Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс] Кочнева Любовь Ивановна

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Кочнева Любовь Ивановна. Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс] : Диссертация ... кандидата медицинских наук : 14.00.39

Введение к работе

Актуальность проблемы

Ревматические заболевания (РЗ) на протяжении вот уже нескольких десятков лет являются объектом пристального внимания большого количества ученых и клиницистов. Повышенный интерес к этой патологии не случаен По данным статистики, заболеваемость болезнями костно-мышечной системы в России увеличилась за последние 10 лет на 41% и составляет в настоящее время 32-34 случая на 100 000 населения. Следует отметить, что в Южном федеральном округе этот показатель наиболее высокий - 38 случаев на 100 000 населения, поэтому проблема особенно актуальна в нашем регионе (Фоломеева О.М. и др., 2002, 2003, 2004).

Системная красная волчанка (СКВ) и системная склеродермия (ССД) являются самыми распространенными патологиями в группе системных поражений соединительной ткани (СПСТ) Заболеваемость СКВ в развитых странах находится в диапазоне от 1,8 до 27,1 случаев на 100 000 населения с большими различиями в разных популяциях (Hochberg МС, 1990). Есть данные, что за последние 40-50 лет этот показатель увеличился почти втрое, и тенденция к росту сохраняется (Uramoto К.М., 1999).

В отличие от СКВ, ССД продолжает оставаться довольно редкой патологией: 0,37 - 1,2 случая на 100 000 населения (Mayes M.D., 1998). Данные о динамике заболеваемости ССД за последние годы противоречивы: есть сообщения, как о росте этих показателей, так и о некотором их снижении, что требует дальнейшего детального изучения (Фоломеева О.М. и др., 2002)

Продолжительность жизни больных хроническими РЗ значительно ниже среднепопуляционной, хотя нельзя игнорировать достигнутые в этом направлении определенные успехи. Применение практически всего арсенала существующих в медицине противовоспалительных и цитотоксических препаратов позволило существенно улучшить прогноз жизни больных СКВ. Если до 1970 г. продолжительность жизни только 40% больных СКВ превышала 5 лет, то в настоящее время 5-летняя выживаемость достигает 70-90% (Клюквина Н.Г. и др., 2002) По данным аутопсий в Москве летальность от СКВ за 2002 год составила 12,7% среди всех РЗ, ставших причиной смерти (Эрдес Ш. и др., 2003).

При ССД прогноз остается менее благоприятным: 40% больных (в основном с острым и подострым течением) погибает в течение первых 5 лет, 70% - в течение 10 лет. В то же время при хроническом течении заболевания выживаемость сохраняется приблизительно на одном уровне на протяжении 10-15 лет и составляет 84-88 % (Mayes M.D., 1998).

Социально-экономические последствия СКВ и ССД трудно переоценить Средний возраст больных СКВ к началу заболевания составляет 27,1±11,8, к моменту рь-ivnqa ня инр^пмлнпгггь - 34±10,4

І М>С НАЦИОНАЛЬНАЯ і
¹' БИБЛИОТЕКА ^!

, gbymlfOf \

(Фоломеева О.М. и др., 2001). Очевидно, что наряду с прямыми затратами, такими как дорогостоящая диагностика, пожизненное медикаментозное лечение, систематическое лабораторное и инструментальное обследование с целью коррекции терапии, существенный вес имеют непрямые затраты- снижение и утрата трудоспособности, нередко - преждевременная смерть, вторичное бесплодие и т.д.

В числе основных задач инициированной под эгидой ВОЗ Всемирной декады по заболеваниям, поражающим двигательный аппарат человека (2000-2010 гг), были названы дальнейшее изучение патогенетических механизмов ревматических заболеваний, совершенствование и внедрение в практику новых методов ранней диагностики и лечения с учетом не только клинической, но и экономической эффективности и целесообразности (Насонова В.А. и др., 2001).

Как показали новейшие разработки в диагностике ССД и СКВ, иммуноферментные методы анализа (ИФА) с использованием иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами на основе антигенов нуклеиновой, липидной и белковой природы (ИГАП) в полной мере отвечают указанным требованиям. Неоспоримые преимущества метода заключаются, в первую очередь, в повышении стабильности иммобилизированного биополимера, а также возможности регенерировать сорбент, что ведет к значительному экономическому эффекту Кроме того, иммобилизация биологически активных веществ в поверхностном слое гранулы создает высокую концентрацию антигена именно в реакционно-активной зоне, что повышает чувствительность твердофазных методов анализа Включение магнитного материала в гранулы дает возможность ускорить и упростить манипуляции на всех этапах исследования, улучшая качественные характеристики определений и увеличивая число обрабатываемых проб. Указанные преимущества делают этот метод экономичным и легко применимым в практической медицине (Гонтарь И.П. и др., 2002, Ефременко В.И., 1996).

Гранулированные препараты с магнитными свойствами уже были использованы для усовершенствования иммунодиагностики СКВ и ССД и выявления антител (AT) к ДНК, РНК, кардиолипину, каталазе, церулоплазмину и другим биополимерам В ряде случаев специфические антитела обнаруживались на начальных стадиях заболевания, что позволило решить вопросы ранней диагностики (Маслакова Л.А., 1999, Сущук Е.А., 2002, Язид Аль Раави,2002).

Антителообразование к фибронектину (ФН) при РЗ представляет собой малоизученную проблему. Выбор этого высокомолекулярного гликопротеида в качестве объекта исследования не случаен. Благодаря многообразию свойств, ФН принимает участие во многих жизненно важных процессах, таких как фагоцитоз, гемостаз, модулирование

проницаемости сосудистой стенки, формирование внеклеточного соединительнотканного матрикса (Ковалев В М. и др , 1989, Atta M.S. et al., 1995). Предполагается, что при СПСТ нарушение функций ФН с развитием патологических реакций может быть обусловлено антителообразованием к нему. В связи с этим, использование иммобилизированной формы ФН в иммунодиагностике СКВ и ССД представляется весьма актуальной задачей, направленной на улучшение качества диагностики этих заболеваний и обозначающей перспективы изучения отдельных механизмов их патогенеза.

Цель работы

Целью настоящего исследования являлось усовершенствование иммунологической диагностики и оценки эффективности лечения системной красной волчанки и системной склеродермии путем определения антител к фибронектину с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента.

Основные задачи исследования

Получить иммобилизированную форму фибронектина, изучить ее физико-химические свойства.
Применить иммобилизированную форму фибронектина в иммуноферментном методе анализа для выявления антител к нему.

Определить возможность неспецифического взаимодействия фибронектина с иммуноглобулинами крови.
На основе иммуноанализа изучить содержание фибронектина и антител к нему в сыворотке крови здоровых лиц и больных системной красной волчанкой и системной склеродермией в зависимости от активности, стадии и клинических проявлений заболевания.
Провести оценку влияния терапии на динамику уровня антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией.

Научная новизна работы

Впервые для иммунодиагностики СКВ и ССД разработан вариант иммуноферментного анализа с применением иммобилизированной гранулированной формы ФН и подобраны оптимальные условия его постановки Для оценки активности патологического процесса впервые применено комплексное исследование с определением количества общего ФН плазмы крови и антител к нему.

В ходе работы в сыворотках крови больных СКВ и ССД обнаружены AT к ФН. Показано, что их уровень достоверно отличается от содержания данных AT в сыворотке крови здоровых лиц. Установлено, что поражение нервной системы при ССД, почек при СКВ и сердечно-сосудистой системы при обоих заболеваниях сопровождается максимальными значениями исследуемых AT Выявлено, что количество плазменного ФН и уровень AT к нему у больных СКВ и ССД коррелируют с активностью патологического процесса. Определена способность исследованных показателей к изменению под влиянием проводимой терапии, что обеспечивает возможность оценки ее эффективности

Практическая ценность

Разработана доступная для применения в клинических лабораториях методика иммуноферментного определения уровня AT к ФН на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Выявление AT к ФН в предложенной модификации ИФА может быть использовано в качестве дополнительного теста для диагностики СКВ и ССД, оценки активности патологического процесса и прогнозирования клинических форм заболевания. AT к ФН обнаруживаются на ранних стадиях заболевания и могут быть использованы для своевременной диагностики СКВ и ССД. Динамика изученных показателей дает возможность судить об эффективности проводимой терапии.

Основные положения, выносимые на защиту

На защиту выносится положение о возможности определения антител к ФН с помощью методов иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных СКВ и ССД. Исследование антител к ФН может быть использовано в качестве дополнительных тестов для диагностики СКВ и ССД, выделения клинических вариантов заболеваний, а в комплексе с определением количества общего ФН плазмы крови - для уточнения степени активности патологического процесса. Динамика этих показателей может служить для оценки эффективности проводимой терапии.

Внедрение в практику

Методы определения количества иммунореактивного ФН и антител к ФН с помощью иммобилизированных антигенных препаратов с

магнитными свойствами внедрены в МУЗ ГКБ №25 г. Волгограда и МУЗ ГБ №1 им. С.З Фишера г. Волжского.

Публикации

Основные положения диссертации изложены в 12 печатных работах, из которых 4 - в центральной и 8 - в местной печати

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на XI Российском конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2004 г.), конференции «Актуальные вопросы практической и теоретической ревматологии» (Звенигород, 2004 г.), ежегодных научных конференциях студентов и молодых ученых ВолГМУ (2002-2005 гг.).

Объем и структура диссертации