Введение к работе
Актуальность проблемы. Эндотелиальные клетки сосудистого русла, осуществляя синтез локально действующих медиаторов, морфофункционалыю ориентированы на оптимальное регулирование органного кровотока. Общая масса эндотелия у человека колеблется в пределах 1600-1900 г, что даже больше массы печени. Поскольку клетки эндотелия выделяют большое количество различных веществ в кровь и окружающие ткани, их комплекс можно рассматривать как самую большую эндокринную систему. В патогенезе и клинике артериальной гипертонии, атеросклероза, сахарного диабета и их осложнений одним из важных аспектов считается нарушение структуры и функции эндотелия (Бабак ОЛ., 2004; Сидоренко Б.А., 2003; Napoli С, 2001; Шестакова М.В., 2011). При этих заболеваниях он предстает в роли первоочередного органа мишени, поскольку эндотелиальная выстилка сосудов участвует в регуляции сосудистого тонуса, гемостаза, иммунного ответа, миграции клеток крови в сосудистую стенку, синтезе факторов воспаления и их ингибиторов, осуществляет барьерные функции. Как известно, NO синтезируется из L-аргинина под влиянием NO-синтетазы путем присоединения молекулярного кислорода к конечному атому азота гуанидиновой группы L-аргинина (Марков Х.М., 2005; Яковлев В.М., 2000; Loscalzo J., 2004).
В связи с вышеизложенным представляегся актуальным проведение углубленного исследования эндотелиопротекторных и противовоспалительных эффектов симвастатина и правастатина в широком диапазоне доз в сочетании с L-аргинином и резвератролом в рамках активно разрабатываемого в последние годы научного направления кафедры фармакологии Курского государства того медицинского университета. Сформировалась фармакологическая мишень «ADMA-eNOS», которая, на наш взгляд, будет объектом повышенного интереса фармакологов к этой проблеме в предстоящие годы (Покровский М.В. исоавт., 2010).
Ранее было показано, что L-яргинин и резвератрол как ионотерапия, и в
сочетании с антигипертензивными средствами на ADMA-подобной модели L-
NAME-индуцировашюй эндотелиалыюй дисфункции эффективно увеличивали
активность эндотелиалыюй NO-синтазы и продукцию оксида азота и
предотвращали развитие эндотелиалыюй дисфункции у крыс-самцов.
Эффективными на данной модели оказались также антиоксиданты,
потенцированные поликлональные антитела к eNOS и др. Более того,
определенное развитие получили исследования эндотелиопротективной
активности на других «ADMA-eNOS-ассоциированных» экспериментальных
моделях «метаболического X синдрома», гомоцистеин-индуцированной,
гипоэстроген-индуцированной, сепсис-индуцированной эндотелиалыюй
дисфункции и при реактивном поствакциналыюм васкулите, что вплотную приблизило понимание необходимости исследования взаимосвязи противовоспалительной и эндотелиопротективной активности сердечнососудистых средств.
Одним из возможных направлений может быть использование
плейотропных (то есть дополнительных эффектов, не зависящих от их основного
действия) свойств ингибиторов ГМГ-Ко-А-редуктазы - статиков. В последние
годы среди плейотропных эффектов статинов выделяют следующие:
антиишемические, сосудорасширяющие, эндотелиопротекторные,
противовоспалительные, антитромботические, антипролиферативные ГМК, антиаритмические, антионкогенные, иммунодепрессивные, антиостеопоретические, а также способность предотвращать развитие болезни Альцгеймера и др.). Более того, в статье «Статины - пшолипидемические или противовоспалительные средства?» (Грацианский Н.А., 2008) проблема эндотелиопротекции рассматривается в акценте на плсйотропные свойства статинов, проявляющиеся независимо от гиполипидемических, или в диапазоне доз, еще не вызывающих гиполипидемическое действие.
По мнению многих исследователей, плейотропные эффекты статинов не связаны с их гиполипидемическим действием. Мевалонат является основным метаболитом не только для синтеза ХС, но и для синтеза изопреноидных промежуточных соединений, таких как фарнезилфосфат (FPP) или геранилгеранилпирофосфат (GGPP). Эти молекулы участвуют в активации и внутриклеточном транспорте белков Rho и Ras, которые, в свою очередь, являются ключевыми для пролиферации, дифференциации клеток, в том числе гладкомышечных клеток и клеток иммунной системы (Аронов Д.М., 2010, 2011).
В то же время открытым остается вопрос о возможности комбинированного использования прямых донаторов NO (L-аргинина) и активаторов eNOS (резвератрола и др.) в сочетании со статинами в части потенцирования эндотелиопротекторной и противовоспалительной активности.
С другой стороны, статины предеставляют собой далеко не однородную группу препаратов, обладающих различной липофильностыо и, следовательно, различной тропностыо к внепеченочным тканям. Не исключено, что именно данным обстоятельством могут быть объяснены, во-первых, разное воздействие статинов с гидро- (правастатин) или липофильными (симвастатин) свойствами на пролиферацию, проапоптоз ГМК эндотелия, экспрессию цитокинов и, во-вторых, различия в их плейотропном действии, полученные in vivo и in vitro. Создается впечатление, что липиднезависимое, плейотропное действие, статинов - это явление характерно не для класса лекарств в целом, а для отдельных его представителей (Арутюнов ГЛ., 2010).
Среди фармакологических агентов, планируемых к комплексному изучению в контексте вышеизложенного, предполагается исследование эффективности симвастатииа («ЗОКОР» (Мегк, Германия), аторвастатипа («ЛИПТОНОРМ», «Фармстандарт, РФ), розувастатина («Акорта» («Фармстандарт», РФ), "EUROBIOPHARM JmgH", Гамбург) и резвератрола , а также их сочетанного применения.
Цель работы: провести комплексное изучение противовоспалительных, эндотелио- и кардиопротективных эффектов симвастатииа, аторвастатипа и розувастатина, а также их сочетаний с L-аргинином и резвератролом.
Задачи исследовании:
1. Исследовать противовоспалительную активность ингибиторов ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатина, аторвастатина, розувастатина и эндотелиопротекторов L-арпшина и резвератрола на моделях формалинового отека лапки мышей и экссудации на аппликацию ксилола при введения синьки Эванса у кроликов.
2. Исследовать противовоспалительную активность сочетанного
применения ингибиторов ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатина, аторвастатина и
розувастатина и эндотелиопротекторов L-аргинина и резвератрола.
3. Изучить влияние монотерапии ингибиторами ГМГ-Ко-А-редуктазы
симвастатином, аторвастатином и розувастатином на развитие L-NAME-
индуцированной эндотелиалыюй дисфункции.
4. Изучить эндотелиопротективную активность сочетанного использования
ингибиторов ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатина, аторвастатина и розувастатина с L-
аргинином при моделировании L-NAME-индуцнрованной эндотелиалыюй
дисфункции.
5. Исследовать эндотелиопротективную активность сочетанного использования
ингибиторов ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатина, аторвастатина и розувастатина с
резвератролом при моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиалыюй
дисфункции.
Номер государственной регистрации темы - 01.2011.57807.
Научная новизна.
В работе впервые изучена эпдотелиопротективпая активность ингибиторов ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатина, аторвастатина и розувастатина и их комбинаций с L-аргинином и резвератролом на модели L-NAME-индуцированного NO-дефицитного оксида азота. Продемонстрировано, что статины проявляли дозозависимое эндотелио- и кардиопротективное действие, что выражалось в преобладании эндотелийзависимого расслабления сосудов и снижении коэффициента эндотелиалыюй дисфункции (КЭД) до уровня интактных животных, а также в полном предотвращении снижения содержания нитрит-ионов, улучшении показателей сократимости при проведении нагрузочных проб и предотвращении развития нарушений в сосудистом эпителии почечных артерий и гипертрофии кардномиоцитов. Наиболее активным оказался розувастатин в дозе 8,6 мг/кг.
Параллельно исследована противовоспалительная активность статинов и их комбиііаций с L-аргинином и резвератролом на моделях формалинового отека лапки у мышей и экссудативного воспаления у кроликов. Ингибиторы ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатин, аторвастатин и розувастатин в терапевтическом диапазоне доз проявляют дозозависимое противовоспалительное действие на моделях формалинового отека лапы у мышей и экссудативного воспаления у кроликов по методу Ойвина. Эндотелиопротектор L-аргинин оказывал противовоспалительное действие у мышей и ire влиял на площадь «синих пятен» и время их появления у кроликов. Резвератрол оказывал слабое противовоспалительное действие на обеих моделях. Сочеташюе использование
статипов с L-аргинином при формалиновом отеке у мышей нивелирует
противовоспалительный эффект аргинина. Резвератрол в сочетании с
ингибиторами ГМГ-Ко-А-редуктазы оказывает аддитивное
противовоспалительное действие, достигающее максимума для комбинации розувастатин 35 мг/кг + резвератрол 4,0 мг/кг.
Комбинированное использование эндотелиопротектора L-аргинина (200 мг/кг) с ингибиторами ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатином (4,6 мг/кг), аторвастатином (2,2 мг/кг) и розувастатином (2,2 мг/кг) показало аддитивное эндотелио- и кардиопротективное действие. Наиболее эффективной комбинацией является сочетание L-аргинина с розувастатином.
Комбинированное использование эндотелиопротектора резвератрола (2 мг/кг) с ингибиторами ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатином (4,6 мг/кг), аторвастатином (2,2 мг/кг) и розувастатином (2,2 мг/кг) показало аддитивное эндотелио- и кардиопротективное действие. Наиболее эффективной комбинацией является сочетание резвератрола с розувастатином.
Научная новизна подтверждается заявкой на получение патента РФ.
Практическая значимость.
В работе обоснована эффективность сочетанного применения симвастатина, аторвастатина и розувастатина с L-аргинином и резвератролом для коррекции эндотелиалыюй дисфункции в эксперименте.
Материалы, касающиеся кардио- и эндотелиопротекторных эффектов розувастатина («Акорта» производства ОАО «Томскхимфарм-Фармстандарт»), вошли в регистрационное досье на препарат.
Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленное клиническое комплексное использование сочетания статипов с L-аргинином и резвератролом в терапии дислипопротеинемий в сочетании с артериальной гипертензией и при положительной «манжеточной пробе».
Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе ряда кафедр ГОУ ВПО КГМУ, ГОУ ВПО БелГУ, ГОУ ВПО ВГМА им. Н.Н. Бурденко Минздравсоцразаития Российской Федерации.
Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных
сессиях и конференциях молодых ученых ГОУ ВПО КГМУ в 2009, 2010 и
2011 гг., XIV и V национальном конгрессе «Человек и лекарство». Апробация
диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр
фармакологии, клинической фармакологии и фармакотерапии,
патофизиологии, гистологии, внутренних болезней №2, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 5 в журналах, рекомендуемых ВАК РФ.
Положения, выносимые на защиту:
1. Ингибиторы ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатин, аторвастатин и розувастатин оказывают дозозависимое противовоспалительное действие.
-
Ингибиторы ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатин, аторвастатин и розувастатин на модели L-NAME-индуцированного дефицита NO проявляют дозозависимос эндотелио- и кардиопротективное действие. Наибольшей активностью обладает розувастатин в дозе 8,6 мг/кг.
-
Комбинированное использование зндотелиопротектора L-аргинина с ингибиторами ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатином, аторвастатином и розувастатином проявляет аддитивное эндотелио- и кардиопротективное действие. Наиболее эффективной комбинацией является сочетание L-аргинина с аторвастатином.
-
Комбинированное использование зндотелиопротектора резвератрола с ингибиторами ГМГ-Ко-А-редуктазы симвастатином, аторвастатином и розувастатином проявляет аддитивное эндотелио- и кардиопротективное действие. Наиболее эффективной комбинацией является сочетание резвератрола с симвастатином.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных данных, выводов и списка использованной литературы, включающего 162 источника, из них 53 отечественных и 109 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 140 страницах машинописи, содержит таблиц - 23, рисунков - 25.
![Гипотензивное действие 3-(3-[1,2,4-триазоло])-оксатриазолиум-5-олата: физиологический и биохимический анализ в экспериментах на крысах](/i/i/4363/460006.png "Гипотензивное действие 3-(3-[1,2,4-триазоло])-оксатриазолиум-5-олата: физиологический и биохимический анализ в экспериментах на крысах Артемьева, Марина Михайловна")
