается максимальными значениями исследуемых ауто-антител Динамика уровня Ат к КО позволяет прогнозировать клиническое течение РА и судить об эффективности проводимой терапии.
Практическая ценность
Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к КО на осно-
ве иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента Выявление Ат к КО в предложенной модификации ИФА может быть использовано в качестве дополнительных тестов в комплексной диагностике РА для характеристики активности патологического процесса, особенно на ранних стадиях заболевания, и прогнозирования клинических форм РА. Определение антител к КО в динамике дает возможность судить об эффективности и адекватности проводимой терапии.
Основные положения, выносимые на защиту
На защиту выносится положение о возможности использования определения антител к ксантиноксидазе иммуноферментным методом с помощью иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента в качестве дополнительного теста для диагностики степени активности, характера течения, формы РА, оценки эффективности проводимой терапии, дифференциальной диагностике' с ОА и подагрическим артритом
Внедрение в практику
Методы определения антител к КО у больных РА иммуноферментным методом с помощью иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента внедрены в практику работы Муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница № 25» г Волгограда, Государственного учреждения здравоохранения «Волгоградский областной клинический госпиталь ветеранов войн», Муниципального учреждения здравоохранения «Городская больница №1 им. С 3 Фишера» г. Волжского, Муниципального учреждения здравоохранения «Городская больница №2» (г Ставрополь).
Публикации и апробация диссертации
По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ, из которых 9 - в центральной и 9 - в местной печати. Материалы диссертации были представлены на ежегодных научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета (2006, 2007 гг), научных конференциях ГУ НИИ КиЭР РАМН (2006, 2007, 2008 гг.), на конгрессе EULAR (Амстердам, Нидерланды, 2006 г.), 1-ом и П-ом Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2006, 2007), II Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2007), XIV и XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007, 2008), VIII Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007), XII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007), научно-практической кон-
ференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2007» (Санкт-Петербург, 2007), V конференции с международным участием «Диагностика в клинической медицине» (Египет, Хургада, 2008), юбилейной XV Международной конференции «Ломоносов» (Москва, 2008), IV Всероссийской конференции «Инновационные технологии в ревматологии» (Нижний Новгород, 2008).
Результаты диссертации были апробированы на совместном заседании ученого совета ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и кафедры госпитальной терапии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» 17 марта 2008 года (Протокол №2)
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, 9 глав, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций Диссертация иллюстрирована 25 таблицами, 14 рисунками, 2 выписками из истории болезни Указатель литературы содержит 287 источников, в том числе 96 отечественных и 191 иностранный.
![Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс]](/i/i/4424/196012.png "Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс] Кочнева Любовь Ивановна")
