Введение к работе
Актуальность проблемы
- Системная красная волчанка (СКВ) является мультисистемным воспалительным заболеванием, клинические проявления которого варьируют в диапазоне от мягко протекающего недуга с преимущественным поражением кожи и суставов до тяжелого инвалидизирующего поражения с развитием почечной недостаточности и глубоких нарушений нервной системы.
Несмотря на то, что СКВ является относительно редким заболеванием с распространенностью около 1 на 1000 населения (Lawrence R.C. et al., 1998), эта патология имеет большое социальное и медицинское значение. Отмечен рост заболеваемости СКВ за последние четыре десятилетия почти в три раза (Uramoto К.М. et al., 1999). Высокая социально экономическая значимость СКВ обусловлена преимущественным поражением лиц трудоспособного периода жизни, преобладанием женщин детородного возраста, что ведет к большим прямым и косвенным затратам на лечение. (Clarke А.Е. et al., 1993, 1999, Sutcliffe N. et al., 2001). Расходы на лечение больных СКВ возрастают с увеличением активности болезни и ухудшением общего состояния пациентов (Clarke А.Е. et al., 1994), следовательно адекватный контроль болезни и поддержание активности СКВ на минимальном уровне могут обеспечить значительный экономический эффект.
Несмотря на достигнутые успехи в диагностике и лечении СКВ, задача своевременной постановки диагноза, назначения адекватной терапии и контроля за ее эффективностью часто бывает осложнена. Вариабельность клинической картины, полиморфизм проявлений затрудняют диагностику, а недостаточные знания этиологии и патогенеза этого тяжелого страдания не позволяют выработать оптимальную терапевтическую тактику.
В последние годы пристальное внимание уделяют участию активных форм кислорода и антиоксидантної! системы в физиологических и патологических процессах, в том числе и при СКВ (Зборовская И.А., 1995, Лисицина Т.А. и др., 1996, Knight J.A., 1995). Теоретическим обоснованием участия свободных радикалов в патогенезе СКВ является способность повреждать белки, липиды, ДНК, придавая им свойства аутоантигенов и провоцируя выработку аутоантител (Amara A. et al., 1995, Kubota Т. et al., 1996, Cooke M.S. et al., 1997). Церулоплазмин (КФ 1.16.3.1) (ЦП) является одним из основных внеклеточных ферментов-антиоксидантов, диагностическое значение которого при СКВ до настоящего времени четко не определено. Данные о содержании и активности ЦП в крови больных СКВ весьма противоречивы (Главинская Т.А. и др., 1973, 1989, Surrall К.Е. et al., 1987), что связано с различными подходами к отбору больных и разными методиками определения.
Учитывая гиперпродукцию активных форм кислорода (АФК) при СКВ (Полтырев А.С. и др., 1991, Папичев В.А., 1992, Зборовская И.А., 1995), можно ожидать компенсаторное увеличение синтеза антиоксидантов, в том числе и ЦП, что должно приводить к ингибированию свободных радикалов. Однако, при СКВ отмечено накопление вторичных токсичных продуктов свободно-радикальных реакций (Ames P. et al, 1999, Svenungsson Е. et al, 2001), таким образом имеется дисбаланс между продукцией и утилизацией АФК. Причины подобного дисбаланса до сих пор не ясны. Одной из причин функциональной недостаточности энзимов, в том числе ферментов-антиоксидантов, считают образование антител к ним (Боброва Л.Н., 1995, Кукк Э.Л., Уйбо P.M., 1995).
Представляется актуальным исследовать иммунный ответ к внеклеточному ферментативному звену антиоксидантной защиты при СКВ, что будет способствовать выработке усовершенствованных способов диагностики СКВ и более точной оценке активности патологического процесса, позволит уяснить некоторые детали патогенеза данного заболевания. Результаты исследования могут дать дополнительные критерии эффективности проводимой терапии, что, в конечном итоге, поможет облегчить состояние больных СКВ и уменьшить затраты, связанные с этим страданием.
Цель работы
Целью исследования является усовершенствование диагностики, повышение точности оценки активности патологического процесса у больных СКВ и улучшение контроля эффективности проводимой терапии с помощью иммобилизированных гранулированных форм церулоплазмина с магнитными свойствами.
Основные задачи исследования
-
Получить иммобилизированные гранулированные препараты ЦП, изучить биохимические и антигенные свойства иммобилнзированного фермента.
-
Применить иммобилизированную форму ЦП в иммуноферментном методе исследования для определения аутоантител к ЦП, определить границы нормы, оценить чувствительность и специфичность данного метода в диагностике СКВ.
3.. Исследовать содержание антител к ЦП, а также оксидазную активность и количество иммунореактивного ЦП у больных СКВ в зависимости от активности, характера течения, клинических особенностей заболевания.
4. . Оценить возможности определения антител к ЦП, оксидазиой активности и количества, иммунореактивного ЦП для объективизации контроля эффективности проводимой терапии у больных СКВ.
Научная новизна работы
Впервые для иммунодиагностики СКВ были созданы и применены в иммуноферментном методе исследования иммобилизированные гранулированные антигенные препараты ЦП с магнитными свойствами. Подобраны оптимальные условия иммобилизации фермента, позволяющие сохранять как его энзимные функции, так и антигенные свойства. Полученная иммобилизированная форма фермента отличается высокой устойчивостью и может быть использована как модель для изучения взаимодействия антиген-антитело.
Впервые для оценки активности патологического процесса при СКВ применено комплексное исследование с определением оксидазнои активности ЦП, измерением количества ЦП в сыворотке крови иммуноферментным методом и расчетом удельной оксидазнои активности фермента.
В ходе работы в сыворотках крови больных СКВ выявлены антитела к ЦП. Показано, что количество иммунореактивного ЦП, его оксидазная активность и уровень антител к ферменту коррелируют с активностью патологического процесса при СКВ. Выявлено, что аутоантитела к ЦП чаще обнаруживаются у больных СКВ с высокой активностью болезни, при наличии поражения сосудов. Показана возможность оценки активности СКВ с использованием лабораторных показателей активности, количества ЦП и наличия антител к нему. Установлена способность исследованных показателей к изменению под влиянием лечения, что обеспечивает возможность оценки эффективности проводимой терапии.
Практическая ценность
Разработана доступная для использования в клинических лабораториях методика иммуноферментного анализа антител к ЦП на основе иммобилизированных гранулированных препаратов с магнитными свойствами. Определение антител к ЦП в предложенной модификации иммуноферментного метода с одновременным исследованием оксидазнои активности и количества иммунореактивного ЦП и расчетом удельной оксидазнои активности фермента может быть использовано в качестве дополнительных тестов для диагностики СКВ, оценки активности патологического процесса и выделения клинических форм заболевания. Антитела к ЦП выявляются на ранних стадиях заболевания и могут быть использованы для своевременной диагностики заболевания. Показано, что динамика изученных показателей может быть использована для суждения об эффективности терапии.
Основные положения, выносимые на защиту
На защиту выносится положение о возможности определения антител к ЦП с помощью методов иммуноферментного анализа на основе иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами у больных СКВ. Исследование антител к ЦП, оксидазной активности, количества, удельной оксидазной активности ЦП может быть использовано в качестве дополнительных тестов для диагностики СКВ, уточнения степени активности патологического процесса, выделения клинических вариантов СКВ. Динамика этих показателей может служить для оценки эффективности проводимой терапии.
Внедрение в практику
Методы определения оксидазной активности ЦП, количества иммунореактивного ЦП, удельной оксидазной активности ЦП и антител к ЦП с помощью иммобилизированных антигенных препаратов с магнитными свойствами внедрены в Муниципальном медицинском учреждении «Клиническая больница скорой медицинской помощи №25» г. Волгограда.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, из которых 4 - в центральной и 1 - в зарубежной печати.
Апробация работы
Основные положения диссертации были представлены на итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых Волгоградской медицинской академии (1998 - 2001 гг.), научно-практической конференции «Современные аспекты глюкокортикостероидной терапии ревматических заболеваний» (Москва, 1999), юбилейной конференции, посвященной 15-летию НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН (Волгоград, 2000), Ш съезде ревматологов России (Рязань, 2001), ежегодном Европейском ревматологическом конгрессе EULAR (Прага, 2001).
Объем и структура диссертации
![Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс]](/i/i/4424/196012.png "Клинико-диагностическое значение определения антител к фибронектину у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией с использованием иммобилизированной формы магнитоуправляемого сорбента [Электронный ресурс] Кочнева Любовь Ивановна")
