Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 10
2.1.Легочная гипертензия 10
2.1.1.Классификация легочной гипертензии 11
2.1.2.Патогенез легочной гипертензии 12
2.1.3.Патогенез гипоксической формы легочной гипертензии .15
2.1.3.1. Гипоксия 15
2.1.3.2. Виды гипоксий 15
2.1.3.3. Реакция организма на гипоксию. 17
2.1.4. Гендерные различия в проявлениях легочной гипертензии .. 23
2.2.Эстрогены 24
2.2.1.Эстрадиол: синтез, метаболизм.. .24
2.2.2.Основные физиологические функции эстрадиола 29
2.2.3.Роль эстрадиола в регуляции сердечно-сосудистой системы .36
2.3. Влияние эстрадиола на выраженность легочной гипертензии на различных экспериментальных моделях .40
2.3.1. Влияние эстрадиола на проявление монокроталиновой и блеомициновой моделей легочной гипертензии 40
2.3.2. Влияние эстрадиола на проявление гипоксической модели легочнойгипертензии. 41
3. Материалы и методы исследования .43
3.1. Деление животных на экспериментальные группы и моделирование гипоксической формы легочной гипертензии , 43
3.2. Проведение билатеральной овариэктомии и введение разных доз эстрадиола и блокатора его ядерных и мембранных рецепторов типа альфа и бета 44
3.3. Плетизмографическое измерение систолического артериального давления в хвостовой артерии животного 45
3.4. Гематологическое исследование крови: определение содержания эритроцитов и концентрации гемоглобина, расчет уровня гематокрита .46
3.5. Проведение острого физиологического эксперимента для регистрации гемодинамических параметров и их реакции на введение вазоактивных веществ с использованием имплантируемых катетеров in vivo 46
3.6. Исследования реактивности изолированных легочных и системных сосудов в ответ на перфузию вазоактивных веществ in vitro .49
3.7. Морфометрические исследования сердца и матки 50
3.8. Биохимические эксперименты 51
3.9. Вещества, использовавшиеся в экспериментах 52
3.10. Статистический анализ 52
4.Результаты .53
4.1.Изучение влияния хронической гипоксии на овариэктомированных и интактных самок крыс популяции Wistar 53
4.1.1. Изучение влияния хронической гипоксии на систолическое давление в правом желудочке и на вес правого желудочка сердца у интактных и овариэктомированных самок крыс популяции Wistar 53
4.1.2. Влияние хронической гипоксии на уровень содержания эстрадиола в плазме крови самок крыс .55
4.1.3. Качественная оценка овариэктомии по массе матки животного 56
4.2.Изучение влияния растворителя пропиленгликоля на регистрируемые параметры сердечно-сосудистой системы при гипоксической форме легочной артериальной гипертензии у овариэктомированных самок крыс популяции Wistar 57 4.3.Сравнительный анализ изучения влияния хронического применения эстрадиола в дозах 15 и 60 мкг/кг на овариэктомированных самок крыс популяции Wistar , подвергавшихся хронической гипоксии в течение 2 недель или содержавшихся в нормоксических условиях 59
4.3.1. Влияние введения экзогенного эстрадиола овариэктомированным самкам крыс при условиях гипоксии или нормоксии на систолическое давление в правом желудочке и на вес правого желудочка сердца. 59 4.
3.2.Влияние хронического введения экзогенного эстрадиола овариэктомированным самкам при условиях гипоксии и нормоксии на массу матки животных. 62
4.3.3. Влияние хронического введения экзогенного эстрадиола овариэктомированным самкам при условиях гипоксии и нормоксии на уровни гематокрита, количества эритроцитов и гемоглобина.. 63
4.4. Изучение влияния введения экзогенного эстрадиола в дозах 5 и 15 мкг/кг в день в течение 21 дня и гипоксии в течение 2 недель на овариэктомированных самок крыс популяции Wistar 67
4.4.1. Влияние введения экзогенного эстрадиола и гипоксии на систолическое давление в правом желудочке и на вес правого желудочка сердца. 68
4.4.2. Влияние хронического введения экзогенного эстрадиола и гипоксии на систолическое и среднее артериальное давление. Реакции регистрируемого артериального давления на введении вазоактивных веществ 70
4.4.2.1. Изменение систолического артериального давления. Сравнение показателей, полученных прямым и непрямым методами регистрации 71
4.4.2.2. Среднее (системное и систолическое) артериальное давление у овариэктомированных самок с хроническим введением эстрадиола при гипоксической форме легочной гипертонии 72
4.4.2.3.Изменения системного среднего артериального давления при внутривенном болюсном введении вазоактивных веществ 73
4.4.3. Влияние хронического введения экзогенного эстрадиола в дозах 5 и 15 мкг/кг на массу матки .74
4.5.Изучение влияния введения экзогенного эстрадиола в дозах 15 и 60 мкг/кг в день и блокатора эстрадиоловых рецепторов типа и ICI 182,780 в дозе 150 мкг/кг в день в течение 28 дней и гипоксии в течение 2 недель на овариэктомированных самок крыс популяции Wistar 75 4.5.1. Влияние введения экзогенного эстрадиола, блокатора эстрадиоловых рецепторов и гипоксии на систолическое давление в правом желудочке и на вес правого желудочка сердца 76 4.5.2.Реакция среднего системного артериального давления на хроническое введение эстрадиола, блокатор эстрадиоловых рецепторов и гипоксию 77 4.5.3.Изменения системного артериального давления при внутривенном введении вазоактивных веществ .79
4.5.4. Влияние хронического введения эстрадиола в дозах 15 и 60 мкг/кг
овариэктомированным гипертензивным самкам крыс на массу матки 80
4.6. Изучение реактивности изолированных сосудов малого и большого круга кровообращения овариэктомированных самок крыс популяции Wistar при хроническом введение эстрадиола и действии гипоксии 82
4.6.1. Дозо-зависимая реакция изолированных легочных сосудов овариэктомированных крыс популяции Wistar, получавших эстрадиол в дозе 15 мкг/кг, на серотонин после воздействия хронической гипоксии .83
4.6.2. Дозо-зависимая реакция изолированных перфузируемых сосудов овариэктомированных крыс популяции Wistar, получавших эстрадиол в дозе 15 мкг/кг, на ацетилхолин после воздействия хронической гипоксии 85
4.6.3. Дозо-зависимая реакция на эстрадиол сосудов овариэктомированных крыс популяции Wistar, хронически получавших эстрадиол в дозе 15 мкг/кг в сочетании с хронической гипоксией 87
5.Обсуждение результатов 90
6.Выводы 99
7.Список используемых в работе сокращений 100
8.Список литературы 103
9.Благодарности 121
- Гендерные различия в проявлениях легочной гипертензии
- Исследования реактивности изолированных легочных и системных сосудов в ответ на перфузию вазоактивных веществ in vitro
- Качественная оценка овариэктомии по массе матки животного
- Влияние хронического введения экзогенного эстрадиола в дозах 5 и 15 мкг/кг на массу матки
Введение к работе
Актуальность проблемы. Легочная артериальная гипертензия (ЛГ) представляет собой заболевание, определяемое патологическим состоянием малого круга кровообращения и характеризующееся хроническим повышением давления в сосудистой системе легких и правом желудочке сердца, а также его гипертрофией (Мартынюк Т.В., Чазова И.Е., Наконечников С.Н., 2011; Forfia P.R., Trow T.K., 2013). Гипоксическая форма ЛГ (ГФЛГ) возникает либо при хроническом уменьшении парциального давления во вдыхаемом воздухе (высокогорная болезнь), либо как гипоксическое состояние организма, возникающее в результате заболеваний легких и нарушения их функции, таких как обструктивная болезнь, воспалительный процесс разного генеза, апное (Penaloza D., Arias-Stella J., 2007; Sunderram J., Androulakis I.P.,2012; Nathan S.D., Hassoun P.M., 2013). В последних случаях ЛГ является осложнением легочных заболеваний, усугубляющим их течение. Патогенез ГФЛГ является сложным и зависит от вида заболевания дыхательной системы (Чучалин А.Г., 2008: Voelkel N.F., Mizuno S., Bogaard H.J., 2013). Однако общим является развитие суживающей реакции сосудов малого круга кровообращения, возникающее при острой гипоксии, как адаптивная реакция, и приводящее к увеличению сосудистого тонуса и сосудистого сопротивления при действии хронической гипоксии (Aaronson P.I. и др., 2006; Sylvester J.T. и др., 2012). Вторым общим и важным фактором патогенеза ГФЛГ является изменение секреторного фенотипа эндотелия сосудов, выражающееся в увеличении синтеза сосудосуживающих и уменьшении сосудорасширительных факторов, что, в конечном итоге, также приводит к возрастанию сосудистого тонуса, и сопровождается активацией свертывающей системы крови и процесса воспаления (Hassoun P.M. и др., 2009; Klinger J. R., Abman, S. H., Gladwin, M. T., 2013). Третьим важным фактором в развитии ГФЛГ в последнее время рассматривается зависимость проявления этого заболевания от пола человека и животного. Известно, что ГФЛГ встречается чаще среди женской популяции, нежели среди мужской (Safdar Z., 2013; Pugh M.E., Hemnes A.R., 2010). Этот факт противоречит представлению, сложившемуся в последнее десятилетие, о протективной роли женского полового гормона эстрадиола в отношении сердечно-сосудистой системы (Chung M.T. и др., 2010; Fukumoto T. и др., 2013; Kypreos K.E. и др., 2014). Было выявлено, что существуют не только
ядерные, но и мембранные рецепторы к эстрадиолу, которые обуславливают быструю реакцию на этот гормон (Kim K.H., Young B.D., Bender J.R., 2014). Активация этих рецепторов на эндотелии сосудистой стенки приводит к активации синтеза расширительных факторов, таких как оксид азота или простациклин, что реализуется в уменьшении сосудистого сопротивления и, в конечном итоге, может приводить к уменьшению артериального давления (do Nascimento G.R. и др., 2009). Эти данные вошли в противоречие с высокой степенью заболеваемости ГФЛГ среди женского населения, развитием гипертензии у женщин при беременности или на фоне приема гормональных средств в разных возрастных группах и были объединены в группу явлений, так называемого “эстрадиолового парадокса”. Таким образом, сформировался клинический запрос на экспериментальное изучение роли женского полового гормона в развитии гендерзависимых заболеваний и, в частности, ЛГ. Существует несколько экспериментальных моделей ЛГ (Tofovic S.P., 2010). Монокроталиновая и блеомициновая модели воспроизводят структурные изменения, характерные для идиопатической и токсической форм легочной гипертензии, соответственно. При изучении влияния эстрадиола на степень проявления ЛГ в этих моделях было показано протективное действие гормона как в экспериментах на самках, так и у самцов крыс разных линий (Tofovic S.P. и др., 2009; Nadadur R.D. и др., 2012). В отношении гипоксической формы ЛГ были получены противоречивые результаты. Самцы крыс с ГФЛГ, хронически получавшие эстрадиол, демонстрировали меньшую степень развития заболевания (Lahm T. и др., 2012). Удаление яичников – основного органа, синтезирующего эстрадиол в организме самок, приводило к ухудшению состояния этих животных при моделировании ГФЛГ (Resta T.C., Kanagy N.L., Walker B.R., 2001). Данные получены более 10 лет назад, а в последнее время подобных исследований проведено не было. Цели и задачи исследования. Целью настоящего исследования стало изучение влияния хронического применения эстрадиола на развитие гипоксической формы легочной гипертензии на самках крыс популяции Wistar. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
1.Провести сравнение степени развития гипоксической формы легочной гипертонии у интактных и овариэктомированных самок крыс популяции Wistar.
2.Оценить влияние хронического введения эстрадиола в дозах 5, 15 и 60 мкг/кг на степень развития гипоксической формы легочной гипертонии у овариэктомированных самок крыс популяции Wistar .
3.Провести анализ механизма действия хронически вводимого эстрадиола в дозе 15 и 60 мкг/кг в день на развитие гипоксической формы ЛГ с помощью блокатора эстрадиоловых рецепторов типа и ICI 182,780 у овариэктомированных самок крыс.
4.Изучить изменение реактивности изолированных сосудов малого и большого круга кровообращения у овариэктомированных самок крыс с ГФЛГ и хроническим введением разных доз эстрадиола.
5.Провести анализ изменений гематокрита, количества эритроцитов и гемоглобина в плазме крови нормотензивных и крыс с ГФЛГ при хроническом введением разных доз эстрадиола.
Научная новизна работы. Установлено, что эстрадиол, не оказывает протективного
действия, а способствует развитию гипоксической формы легочной гипертензии у
самок крыс популяции Wistar. Выявленный эффект эстрадиола значительно
снижается в условиях применения ICI 182,780 - блокатора и рецепторов к
эстрадиолу, что подтверждает реализацию эффекта эстрадиола через специфические
рецепторы. Анализ реакций системного артериального давления (АД) выявил
уменьшение его величины у самок с ГФЛГ при хроническом введении эстрадиола
по сравнению с ГФЛГ самками без введения эстрадиола. Оценка ответов
изолированных перфузируемых сегментов системных и легочных сосудов показала,
что в основе различий в изменении артериального давления в малом и большом
круге кровообращения лежат разнонаправленные изменения реактивности сосудов
большого и малого круга кровообращения на сосудорасширительные и
сосудосуживающие факторы. Хроническое введение эстрадиола
овариэктомированным самкам крыс с ГФЛГ приводит к снижению
кислородтранспортной функции крови - уменьшению гематокрита, содержания эритроцитов и гемоглобина, что свидетельствует о множественности механизмов отрицательного действия эстрадиола на развитие гипоксической формы ЛГ у самок крыс популяции Wistar.
Теоретическая и практическая значимость работы. Впервые показано отрицательное воздействие эстрадиола на развитие гипоксической формы легочной гипертензии, моделируемой посредством хронической прерывистой гипобарической гипоксии. На изолированных сосудах установлено снижение реактивности легочных сосудов к эстрадиолу, уменьшение эндотелий-зависимых реакций на этот гормон. Кроме того, хроническое введение эстрадиола овариэктомированным самкам с ГФЛГ вызывает снижение кислородтранспортной функции крови за счет уменьшения количества гемоглобина. Увеличение степени развития ГФЛГ сопровождается уменьшением величины системного артериального давления, что свидетельствует о проявлении протективного действия гормона на сосуды большого круга кровообращения, опосредуемого увеличением реактивности к сосудорасширительным факторам и уменьшением – к сосудосуживающим агентам. Полученные результаты необходимо учитывать в клинической практике при применении эстрадиола для коррекции гормонального статуса у женщин.
Положения, выносимые на защиту:
-
Женский половой гормон эстрадиол способствует развитию гипоксической формы легочной гипертензии, моделируемой хронической прерывистой гипобарической гипоксией, у самок крыс популяции Wistar.
-
Эффект является специфическим, реализуясь через альфа и бета рецепторы к эстрадиолу.
-
Анализ отрицательного действия эстрадиола на развитие ГФЛГ у самок крыс популяции Wistar подтверждает участие данного полового гормона в развитии патологического процесса, что находит свое выражение в разнонаправленном изменении реактивности сосудов малого и большого круга кровообращения и уменьшении кислородтранспортной функции крови.
Апробация результатов исследования. Основные положения диссертации были представлены на 21-ом и 22-ом Европейских Конгрессах , посвященных изучению гипертензии (Милан 2011, Милан 2013); на XIX международной молодежной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых “Ломоносов” (Москва, 2012); на VIII Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 220-летию со дня рождения академика К.М. Бэра, «Механизмы
функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2012); на XXII съезде Физиологического общества имени И.П. Павлова (Волгоград, 2013). Публикации. Диссертационные материалы опубликованы в 11 работах, из которых 3 статьи - в научных изданиях, рекомендуемых ВАК, и 8 тезисов – в сборниках материалов конференций России и за рубежом.
Личный вклад. Автор работы является основным исполнителем проведенного исследования на всех этапах: анализа данных литературы по теме диссертационной работы, проведения экспериментальной части исследования, обработки и анализа полученных данных, формулировании выводов и рекомендаций. При активном участии автора подготовлены публикации по материалам диссертации. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 121 странице и включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, результаты, обсуждение, выводы, список цитируемой литературы (содержит 209 источников, в том числе 23 опубликовано в отечественных изданиях). Работа иллюстрирована 32 рисунками и содержит 7 таблиц.
Гендерные различия в проявлениях легочной гипертензии
По данным Национального института здоровья США с 1981 по 1987 гг выявлен средний возраст болеющих легочной гипертензией - 36 ± 15 лет , а при оценке зависимости от пола определили превосходство женщин, страдающих легочной гипертензией , в соотношении 1.7:1 в сравнении с мужским населением (Rich S. и др., 1987). Проведенное позже обширное исследование американцев Всемирной Организации Здравоохранения (1982 – 2006 гг) выявило 578 пациентов с ЛГ, среди которых также превалировал женский пол (Thenappan T. и др., 2007) (Рис.3).
Распределение пациентов с рано диагностированной легочной гипертензией по полу и возрасту. : - женщины; - мужчины (Thenappan T. и др., 2007).
В других исследованиях также было показано, что 79,5 % из всех пациентов - женщины, причем превосходство их количества распространяется на все виды легочной гипертензии (McGoon M.D. и др., 2008; Badesch D.B. и др., 2010; Benza R.L. и др., 2010). В Европе от 57% до 70% заболеваемости легочной гипертонией также приходится на женское население (Ling Y. и др., 2012; Humbert M. и др., 2006). При определении процентного соотношения заболеваемости среди мужчин и женщин необходимо принимать во внимание тот факт, что женщины после установления диагноза ЛГ живут на 3 года больше, чем мужчины (Humbert M. и др., 2010; Humbert M. и др., 2010). Кроме того, клинические исследования последних лет показали что мужчины старше 60 лет имеют наихудшие прогнозы в сравнении с более молодыми мужчинами и женщинами всех возрастов (Benza R.L. и др., 2010). Ввиду выявленных различий между частотой встречаемости легочной гипертонии разного генеза среди мужского и женского населения встает вопрос о том, что лежит в основе этого явления. В связи с гендерной зависимостью в проявление легочной гипертонии возникла необходимость в проведениии исследований по изучению возможного вовлечения половых гормонов в патогенез этого заболевания (Pugh М.Е.,Hemnes A.R., 2010). Данная необходимость также обусловлена тем, что по результатам исследования женщин с тяжелым течением легочной гипертензии был выявлен большой процент пациенток, принимавших оральные контрацептивы. Медикаменты содержали синтетический эстрадиол, аналогичный эндогенному, и принимались как кратковременно, так и в течение 10 лет, во время пре- и постменопаузы (Sweeney L., Voelkel N. F., 2009).
Эстрогены – группа соединений, относящихся к стероидам, являются женскими половыми гормонами, однако, в малом количестве они также представлены и у мужчин. Выделяют три основных вида эстрогенов: эстрон, эстриол и эстрадиол. Ввиду того, что последний из видов обладает наибольшей биологической активностью в организме, на нем сосредоточено особое внимание.
Наибольшее количество эстрадиола (Е2 ) синтезируют и секретируют фолликулярные клетки яичников перед овуляцией – выходом ооцита второго порядка из зрелого фолликула для дальнейшей транспортировки его по половым путям женщины с целью последующего оплодотворения. Нейрофизиологическая регуляция цикличного созревания яйцеклеток берет свое начало из гипофиза посредством фолликулстимулирующего (ФСГ) и лютеинизирующего (ЛГ ) гормонов. ФСГ и ЛГ – гликопротеины, в структуре которых содержится по две субъединицы, а выделяются они в передней доле гипофиза (аденогипофиз). Гормоны, необходимые для репродукции, в свою очередь, регулируются соответствующими гонадолиберинами, которые образуются в клетках гипоталамуса. Влияющий на созревание фолликула ФСГ и инициирующий разрыв фолликула ЛГ связаны с выделяющимся эстрадиолом сначала прямой, а потом обратной связью. При повышении уровня эстрадиола в циркулирующей крови уменьшается чувствительность аксонов нейрональных клеток, в которых вырабатываются гонадолиберины, а уменьшение концентрации последних ведет к падению концентрации ФСГ и ЛГ в крови. Однако, когда созревание и разрыв фолликула произошли и уровень эстрадиола после своего физиологического пика упал, низкие уровни Е2 в организме вплоть до подпороговых сдерживают уровни гонадолиберина, и, как следствие, выработку фолликулстимулирующего и лютеинезирующего гормонов на уровне, не способном запускать рост фолликула и его овуляцию (Шмидт Р., Тевс Г., 1996). Предшественником стероидных гормонов является холестерин. Он синтезируется в гормон-образующих тканях, в том числе и в яичниках.
Биосинтез половых гормонов. - путь образования эстрадиола. fc- l -иные пути преобразования холестерина и продуктов его метаболизма, в том числе продукция мужского полового гормона тестостерона (Ашфарян Л.А., Киселев В.И., 2007).
Накопление в клетках эфиров холестерина происходит под действием ацил-коэнзим А: холестеролацилтрансферазы в липидных каплях. Транспорт холестерина к месту нахождения (внутренняя мембрана митохондрий) первого из ферментов, осуществляющего стероидогенез и трансформирующего холестерин в прегненолон, цитохрома Р450scc, происходит посредством StAR – стероидного белка быстрой регуляции. Во время беременности стероидогенным органом становится плацента, а специфическим переносчиком трансформированного холестерина служит белок MLN64 , который по характеристикам и групповой принадлежности соответствует таковому в гонадах. Под действием цитохрома Р450scc (дезмолаза,CYP11A1) происходит катализ 20- и 22- гидроскилирования исходного субстрата гормонов. Через промежуточный продукт 20,22-дигидроксихолестерин образуется прегненолон. Последний трансформируется в прогестерон посредством 3-гидроксистероиддегидрогеназы. Прогестерон представляет собой самостоятельное соединение стероидной природы, также участвующие во многих процессах женского организма. Однако в данном обзоре внимание сосредоточено на другом продукте метаболических превращений холестерина – эстрадиоле. Прогестерон подвергается гидроксилированию при помощи 17,20-Лиазы, маленького глобулярного белка-цитохрома P450с17 (CYP17) в 17-гидроксипрогестерон, промежуточное соединение перед образованием андростендинола – непосредственного предшественника мужского полового гормона тестостерона и эстрона – слабо активного соединения из группы эстрогенов. Эстрадиол образуется из последних упомянутых метаболитов холестерина посредством воздействия различных ферментов, и обеспечивает взаимопревращение эстрона в эстрадиол, производя восстановление эстрогенов до наиболее активной формы, 17-гидроксистериоддегидрогеназа (17 - ГСД). В данном каскаде принимает участие 17 - ГСД типа 1, ввиду его преимущественной экспресии в яичниках, продукция этого фермента второго типа, также катализирующего эстрон до более активной формы, происходит в плаценте, молочной железе, печени, эндометрии (Смирнов А.Н., 2006). Широко представленная локализация 17 - ГСД 2 типа обеспечивает катализ не только эстрона до эстрадиола, но и инициирует превращение андростендиола до тестростерона. Образовавшийся тестостерон может участвовать в продукции Е2, посредством воздействия на него ароматазы (цитохром P450arom, CYP19А1) превращаясь в эстрадиол как у женщин, так и у мужчин. Ферменты 17 -ГСД и ароматаза представлена у обоих полов, однако, наибольшее внимание уделяют генетическому полиморфизму ароматазы, ассоциированному с риском развития сердечнососудистых патологий. Два отличия последовательности ДНК размером в один нуклеотид в геноме фермента ароматазы (rs700518 and rs726547) могут существенно влиять на отношение уровней тестостерона и эстрогена у мужчин (Peter I. и др., 2008). У женщин 5 вариантов изменения одного нуклеотида в гене ароматазы могут влиять на соотношение в организме уровней женского и мужского полового гормона. Наличие сегмента rs936306 ароматазы ввиду наибольшей частоты встречаемости среди африканских и американских женщин было ассоциировано с уменьшением соотношения тестостерон – эстрадиол (Sowers M.F. и др., 2006). Другие изменения в структуре гена ароматазы могут быть ассоциированы со снижением чувствительностью к инсулину у этих женщин и последующим развитием сахарного диабета. Выше описанные состояния являются факторами риска для развития сердечно-сосудистых заболеваний у женского населения (Lo J.C. и др., 2006).
Отмечают наличие различных ферментов, участвующих в синтезе эстрадиола, в эндотелии сосудов и в их гладкомышечных клетках, а также в фибробластах и миоцитах, находящихся непосредственно в сердце (Harada N. и др., 1999; Park B.K., 2000). Последняя информация дает возможность предположить важную роль локальной продукции самого активного из группы женских половых гормонов – эстрадиола, в функционировании сердечно-сосудистой системы.
Образовавшийся Е2 в организме претерпевает различные метаболические изменения, обуславливающие основные физиологические функции эстрадиола, а в основе этих трансформаций лежит окисление. Первое, о чем стоит упомянуть, это возможность взаимного превращения эстрона в эстрадиол и обратно. Данный процесс играет важную роль в синтезе Е2, , как это было описано выше, однако, возрастающие концентрации менее активного соединения из группы женских половых стероидов эстрона могут замедлить процессы, которые в норме стимулирует эстрадиол.
Окислительное гидроксилирования Е2 , а точнее его кольца D в позиции C16 приводит к образованию третьего из наиболее известных женских половых гормонов – эстриола (16-гидроксиэстрадиол) и трансформированного эстрона - 16-гидроксиэстрона (Рис.5). Первый метаболит не сравним по биологической активности с эстрадиолом, однако, второй сходен по своим провоспалительным,, промитогенным и проангиогенным свойствам Е2 . Тем не менее, отличие 16-гидроксиэстрона от эстрадиола состоит в снижении афинности к глобулину, связывающему половые гормоны (SHBG), и в возможности на более продолжительное время связываться с рецепторами к эстрогенам (Swanek G.E., Fishman J., 1988), вызывая тем самым эффекты состояния хронической гиперэстрогении в органах –мишенях, которые включают в себя пролиферацию клеток окружающих тканей (Fishman J., Martucci C., 1980).
Меньшей биологической значимостью наделяют минорный путь транформации эстрадиола в позиции С4, в результате которого получается 4-гидроксиэстрадиол, относящийся к группе катехол-эстрогенов со слабой эстрогенной, однако, выраженной канцерогенной активностью (Рис.5).
Самое главное место в метаболизме эстрадиола занимает гидроксилирование последнего в позиции С2 (Jellinck P.H., Hahn E.F., Fishman J.,1986).
Молекула эстрадиола и позиции, в которых происходят его окислительные процессы с последующим образованием метаболитов разной биологической активностью (Tofovic S.P., 2010).
2-гидроксиэстрадиол (2-ГЭ) – соединение, образованное с участием ферментов CYP1A1/CYP1B1. Не обладает высокой активностью, а подвергаясь О-метилированию посредством катехол-О-метилтрансферазы, переходит в 2-метоксиэстрадиол (2-МЭ) , который вообще не имеет активности, подобной эстрогенам (Liu D, Bachmann K. A., 1998 ; Lakhani N.J. и др., 2003). Катехол – О – метилтрансфераза (СОМТ) – фермент, представленный повсеместно в организме, а изменения в его геноме могут также, как и генетический полиморфизм ароматазы, влиять на концентрации эстрадиола в крови (Worda C. и др., 2003). Катехолэстрогены - продукты метаболизма эстрадиола, к которым относятся 16-гидроксиэстрадиол, 4-гидроксиэстрадиол и 2 – гидроксиэстрадиол, являются биологически активным и при некоторых обстоятельствах могут, например, конкурировать с СОМТ, которая может связываться с адренергическими рецепторами и инактивировать норадреналин, контролирующий величину и продолжительность симпатического влияния, обуславливающего сосудистое сопротивление (Ball P., Knuppen R., 1990; Paden C.M. и др., 1982). Катехолэстрогены являются антиоксидантами, которые могут потенцировать выработку оксида азота, простациклина и ингибировать синтез эндотелина – 1, что, в итоге, может приводить к уменьшению сосудистого тонуса. 2- МЭ , продукт метаболизма 2-ГЭ посредством COMT, может подавлять пролиферацию как гладкомышечных,так и эндотелиальных клеток сосудов. Необходимо отметить, что эти эффекты как катехол - , так и метоксиэстрадиола зависят от соотношениях их концентраций и могут по-разному влиять на поврежденную стенку сосуда, где происходит патологическая пролиферация, в сравнении с неповрежденной (Dubey R.K., Tofovic S.P., Jackson E.K., 2004; Barchiesi F. и др., 2006). Ввиду разнонаправленных эффектов на поддержание тонуса сосудов у различных метаболитов эстрадиола и вовлечения фермента их трансформации (СОМТ) в передачу сигналов в адренергической системе, которая вовлечена в регуляцию тонуса сосуда, в настоящее время существует необходимость изучения количественного соотношения этих веществ у мужчин и женщин, не определяемое ранее, но способное в перспективе выявить факторы риска развития патологий сердечно-сосудистой системы соответственно половой принадлежности.
Исследования реактивности изолированных легочных и системных сосудов в ответ на перфузию вазоактивных веществ in vitro
По окончанию острого физиологического эксперимента после декапитации у самок крыс популяции Wistar извлекали легочную артерию 3-го порядка и подколенную артерию. Для получения легочной артерии 3-го порядка производили эктомию правого легкого и располагали его в ванночке с физиологическим раствором. Пинцетами и стеклянными крючками выделяли легочную артерию 3-го порядка, далее ее часть длиной 4 мм с небольшой дополнительной частью предшествующего сосуда располагали на пинцете. Дополнительную часть сосуда крепили на игле из нержавеющей стали диаметром 0,5 мм, другая его часть оставалась не закрепленной и имела рабочую поверхность эндотелия, необходимую для исследования. Ответвления, имевшиеся у исследуемой части легочной артерии 3-ого порядка, перевязывали. Для выделения подколенной артерии животное располагали в ванночке спинкой вниз. На внутренней стороне бедра выщипывали шерсть, далее делали разрез 3-4 см кожного покрова. Раздвигали мышцы и определяли нервно-мышечный тяж, идущий под углом 45 градусов относительно вертикальной оси тела крысы от дистального края лапки животного к тазу. Пинцетами из этого тяжа выделяли артерию. Отрезок для исследования (4 мм ) с дополнительной частью предшествующего сосуда длиной несколько миллиметров помещали на пинцете. Дополнительный отрезок сосуда крепили на игле диаметром 0,5 мм из нержавеющей стали, другая его часть, являвшаяся экспериментальной, оставалась не закрепленной и имела рабочую поверхность эндотелия, необходимую для исследования. Ответвления, имевшиеся у необходимой части подколенной артерии, перевязывали. Далее отсепарированные сосуды с перевязанными их ответвлениями на иглах помещали в ванночки обьемом 10 мл с модифицированным физиологическим раствором Кребса-Хенсляйта (содержание веществ в мМ: NaCl - 118, KCl - 4,7, CaCl2 - 3,3, MgSO4 - 2,4, KH2PO4 - 1,18, глюкоза - 5,05, NaHCO3 - 24,9; рН 7,4); температуру раствора поддерживали на уровне 37-37,5 С; в течение 20 минут перед экспериментом раствор аэрировали карбогеном (5% СO2, 95% O2). Перфузия сосудов происходила с постоянным протоком со скоростью 2 мл/мин (внутренний проток) и 4 мл/мин (внешний проток). Установка для данного эксперимента включала в себя системы внешней и внутренней перфузии изолированного сосуда, компьютер, датчик давления (Statham. USA), аналого-цифровой преобразователь (L-Card, модель E 14-140), усилитель потенциалов, ванночку для выделенного сегмента сосуда. Частота сигнала - 500 Гц. Калибровку датчики производили при помощи ртутного манометра, груши и буферной емкости перед началом каждого экспериментального дня. Регистрацию и обработку данных производили при помощи программы PowerGraph (Измайлов Д. Ю., 2007). Перфузию изолированных сосудов проводили растворами серотонина (3 10-8М- 10-5М), ацетилхолина (10-9М-10-5М) и эстрадиола (10-7М- 10-5М). Раствор меняли на большую концентрацию тогда, когда достигалось плато на предыдущей концентрации. Результаты перфузии изолированных сосудов представлены в работе с вычетом фонового уровня работающей установки, а также с вычетом фонового значения давления в изолированном сосуде, записанного до введения веществ на физиологическом растворе.
Морфометрическое исследование сердца проводили сразу после декапитации животного. Извлекали сердце целиком, помешали в физиологический раствор. Далее производили сепарацию сердца на основные части : правое и левое предсердие, левый желудочек, перегородку и правый желудочек. Подсушивали отдифференцированные части сердца на салфетке. Взвешивали все части по отдельности и вместе. Последнее характеризовали, как массу всего сердца. Относительный вес правого желудочка оценивали, как отношения RW/BW (ПЖ/вес животного), где RW - вес правого желудочка (right ventricular weight), BW - масса экспериментального животного (body weight) (Itoh A., Tomita H., Sano S., 2009). Полученный индекс массы сердца умножали на 10 000 для упрощения цифрового выражения результатов. Матку после декапитации животного извлекали, помещали в физиологический раствор, далее подсушивали и взвешивали. Для оценки данного параметра не использовали индексов, так как сравнивали собственную массу матки интактных крыс и массу матки овариэктомированных крыс с различными воздействиями. 3.8.Биохимические эксперименты.
Для определения уровня женского полового гормона эстрадиола в крови у экспериментальных самок крыс популяции Wistar за сутки до окончания воздействия гипоксии после измерения систолического артериального давления непрямым методом (методика описана выше) забирали кровь. Надрезали конец хвоста животного и проводили тремя пальцами от основания хвоста к его кончику без нажима в том случае, если материал для исследования было недостаточно. Кровь, собранную в пластиковый эппендорф для определения уровня эстрадиола, центрифугировали (8000 оборотов,10 мин), отделяли сыворотку в другой эппендорф, индивидуальный для каждой крысы, подписанный заранее. Образцы хранили при температуре - 20C до момента проведения анализа. Определение уровня женского полового гормона эстрадиола в крови животных проводили набором для иммуноферментного анализа DRG Эстрадиол ульстрачувствительный (EIA-4399, USA). Все реагенты и образцы перед исследованием доводили до комнатной температуры . обавляли деионизованную воду к концентрату (40X) промывочного раствора. Разбавляли 30 мл концентрированного промывочного раствора 1170 мл деионизованной воды до конечного объема 1200 мл. Начинали анализ с размещения требуемого количества лунок в держателе. Стандарты, контроли и образцы комнатной температуры в объеме по 100 мкл вносили в соответствующие лунки при помощи новых одноразовых наконечников. Следом вносили по 200 мкл ферментного конъюгата в каждую лунку и после перемешивания инкубировали 4 часа при комнатной температуре (18-26С). По окончанию инкубации промывали планшет для ИФА приготовленным заранее буферным раствором и удаляли из него остатки жидкости, путем аккуратного постукивания планшетом по впитывающей бумаге. Вносили раствор субстрата в каждую лунку последовательно и инкубировали 30 минут при комнатной температуре. После инкубации останавливали реакцию, добавляя по 100 мкл стоп-раствора в ячейку. Немедленно определяли оптическую плотность, используя ридер для микропланшетов с длиной волны 450 ± 10 нм. Пересчет получившихся значений оптической плотности экспериментальных образцов производили посредством выведения уравнения, характеризующего стандартную кривую, в программе Statistica 6.0 и использования его в расчетах.
В экспериментах использовали вещества фирмы Sigma Aldrich,USA. Эстрадиол - -Estradiol, Beta-estradiol, синтетический эстрадиол, идентичен эндогенному эстрадиолу, вырабатываемому яичниками женщины фертильного возраста. Кристаллический белый порошок. Не растворим в воде; легко растворим в спирте; растворим в ацетоне, диоксане и других органических растворителях; трудно растворим в растительных маслах. Вещество с молекулярной массой 272.38 г/моль. В данной работе использовали в растворенном виде для введения самкам крыс популяции Wistar с целью имитации отсутствующего гормонального фона, вызванного эктомией обоих яичников. Пропиленгликоль – 1,2-пропандиол, Propane-1,2-diol. Жидкость без цвета, вязкая по констистенции, с характерным резковатым запахом. Является хорошим растворителем. В данной работе использовали ,как растворитель для основного вводимого вещества – эстрадиола.
Фулвестрант - Fulvestrant , ICI 182,780. Селективный блокатор ядерных и мембранных эстрогеновых рецепторов типа и . Возможно его действие, как агониста, на третий, мембранный рецептор эстрадиола GPR30. Обладает высокой афинностью к эстрогеновым рецепторам, сходной с таковой у эндогенного эстрадиола. IC50 = 0.29 нM. Молекулярная масса вещества 606.77 г/моль. Входит в лекарственный препарат Фазлодекс (Faslodex), как главное активное вещество. Препарат используется в онкологической практике для лечения эстрогензависимых опухолей у женщин. В данной работе использовали, как блокатор основных эстрогеновых рецепторов, для оценки предполагаемых механизмов исследуемых явлений.
Данные, собранные в ходе эксперимента, оформлены и представлены в виде среднее ± ошибка среднего. Статистический анализ данных проводили по критерию Манна-Уитни для независимых переменных из пакета программы Statistica 6.0 (Statistica Inc.,США). Как статистический значимый, рассматривали уровень доверительной вероятности р 0,05.
Качественная оценка овариэктомии по массе матки животного
Учитывая, что у овариэктомированных животных было выявлено уменьшение степени развития гипоксической формы легочной гипертонии, в следующей серии экспериментов изучали влияние хронического действия гипоксии на содержание эстрадиола в сыворотке крови гипоксических самок крыс популяции Wistar. и животных, содержавшихся в нормоксических условиях.
Результаты исследования указывают на то, что развитие гипоксической формы легочной гипертонии, сопровождается двухкратным увеличением содержания эстрадиола в плазме крови этих животных ( Гип vs К, 36,88 ± 3,97 vs 18,86 ± 2,29 пмоль/л, p 0,05, n= 7 и n=6) (Рис.12). Удаление яичников значительно понижало содержание эстрадиола в плазме крови (К/Ов и Гип/Ов , 0,69 ± 0,18 и 1,06 ± 0,27 пмоль/л, n = 7 и n = 8) (Рис.12) и сопровождалось уменьшением степени развития легочной гипертонии, что выражалось в уменьшении величины СПЖД на 17 % (Рис.11) .
Таким образом, при овариэктомии наблюдается уменьшение степени развития легочной гипертонии. Овариэктомия (сама по себе) при нормальных условиях содержания животных не влияла на исследуемые параметры.
Для оценки адекватности проведенной билатеральной овариэктомии у животных после всех воздействий (через 1,5 месяца после операции) извлекали матку и взвешивали. У групп крыс, имевших интактные яичники (К и Гип, n=8 и n=9) масса матки составила 369 ± 25 и 329 ± 15 мг, соответственно. Данный параметр достоверно снизился в группах, которым была проведена операция, в сравнении с группами интактного контроля, и составил 89 ± 13 и 84 ± 7 мг (К/Ов и Гип/Ов, n=8 и n=10, соответственно) (Рис.13).
Масса матки овариэктомированных крыс и крыс, имевших интактные яичники, и подвергавшихся воздействию хронической гипоксии. Статистические различия : - К и Гип vs К/Ов и Гип/Ов , р 0,001. Различий между группами К и Гип нет. Расшифровка групп соответствует группам на рисунке №11.
Таким образом, можно говорить о том, что билатеральная овариэктомия была проведена адекватно. Данный факт подтверждает достоверное уменьшение массы матки у крыс с удаленными яичниками в сравнении с их интактным контролем (Рис.13).
Изучение влияния растворителя пропиленгликоля на регистрируемые параметры сердечно-сосудистой системы при гипоксической форме легочной артериальной гипертензии у овариэктомированных самок крыс популяции Wistar.
Ввиду того, что в последующих исследованиях все вещества, вводимые опытным животным, растворяли только в пропиленгликоле, провели контрольные эксперименты, в которых изучали влияние растворителя на параметры, характеризующие состояние сердечно-сосудистой системы при моделировании гипоксической формы легочной артериальной гипертензии (систолическое давление в правом желудочке, среднее системное артериальное давление, частота сердечных сокращений), после введения пропиленгликоля (ПГ, n = 5 ), физиологического раствора (Физ. р-р, n = 7) по 200 мкл на одно животное, а также ввели группу контроля (Контроль, n = 5), которая не получала инъекций. Всех животных, получавших инъекции (21 день), в течение двух последних недель подвергали воздействию гипоксии вместе с контрольными крысами (барокамера, 10 часов в день,14 дней, 5000 м над землей, кислород – 10%).
После окончания всех воздействии получили достоверное уменьшение систолического давления в правом желудочке у групп крыс, получавших ежедневно подкожно физиологический раствор и пропиленгликоль в сравнении с контролем ( Физ.р-р и ПГ vs Контроль, 48±3 и 49±3 vs 62±4 мм рт.ст, p 0,05) (Рис.14). Никаких различий в значениях среднего системного артериального давления и частоты сердечных сокращений не обнаружили.
Рисунок № 14. Величина систолического артериального давления в правом желудочке сердца самок крыс популяции Wistar во всех экспериментальных группах при хроническом действии гипоксии. Статистические различия : достоверное отличие групп, получавших инъекции физиологического раствора (Физ.р-р) и групп, получавших инъекции пропиленгликоля (ПГ) от группы контроля, не получавших инъекций (Контроль), p 0,05. Таким образом, можно говорить о том, что пропиленгликоль, влияет на систолическое давление в правом желудочке, также как и введение физиологического раствора, что позволяет говорить о влиянии процедуры ежедневных инъекций, а не природы вещества, используемого в качестве растворителя или контрольного введения. На основании полученного результата во всех последующих экспериментах при введении различного рода веществ экспериментальным животным, контрольным животным будут делаться ежедневные инъекции растворителя пропиленгликоля для унифицирования процедуры и воспроизведения однотипного влияния на измеряемые физиологические параметры.
Влияние хронического введения экзогенного эстрадиола в дозах 5 и 15 мкг/кг на массу матки
Для оценки наличия Е2 в организме овариэктомированных самок крыс при его введении в разных дозах в работе использовали непрямой метод, в качестве которого было выбрано взвешивание матки, как основного органа-мишени при действии эстрадиола .Для чего после физиологического эксперимента забирали и взвешивали матки животных всех экспериментальных групп. Для адекватной сравнительной оценки массы матки в эксперимент была введена группа интактных самок крыс, соответствующих по возрасту и одновременно с вышеописанными группами подвергавшихся гипоксии (Гип). Было показано дозо – зависимое увеличение массы маток овариэктомированных крыс после введения эстрадиола в дозах 5 (Ов/ Е2 – 5, n =9 ) и 15 (Ов/ Е2 – 15, n=9) мкг/кг в день относительно контроля (Ов/к, n=7) (155 ±15 и 198±10 vs 107±17 мг, p 0,05) (Рис.22).
Массы матки интактных самок крыс популяции Wistar, подвергавшихся гипоксии, и овариэктомированных самок крыс, подвергавшихся воздействию хронической гипоксии и введению эстрадиола в дозах 5 и 15 мкг/кг - достоверное увеличение массы матки в группе Ов/ Е2 – 5 в сравнении с группой Ов/к (p 0,05); - достоверное увеличение массы матки крыс группы Ов/ Е2 – 15 в сравнении с группой Ов/к (p 0,001); @ - достоверные различия между группами Ов/ Е2 – 5 и Ов/ Е2 – 15 (p 0,05). # - достоверное уменьшение массы матки в группе Ов/ Е2 – 15 в сравнении с группой интактных самок крыс, подвергавшихся гипоксии (Гип). Расшифровка групп на рисунке соответствует группам на рисунке № 20.
Таким образом, введение эстрадиола овариэктомированным гипертензивным самкам в течение 21 дня в дозах 5 и 15 мкг на кг в день, сочетавшееся с двухнедельным действием гипоксии приводит к достоверному дозо-зависимому увеличению массы матки в сравнении с контролем. Однако, в сравнении с маткой крыс, имевших интакные яичники и подвергавшихся гипоксии, матка крыс, хронически получавших наибольшую дозу эстрадиола в сутки (15 мкг/кг) в течение 21 дня и подвергавшихся гипоксии, достоверно меньше (Гип vs Ов/ Е2 – 15: 329 ± 15 vs 198±10 мг, n=9 и n=10, p 0,001)(Рис.22). Полученная разница говорит о том, что доза эстрадиола15 мкг/кг для достижения уровня его в крови у экспериментальных крыс, сходного с физиологическим уровнем по косвенному показателю – массе матки, не достаточна.
Изучение влияния введения эстрадиола в дозах 15 и 60 мкг/кг в день и блокатора эстрадиоловых рецепторов типа и ICI 182,780 в дозе 150 мкг/кг в день в течение 28 дней в сочетании с действием гипоксии в течение последних 2 недель на овариэктомированных самок крыс популяции Wistar.
В настоящей серии экспериментов изучали влияние хронического введения блокатора эстрадиоловых рецепторов типов и на развитие гипоксической формы легочной гипертензии, развитию которого способствует хроническоевведение Е2 у овариэктомированных самок. Количество дней введения эстрадиола овариэктомированным самкам крыс в последующей серии составило 28 дней: 2 недели до гипоксического воздействия, и в течение 14 дней во время гипоксии. Подобную схему выбрали ввиду необходимости достижения максимально приближенного к физиологическому уровня эстрадиола в крови исследуемых крыс по косвенному показателю данного параметра – массе матки . 4.5.1. Влияние введения экзогенного эстрадиола и блокатора эстрадиоловых рецепторов в течение 28 дней при совместном действии двухнедельной гипоксии на систолическое давление в правом желудочке и на вес правого желудочка сердца.
При сравнении систолического давления в правом желудочке овариэктомированных самок крыс, получавших эстрадиол в дозах 15 и 60 мкг/кг в день и подвергавшихся действию гипоксии (Ов/ Е2 – 15 и Ов/ Е2- 60, n=8 и n=10 ) , и овариэктомированных самок контрольной группы крыс (Ов/к, n=7), наблюдали увеличение СПЖД на 15% и 12,5 % по сравнению с группой Ов/к (соответственно, 54,6 ± 1,4 и 54 ,0 ± 1,6 vs 48,0 ± 1,5 мм рт.ст., p 0,01 и p 0,05). Введение только блокатора эстрадиоловых рецеторов типа и ICI 182,780 (Ов/бл, n=10) или блокатора эстрадиоловых рецепторов совместно с эстрадиолом в дозе 15 мкг/кг (Ов/ Е2 -15+бл, n=10) овариэктомированным самкам крыс и последующее воздействие на них гипоксии не приводили к достоверным изменениям по СПЖД в сравнению с контролем (Ов/к) (51,6 ± 1,9 и 51,3 ± 1,6 vs 48,0 ± 1,5 мм рт.ст., n= 10,n=10 и n=7)(Рис.23).
Величина систолического артериального давления в правом желудочке сердца овариэктомированных самок крыс популяции Wistar, подвергавшихся воздействию хронической гипоксии в течение 2 недель без (группа контроля,Ов/к) и с введением эстрадиола в дозах 15 и 60 мкг/кг в день (Ов/ Е2 – 15 и Ов/ Е2- 60), блокатора эстрадиоловых рецепторов ICI182,780 в дозе 150 мкг/кг отдельно (Ов/бл) и в сочетании с эстрадиолом (15 мкг/кг, Ов/ Е2 15+бл ) каждый день в течение 1 месяца. достоверное увеличение систолического артериального давления в правом желудочке в группе Ов/ Е2 – 15 в сравнении с группой Ов/к (p 0,01); - достоверное увеличение систолического артериального давления в правом желудочке в группе Ов/ Е2 – 60 в сравнении с группой Ов/к (p 0,05).
Оценка относительного веса правого желудочка показала, что у животных , которым вводили эстрадиол в дозе 60 мкг/кг и воздействовали хронической гипоксией (Ов/ Е2 – 60), происходило увеличение относительного веса правого желудочка в сравнении с группой контроля, (Ов/к), которое составило 7,7 ± 0,4 vs 6,3 ± 0,3, р 0,05. При сравнении группы контроля Ов/к с группами, получавшими меньшую дозу эстрадиола (Ов/ Е2 – 15), блокатор эстрадиоловых рецепторов (Ов/бл) и блокатор эстрадиоловых рецепторов совместно с эстрадиолом (Ов/ Е2 – 15 + бл) и до, и во время гипоксического воздействия, не обнаружили никаких отличий по данному параметру.
Полученные данные свидетельствуют о том, что у крыс, получавших эстрадиол в дозах 15 и 60 мкг/кг совместно с действием гипоксии в течение 2-х недель способствует развитию гипоксической формы легочной гипертензии в сравнении с овариэктомированным гипоксическим контролем. Также можно говорить о том, что введение овариэктомированным самкам крыс эстрадиола совместно с блокатором не приводит к развитию гипоксической формы легочной гипертензии на основании отсутствия достоверных отличий в значениях систолического давления в правом желудочке и относительного веса правого желудочка в сравнении с группой контроля.
Эти данные свидетельствуют о том, что в данной серии опытов хроническое введение эстрадиола овариэктомированным самкам крыс совместно с действием гипоксии способствует развитию легочной гипертензии. Этот эффект, по-видимому, опосредуется через активацию специфических рецепторов к эстрадиолу, так как совместное введение блокатора рецепторов к эстрадиолу и самого гормона не приводит к ГФЛГ у этих животных.
