Введение к работе
Актуальность проблемы
Ревматические заболевания (РЗ) занимают важное место в структуре заболеваемости населения и имеют огромное социально-экономическое значение Среди регистрируемых нозологических форм РЗ в 2005 году в России показатель заболеваемости ревматоидным артритом (РА) у взрослых составил 240 на 100 000 человек (Насонов Е Л , 2007) Более половины пациентов с РА стойко теряют трудоспособность уже через 7-10 лет от начала заболевания Весьма тревожным является то обстоятельство, что инвалидизация наступает быстро и практически не оставляет шансов на возвращение к трудовой деятельности
Хроническое прогрессирующее течение РА ставит перед врачами задачу возможно более ранней его диагностики Однако распознавание РА на ранней стадии представляет значительные трудности По настоящее время не найдено строго специфичного для РА лабораторного теста Только сочетание многих клинических и лабораторных признаков может оказать помощь в диагностике этого заболевания Поэтому и сейчас продолжается поиск методов, позволяющих дифференцировать ревматоидный артрит среди множества воспалительных и дегенеративных болезней опорно-двигательного аппарата
По современным представлениям поражение соединительной ткани при РА является следствием развивающихся иммунопатологических нарушений Об аутоиммунной природе РА свидетельствует ряд признаков выявление ревматоидного фактора (РФ), циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), сенсибилизированных к компонентам соединительной ткани лимфоцитов, а также широкого спектра аутоантител (Ат), в том числе и к различным ферментам Однако следует отметить, что патологическое действие подобных антител до конца не определено
В настоящий момент возрос интерес к изучению метаболизма пури-новых соединений в норме и при патологии, что связано не только со значением данного цикла в обмене нуклеиновых кислот, но и с той важной биологической ролью, которую выполняют его отдельные, составные части ферменты и промежуточные субстраты С активностью ряда ферментов гуаниновой ветви обмена пуриновых производных связаны процессы созревания Т-клеток и развитие Т-клеточного иммунитета в организме, процессы деградации пуринового нуклеозида - гуанозина, обладающего выраженными регуляторной и физиологической активностями
Согласно данным ряда авторов (Черных ТП, 2001, Заводовский Б В , 2004, Мартемьянов В Ф , 2006) у больных РА наблюдается существенные изменения активности ряда ферментов пуринового метаболизма в сыворотке крови, которые коррелируют со степенью активности патоло-
гического процесса Учитывая характерные иммунологические нарушения при аутоиммунных заболеваниях, можно предположить, что изменение энзиматической активности ряда ферментов пуринового метаболизма может быть связано с гиперпродукцией аутоантител к ним
До настоящего времени в литературе имеются сведения только по изучению аутоантител к энзимам адениловои ветви пуринового обмена, в частности - аденозиндезаминазе, при некоторых ревматических заболеваниях (Lee J Y , 2002, Негметзянова, 2006) В то же время процессам ауто-антителообразования к ферментам других метаболических цепочек пуринов гуаниновои и инозиновои, имеющих, вероятно, не меньшее значение при РЗ, практически остается не изученной В связи с этим комплексное исследование у больных РА антител к основному энзиму гуаниновои ветви ПМ - гуаниндезаминазе (ГДА), так же антител к 5'-нуклеотидазе (5'-НТ) и пуриннуклеозидфосфорилазе (ПНФ), принимающих участие в распаде гуанозина, представляет собой актуальную задачу
Цель исследования
Целью настоящего исследования является усовершенствование иммунологической диагностики, дифференциальной диагностики и объективизация контроля эффективности проводимой терапии у больных ревматоидным артритом путем исследования антителообразования к гуаниндезаминазе, 5'-нуклеотидазе и пуриннуклеозидфосфорилазе с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента Основные задачи исследования
-
Получить иммобилизированные формы ГДА, 5'-НТ и ПНФ, изучить их физико-химические свойства
-
Адаптировать иммуноферментный метод анализа с использованием ГДА, 5'-НТ и ПНФ в качестве антигенной матрицы к изучению образования антител к этим ферментам
-
Изучить содержание антител к ГДА, 5'-НТ и ПНФ в сыворотке крови больных РА в зависимости от активности, стадии и характера течения заболевания
-
Изучить энзиматическую активность ГДА, 5'-НТ и ПНФ и содержание антител к ним в сыворотке крови больных РА в зависимости от формы и клинических особенностей заболевания
-
На основе иммуноанализа изучить динамику антителообразования к ГДА, 5'-НТ и ПНФ у больных РА в процессе стационарного лечения, оценить возможность использования антител к данным ферментам в качестве объективных критериев эффективности проводимой терапии
Научная новизна исследования
Впервые для иммунодиагностики РА разработаны и применены в предложенном варианте иммуноферментного анализа методы с использованием иммобилизированных форм ГДА, 5'-НТ и ПНФ, подобраны оптимальные условия их постановки В сыворотках крови больных РА обнаружены антитела к ГДА, 5'-НТ и ПНФ Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных антител в сыворотке крови здоровых лиц и больных остеоартрозом
Выявлено, что концентрация антител к ГДА, 5'-НТ и ПНФ у больных РА коррелирует с активностью патологического процесса, а наличие висцеральных проявлений сопровождается максимальными значениями исследуемых аутоантител Динамика уровней Ат к ГДА, 5'-НТ и ПНФ позволяет прогнозировать клиническое течение РА и судить об эффективности проводимой терапии
Практическая ценность
Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня антител к ГДА, 5'-НТ и ПНФ на основе иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента Выявление антител к ГДА, 5'-НТ и ПНФ в предложенной модификации ИФА может быть использовано в качестве дополнительных тестов в комплексной диагностике РА для характеристики активности патологического процесса, особенно на ранних стадиях заболевания, и прогнозирования клинических форм РА Определение антител к ГДА, 5'-НТ и ПНФ в динамике дает возможность судить об эффективности и адекватности проводимой терапии
Основные положения, выносимые на защиту
На защиту выносится положение о возможности использования определения антител к гуаниндезаминазе, 5'-нуклеотидазе и пуриннуклео-зидфосфорилазе иммуноферментным методом с помощью иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента в качестве дополнительных тестов для диагностики степени активности, характера течения, формы, серологического варианта РА, оценки эффективности проводимой терапии
Внедрение в практику
Методы определения антител к ГДА, 5'-НТ и ПНФ у больных РА иммуноферментным методом с помощью иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента внедрены в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница № 25» г Волгограда, государственного учреждения здравоохранения «Волгоградский областной клинический госпиталь ветеранов войн», му-
ниципального учреждения здравоохранения «Городская больница №1 им С 3 Фишера» г Волжского
Публикации и апробация диссертации
По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, из которых 5 - в центральной, 6 - в местной, 1 - в зарубежной печати Материалы диссертации были представлены на ежегодных научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета (2006, 2007 гг ), научных конференциях ГУ НИИ КиЭР РАМН (2006, 2007 гг), на конгрессе EULAR (Амстердам, Нидерланды, 2006 г), I Национальном конгрессе терапевтов (Москва, 2006), II Международной Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2007), XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007), VIII Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007), XII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007), научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины - 2007» (Санкт-Петербург, 2007)
Результаты диссертации были апробированы на совместном заседании Ученого Совета ГУ НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН и кафедры госпитальной терапии ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» 5 декабря 2007 года (Протокол №8).
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 170 страницах машинописного текста и состоит из введения, 8 глав, обсуждения результатов, выводов и практических рекомендаций Диссертация иллюстрирована 27 таблицами, 18 рисунками, 3 выписками из истории болезни Указатель литературы содержит 206 источников, в том числе 72 отечественных и 134 иностранных
![Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс]](/i/i/4424/196012.png "Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс] Кочнева Любовь Ивановна")
