Введение к работе
Актуальность проблемы. Несмотря на то, что патогенез гестоза далек
от полного понимания, в последние годы наибольшее внимание уделяется
эндотелиальной дисфункции. Плацентарная ишемия приводит к
высвобождению многочисленных плацентарных факторов, которые оказывают серьёзное влияние на кровоток и регуляцию сосудистого русла. Эти факторы включают в себя рецептор-1 растворимого фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) (sFlt-І), аутоантитело рецептора ангиотензина II (тип 1) (АТ1-АА) и цитокины (фактор некроза опухоли (TNF)-a), которые по очереди формируют масштабную дисфункцию эндотелия материнских сосудов. Эта дисфункция проявляется в качестве усиленного образования таких факторов, как эндотелии, активные формы кислорода (ROS), тромбоксан, 20-гидроксиэйкозатетраеновая кислота (20-НЕТЕ) и повышенная чувствительность к ангиотензину П. Кроме этого преэклампсия также связана с уменьшенным формированием сосудорасширяющих факторов (окись азота (N0) и простациклин. Эти изменения в функции сосудов ведут не только к гипертензии, но и к дисфункции многих органов, особенно у женщин с ранним проявлением преэклампсии. (Blaauw J. 2006, Germain A.M. 2007, McCord N. 2006, Noris M. 2004, Ranta V. 1999, Shaamash A.H. 2000).
Метилированные аналоги L-аргинина ассиметричный диметиларгинин (ADMA) и монометиларгинин (L-NMMA) являются эндогенными ингибиторами эндотелиальной окиси азота (eNOS) (Boger R.H. 2009, Sawidou M.D. 2003, Smith C.L. 2003, Speer P.D. 2008).
В последние годы обнаружено, что концентрации ADMA в материнской плазме гораздо выше у женщин с преэклампсией и, что повышенные концентрации ADMA являются одними из предикторов преэклампсии.
Таким образом, сформировалась фармакологическая мишень «ADMA-
eNOS», которая явилась объектом настоящего исследования при
преэклампсии.
Ранее было показано, что L-аргинин как монотерапия, так и в сочетании с антигипертензивными средствами на ADMA-подобной модели L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции эффективно, увеличивал активность эндотелиальной NO-синтазы и продукцию оксида азота и предотвращал развитие эндотелиальной дисфункции у крыс-самцов (Покровский М.В.2008, ЗалозныхЯ.И. 2007).
В связи с вышеизложенным, целью настоящей работы явилось изучение возможности коррекции ADMA-подобного L-NAME-индуцированного гестоза в эксперименте с помощью L-аргинина и его сочетания с амлодипином.
Цель исследования: Провести комплексное сравнительное изучение влияния L-аргинина и амлодипина и их сочетанного использования на течение экспериментального L-NAME индуцированного гестоза.
Задачи исследования:
1. Оценить развитие экспериментального гестоза при L-NAME-индуцированной модели эндотелиальной дисфункции с использованием
результатов функциональных проб, оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и результатов морфологических исследований.
Изучить влияние L-аргинина на течение экспериментального гестоза при моделировании L-NAME- индуцированной эндотелиальной дисфункции с использованием результатов функциональных проб и оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и морфометрических показателей.
Изучить влияние амлодипина на течение экспериментального гестоза при моделировании L-NAME- индуцированной эндотелиальной дисфункции с использованием результатов функциональных проб и оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и морфометрических показателей.
Изучить влияние сочетанного использования L-аргинина и амлодипина на течение экспериментального гестоза при моделировании L-NAME- индуцированной эндотелиальной дисфункции с использованием результатов функциональных проб и оценки плацентарной микроциркуляции, биохимических маркеров и морфометрических показателей.
Провести интегральный векторный анализ для комплексной оценки протективных эффектов L-аргинина и амлодипина при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза.
Научная новизна:
В работе впервые предложен способ моделирования гестоза при L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции. Продемонстрировано, что экспериментальный гестоз характеризуется развитием выраженной артериальной гипертензии, нарушениями плацентарной микроциркуляции и протеинурией. Параллельно развивается комплекс изменений характерных для эндотелиальной дисфункции, выражающейся в изменениями соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилятация) и нитропруссид (эндотелий независимая вазодилятация) с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 3 раза, резким снижением показателей биохимических маркеров (Total NO, экспрессии eNOS-синтетазы), а также характерной динамикой морфофукциональных показателей в плаценте и почечной ткани.
В работе впервые показано, что L-аргинин 200 мг/кг однократно в
течение 7 суток внутрижелудочно оказывает протективное действие при
экспериментальном гестозе на фоне L-NAME-индуцированной N0-
дифицитной ЭД, выражающееся в нормализации плацентарной
миркоциркуляции, снижении артериальной гипертензии, предотвращении
протеинурии и нормализации соотношения эндотелийзависимой и
эндотелийнезависимой вазодилатации.
Амлодипин 0,5 мг/кг однократно в течение 7 суток внутрижелудочно, как монотерапия также обладал эндотелиопротективными эффектами на выбранной модели патологии, однако микроциркуляция в плаценте и альбуминурия не предотвращались.
Сочетанное использование L-аргинина 200 мг/кг с амлодипином 0,5 мг/кг показало аддитивное протективное действие при экспериментальном гестозе, что выражалось в нормализации плацентарной миркоциркуляции, снижении артериальной гиперетензии, предотвращении протеинурии и нормализации соотношения эндотелезависимой и эндотелеонезависимой вазодилатации. Параллельно обнаружена положительная динамика морфологической картины в плацентарной и почечной тканях.
Научная новизна подтверждается 1 заявкой на получение патента РФ.
Практическая значимость:
В работе обоснована эффективность применения L-аргинина в качестве
монотерапии и в сочетании с амлодипином при экспериментальном гестозе на
фоне L-NAME-индуцированной NO-дифицитной ЭД в эксперименте.
Показано, что использование L-аргинина позволяет нормализовать
плацентарную микроциркуляцию, артериальное давление, предотвратить протеинурию, а также изменение соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилятация) и нитропруссид (эндотелий независимая вазодилятация), предотвратить снижением показателей биохимических маркеров (Total NO, активность NO-синтетазы), улучшения морфологической картины в плацентарной и почечной тканях.
Полученные данные позволяют рекомендовать целенаправленные клинические испытания L-аргинина для профилактики гестоза как монотерапии, так и в сочетании с амлодипином.
Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационного исследования используются в учебном процессе и научно-исследовательской работе ряда кафедр ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, ГОУ ВПО БелГУ, ГОУ ВПО ВГМА им. Н.Н.Бурденко.
Апробация работы. Материалы работы доложены на итоговых научных
сессиях и конференциях молодых ученых ГОУ ВПО КГМУ в 2009, 2010 и 2011
гг., XIV и V национальном конгрессе «Человек и лекарство». Апробация
диссертации проведена на научно-практической конференции кафедр
фармакологии, клинической фармакологии и фармакотерапии,
патофизиологии, гистологии, внутренних болезней №2, НИИ экологической медицины КГМУ. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, в том числе 4 в журналах рекомендуемых перечнем ВАК РФ, получено 1 положительное решение о выдаче патента на изобретение.
Положения, выносимые на защиту:
1. Экспериментальный гестоз при L-NAME-индуцированной NO-дефицитной эндотелиальной дисфункции характеризуется выраженной артериальной гипертензией, нарушениями плацентарной микроциркуляции и альбуминурией на фоне изменений соотношений сосудистых реакций на ацетилхолин (эндотелийзависимая вазодилятация) и нитропруссид (эндотелий независимая вазодилятация) с увеличением коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) в 3 раза, резким снижением показателей биохимических маркеров (Total NO, активность NO-синтетазы), а также характерной динамикой морфофункциональных показателей сосудов плаценты.
L-аргинин 200 мг/кг однократно в сутки в течение 7 дней внутрижелудочно оказывал протективное действие при экспериментальном гестозе на модели L-NAME-индуцированной NO-дефицитной ЭД, выражающееся в нормализации артериального давления, плацентарной микроциркуляции, предотвращением протеинурии, снижением КЭД и значений биохимических маркеров и морфометрических показателей плаценты, характеризующих ЭД.
Амлодипин 0,5 мг/кг однократно в сутки в течение 7 дней внутрижелудочно, как монотерапия также обладал протективными эффектами при экспериментальном гестозе, снижая артериальное давление и КЭД, однако не нормализовал плацентарную микроциркуляцию, АД и морфологические показатели сосудов плаценты.
4. Сочетанное использование L-аргинина 200 мг/кг с амлодипином 0,5
мг/кг показало аддитивное протективное действие при экспериментальном
гестозе, что выражалось в нормализации плацентарной микроциркуляции,
снижении артериальной гипертензии, предотвращении протеинурии и
нормализации КЭД. Параллельно обнаружена положительная динамика
морфометрических показателей плаценты и почечной ткани.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка используемой литературы, включающего 164 источника, из них 39 отечественных и 125 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 120 страницах машинописи, содержит таблиц - 13, рисунков - 53.
