Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Сосудисто-тромбоцитарный компонент гемостаза 10
1.2. Реакция высвобождения тромбоцитов 22
1.3. Современные антитромбоцитарные препараты 28
ГЛАВА 2. Скрининг новых производных 1-этилксантина, влияющих на систему гемостаза 37
2.1. Материалы и методы исследования 37
2.2. Определение скрининговой концентрации исследуемых соединений для экспериментов в условиях in vitro 43
2.3. Функциональная активность тромбоцитов под влиянием производных 1-этилксантина
2.4. Коагуляционный компонент гемостаза под влиянием производных 1-этилксантина..48
2.5. Некоторые закономерности зависимости антиагрегационнои и антикоагуляционнои
активности производных 1 -этилксантина от их химической структуры 49
ГЛАВА 3. Эффективность действия соединения М-26 на тромбоцитарный и коагуляционный компоненты гемостаза in vitro 53
3.1. Материалы и методы исследования 53
3.2. Действие соединения М-26 на систему гемостаза, регистрируемое методом тромбоэластографии 57
3.3. Влияние соединения М-26 на тромбоцитарный компонент гемостаза 62
3.4. Исследование действия соединения М-26 на реакцию высвобождения тромбоцитов 65
ГЛАВА 4. Действие соединения м-26 на сосудисто-тромбоцитарный и коагуляционный компоненты гемостаза in vivo 71
4.1. Материалы и методы исследования 71
4.2. Острая токсичность соединения М-26 74
4.3. Оценка дозы М-26 и пентоксифиллина для экспериментов на животных 75
4.4. Влияние соединения М-26 на ключевые звенья системы гемостаза 76
4.5. Влияние соединения М-26 на сосудисто-тромбоцитарный компонент гемостаза з
ГЛАВА 5. Влияние соединения м-26 на генерализованный коллаген адреналиновый тромбоз 88
5.1. Материалы и методы исследования 88
5.2. Влияние соединения М-26 на выживаемость животных при генерализованном коллаген-адреналиновом тромбозе 89
ГЛАВА 6. Заключение 91
Выводы 95
Используемые сокращения 97
Список литературы
- Реакция высвобождения тромбоцитов
- Функциональная активность тромбоцитов под влиянием производных 1-этилксантина
- Действие соединения М-26 на систему гемостаза, регистрируемое методом тромбоэластографии
- Влияние соединения М-26 на ключевые звенья системы гемостаза
Реакция высвобождения тромбоцитов
В процессе активации тромбоцита концентрация фосфатидилсерина, фосфатидилэтаноламина и фосфатидилинозитола на наружной поверхности значительно возрастает и образует прокоагулянтную поверхность, необходимую для фиксации, активации и взаимодействия плазменных белков гемостаза. Кислые фосфолипиды мембраны тромбоцитов - фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин и фосфатидилинозитол формируют фактор 3 тромбоцитов (ф. 3, Р3 или тромбоцитарный тромбопластин) [2].
Цитоскелет тромбоцитов формируют и плотная микротубулярная система, нити актина, спектрина и других протеинов, связанные с мембраной. Плотная микротубулярная система расположена в подмембранном пространстве и обеспечивает увеличение площади поверхности тромбоцита [19]. Эта система микротрубочек, помимо образования цитоскелета, является местом депонирования кальция и синтеза простагландинов [238].
Функциями белков цитоскелета тромбоцитов являются: поддержание формы интактных тромбоцитов; изменение формы при активации тромбоцитов; «фиксация» плазматической части трансмембранных гликопротеинов; передача сигнала от внутренних структур к рецепторам; участие в «направленном» внутритромбоцитарном движении органелл, белков; передача внутриклеточных сигналов;
На мембранах тромбоцитов расположено множество различных рецепторов, посредством которых реализуются основные функции тромбоцитов [66]. Большинство рецепторов являются гликопротеинами (ГП), фиксированными на цитоплазматической мембране тромбоцита. Один конец молекулы рецепторных ГП находится во внеклеточном пространстве, а другой «пронизывает» мембрану и контактирует со структурами тромбоцита, расположенными на внутренней стороне цитоплазматической мембраны. На наружных частях ГП молекул располагаются рецепторные локусы, специфичные для разных веществ [192].
Третья анатомическая область - зона органелл тромбоцитов. Она представлена, главным образом, а-гранулами и плотными тельцами, но также содержит и лизосомы, пероксисомы, митохондрии и включения гликогена. Зона органелл ответственна за хранение и реакцию высвобождения внутритромбоцитарных биологически активных веществ, которые способствуют адгезии и агрегации тромбоцитов [177].
Большая часть гранулярных включений являются а-гранулами образованиями, содержащими внутри электронно-плотную тонкогранулярную субстанцию [169]. а-Гранулы служат местом хранения секретируемых из тромбоцитов белков, среди которых можно выделить несколько основных групп в соответствии с их функциональной активностью: 1. Адгезивные белки.
Белки, участвующие в мобилизации стволовых клеток. Секретируемые белки могут попадать в а-гранулы двумя способами - в результате синтеза и соответствующего процессинга в мегакариоцитах (Р4, 3-тромбоглобулин, тромбоспондин и др.) и путем эндоцитоза из плазмы крови (факторы свертывания и системы фибринолиза, иммуноглобулины, альбумин и др.) [173, 179,215].
В плотных гранулах (плотные тельца, 8-гранулы) содержатся низкомолекулярные соединения - АДФ, АТФ, серотонин, ионы кальция и магния, ГТФ, ГДФ и др. Эти вещества высвобождаются при активации тромбоцитов [152]. В мембранах плотных гранул содержатся белки CD63 и CD107b. Появление данных белков в плазме служит маркером реакции высвобождения [215, 238, 264]. (3-гранулы (гранулы накопления) диффузно расположены в гель-зоне тромбоцитов, представляют собой лизосомы. В тромбоцитарных лизосомах содержатся кислые гликогидролазы (Р-гексаминидаза, Р-глюкуронидаза и др.), а также протеазы (катепсины D и Е) и некоторые другие белки [76].
Гемостатическая функция тромбоцитов обусловлена тромбоцитарными факторами свертывания. Тромбоцитарные факторы свертывания представлены одиннадцатью биологически активными веществами [199].
Фактор Pi - проацеклерин. Участвует в образовании протромбиназы и ускоряет образование тромбина из протромбина, подобно фактору V плазмы. Находится в неактивном состоянии. Для его перевода в активное состояние необходимы коллаген или малые дозы АДФ и тромбин в следовых концентрациях [263]. Он ускоряет свертывание цельной крови, сокращает время рекальцификации, инициируя активацию протромбина фактором Ха в присутствии Са и фактора Рз [269].
Фактор Рг - фибринопластический фактор. Основная функция заключается в ускорении трансформации фибриногена в фибрин [111].
Фактор Рз - тромбоцитарный тромбопластин. Служит матрицей для взаимодействия плазменных факторов гемокоагуляции. По своим свойствам этот фактор идентичен кефалину и мембранному фактору эритроцитов -эритроцитину, эритрофосфатиду [202]. Необходим для эндогенного образования протромбиназы, способствующей превращению протромбина в тромбин. Аналогично факторам Va и Ха обеспечивает протромбиназную активность, потенцируя активацию фактора X [197]. Фактор 3 выделяется при реакции высвобождения тромбоцитов. Определяя активность фактора Рз до и после агрегации тромбоцитов, можно получить представление о реакции высвобождения тромбоцитов [2].
Фактор Р4 - антигепариновый фактор, содержится в а-гранулах. Нейтрализация гепарина Р4 происходит за счет двух пар лизиновых остатков, расположенных на С-конце молекулы [34, 109]. Один тетрамер Р4 может соединяться с одной молекулой гепарина низкой молекулярной массы и с двумя и более молекулами гепарансульфатов высокой молекулярной массы [227]. Именно конкурентное связывание гепарансульфатов с Р4 нарушает его взаимодействие с антитромбином, ингибирует стимуляцию антитромбина Р4. Фактор тромбоцита 4 является антиангиогенным ELR-отрицательным хемокином. Р4 ингибирует миграцию, пролиферацию эндотелиальных клеток и процесс ангиогенеза in vitro и в естественных условиях. Согласно [109, 182, 185], предложены три различных механизма, чтобы объяснить антиангиогенные эффекты Р4. Во-первых, Р4 может напрямую связывать протеогликаны и/или вмешаться в эффект посредника протеогликана, ингибируя активность фактора роста. Во-вторых, Р4 в состоянии взаимодействовать непосредственно с факторами роста ангиогенеза, такими как факторы роста фибробласта или сосудистые факторы эндотелиального роста и ингибировать их взаимодействие с рецепторами поверхности клеток [179]. В-третьих, Р4 может активизировать рецепторы поверхности клеток на эндотелиальных клетках и стимулировать подавляющие рост сигналы. При сердечно-сосудистых заболеваниях Р4 может вмешиваться в коллатеральное кровообращение, образование новых атеросклеротических бляшек, усугублять вызванную гепарином тромбоцитопению [85, 107]. Согласно последним исследованиям [223], в условиях эксперимента на мышах доказаны атеросклеротические свойства Р4. Эти данные дополняются клиническими наблюдениями [150, 184, 222] и подчеркивают, что Р4 способствует развитию атеросклеротического поражения сосудов.
Функциональная активность тромбоцитов под влиянием производных 1-этилксантина44
Однако, в присутствии пентоксифиллина значительно изменялись механико-физические характеристики сгустка. На образцах цитратной крови показатель расчетной «прочности-эластичности» сгустка (А) на 22,8% (Р 0,0001) и показатель фактической меры прочности сгустка (G) на 28,4% меньше в сравнении с контролем. Аналогичные показатели, регистрируемые и на богатой тромбоцитами плазмы, демонстрируют статистически значимое снижение относительно контроля на 17,5% (Р=0,0001) для показателя А и 23,8% (Р=0,01) -для G.
На бестромбоцитарной плазме показатели тромбоэластограмм значимых изменений в присутствии пентоксифиллина не претерпевали (таблица 6). Эти результаты полностью соотносятся с биологической активностью пентоксифиллина [136, 251].
Данные тромбоэластографии, полученные в присутствии М-26, характеризуются изменениями на образцах цитратной крови и обогащенной тромбоцитами плазме. Показатели серии экспериментов, выполненных на образцах обедненной тромбоцитами плазмы, оставались на уровне контрольных значений.
Анализ тромбоэластограмм, полученных на образцах богатой тромбоцитами плазме и цитратной крови, отображает смещение общего гемостатического потенциала в сторону гипокоагуляции (К, TPI, ТМА). Индекс ТМА в присутствии соединения М-26 на образцах обогащенной тромбоцитами плазмы удлиняется на 32,1% (Р=0,0001), на образцах цитратной крови - на 57,3% (Р=0,0001) по сравнению с контрольными значениями. Статистически значимо изменяются показатели R и Angle, косвенно характеризующие функциональную активность тромбоцитов. На образцах обогащенной тромбоцитами плазмы показатель R при действии М-26 удлиняется в среднем на 40,5% (Р=0,007) по сравнению с контролем. Значительно снижается и показатель МА на фоне нормального количества тромбоцитов и фибриногена. Показатель МА в группе М-26 в 1,8 раза (Р 0,001) меньше, чем в контрольной группе на образцах цитратной крови и обогащенной тромбоцитами плазме. Это приводит к снижению прочности сгустка. Показатели А и G снижены в группе М-26 в 1,8 (Р=0,00001) и 2,5 (Р=0,00001) раза в сравнении с нормалью на образцах обогащенной тромбоцитами плазмы.
Сравнивая показатели тромбоэластограммы в присутствии соединения М-26 и пентоксифиллина, можно сделать следующие выводы: во-первых, соединение М-26 и пентоксифиллин проявляют антиагрегационную активность, не влияя на систему фибринолиза; во-вторых, соединение М-26 вызывает более выраженное смещение коагуляционного потенциала в сторону гипокоагуляции по сравнению с пентоксифиллином - индекс ТМА в присутствии соединения М-26 на обогащенной тромбоцитами плазмы выше на 14,5% (Р=0,0009) и на образцах цитратной крови - на 25,1% (Р=0,0004). В-третьих, пентоксифиллин уступает соединению М-26 по уровню антиагрегационной активности - показатель МА, характеризующий функциональную активность тромбоцитов, в группе М-26 в 1,5 раза (Р 0,001) для обогащенной тромбоцитами плазмы и 1,6 раза (Р=0,001) для цитратной крови и меньше по сравнению с группой пентоксифиллина.
Изучение влияния соединения М-26 и пентоксифиллина, как препарата сравнения, на функциональную активность тромбоцитов в условиях in vitro проводили в концентрациях 4x10", 2x10", 10" и 5x10" М/л. В качестве индукторов агрегации использовали АДФ, коллаген, адреналин, ристомицин.
Показатели антиагрегационной активности пентоксифиллина и М-26 при АДФ- и коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов представлены в таблице 9.
По результатам исследования АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов установлено, что соединение М-26 в концентрации 2x10" М/л проявило 100,0% антиагрегационную активность на 8 из 14 образцах крови разных доноров. На 6 образцах крови проявило антиагрегационную активность равную 40,0%. При изучении зависимости эффекта от концентрации установлено, что в концентрации 10" М/л соединение М-26 подавляло агрегацию тромбоцитов в среднем на 29,8% (Р=0,0003), в концентрации 5хЮ"4 М/л - на 12,3% (Р=0,001) относительно контроля.
Примечание: Pi- уровень статистической значимости различий признаков в сравнении с контрольной группой; Рг- уровень статистической значимости различий признаков групп пентоксифиллина и М-26
Так как соединение М-26 проявляло двойственную активность в концентрации 2x10" М/л, провели регистрацию индуктор-индуцированной агрегации тромбоцитов в большей концентрации - 4x10" М/л на 10 образцах донорской крови. В концентрации 4x10" М/л в присутствии М-26 регистрируется стойкая 100% антиагрегационная активность. В данных концентрациях пентоксифиллин уступает соединению М-26.
Действие соединения М-26 на систему гемостаза, регистрируемое методом тромбоэластографии
Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей (Me (25-75)). Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса (для независимых наблюдений) и Фридмена (для повторных наблюдений). Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05. Наборы реагентов, используемые для работы на этапе in vivo:
Изучение острой токсичности пентоксифиллина проводилось ранее в лаборатории на базе кафедры биологической химии Башкирского государственного медицинского университета [26, 27, 65]. Согласно результатам этих исследований и данным литературы [251] ЛД5о пентоксифиллина при внутрибрюшинном введении крысам составляет 250 мг/кг. Поиск показателя ЛД50 пентоксифиллина и соединения М-26 проводили в нарастающих концентрациях, начиная с 200 мг/кг с шагом в 50 мг/кг.
Результаты определения показателя ЛД50 для пентоксифиллина и соединения М-26 представлены в таблице 13. В ходе экспериментальной работы определено, что летальный исход при внутрибрюшинном введении пентоксифиллина регистрируется в дозе 250 мг/кг. Согласно методу Дейхмана и Ле Бланка ЛД50 пентоксифиллина составляет 250 мг/кг.
Внутрибрюшное введение крысам соединения М-26 в нарастающих дозировках не приводило к гибели животных в концентрациях, превышающих ЛД50 пентоксифиллина в 2,5 раза. Считая дальнейший поиск ориентировочной среднесмертельной дозы соединения М-26 для сравнения с аналоговым препаратом нецелесообразным, констатируем последнюю исследуемую концентрацию - 600 мг/кг.
Показатели антиагрегационной активности тромбоцитов при внутрибрюшинном введении крысам пентоксифиллина в различных концентрациях ранее проведены на базе кафедры биологической химии Башкирского государственного медицинского университета [65]. Однако, принимая во внимание вариабельность данных, характеризующих эффект каких-либо воздействий на гемостаз, и подверженность показателей системы гемостаза сезонным изменениям для уверенности в результатах мы провели опыты с разными концентрациями пентоксифиллина.
Выбор концентрации пентоксифиллина для экспериментов на этапе in vivo основывался на общепринятой схеме использования пентоксифиллина с перерасчетом на крыс [82]. Принимая во внимание максимальную суточную дозу пентоксифиллина для человека 1200-1500 мг, с учетом коэффициента соотношения массы и поверхности тела, рабочая концентрация для крысы составляет 33,6 мг/кг массы тела. Показатели зависимости антиагрегационной активности пентоксифиллина от концентрации при внутрибрюшинном введении крысам представлены в таблице 14. Таблица 14 - Показатели антиагрегационной активности пентоксифиллина при внутрибрюшинном введении крысам, Me (25-75)
Экспериментальные исследования подтвердили, что внутрибрюшинное введение крысам 40 мг/кг массы тела пентоксифиллина приводит к снижению агрегации тромбоцитов в среднем на 50%. Расчет эквимолярной концентрации, соответствующей 40 мг/кг пентоксифиллина (ЕС50), исходя из разницы молекулярных масс, для соединения М-26 составила 70 мг/кг. Дальнейшие исследования биологической активности проводили при внутрибрюшинном введении крысам в эквимолярных дозах, равных для пентоксифиллина - 40 мг/кг и для М-26 - 70 мг/кг.
Изучение влияния соединения М-26 на систему гемостаза в условиях in vivo начали с тромбоэластографии - метода, позволяющего оценить систему гемостаза в комплексе по основным ключевым звеньям. Для этого лабораторные крысы были разделены на 3 группы (по 7 крыс в каждой). Экспериментальным группам крыс интроперитонеально вводили пентоксифиллин в концентрации 40 мг/кг массы тела (I группа) и соединение М-26 в эквимолярной концентрации и аналогичном объеме (II группа), а крысам контрольных групп (III) - в том же объеме физиологический раствор. Результаты исследования представлены в таблице 15 и рисунке 11. Анализ тромбоэластограмм крови крыс, получивших внутрибрюшинно пентоксифиллин, демострирует незначительное смещение общего коагуляционного потенциала в сторону гипокоагуляции: индекс тромбодинамического потенциала (TPI) в контрольной группы составил в среднем 15,1 /сек, а в группе пентоксифиллина - 7,7 /сек (Р=0,001). Однако, показатель ТМА у животных, экспонированных пентоксифиллином, не отличался от данных контрольной группы (Р=0,8). Параметр МА, характеризующий функциональную активность тромбоцитов, группы пентоксифиллина на 11,6% (Р=0,00001) меньше в сравнении с контролем. При этом показатель Angle, отображающий функциональное состояние фибриногена, при введении животным группе пентоксифиллина (Р=0,4) остается на уровне контрольных значений.
Показатели тромбоэластограмм крыс, получивших соединение М-26 аналогично группы пентоксифиллина, демонстрируют снижение функциональной активности тромбоцитов - показатель МА снижен в 1,7 раза (Р=0,00001) по сравнению с контролем. Это приводит к статистически значимому смещению коагуляционного потенциала в сторону гипокоагуляции. Показатель ТМА удлиняется на 16,7% (Р=0,0005), a TPI сокращается в 4,4 раза (Р=0,00003) относительно контроля.
Сравнение данных тромбоэластограмм групп крыс, получивших М-26 и пентоксифиллин, позволяет сделать следующие выводы:
Результаты комплексного метода оценки состояния системы гемостаза свидетельствуют о более выраженном антиагрегационном действии М-26 по сравнению с препаратом сравнения - пентоксифиллином. Принципиально в данном случае является изменение показателя активности тромбоцитов (МА) на фоне нормального количества тромбоцитов и фибриногена. Показатель МА в группе крыс, получавших М-26, снижен в 1,5 раза (Р=0,000001) по сравнению с животными, которым вводили пентоксифиллин. У крыс, получивших М-26, это приводит к статистически значимому снижению общего коагуляционного потенциала в сторону гипокоагуляции - показатель ТМА удлиняется у группы М-26 в 1,2 раза, a TPI уменьшается в 2,3 раза в сравнении с группой пентоксифиллина. Это приводит к более выраженному снижению показателей механико-физических свойств сгустка - показатель А снижен в группе «М-26» в 1,3 раза, показатель G - в 1,7 раза по сравнению с группой «пентоксифиллина». Показатели фибринолиза в присутствии пентоксифиллина и соединения М-26 остаются на уровне контрольных значений.
Влияние соединения М-26 на ключевые звенья системы гемостаза
В результате экспериментальной работы установлена выраженная антиагрегационная активность пентоксифиллина при внутрибрюшинном введении крысам в концентрации 40 мг/мл. Показатели максимальной агрегации тромбоцитов при действии АДФ и коллагена снижались в среднем на 45,4% (Р=0,03) и 7,6% (Р=0,6) соответственно относительно контроля. Средний размер тромбоцитарных агрегатов статистически уменьшался в сравнении с контрольной группой на 37% (Р=0,01) при индукции агрегации АДФ и 10,7% (Р=0,4)-коллагеном. Скорость агрегации тромбоцитов в присутствии пентоксифиллина при индукции АДФ статистически значимо ниже - 46,2 мм (Р=0,03), чем в контроле - 44,7 мм. На адреналин- и ристомицин- индуцированную агрегацию тромбоцитов значимого влияния пентоксифиллина не регистрировалось. При этом, несмотря на отсутствие антиагрегационного эффекта при адреналин-индуцированной агрегации тромбоцитов, средний размер агрегатов был статистически значимо меньше и составлял - 3,1 о.е. (Р=0,01), при контрольных -4,8 о.е. (рисунок 14). А скорость агрегации была статистически значимо ниже в среднем на 12,9% (Р=0,0003). Соединение М-26 проявило значимую антиагрегационную активность при действии всех индукторов, за исключением ристомицин-индуцированной агрегации тромбоцитов. При этом по всем показателям, измеряемым анализатором агрегации тромбоцитов, соединение М-26 статистически значимо превосходит препарат сравнения - пентоксифиллин. Полученные результаты in vivo по спектру антиагрегационнои активности полностью соотносятся с данными, полученными на этапе in vitro.
При регистрации агрегации тромбоцитов, индуцированной АДФ в концентрации 5 мкг/мл, на образцах крови крыс контрольной группы проявлялась двухволновая агрегация тромбоцитов в 100% случаев. В группе, получившей соединение М-26, кривая агрегации тромбоцитов характеризуется как одноволновая обратимая (рисунок 12).
Анализ агрегатограмм, регистрируемых на коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов, при действии М-26 показывает статистически значимое удлинение lag-фазы в среднем на 70% (Р 0,05) и практически полное отсутствие агрегации тромбоцитов под действием коллагена (рисунок 13).
Одноволновая обратимая агрегация тромбоцитов при индукции АДФ в концентрации 5 мкг/мл и выражено слабая агрегация и удлинение lag-периода при коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов свидетельствуют об изменении реакции высвобождения тромбоцитов в присутствии М-26.
На следующем этапе исследований было проведено определение содержания тромбоцитарных факторов Рз и Р4 в крови при внутрибрюшинном введении крысам М-26 и пентоксифиллина в эквимолярных дозах. Результаты исследования представлены в таблице 21. Из приведенных данных видно, что при внутрибрюшинном введении соединения М-26 активность тромбоцитарных факторов Р3 и Р4 статистически значимо снижается, что свидетельствует об уменьшении доступности факторов Р3 и Р4 или нарушении реакции высвобождения при агрегации тромбоцитов.
Для определения антитромботического эффекта за 1 час до моделирования тромбоза контрольной группе мышей внутрибрюшинно вводили физиологический раствор, экспериментальным группам - исследуемые вещества в эквимолярных концентрациях и аналогичном объеме - для пентоксифиллина 40 мг/кг и 70 мг/кг для М-26. Моделирование генерализованного тромбоза [139] проводили введением индукторов агрегации в хвостовую вену мышей. В качестве триггера тромбоза использовали смесь растворов коллагена и адреналина (0,5 и 0,06 мг/кг соответственно).
Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Выживаемость оценивали от времени инъекции в хвостовую вену взвеси коллагена и адреналина до момента гибели или истечение 14 суток наблюдений. Анализ выживаемости проведен при помощи метода Каплана-Мейера. Различия выживаемости между группами оценивались при помощи критерия Вилкоксона.
Результаты определения антитромботического эффекта соединения М-26 и пентоксифиллина при генерализованном коллаген-адреналиновым тромбозе представлены в таблице 22 и рисунках 16-17.
Примечание: - уровень статистической значимости различий признаков контрольной и опытной групп (Pi 0,01); Р2- уровень статистической значимости различий признаков групп, получавших пентоксифиллин и соединение М-26 при % =33,1
В группе контроля инъекция взвеси адреналина и коллагена приводит к гибели всех животных в течение 3 суток. При этом более 50% мышей погибло в течение первого часа эксперимента. Легкие, извлеченные после гибели животных, были темно-красного цвета, по всей площади наблюдались множественные тромбы.
Пентоксифиллин статистически значимо (Pi 0,01) снижал падеж мышей по сравнению с контролем. Выживаемость в группе пентоксифиллина на 14 сутки наблюдения составила 58,3%. Основной падеж пришелся на первые сутки после введения индукторов тромбоза. Макроскопическая оценка извлеченных легких демонстрирует значительное снижение зоны тромбоэмболического поражения.
В экспериментальной группе животных, получивших соединение М-26, гибель статистически значимо меньше в сравнении с контролем и препаратом сравнения. На 14 сутки эксперимента показатель выживаемости при внутрибрюшинном введении соединения М-26 составил 75,1%. Основная гибель лабораторных животных пришлась на первые сутки наблюдения. Легкие животных, которым вводили соединение М-26, имели нормальную окраску с минимальными точечными потемнениями.
![Состояние системы гемостаза и реологических свойств крови у больных с обострением хронического рецидивирующего сальпингоофорита и гнойными процессами в придатках матки [Электронный ресурс]](/i/i/4591/178610.png "Состояние системы гемостаза и реологических свойств крови у больных с обострением хронического рецидивирующего сальпингоофорита и гнойными процессами в придатках матки [Электронный ресурс] Гусев Сергей Николаевич")