Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Патогенетические мезанизмы химического поражения печени -
1.2. Характеристика современных гериатрических и гепатозащитных средств . 28
1.3. Фармакологическая характеристика мексидола и новых комплексных соединений - производных пиримидина с янтарной кислотой 34
Глава 2. Методические вопросы исследования 40
2.1. Материал экспериментального исследования -
2.2. Моделирование токсического поражения печени ТХМ и методы коррекции . 42
2.3. Методика оценки устойчивости животных различного возраста к острому гипоксическому воздействию 43
2.4. Методы исследования в эксперименте 43
2.4.1. Морфологические методы 43
2.4.2. Биохимические методы 44
2.4.3. Оценка состояния компонентов системы «ПОЛ-АОЗ» в печени и крови животных 45
2.4.3.1. Определение продуктов ПОЛ 46
2.4.3.1.1. ТБК-реагирующие продукты (ТБК-тест) 46
2.4.3.1.2. Диеновые конъюгаты и шиффовы основания 47
2.4.3.2. Активность каталазы 49
2.4.3.3. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 49
2.4.4. Определение содержания АТФ в ткани печени 50
2.4.5. Гематологические методы 51
2.4.6. Функциональные пробы печени 51
Глава 3. Функционально-метаболические изменения в печени и крови у крыс разного возраста при остром отравлении тетрахлорметаном на фоне коррекции антиокси дантами 53
3.1. Морфофункциональные показатели печени 54
3.2. Длительность гексеналового наркоза 57
3.3. Коэффициент ретенции бромсульфалеина 59
3.4. ПОЛ/АОЗ в ткани печени 61
3.5. Активность каталазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в печени 66
3.6. Биохимические показатели сыворотки крови 68
3.7. Гематологические показатели 80
Глава 4. Функционально-метаболические процессы в печени и крови в условиях хронической интоксикации взрослых и старых крыс тетрахлорметаном на фоне коррекции мексидолом и комплексным соединением окси-метилурацила с янтарной кислотой 84
4.1. ПОЛ/АОЗ и состояние периферической крови 85
4.2. Биохимические показатели крови взрослых и старых крыс отражающие метаболизм и функцию печени 88
4.3. Показатели ретенции бромсульфалеина 103
4.4. Активность ферментов антиоксидантной защиты, процессов перекисного окисления липидов и содержание аденозинтрифосфорпой кислоты в печени 107
Глава 5. Влияние тетрахлорметана, комплексного соединения оксиметилурацила с янтарной кислотой и мексидола на выживаемость взрослых и старых крыс в условиях острой гипоксии 117
Заключение 122
Выводы 138
Список литературы 140
- Патогенетические мезанизмы химического поражения печени
- Моделирование токсического поражения печени ТХМ и методы коррекции
- Морфофункциональные показатели печени
- ПОЛ/АОЗ и состояние периферической крови
Введение к работе
Актуальность исследования
В современной стареющей популяции людей патология гепатобилиарной системы распространена достаточно широко и, по данным С. Д. Подымовой (1998), достигает 60 случаев на 10000 населения. В Российской Федерации доля лиц в возрасте 60 лет и старше увеличилась с 12 до 18,5%, а доля лиц 75 лет и старше с 2,5 до 4,1% населения страны (Донцов В. И., 1999).
В этих условиях приоритетной научной задачей становится не столько увеличение продолжительности жизни, сколько повышение ее качества, эффективной профилактики и лечения заболеваний лиц пожилого и старческого возраста.
Всемирная организация здравоохранения ежегодно отмечает увеличение заболеваний печени, вызванных ксенобиотиками. К ядам с избирательной или преимущественной гепатотоксичностью относит производственные токсиканты, природные соединения и лекарственные средства, всего более 40 групп химических веществ (Куценко С. А., 2004). По данным А. И. Арчакова и И. И. Карузиной (1998), известно около 80000 ксенобиотиков и более 200 лекарственных препаратов, способных вызывать гепатотоксические эффекты.
В 30% случаев острых отравлений возникают клинические проявления химического повреждения печени, у 7% людей получавших лекарственные препараты, развивается токсическое поражение этого органа (Лужников Е. А., 2000).
Вследствие принципиальной общности молекулярных механизмов повреждения гепатоцитов вне зависимости от природы химического повреждающего воздействия общемедицинское значение приобрели исследования поражения клеток печени гепатотропным ядом - тетрахлорметаном. Эта классическая модель патологии паренхиматозных клеток печени широко и с успехом используется для решения различных проблем клинической и экспериментальной гепа-i
тологии, в том числе для изучения патогенеза токсических, вирусных поражений печени и поиска новых эффективных гепатозащитных средств (Губ-ский Ю. И., 1989; Насыров X. М., 1995; Хавинсон В. X. и соавт., 2003; Никитина И. А., 2004). Несмотря,на усилия многих исследователей, ряд вопросов пато-химических механизмов поражения гепатоцитов остались не выясненными, а способы специфической профилактики и терапии химических поражений печени недостаточно эффективны. Онтогенетический аспект данной проблемы до сих пор малоисследован (Васильев Г. А., 1991; Западнюк В. И., 1990, 1997; Зимницкий А. Н., 2005).
В то же время медикаментозная коррекция у лиц пожилого и старческого возраста, имеющих сниженные функциональные резервы печени связана со значительными трудностями и ограничениями. К этой категории относятся, прежде всего, больные, перенесшие инфекционные гепатиты, злоупотребляющие алкоголем, а также лица со злокачественными новообразованиями, подлежащие массированной фармако- и химиотерапии. Особую группу составляют лица, длительное время проработавшие в условиях вредного химического производства (Карамова Л. М., 2002; Фёклина Т. Ю. и соавт., 2003). ~
Нарушения функционального состояния печени пагубно отражаются и на адаптационной возможности организма, существенно снижают его резистентность к действию различных факторов среды, способствуют обострению хронических заболеваний, ухудшают их прогноз. В этой связи возникший аспект является актуальным, имеет социальную и медицинскую значимость, требует разработки адекватных методов коррекции, способных улучшить функциональное состояние печени у лиц пожилого и старческого возраста, защитить от различных токсикантов, повысить ее регенераторный потенциал.
На модели частичной гепатэктомии недавно установлено, что некоторые лекарственные средства активируют регенераторный потенциал «старых» донорских гепатоцитов в условиях токсического поражения печени тетра-хлорметаном (далее ТХМ). В то же время механизмы защитно-
восстановительных процессов в этом случае требуют дальнейшего изучения (Реутов А. А., 2004). Получившая в геронтологии признание концепция сво-боднорадикальных механизмов старения и повреждения клетки предполагает, что свободные радикалы, несомненно, могут играть важную роль в патогенезе химического поражения печени в стареющем организме, а антиокси-данты являются средствами патогенетического лечения. В этой связи отметим, что гепатопротекторное действие многих лекарственных средств, применявшихся ранее эмпирически, впоследствии было объяснено обнаруженными у них антиоксидантными свойствами (Скакун Н. П., 1985, 1987; Сара-тиков А. С. и соавт., 1995).
В то же время известно, что другим патогенетическим механизмом химического поражения печени является гипоксия (ишемия) (Голиков С..-Ы. и соавт., 1986), которая в свою очередь может являться мощным механизмом усиления процессов радикально-цепного окисления в мембранах гепатоцитов (Абдулла-ев Н..Х. и соавт., 1989; Биленко М. В., 1989). Это определило перспективу применения для защиты печени препаратов, сочетающих антиоксидантную и про-тивогипоксическую активность. К числу подобных препаратов, положительно зарекомендовавших себя в клинике, относятся препараты, содержащие янтарную кислоту (Западнюк В. И., 1997; Ивницкий Ю. Ю. и соавт., 1998; Воронина Т. А., 2000, 2001; Лукьянова Л. Д., 2004, 2005; Семиголовский Н.Ю., 2004). Исследования новых производных пиримидина на моделях токсического поражения печени крыс ТХМ, алкоголем, полихлорвиниловыми бифимилами, дихлорэтаном показали эффективность оксиметилурацила (Хайбуллина 3. Г., 1994; Савлуков А. И., 2000; Мирсаев Т. Р., 2002; Мышкин В. А. и соавт., 2005).
Вместе с тем возможности данного препарата, его комбинации с янтарной кислотой по метаболической коррекции поражения печени тетрахлорметаном у животных разного возраста остаются не изученными, что и определило целесообразность данного исследования.
Цель: определение патогенетической значимости нарушений в системе антиокислительной защиты, активности ПОЛ при интоксикации тетрахлорме-таном взрослых и старых животных и изучение возможности использования антиоксидантных препаратов, содержащих сукцинат, - мексидола и комплекса оксиметилурацила с янтарной кислотой для коррекции выявленных нарушений и выживаемости при экстремальной гипоксической нагрузке.
Задачи исследования
Для достижения цели должны быть решены следующие задачи:
1. Изучить функционально-метаболические показатели в печени и эритро
цитах взрослых и старых крыс в условиях острой интоксикации ТХМ на фоне
коррекции мексидолом, комплексным соединением оксиметилурацила с янтар
ной кислотой в эксперименте на основании:
состояния системы ПОЛ-АОЗ в печени и крови (количество ДК, ШО,. ТБК-РГТ, активность каталазы, Г-6-ФДГ);
гематологических показателей (эритроциты, ретикулоциты, гемоглобин, ЭФПЭ);
биохимических показателей крови (УрН, АлАТ, АсАТ, ЛДГ, ЩФ, БРБ, общий белок, мочевая кислота);
морфофункциональных показателей (масса печени, плоидность гепато-цитов, гексеналовая проба, К ретенции БСФ);
2. Исследовать функционально-метаболические показатели в печени
взрослых и старых крыс в условиях хронической интоксикации ТХМ на фоне
коррекции мексидолом и комплексным соединением осиметилурацила с янтар
ной кислотой в эксперименте на основании:
биохимических показателей сыворотки крови (УрН, АлАТ, АсАТ, ЛДГ, ЩФ, БРБ, общий белок, мочевая кислота);
активности ПОЛ (ДК, ТБК-РП) и содержания АТФ;
состояния экскреторной функции печени (К ретенции БСФ);
Провести сравнительную оценку гепатозащитной эффективности мекси-дола и комплексного соединения оксиметилурацила с янтарной кислотой у взрослых и старых крыс с токсическим поражением печени, вызванным острой и хронической интоксикацией тетрахлорметанам, по показателям морфометри-ческих, биохимических и функциональных критериев.
Изучить влияние ТХМ, мексидола и комплексного соединения оксиметилурацила с янтарной кислотой на возрастную резистентность крыс к экстремальной гипоксической нагрузке по критерию выживаемости животных.
Научная новизна
Впервые в комплексе изучены возрастные особенности функционально-метаболических изменений в печени и крови при острой интоксикации ТХМ, а также в печени в условиях хронической тетрахлорметановой интоксикации, эффективность их коррекции мексидолом, комплексным соединением оксиметилурацила с янтарной кислотой параллельно с оценкой влияния препаратов на резистентность организма к экстремальной гипоксической нагрузке.
Выявлены возрастные различия в показателях активности процессов ПОЛ/АОЗ в печени и крови у животных в условиях острой и хронической интоксикации тетрахлорметаном. При остром отравлении в крови старых животных более значительно, чем у взрослых, возрастает концентрация вторичных продуктов ПОЛ и подавляется активность антиоксидантных ферментов, в то время как в печени отмечается лишь более значительное увеличение количества вторичных продуктов ПОЛ без изменения активности антиоксидантных ферментов. Дисбаланс ПОЛ/АОЗ сопровождается гепатотоксическими эффектами, которые проявляются развитием цитолитического и холестатического синдромов, нарушением экскреторной и антитоксической функций печени, а также изменением клеточной популяции гепатоцитов и их цитолизом более выраженным у взрослых крыс.
Впервые показано, что антиоксидантные препараты, содержащие янтарную кислоту, - оксиметилурацил и мексидол в условиях острой и хронической интоксикации ТХМ стабилизируют в печени и крови ПОЛ, в значительной степени препятствуют развитию патологических изменений в крови и печени взрослых и старых крыс.
Впервые в финале хронической тетрахлорметановои интоксикации обнаружены разнонаправленные реакции ПОЛ в печени: активация у взрослых и подавление активности ПОЛ у старых животных.
Комплексное соединение оксиметилурацила с янтарной кислотой и мексидол в условиях хронической тетрахлорметановои интоксикации препятствует развитию патологических изменений в печени старых крыс и более эффективно, чем при острой интоксикации, повышают резистентность организма взрослых и восстанавливают ее у старых животных в условиях экстремальной гипок-сической нагрузки.
Максимальные антиоксидантные и корригирующие эффекты наблюдаются при использовании комплексного соединения оксиметилурацила с янтарной кислотой.
Проведенные исследования расширяют представления о возрастных особенностях реакции животных на химическую травму различной интенсивности и острую гипоксическую нагрузку в условиях лечебно-профилактического применения антиоксидантов, содержащих янтарную кислоту.
Научно-практическое значение
Полученные результаты могут быть использованы при разработке клинических рекомендаций для включения антиоксидантов,обладающих антигипок-сической активностью, в схемы лечения поражений печени при остром и/или хроническом течении патологического процесса у лиц пожилого и старческого возраста. Они представляют интерес для дальнейших экспериментальных ис-
следований по уточнению показателей возрастной нормы у интактных животных и крыс с экспериментальной химической патологией.
Основные положения, выносимые на защиту:
Возрастные различия в степени выраженности и особенности патогенеза поражения печени ТХМ в значительной мере определяются продолжительностью действия и дозой токсиканта - однократное (острое) или длительное (хроническое).
Наиболее значимым звеном токсогенеза у взрослых и особенно старых животных является дисбаланс в системе ПОЛ/АОЗ. Хроническое воздействие ТХМ у старых животных сопровождается подавлением активности ПОЛ.
3.Эффективными средствами коррекции дисбаланса в системе ПОЛ-АОЗ и функционально-метаболических нарушений в условиях острой и хронической интоксикации взрослых и старых животных являются мекси-дол и комплексное соединение оксиметилурацила с янтарной кислотой.
4.Мексидол и комплексное соединение оксиметилурацила с янтарной кислотой в условиях хронической интоксикации ТХМ восстанавливают резистентность организма к экстремальной гипоксической нагрузке у взрослых и старых животных, сукцинат оксиметилурацила более эффективен у старых крыс.
Объём и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 123 отечественных и 88 иностранных источников. Работа изложена на 161 странице, иллюстрирована 47 таблицами и 19 рисунками.
Патогенетические мезанизмы химического поражения печени
Возрастным особенностям изменения печени при воздействии тетра-хлорметана посвящены немногочисленные публикации [79, 96, 116].
Высокая чувствительность печени к химическим соединениям определяется несколькими обстоятельствами. Во-первых, вещества, проникающие в организм через желудочно-кишечный тракт, прежде всего, поступают именно в печень, это первый орган, стоящий на пути ксенобиотика, резорбировавшегося во внутренние среды организма; во-вторых, печень - основной орган, ответственный за метаболизм чужеродных веществ, а поскольку это нередко сопряжено с образованием высоко реакционноспособных промежуточных продуктов и инициацией свободнорадикальных процессов, то в ходе метаболизма весьма вероятно его повреждение.
Из химических ядов, вызывающих токсические гепатиты, наиболее важны галоиды углеводородов (хлороформ, четыреххлористый углерод, дихлорэтан, хлористый этилен), хлорированные нафталины (головакс, совол, совтол), нит-ро- и аминосоединения бензола, продукты производства синтетического каучука, некоторые металлы и их соединения [1, 10, 26, 73].
Патологические состояния печени химической этиологии можно отнести к одному из двух типов: цитотоксические (некроз, стеатоз, канцерогенез) и холе-статические (нарушение секреции желчи, развитие желтухи) [1, 73].
Стеатоз, или жировое перерождение печени, - это состояние, характеризующееся избыточным накоплением жира в гепатоцитах, который является самым ранним проявлением токсического поражения органа. Одновременно отмечается снижение содержания в плазме крови липидов и липопротеидов [73].
Некроз - это дегенеративный процесс, приводящий к клеточной гибели. Некротические изменения, развивающиеся от действия токсикантов, могут затрагивать лишь отдельные участки печени (фокальный некроз) либо всю массу органа (тотальный.некроз). Гибель клеток сопровождается повреждением плазматических мембран; ей предшествует ряд морфологических изменений гепа-тоцитов: отек цитоплазмы, делатация цитоплазматического ретикулума, набухание митохондрий с разрывом крист, деградация полисом, разрушение орга-нелл и ядра клетки, стеатоз [1, 10].
Фиброз (цирроз) - конечный результат хронически протекающих патологических процессов, развивающихся в печени при воздействии токсикантов. В поврежденном органе появляются коллагеновые тяжи, разрушающие нормальную структуру органа и нарушающие внутрипеченочный кровоток, желчевыделение [73, 75].
Канцерогенез наблюдается при воздействии целого ряда природных и промышленных токсикантов, которые могут выступать в роли инициаторов опухолевого роста, вызывая структурные повреждения молекул ДНК [73].
Для обозначения токсических поражений печени используется понятие токсическая гепатопатия. Для токсических повреждений печени характерны дегенеративные (воспалительно-дистрофические) и деструктивные изменения паренхиматозного органа типа дистрофии, некробиоза и некроза [51, 73].
По мнению Е. А. Лужникова и соавт. (2000, 2001), следует различать два основных патогенетических механизма токсических повреждений печени: специфические и неспецифические. При поражениях специфического характера основное значение имеет непосредственный контакт токсического вещества с паренхимой печении ее повреждения (то есть действие яда на печеночную клетку, ее эндоплазматический ретикулум с дезоргаенизацией внутриклеточного метаболизма). Неспецифическое токсическое поражение печени развивается вторично, как следствие патологических изменений в организме, вызванных острым отравлением. Одним из таких изменений в организме является нарушение регионального кровообращения в печени при экзотоксическом шоке [51].
Моделирование токсического поражения печени ТХМ и методы коррекции
К геропротекторам обычно относят биологически активные вещества, увеличивающие продолжительность жизни лабораторных животных [3, 31, 32, 59]. Комплексная проблема геронтологии и гериатрии - это поиск новых геропротекторов, разработка рациональных комбинаций с целью повышения их эффективности.
Уже в течение нескольких десятилетий предпринимаются попытки сформировать научные основы классификации геропротекторов. В значительной степени такая классификация условна, так как не всегда удается получить надежные доказательства способности препарата замедлять процессыхтарения.
Наиболее известна классификация геропрофилактических средств, которую предложил В. И. Западнюк [31]. Согласно этой классификации выделяют следующие группы препаратов (средств): 1) специфические иммунные цитотоксические сыворотки; 2) препараты тканевой терапии, получаемые по способу В.Н. Филатова; 3) адаптогены растительного, животного и синтетического происхождения; 4) комбинированные препараты - поливитамины, смеси аминокислот; 5) антиоксиданты; 6) хелаторы (бета-аминокапроновая кислота); 7) нейротропные препараты; 8) гормоны; 9) антидиабетические средства; 10) янтарная и липоевая (тиоктовая) кислоты и др. Некоторые авторы [32, 59, 92] выделяют дополнительные группы: иммуномодуляторы и стимуляторы роста иммунокомпетентных клеток; препараты, полученные из шишковидного тела, - мелатонин и эпита-ламин; препараты, препятствующие развитию апоптоза; ингибиторы транскрипции и трансляции; энтеросорбенты; новокаин; антигипоксанты.
Последняя группа, несомненно, актуальна. Еще Н. Н. Сиротинин (1972), рассматривая роль и значение гипоксии в предупреждении развития патологических явлений в пожилом и старческом возрасте, указывал на то, что лица старше 60 лет живут как бы на 1600 м выше, чем люди среднего возраста, и предлагал в качестве противогипоксического средства кислородную пену с различными напитками, заключающими в себе пенообразователи.
В. Н. Анисимов (2000) предложил классификацию геропрофилактических средств, основанную на существовании корреляции между скоростью старения индивида и скоростью развития новообразований. Автор предлагает различать три класса геропрофилактических средств. К первому классу относятся антиок-сиданты, увеличивающие латентный период опухоли и за счет этого удлиняющие продолжительность жизни потенциальных опухоленосителей/Ко второму классу — препараты, увеличивающие продолжительность жизни за счет снижения темпа старения и частоты возникновения опухолей (эпиталамин, мелато-нин). К третьему классу относятся препараты, увеличивающие выживаемость в молодом возрасте [3].
Наиболее многочисленная группа геропротекторных средств представлена антиоксидантами [4, 19, 20, 128].
В основу современных классификаций антиоксидантов положены два принципа: механизм действия и химическое строение. В. Г. Зайцев и О. В. Островский (2003) классифицируют антиоксиданты прямого и непрямого действия на основании химического строения [30]: 1. Доноры протона: - фенолы; - азотосодержащие гетероциклические вещества; - тиолы; - альфа-, бета-диенолы; - порфирины. 2. Полиены. 3. Катализаторы (имитаторы ферментов). 4. Ловушки Комплексообразователи (хелаторы).радикалов. 5. Комплексообразователи (хелаторы).
Согласно [22, 59, 122] основными принципами антиоксидантной терапии в условиях патологии, сопряженной с возрастом, являются: приоритет природных антиоксидантов (экстракты из морских беспозвоночных, водоросли - макрофиты, планктон, женьшень, элеутерококк и другие биогенные стимуляторы); применение липидорастворимых (токоферолы, убихиноны, ретинойды, коротиноиды и др.) и водорастворимых (глютатион, цистеин, метионин, аскорбиновая кислота и др.) антиоксидантов; регулярное исследование лабораторных показателей при использовании антиоксидантов.
Установлено, что при применении антиоксидантов отрицательный эффект, заключающийся в активации ПОЛ, наблюдается в 4% случаев, а при отказе от их применения — в 60%. Большинство препаратов оказывают положительное влияние на течение патологических процессов, локализующихся в разных органах и системах, что доказывает универсальность механизма их действия [59, 122].
Морфофункциональные показатели печени
Исследование проведено на 284 беспородных белых крысах - самцах из питомника РАМН «Рапполово». Использованы животные двух возрастных групп: 1-я груп па - взрослые животные, массой 298±11,5 г, возраст 12-13 месяцев; 2-я группа - старые животные массой около 400 г, возраст 22-24 месяца.
Распределение животных по группам представлено в табл. 4. ,1 Примечание. I группа - интактные: И - острое отравление тетрахлорметаном; III - мексидол + острое отравление тетрахлорметаном; IV - комплекс ЯК + ОМУ + острое отравление тетрахлорметаном.
Введение тетрахлорметана проводилось по схеме на протяжении 5 дней ежедневно. Параллельно вводились препараты—мексидол и комплекс янтарной кислоты с оксиметиурацилом.
Морфологический; и морфометрический анализы выявили, что масса взрослых крыс II группы, которым вводили тетрахлорметан, на 9,4% ниже, чем у интактных крыс данной возрастной группы-(Р 0,05). В III и IV группах животных, которым, наряду с тетрахлорметаном, вводили соответственно мексидол и комплекс янтарной; кислоты с оксиметилурацилом, масса животных не имела существенных различий (Р 0,05) по сравнению с интактными крысами I группы (табл. 5).
В то же время масса тела старых крыс, которым вводили тетрахлорметан (II группа), так же как тетрахлорметан и препараты (III и IV группы) не имела достоверных различий при сравнении этого показателя между группами. В то же время масса тела у взрослых: крыс была достоверно ниже по сравнению со старыми крысами во всех четырех группах.
Аналогичные данные получены при сравнительном анализе массы печени взрослых и старых крыс, интактных, отравленных тетрахлорметаном, и животных, которым, наряду с тетрахлорметаном, вводили мексидол, а также комплекс янтарной кислоты с оксиметилурацилом (табл. 6).
Результаты определения плоидности гепатоцитов приведены в табл. 7 и 8. Как показывает анализ полученных данных, количество диплоидных клеток у старых крыс в 2,3 раза больше, чем у взрослых животных. Различие статистически достоверно. Это согласуется с данными других исследований [80].
Количество двуядерных клеток у взрослых крыс, которым вводили тетрахлорметан, в 3,3 раза превышает их число по сравнению с интактными животными Г группы (Р 0,05). В группе III, где животные параллельно получали мек сидол, так же как и в IV группе крыс, которым, наряду с тетрахлорметаном, вводили комплекс янтарной кислоты с оксиметилурацилом, количество дву-ядерных клеток было достоверно выше по сравнению с интактными животными I группы (в обоих случаях Р 0,05).
Другая динамика изменения диплоидности гепатоцитов выявлена в группе старых крыс. В группе II у животных, которым вводили тетрахлорметан, отмечалось снижение количества диплопии в 1,27 раза по сравнению с интактными животными I группы (Р>0,05). Однако количество диплоидных клеток у старых крыс I и II групп было достоверно выше, чем у взрослых животных (в обоих случаях Р<0,05).
У старых крыс III и IV групп, которым, наряду с тетрахлорметаном, вводили препараты, количество диплоидных клеток существенных различий не имело по сравнению с животными I и II групп.
Количество безъядерных гепатоцитов у взрослых и старых крыс I группы достоверных различий не имеет (табл. 8). В то же время количество клеток у старых животных II группы в 4,7 раза больше, чем у интактных крыс I группы. Выявлена также разница между числом безъядерных гепатоцитов у старых и взрослых крыс II группы: у старых оно в 1,3 раза больше, чем у взрослых (различие статистически достоверно).
В III группе старых крыс, где животные параллельно получали мексидол, количество безъядерных клеток снизилось в 1,14 раза по сравнению со II группой (различие статистически достоверно). В то же время в IV группе животных, где крысы получали параллельно комплекс янтарной кислоты с оксиметилура-цилом, также было выявлено снижение числа клеток по сравнению со II группой животных, однако оно не было статистически достоверно.
ПОЛ/АОЗ и состояние периферической крови
Обнаруженные различия в реакции системы ПОЛ - АОЗ периферической крови взрослых и старых крыс могут отражать как специфические особенности реакции крови у животных разного возраста на введение в организм тетрахлор-метана, так и представлять стандартные возрастные реакции на действие экстремальных факторов [123].
Целью данного раздела работы являлось изучение возрастных особенностей реакции системы ПОЛ - АОЗ и состояния периферической крови в условиях хронической интоксикации ТХМ на фоне коррекции антиоксидантами. В эксперименте было использовано 40 взрослых крыс-самцов и 40 старых животных мужского пола. Взрослые и старые крысы были разделены на 4 группы: Группа I — интактные крысы (контроль). Группа II — животные, которым многократно вводили ТХМ. Группа III - животные, которым вводили мексидол и ТХМ. Группа IV - животные, которым вводили комплекс оксиметилурацила с янтарной кислотой. Тестирование проводили на 30 сутки эксперимента. После многократного введения ТХМ выявлены определенные изменения в системе ПОЛ - АОЗ и периферической крови взрослых крыс (таблица 28).
Как видно из таблицы 28 количество эритроцитов у крыс отравленных ТХМ находилось на уровне контрольных показателей, однако отмечалось снижение содержания гемоглобина, которое на 30 сутки опыта составило 104,2±2,14 г/л (Р 0,05), что было достоверно ниже чем у контрольных животных 154,0±2,06 г/л.
Показатель гематокрита практически не изменился, в то же время наблюдалось увеличение количества ретикулоцитов, которое достигало к 30 суткам 156,2±15,0г/л(Р 0,05).
Средняя ЭФПЭ снижалась до 0,048±0,007 10"8 M2/VC (Р 0,05), что свидетельствует об изменении заряда мембран эритроцитов у взрослых крыс отрав-ленных ТХМ.
ТХМ в мембранной фракции эритроцитов взрослых крыс увеличивает количество ТБК-реагирующих продуктов до 0,43±0,03 нмоль/мг белка, что достоверно превышает показатели интактных крыс.
Хроническая интоксикация ТХМ сопровождается снижением показателя каталазы с 0,69±0,07 усл. единиц до 0,20±0,04 условных единиц (Р 0,05), что свидетельствует о нарушении равновесия в системе ПОЛ-АОЗ периферической крови.
В тех же условиях опыта отмечались ретикулоцитоз и значительное возрастание количества ТБК-реагирующих продуктов в мембране эритроцитов старых крыс на фоне незначительных колебаний показателя каталазы (0,50±0,08 усл.единиц против 0,56±0,06 усл.ед. в контроле) (таблица 29). Это свидетельствует о большей степени преобладания ПОЛ над антиоксидантной защитой в периферической крови у старых крыс.
Введение мексидола взрослым крысам стабилизировало равновесие в системе «ПОЛ-АОЗ», что подтверждается снижением до нормы количества ТБК-РП и показателя активности каталазы. Кроме того мексидол частично восстанавливает содержание гемоглобина и среднюю ЭФПЭ у животных данной возрастной группы, но не оказывает существенного влияния на ретикулоцитоз.
У старых животных в условиях многократного введения им ТХМ мексидол оказывает корригирующий эффект на количество ТБК-РП, но не влияет на ретикулоцитоз и среднюю ЭФПЭ. Применение оксиметилурацила сукцината в условиях многократного введения ТХМ также оказало положительный корригирующий эффект у взрослых и старых крыс (таблицы 28, 29).
