Введение к работе
Актуальность проблемы
Общепризнано, что при ИБС нарушения системы гемостаза и реологии крови играют важную роль, как в патогенезе этого заболевания, таки его осложнений. Риск развития ИБС увеличивают повышенная адгезивно-агрегационная активность тромбоцитов, высокое содержание в плазме крови фибриногена, увеличение активности VII фактора свертывания крови, снижение антикоагуляционной и фибринолитической активности (Гасилин B.C., 1975; КузникБ.И., 1991; Бокарев И.Н., 1996). Поэтому одна из наиболее актуальных проблем в лечении атеросклероза, ИБС, ряда других заболеваний — поиск новых методов лечения, способных нормализовать свертывающую систему эффективно и надолго. Одним из таких перспективных направлений является трансплантация различных клеточных субстратов. Механизм терапевтического воздействия фетальных клеток и тканей включает специфические (заместительные) и неспецифические (общие для всех зародышевых тканей) эффекты (Грищенко В.П., 2001). Последние обусловлены, вероятно, индукцией факторов нейроэндокринной регуляции, поддерживающих тканевой гомеостаз. При лечении экспериментальной гиперхолестеринемии у животных было продемонстрировано позитивное влияние трансплантации клеток фетальной печени на систему гемостаза (Стрекаловский Д.В., 1999). Происходило повышение антикоагулянтных свойств крови, снижение ее тромбопластической активности, стабилизация агрегационных свойств тромбоцитов. Имеются сообщения и об использовании метода клеточной терапии в лечении больных ИБС (РуновичАА., 1996, 1997; Курильская Т.Е., 1999; Никифоров С Б., 2000). У пациентов отмечалось нарастание фибринолитической и антикоагулянтной активности за счет повышения уровня плазминогена, антитромбина Ш и снижение напряженности коагуля-ционного потенциала. После однократной трансплантации оптимальный эффект удерживался в течение длительного периода наблюдения. Раскрытие механизмов влияния клеточной терапии на систему гемостаза — решающие условие для возможного последующего использования клеточной трансплантации в терапевтических целях.
„ НАЦИОНАЛЬНА» БИБЛИОТЕКА \
СПетер О»
п пи IIW |
Точно установлено, что ткани человеческого организма обладают тромбопластическими и фибринолитическими свойствами. Клеточные структуры печени продуцируют факторы свертывающей и противосвер-тывающей систем крови, такие как VII фактор (проконвертин), протромбин, фибриноген, плазминоген (Маркосян АА., 1968; Милова-нов А.П., 2001). В ткани легкого имеются тучные клетки, которые синтезируют гепарин, большое количество активаторов плазминогена. Плацента обладает мощной противосрортогоаюше^й системой, которая
нейтрализует нарастающую гиперкоагуляцию материнской крови по мере развития беременности (Макаров ВА, 1998; МиловановА.П., 2001).
В печени синтезируются также многие белковые компоненты (ферментные системы) плазмы крови, участвующие в образовании тромбов и в фибринолизе. Легкие, плацента и сердце способны продуцировать тром-бопластиноактивные вещества, прокоагулянты, активаторы фибринолиза.
Является очевидным и тот факт, что фетальные клетки в период гестации до 20 недель не вызывают иммунной реакции отторжения, поскольку в I и II триместрах беременности еще не экспрессированы белки гистосовместимости I и II класса. В то же время они содержат большое количество различных биологически активных веществ, таких как ростовые факторы, пептиды, а-фетопротеин, антиоксиданты, микроэлементы, витамины, гормоны, адаптогены, противовоспалительные, бактериостатические соединения и пептиды, стимулирующие им-мунокомпетентные клетки (ШмидФ., 1991; Никифоров СБ., 2000). Между тем в доступной отечественной и зарубежной литературе сведения о гемостазиологическом потенциале органотипических фетальных и неонатальных клеточных культур нами не обнаружены. Информация о воздействии клеточного материала на показатели гемостаза в плазме крови больных ишемической болезнью сердца немногочисленна, а сведения о влиянии этих клеток на плазму крови здоровых людей вообще отсутствуют. В связи с этим нам представляется актуальным расширить представления о влиянии клеточной трансплантации на активность факторов системы гемостаза в норме и патологии.
Исходя из этого, целью работы явилось изучение гемостазиологи-ческого потенциала фетальных клеточных культур человека и неона-тальныхклеточныхкультур кролика и оценка ихвлияния на активность факторов системы гемостаза в плазме крови больных ишемической болезнью сердца in vitro.
Задачи исследования:
-
Изучить и провести сравнительный анализ гемостазиологичес-кого потенциала органотипического фетального клеточного материала человека и неонатального клеточного материала кролика.
-
Исследовать влияние органотипических фетальных клеточных суспензионных культур человека и новорожденных кроликов на активность факторов гемостаза донорской плазмы in vitro.
-
Оценить воздействие органотипических фетальных клеточных суспензионных культур человека и новорожденных кроликов на активность факторов системы гемостаза в плазме больных ИБС in vitro.
-
Провести сравнительный анализ влияния фетальных и неонатальных клеточных суспензионных культур на активность факторов системы гемостаза в плазме крови доноров и больных ИБС.
Научная новизна
Впервые представлены данные о гемостатическом потенциале ор-ганотипических фетальных клеточных суспензионных культур человека и неонатальных клеточных суспензионных культур кроликов.
Выявлены отличительные особенности воздействия фетальных и неонатальных клеточных культур на показатели системы гемостаза в плазме крови здоровых людей и больных коронарным атеросклерозом.
Установлено, что ведущим звеном антикоагуляционного эффекта фетальных и неонатальных суспензионных культур на плазму крови больных ИБС является повышение уровня плазминогена и активности АТ-Ш.
Новыми являются данные о том, что под влиянием неонатальных клеточных суспензионных культур кролика, по сравнению с фетальными клеточными культурами человека, в плазме крови больных ИБС в большей степени увеличивается активность фибринолитической системы, в основном за счет повышения уровня плазминогена. Также установлено, что снижается уровень фибриногена и активность XIII фактора.
Разработана концептуальная схема возможного использования фетальных и неонатальных органотипических клеточных культур в целях коррекции системы гемостаза в плазме крови больных ИБС.
Теоретическая и практическая значимость работы заключается в том, что в эксперименте in vitro установлено наличие факторов системы гемостаза в клеточных культурах печени, легкого, сердца и плаценты человека на 18—20 неделях гестации и неонатальных клеточных культурах печени, легкого и сердца кролика. Также представилось возможным патогенетически обосновать использование различных органотипических клеточных суспензионных культур в целях оптимизации системы гемостаза у больных ИБС.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Органотипические суспензионные клеточные культуры печени, легкого, сердца и плаценты фетусов человека и клеточные культуры печени, легкого, сердца неонатального кролика обладают свертьшающими и противосвертывающими свойствами, что подтверждается стандартными тестами, принятыми для оценки состояния системы гемостаза
-
Органотипические фетальные клеточные культуры человека и неонатальные клеточные культуры кролика при совместной инкубации с донорской плазмой способствуют возрастанию активности коа-гуляционного звена при умеренном повышении активности антикоа-гулянтной и фибринолитической систем
-
При взаимодействии фетальных и неонатальных клеточных культур с плазмой крови больных ИБС выявляется более выраженное, чем в плазме крови доноров, повышение уровня плазминогена и активно-
сти АТ-Ш с одновременной ингибицией факторов протромбинового комплекса, что приводит к уравновешиванию активности свертывающей и противосвертывающей систем.
Апробация
Материалы диссертации доложены и обсуждены на молодежной научно-практической конференции СО РАМН (Новосибирск, 2000), на II межрегиональной научно-практической конференции «Клинические аспекты клеточной и фетальной терапии» (Омск, 2000), на международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование» (Пермь, 2003), на межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых Сибири « Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины» (Иркутск, 2003), на научной конференции молодых ученых «Новое в реконструктивной хирургии», посвященной дню основания РНЦХ РАМН (Москва, 2004), на Всероссийской научно-практической конференции «Развитие физико-химической биологии и биотехнологии на современном этапе», посвященной 25-летию кафедры физико-химической биологии Иркутского государственного университета (Иркутск, 2003), на V конгрессе молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2004).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 10 научных работ.
Структура и объем работы
Диссертация изложена на 131 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 21 рисунком и 2 схемами. Библиография содержит 175 источников, из них 114 — отечественных, 61 — зарубежных авторов.
