Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Современное представление о механизмах развития сахарного диабета 1 типа 10
1.1.1. Роль наследственной предрасположенности в патогенезе сахарного диабета 1 типа 11
1.1.2. Роль факторов окружающей среды в патогенезе СД 1 типа 13
1.1.2.1. Роль вирусной инфекции в развитии ИЗСД 13
1.1.2.2. Роль химических веществ в развитии ИЗСД 15
1.1.2.3. Роль факторов питания в развитии сахарного диабета 1 типа... 17
1.1.3. Роль иммунологических факторов в развитии СД 1 типа 18
1.1.4. Роль процессов свободнорадикального окисления в развитии СД 1 типа 21
1.1.5. Экспериментальная стрептозотоциновая модель сахарного диабета 1 типа 23
1.2. Основные биологические эффекты низкоинтенсивного лазерного излучения 26
1.3. Использование НИЛИ в терапии диабетических ангиопатий 33
1.4. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения в клинике 38
Глава 2. Материалы и методы исследования 40
Глава 3. Результаты собственных исследований 46
3.1. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на показатели состояния организма при развитии экспериментального стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета (СИСД) 46
3.1.1. Влияние НИЛИ на изменение массы тела, показатели углеводного обмена, тимический и селезеночный индексы у крыс в динамике возникновения и развития стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета 47
3.1.2. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на уровень перекисного окисления липидов в крови при развитии СИСД 56
3.1.3. Содержание МСМ в сыворотке крови при действии НИЛИ на крыс со стрептозотоцининдуцированным сахарным диабетом 59
3.1.4. Изменение лейкоцитарной формулы крови под влиянием НИЛИ при развитии экспериментального стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета 61
3.1.5. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на некоторые биохимические показатели крови у крыс при развитии СИСД 70
3.2. Влияние НИЛИ на состояние системы микроциркуляции и механизмы ее регуляции в кожных покровах крыс при развитии стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета 73
Обсуждение результатов 85
Выводы 115
Практические рекомендации 116
Список литературы 117
- Роль иммунологических факторов в развитии СД 1 типа
- Основные биологические эффекты низкоинтенсивного лазерного излучения
- Влияние НИЛИ на изменение массы тела, показатели углеводного обмена, тимический и селезеночный индексы у крыс в динамике возникновения и развития стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета
- Изменение лейкоцитарной формулы крови под влиянием НИЛИ при развитии экспериментального стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета
Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время сахарный диабет (СД) является одной из ведущих медико-социальных проблем современной медицины.
Распространенность данного заболевания в промышленно развитых странах составляет 5-6%, в России-3%, при этом отмечается неуклонная тенденция к увеличению числа заболевших (Балаболкин М.И., 1997; Дедов И.И. и др., 2000, 2002; Новиков В.И., 2004).
Одной из наиболее тяжелых форм сахарного диабета является инсулинзависимый сахарный диабет или сахарный диабет 1 типа. Особая значимость этого заболевания состоит в том, что, начинаясь, как правило, в молодом возрасте, оно становится причиной ранней инвалидизации и смертности за счет острых (диабетические комы) и хронических (сосудистых) осложнений СД 1 типа (ВОЗ, 1995; Гагарин В.И., Артамонова Ю.В., 1997; Догадин С.А. и др., 2007).
Существенные экономические затраты на лечение и медико-социальную реабилитацию больных с сахарным диабетом 1 типа в сочетании с их до сих пор невысокой эффективностью вынуждают ученых различных стран мира проводить многочисленные научные исследования, направленные на поиск средств и методов, способных влиять не только на клинические проявления СД 1 типа и его осложнения, но, прежде всего, на основные патогенетические звенья этого заболевания (Дорошенко Е.О. и др., 1996; Васюткова Л.А., 2002; Сидоров П.И. и др., 2007).
В настоящее время СД 1 типа рассматривается как органоспецифическое аутоиммунное заболевание, приводящее к гибели бета-клеток поджелудочной железы и развитию абсолютной инсулиновой недостаточности (Bonifacio Е., Botazzo G.F., 1991; Безвертенко И.А., 1998). Современные клинические подходы к лечению СД 1 типа, в основном, базируются на принципах заместительной инсулинотерапии, диетотерапии,
рациональной физической нагрузки и обучения пациентов самоконтролю (Балаболкин М.И. и др., 2000; Смирнова О.М., 2000).
Вместе с тем, инсулинотерапия не может эффективно влиять на основные патогенетические звенья, ведущие к прогрессирующей деструкции бета-клеток поджелудочной железы (например, за счет активации перекисного окисления липидов, развития аутоиммунных процессов), поэтому сформированная в настоящее время концепция патогенеза СД 1 типа предполагает разработку и использование методов патогенетической терапии, эффективных уже на ранних стадиях болезни и направленных на сдерживание иммуно-метаболической агрессии против бета-клеток поджелудочной железы. Уже полученные в этом отношении экспериментальные и клинические результаты свидетельствуют о действенности такого подхода (Akerblom Н.К., Knip М., 1997; Atkinson М., Eiserbarth G., 2001; Новиков В.И., 2004; Жестовский С.С. и др., 2007).
С нашей точки зрения, одним из таких методов может стать применение низкоинтенсивного лазерного излучения (БИЛИ). Действительно, внедрение в практическое здравоохранение лазерной техники, с помощью которой решаются самые различные проблемы патологии, является несомненным достижением современной медицины. Особо широкое распространение получили лазерные аппараты, генерирующие низкоинтенсивное лазерное излучение с длинами волн как светового диапазона, так и ближней инфракрасной области. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения оказалось достаточно эффективным при многих болезнях. Важно, что использование НИЛИ отличается экономичностью, доступностью, широким диапазоном биоэффективных доз, совместимостью с традиционными методами терапии. Сейчас уже трудно назвать ту область медицины, в которой не было бы доказано положительное влияние этого излучения (Илларионов В.Е., 1992).
В частности, в последние годы показано, что НИЛИ, применяемое в терапевтических целях, уменьшает активность процессов, лежащих в основе
7 разнообразной патологии человека, в том числе сахарного диабета 1 типа.
Например, обнаружена способность низкоинтенсивного лазерного излучения
оказывать выраженное тормозящее влияние на активность
свободнорадикальных реакций, в частности перекисного окисления липидов
(ПОЛ) (Зиньковская Т.М. и др., 1994; Коломиец Л. А., 1996),
стабилизировать мембраны клеток и клеточных органелл (Itoh Т. et al., 1996).
На тканевом уровне НИЛИ проявляет себя активацией функции сосудов
микроциркуляторного русла, стимуляцией репарации тканей, уменьшением
длительности фаз воспаления, увеличением поглощения тканями кислорода,
активацией тканевого метаболизма (Недогода В.В. и др., 1994; Елисеенко
В.И., 1997; Халепо О.В., 2000; Клебанов Г.И. и др., 2001).
В литературе имеются данные, что низкоинтенсивное лазерное излучение способно вызывать снижение уровня циркулирующих иммунных комплексов и молекул средней массы (МСМ) в крови, улучшать функциональное состояние иммунной системы у пациентов (Хакимов И.С., 1994; Бабаджанов Б.Р. с соавт., 1997).
Все названное дает основание полагать, что использование НИЛИ может оказать благоприятный эффект на ранней стадии развития сахарного диабета 1 типа, противодействуя названным выше патогенетическим механизмам этого заболевания. Это и явилось основанием проведения данной работы.
Целью исследования является изучение влияния низкоинтенсивного лазерного излучения на развитие сахарного диабета 1 типа в эксперименте.
Задачи исследования:
1. Оценить влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на показатели общего состояния животных, биохимические показатели сыворотки крови крыс, уровень активности перекисного окисления липидов и концентрацию молекул средней массы в крови животных при развитии стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета.
2. Изучить особенности лейкоцитарной формулы периферической
крови крыс в динамике развития стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета при низкоинтенсивном лазерном воздействии.
3. Оценить влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на
состояние системы микроциркуляции и механизмы ее регуляции в кожных
покровах крыс при формировании стрептозотоцининдуцированного
сахарного диабета.
Научная новизна. Впервые в эксперименте со
стрептозотоцининдуцированным сахарным диабетом (СИСД) выявлен положительный эффект низкоинтенсивного лазерного излучения с частотой следования импульсов 1500 Гц на основные показатели развития сахарного диабета 1 типа.
Впервые обнаружено, что у крыс, подвергавшихся низкоинтенсивному лазерному воздействию на фоне введения стрептозотоцина, менее выражены клинические признаки развивающегося сахарного диабета 1 типа: снижен ,-* темп потери массы тела, в более поздние сроки появилась гипергликемия, что сочетается с более высоким уровнем инсулина в крови; в меньшей степени активированы процессы перекисного окисления липидов и меньше концентрация молекул средней массы в сыворотке крови, характерны более высокие показатели относительной массы тимуса (тимический индекс) и селезенки (селезеночный индекс).
Впервые обнаружено, что низкоинтенсивное лазерное излучение оказывает благоприятное влияние на состояние системы микроциркуляции в кожных покровах крыс при развитии стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета. Это проявляет себя стимуляцией активных механизмов микрогемодинамики и нормализацией перфузии, а также повышением компенсаторных резервов микроциркуляторного русла.
Практическая значимость работы. Полученные результаты работы позволяют рекомендовать использование НИЛИ в качестве одного из методов патогенетической терапии в комплексном лечении на ранних
9 стадиях развития сахарного диабета 1 типа, а применение лазерной допплеровской флоуметрии — в качестве дополнительного скринингового метода оценки степени повреждения организма при развитии инсулинзависимого сахарного диабета. Положения, выносимые на защиту.
1. Низкоинтенсивное лазерное излучение с частотой следования
импульсов 1500 Гц, длиной волны 0,89 мкм при 8-ми минутной экспозиции
благоприятно влияет на основные клинические проявления в динамике
развития стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета: у животных
менее выражены признаки интоксикации и снижен темп потери массы тела.
При действии низкоинтенсивного лазерного излучения тормозится развитие экспериментального сахарного диабета 1 типа, что проявляет себя более высоким содержанием инсулина в крови, поздним развитием * гипергликемии, снижением уровня глюкозы и отсутствием кетоновых тел в моче.
Под влиянием низкоинтенсивного лазерного излучения у крыс В " динамике развития стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета наблюдаются более низкие цифры, характеризующие активность процессов ч перекисного окисления липидов и концентрацию молекул средней массы в крови.
Низкоинтенсивное лазерное излучение способствует улучшению перфузии в кожных покровах крыс при развитии стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета, оказывая положительное действие преимущественно на активные механизмы регуляции микрогемодинамики.
Внедрение результатов исследования. Результаты, полученные в ходе работы, используются на кафедре патофизиологии при анализе материалов, связанных с влиянием на организм ионизирующего излучения, а также при изучении основных патогенетических аспектов сахарного диабета 1 типа.
Публикации. По теме кандидатской диссертации опубликовано 6 печатных работ, 4 — в центральной, 2 - в местной.
Роль иммунологических факторов в развитии СД 1 типа
Проведенные многочисленные исследования позволяют отнести СД 1 типа к группе аутоиммунных заболеваний (Злобина Е.Н., Дедов И.И., 1993; ВОЗ, 1995; PJ. Lifebvre et al., 1998; Ярилин А.А., 1999; Kay T.W. et al., 2000). Об этом свидетельствуют следующие факты. Во-первых, СД 1 типа часто сочетается с другими аутоиммунными болезнями, такими как хронический аутоиммунный тиреоидит, диффузный токсический зоб, идиопатическая форма болезни Аддисона и т.д. Во-вторых, наличие аутоиммунного воспаления островков Лангерганса (инсулита) у больных, умерших вскоре после манифестации диабета, и у эспериментальных моделей ИЗСД (линия мышей NOD- Non-Obese Diabetic mice). И, наконец, выявление широкого спектра аутоантител к различным антигенам бета-клеток поджелудочной железы (Вельбри С.К., 1985; Серов В.В., Зайратьянц О.В., 1992; Ablamunits V. et al., 1999; Колесник Ю.М., Островский М.А., 2004).
В настоящее время наличие аутоантител к различным белкам клеток островков Лангерганса является наиболее хорошо изученным иммунологическим феноменом, характерным для СД 1 типа. Основными типами антител, выявляемых в крови пациентов при ИЗСД, являются антитела к цитоплазматическим компонентам бета-клеток (ICA). Эти антитела появляются задолго до клинических появлений диабета и позволяют проводить его раннюю диагностику (Вартанян Н.Л. и др., 2000). Также в сыворотках больных обнаруживаются цитотоксические и клеточно поверхностные аутоантитела (ICSA), аутоантитела к инсулину (IAA) , проинсулину, глютаматдекарбоксилазе (GAD) (Смирнова О.М., 1995; Галенок В.А., Жук Е.А., 1996; Жук Е.А, 1997; Балаболкин М.И., 2000). Вместе с тем, перечисленные аутоантитела в настоящее время рассматриваются как маркеры, свидетельствующие о повреждении бета-клеток и/или о продолжении иммунной реакции; что они вряд ли вовлечены в основной механизм гибели инсулинпродуцирующих клеток (Christie M.R. et al., 1994; D.Lekoith et al., 1996; Дедов И.И. и др., 2005). Большинство исследователей придерживается мнения, что; основная роль в процессе деструкции бета-клеток принадлежит клеточному звену иммунитета. В пользу этого свидетельствует наличие воспаления, локализующегося в островках Лангерганса и носящего аутоиммунный характер (аутоиммунного инсулита), у больных с СД 1 типа (Потемкин В.В. и др., 1994; Moriwaki М. et al., 1999). Инфильтрированные островки Лангерганса содержат в порядке убывания их количества следующие типы иммунокомпетентных клеток: цитотоксические Т-лимфоциты, резидентные островковые макрофаги, Т-хелперы типа 1 и Т-хелперы типа 2 (Green Е.А., Flavel R.A., 1999). Существенное значение в патогенезе СД 1 типа отводят нарушениям регуляторных механизмов иммунной системы и дисфункции тимуса. Полагают, что дисфункция тимуса может быть одной из причин образования указанного выше аутореактивного клона Т-лимфоцитов, цитотоксических по отношению к В-клеткам поджелудочной железы; она может приводить к увеличению количества и активности Т-хелперов, снижению активности Т-супрессоров (Полторак В.В., Блох К.О., 1989; Riley W.J., 1989; Nerup J. et al., 1994; Зак К.П. и др., 2005; Мазурина Н.К., 2007). Т-лимфоциты играют важную роль в инициации и дальнейшем развитии аутоиммунного процесса, приводящего к уничтожению инсулинпродуцирующих клеток островков (Toyoda Н., Formby В., 1998). При этом основная роль принадлежит цитотоксическим Т-лимфоцитам. Цитотоксические реакции развиваются на фоне аутоиммунного инсулита (АИ) и протекают при участии антигенпредставляющих клеток (АПК), функции которых при ИЗСД выполняют макрофаги, эндотелий сосудов, экзокринные клетки ацинусов, Т-хелперы (Pavlovic D. et al.,1997; Ahren В., Havel P.J., 1999). Значение Т-клеток в формировании диабета показали В. Boitard с соавт., которые с помощью тимэктомии и введения антител к CD4 защищали мышей линии NOD от развития диабета (Boitard В. et al., 1989). Важным показателем состояния иммунной системы при ИЗСД является анализ цитокинового статуса, так как взаимодействие между клеточными s популяциями осуществляется через отдельные цитокины (Галенок В.А., Жук Е.А., 1995; Бондарь И.А., Орешкова С.Ф., 1996; Benoist L., Mathis D., 1997), г которые в значительной мере синтезируются макрофагами и обуславливают , последующее развитие АИ. Основными из этих цитокинов являются ИЛ-1, ФНО, гамма-интерферон (Reimers J.I., 1998). Большинство авторов сходятся во мнении, что механизмы повреждающего действия цитокинов на бета-клетки опосредованы свободно-радикальным цитотоксическим эффектом (за счет активации процессов свободнорадикального окисления) и увеличением проницаемости островковых капилляров (за счет увеличения синтеза NO), что способствует привлечению лимфоцитов в ткань островка и возникновению инфильтрации, которая играет важную роль при развитии ИЗСД (Горелышева В.А., 1994; Eizirik O.L. et al., 1996; McDaniel MX. et al., 1996; Mukherjece B. et al., 1998; Бондаренко O.H. и др., 2002). Исходом АИ является гибель большей части бета-клеток островков Лангерганса, что ведет к снижению продукции инсулина (Koeslag J.H. et al., 1997). Причем основным механизмом деструкции бета-клеток является апоптоз (Moriwaki М. et al., 1999). Сами же панкреатические островки уменьшаются в размере и подвергаются либо фиброзу, либо кальцификации. Характерно, что периферически расположенные альфа-клетки пролиферируют и проникают в центральные части островка, образуя тяжи между остатками бета-клеток и фиброзной тканью (Taniyama Н. et al., 1999).
Основные биологические эффекты низкоинтенсивного лазерного излучения
В настоящее время в литературных источниках накоплено значительное количество информации, касающейся как эффектов низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ), так и возможных механизмов их развития (Молотков О.В., Брук Т.М., 1994; Брискин Б.С. и соавт., 1996; Брук Т.М., 1999; Халепо О.В., 2000). В основе механизма биологического действия НИЛИ лежат процессы, происходящие в организме на всех уровнях организации: молекулярном и клеточном, тканевом, органном, системном. По мнению ряда авторов, начальным звеном лазерной биостимуляции является поглощение света клеточной фоторецепторной молекулой (Гамалея Н.Ф., 1989; Кару Т.Й., 1996; Бриль Г.Е. и др., 1997). Фотоакцепторами для лазерного излучения могут служить вещества, такие как супероксиддисмутаза, каталаза, НАДФ-Н2, дегидрогеназы (Архангельский А.В. и др., 1980; Бриль Г.Е., Бриль А.Г., 1998). Поглощая энергию лазерного излучения, эти ферменты переходят в возбужденное состояние, что приводит к изменению скорости регулируемых ими биохимических процессов (Кару Т.Й., 1989) . Другие исследователи предполагают, что НИЛИ влияет на более широкий класс макромолекул и надмолекулярных комплексов (биомембраны), в результате чего изменяется конформационное строение последних и их свойства (Корочкин И.М., Байбенко Е.А., 1990; Евстигнеев А.Р., Инюшин В.Н., 1997). Немаловажное значение в механизме действия НИЛИ отводится активным формам кислорода, которые индуцируют окислительные процессы, оказывая слабое повреждающее действие на биологические мембраны (Udut V.V. et al., 1991). Некоторые исследователи обсуждают возможность влияния НИЛИ на электропотенциал клеточных мембран за счет микроизменений температурного поля (Борисова A.M. и др., 1992). На основании различных экспериментальных работ предпологают, что изменения, происходящие в клетке после действия НИЛИ, проходят несколько этапов (Мантейфель В.М. и др., 1992): 1 этап — поглощение кванта света макромолекулами, локализованными в митохондриях и других органеллах клетки; 2 этап - изменение свойств макромолекул и надмолекулярных комплексов; 3 этап — изменение функциональной активности самой клетки (за счет ч изменения энергетического потенциала, баланса медиаторов, и др.); 4 этап - увеличение или уменьшение экспрессии генов, в том числе «генов раннего ответа» (c-myc, c-fos). Изменение баланса клеточных рецепторов и факторов роста. Таким образом, первичный каскад биохимических реакций в ответ на действие НИЛИ запускается в клеточных органеллах, содержащих большое количество металлоферментов-фотоакцепторов (в основном, в митохондриях), и только затем сигнал передается на генетический аппарат клетки, вызывая различные ответные реакции. В облученных лазером клетках наблюдается повышение активности обменных процессов, связанное с активацией ядерного аппарата клеток (увеличение содержания ДНК и РНК, деконденсация хроматина); повышение активности системы ДНК-РНК-белок ведет к возрастанию синтеза белка; изменение энергетического обмена за счет возрастания уровня АТФ; стимуляция внутриклеточного электролитного обмена (повышение содержания ионов кальция в 2-5 раз); увеличивается количество внутриклеточных органелл (рибосом, полисом, гранулярной эндоплазматической цепи, митохондрий) (Кару Т.Й. и др., 1993; Байбеков И.М., 1994; VaccaR.A. et al., 1997; Reddy G.K. et al.,1998). Наряду с этим, облучение инфракрасным лазером с длиной волны 890 нм также стимулирует пролиферативную активность клеток (Александров Т.М. с соавт., 1994; Кац В.А. с соавт., 1994). Кроме того, помимо увеличения митотическои активности, лазерное излучение способствует увеличению их дифференцировки (Павлова Е.С. и соавт., 1995), повышению функциональной активности (Брискин Б.С. с соавт., 1996; Идрисова Л.Т. с соавт., 2000). К настоящему времени в литературе накопилось достаточно данных, свидетельствующих о способности лазерного излучения оказывать существенное влияние на интенсивность свободнорадикальных реакций, в частности, перекисного окисления липидов. В большом числе-опубликованных работ прослеживается зависимость выраженности саногенного влияния НИЛИ как от индуцированного им повышения, активности системы антиоксидантной защиты, так и снижения интенсивности процессов ПОЛ. Так, например, показано, что после облучения пациентов с различными заболеваниями в крови повышается сниженная в условиях патологического процесса активность таких ферментов как каталаза (Зиньковская Т.М. и др., 1994; Коломиец Л.А., 1996), супероксиддисмутаза (Плужников М.С. с соавт., 1991), глутатионпероксидаза (Ткаченко А.И., 1997), церулоплазмина и трансферрина (Авруцкий М.Я. и соавт., 1993). Эти эффекты могут быть причиной снижения образования и последующего накопления в крови, мембранах клеток и других клеточных структурах промежуточных и конечных продуктов избыточной липопероксидации (Вавринчук С.А., Корита В.Р., 1993; Циммерман Я.С. и др., 2000). При изучении микросомального окисления в клетках печени было установлено, что прижизненное сеансное ИК лазерное облучение этого органа существенно подавляет реакции спонтанного ПОЛ, а также активирует реакции метаболизма ксенобиотиков цитохромом-Р450 (Золотарева Т.А и соавт.,1995, 1998). Косвенным подтверждением антиоксидантного эффекта НИЛИ могут служить данные о стабилизации мембран клеток и клеточных органелл после лазерного воздействия (Лапрун И.Б., 1990; Павлова Р.Н. и соавт.,1993; ItohT.etal., 1996).
Следует особо отметить, что в большинстве работ прослежена зависимость антиоксидантного эффекта лазерного излучения от исходной интенсивности процессов ПОЛ и степени угнетения антиоксидантной системы: чем более выражены процессы ПОЛ, чем больше накапливается его продуктов, тем заметнее антирадикальное влияние НИЛИ. В ряде работ обращается внимание на зависимость выраженности антиоксидантного эффекта лазерного облучения от дозы и кратности облучения (Колесова О.Е. " и соавт., 1994; Зырянова Т.Н. и др., 1994).
Вместе с тем, нельзя не обратить внимания, что в литературе имеются -отдельные сведения и о том, что НИЛИ, наоборот, может стимулировать свободно-радикальные процессы. Например, в сообщении Павловой Р.Н. (1993) указывается, что у здоровых людей лазерное воздействие приводит к повышению интенсивности ПОЛ. Аналогичные результаты приводит Мищенко В.П. (1988), в который обнаружил увеличение в крови больных уровня малонового диальдегида при облучении их гелий-неоновым лазером.
Влияние НИЛИ на изменение массы тела, показатели углеводного обмена, тимический и селезеночный индексы у крыс в динамике возникновения и развития стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета
Как известно, наиболее значимыми клиническими признаками СД 1 типа являются гипергликемия, снижение массы тела, полидипсия, полиурия с глюкозурией и кетонурией. В связи с этим представлялось важным изучить влияние НИЛИ на указанные выше параметры состояния животных при развитии экспериментального стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета.
Как следует из приведенных результатов, средняя масса тела контрольных (интактных) животных с первого дня эксперимента постепенно нарастала (со 149,8 ± 2,8 г до 210,5 ± 1,03 г), т.е. на 35 сутки от начала введения препарата она на 40% превышала исходные значения (р 0,05 во всех случаях).
Характерно, что средняя масса тела крыс, получавших стрептозотоцин и не облучавшихся дополнительно лазером, постепенно снижалась со 150,1 ± 2,35 г до 120,1 ± 2,02 г к 35 суткам наблюдения, т.е. на 25% (р 0,05 во всех случаях).
Более детальный анализ показал, что средняя масса тела крыс, получавших СТЦ и не подвергавшихся лазерному облучению, была ниже по сравнению со средней массой тела крыс контрольной группы: на 7 сутки -на 20,4%, на 10 сутки - на 26,6%, на 15 сутки - на 28,9%, на 20 и 30 сутки -на 36% , на 25 сутки - на 33,2% и на 35 сутки от начала введения препарата -на 43% (р 0,05 во всех случаях). Отметим что, средняя масса тела крыс, получавших стрептозотоцин и подвергавшихся. лазерному облучению, также постепенно снижалась со 159,11 ± 2,4 г до 146,9 ± 2,23 г к 35 суткам исследования, т.е. на 8% (р 0,05 во всех случаях). При сравнении с контролем средняя масса тела животных этой группы на 7 сутки от начала введения СТЦ была ниже на 9%, на 10 сутки - на 13%, на 15 сутки - на 16%, на 20 и 25 сутки - на 20% , на 30 сутки - на 25,3% и на 35 сутки - на 30,2% (р 0,05 во всех случаях). Однако, подчеркнем, что уже с 7 суток от начала введения стрептозотоцина, средняя масса тела облученных НИЛИ крыс превышала среднюю массу тела крыс, не подвергавшихся лазерному облучению: на 7 сутки - на 14,5%, на 10, 15 и 25 сутки - на 18,5%, на 20 и 35 сутки - на 21,6%, на 30 сутки - на 17,2%) (р 0,05 во всех случаях). Таким образом, на 35 сутки от начала введения СТЦ средняя масса тела крыс, облученных НИЛИ, оказалась на 27 г больше по сравнению с животными, получавшими СТЦ, но без лазерного воздействия. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что 3-х кратное введение СТЦ закономерно сопровождается прогрессирующей потерей массы тела животных, признаком, характерным для развития СД 1 типа. Вместе с тем, важно, что при действии низкоинтенсивного лазерного излучения регистрировалась существенно менее выраженная потеря массы тела у крыс в процессе развития экспериментального сахарного диабета. Влияние НИЛИ на некоторые показатели состояния углеводного обмена у крыс в динамике развития СИСД представлено в таблице 2. Полученные результаты свидетельствуют, что уровень глюкозы в крови не облученных лазером крыс уже к концу 2-х суток от начала введения СТЦ был в 3,3 раза выше по сравнению с контрольными величинами (р 0,05). В дальнейшем, концентрация глюкозы в крови этой группы превышала контрольные значения на 4, 7 и 15 сутки исследования приблизительно в 2,5 раза, на 10, 25, 30 и 35 сутки - в 3 раза (р 0,05 во всех случаях). На 20 сутки от начала введения стрептозотоцина в крови необлученных крыс был отмечен самый высокий уровень гликемии, который превышал контрольные значения в 4,3 раза (р 0,05).
Изменение лейкоцитарной формулы крови под влиянием НИЛИ при развитии экспериментального стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета
Как свидетельствуют данные табл. 6, в группе крыс, которым вводили только стрептозотоцин, общее количество лейкоцитов в периферической крови было выше контрольных значений во все сроки исследования. Так, на 10 сутки этот показатель был выше, чем в контроле в 3 раза, на 20 сутки — в 2,5 раза, на 30 сутки - в 3,5 раза, на 40 сутки — в 4 раза (р 0,05 во всех случаях). В периферической крови животных, которые на фоне введения стрептозотоцина подвергались лазерному облучению, общее количество лейкоцитов на 10 сутки от начала введения СТЦ было в 3,3 раза выше по сравнению с контрольными (интактными) животными (р 0,05), а на 20 сутки исследования общее количество лейкоцитов крови не отличалось от контрольных значений (р 0,05). В дальнейшем, общее количество лейкоцитов в периферической крови этой группы крыс вновь возрастало по сравнению с контролем в 1,8 и 2,6 раза на 30 и 40 сутки исследования соответственно (р 0,05 в обоих случаях). Следует отметить, что, начиная с 20 суток от начала введения стрептозотоцина, у животных, подвергавшихся действию НИЛИ, общее количество лейкоцитов в периферической крови было ниже, чем у не облученных лазером животных приблизительно в 1,5 раза (р 0,05 во всех случаях). Что касается лейкоцитарной формулы, то процентное содержание эозинофильных лейкоцитов в крови названных выше групп животных с СИСД на 10 и 20 сутки исследования существенно не различалось как между собой, так и по сравнению с контрольными (интактными) крысами (р 0,05 во всех случаях). На 30 и 40 сутки от начала введения СТЦ этот показатель у не облученных лазером крыс был выше, чем в контроле в 1,7 и 1,8 раза соответственно (р 0,05 в обоих случаях). У крыс, которые дополнительно подвергались низкоинтенсивному лазерному облучению параллельно с введением СТЦ, процентное содержание эозинофильных лейкоцитов в периферической крови также увеличивалось по сравнению с контрольной группой животных на 30 и 40 сутки от начала введения препарата в 2 раза (р 0,05 в обоих случаях). Отметим, что и в эти сроки исследования не было обнаружено никаких различий в процентном содержании эозинофильных лейкоцитов в периферической крови крыс с СИСД, получавших или не получавших дополнительно НИЛИ. Обращает на себя внимание уменьшение процентного содержания нейтрофильных лейкоцитов (палочкоядерных и сегментоядерных) в крови животных обеих групп, подвергавшихся и не подвергавшихся облучению лазером, во все сроки от начала введения СТЦ. Так, на 10 сутки от начала введения стрептозотоцина содержание палочкоядерных нейтрофилов в периферической крови не подвергавшихся лазерному воздействию крыс было в 2,2 раза, на 20 и 30 сутки - приблизительно в 1,7 раза ниже по сравнению с контролем (р 0,05 во всех случаях). На 40 сутки от начала введения препарата процентное содержание палочкоядерных нейтрофилов в крови данной группы животных было снижено в 27,4 раза (р 0,05). В группе крыс, подвергавшихся наряду с введением стрептозотоцина облучению НИЛИ, содержание палочкоядерных нейтрофилов также снижалось во все изученные сроки. На 10 сутки от начала введения СТЦ этот показатель был ниже контрольных значений в 3,8 раза, на 30 сутки - в 6,7 раза (р 0,05 в обоих случаях). На 20 и 40 сутки палочкоядерные нейтрофилы в крови данной группы крыс встречались крайне редко. Следует отметить, что на 10, 20, 30 и 40 сутки от начала введения стрептозотоцина процентное содержание палочкоядерных нейтрофилов у крыс, получавших дополнительно НИЛИ, было ниже по сравнению с необлученными животными в 1,7; 8; 3,7 раз и в 4 раза соответственно (р 0,05 во всех случаях). Процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов в периферической крови животных с СИСД также было снижено по сравнению с таковым у контрольных (интактных) животных во все сроки исследования. Так, в периферической крови животных, получавших стрептозотоцин без лазерного воздействия, содержание сегментоядерных нейтрофилов было ниже, чем в контроле на 10 и 30 сутки исследования в 2 раза, на 20 и 40 сутки исследования — в 3 раза (р 0,05 во всех случаях).
В крови животных, подвергавшихся действию НИЛИ на фоне введения стрептозотоцина, процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов было снижено по сравнению с животными контрольной группы на 10, 20 и 30 сутки приблизительно в 1,5 раза и на 40 сутки - в 2,8 раза (р 0,05 во всех случаях).
Вместе с тем, следует подчеркнуть, что на 20, 30 и 40 сутки от начала введения СТЦ содержание сегментоядерных нейтрофилов в крови облученных лазером крыс было выше, чем у животных, не подвергавшихся лазерному облучению, приблизительно в 2 раза (р 0,05 во всех случаях).
Процентное содержание моноцитов в периферической крови крыс с экспериментальным СД, не подвергавшихся облучению лазером, увеличивалось во все изученные сроки. Так, на 10 и 20 сутки от начала введения стрептозотоцина этот показатель был выше контрольных значений в 1,5 раза, на 30 сутки — в 1,8 раза, на 40 сутки — в 2,3 раза (р 0,05 во всех случаях).
В крови животных, подвергавшихся лазерному облучению на фоне введения СТЦ, содержание моноцитов в периферической крови также было повышено по сравнению с контрольными величинами: 10, 20 и 30 сутки — в 1,4 раза, на 40 сутки - в 2,3 раза (р 0,05 во всех случаях).
