Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 10
1.1. Место синдрома энтеральной недостаточности в патогенезе эндогенной интоксикации при перитоните 10
1.2. Значение перекисного окисления липидов в патогенезе синдрома эндогенной интоксикации и его коррекция 19
1.3. Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на биологический объект 30
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования 36
ГЛАВА III. Эндотоксикоз, энтеральная недостаточность и модификация липидного спектра тканей тонкой кишки в патогенезе острого перитонита 49
3.1. Показатели эндогенной интоксикации и интенсивности процессов перекисного окисления липидов в плазме крови при перитоните 49
3.2. Функциональное состояние тонкой кишки, перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита в динамике развития острого перитонита 53
3.3. Липидный спектр тканей тонкой кишки в условиях острого экспериментального перитонита 57
ГЛАВА IV. Влияние низкоинтенсивного лазерного облучения крови на ряд показателей гомеостаза при экспериментальном перитоните 62
4.1. Эффективность лазерного излучения в коррекции синдрома эндогенной интоксикации при перитоните 62
4.2. Изменение функционального состояния тонкой кишки и уровня липопероксидации при воздействии лазерного облучения 67
4.3. Модификация липидного спектра тканей тонкой кишки низкоинтенсивным внутрисосудистым лазерным излучением 72
ГЛАВА V. Антиоксидантная терапия в коррекции эндотоксикоза и сдвигов липидного спектра тканей тонкой кишки при перитоните 77
5.1. Влияние эмоксипина на ряд показателей эндотоксикоза и липопероксидации в плазме крови при остром перитоните 77
5.2. Оценка энтеропротективной активности антиоксидантной терапии в динамике развития острого экспериментального перитонита 82
5.3. Изменение липидного спектра тканей тонкой кишки при эндотоксикозе перитонеального генеза на фоне терапии эмоксипином .87
ГЛАВА VI. Эффективность комбинации лазерного и антиоксидантного воздействия в коррекции эндотоксикоза и энтеральной недостаточности 93
6.1. Динамика показателей токсичности и интенсивности процессов перекисного окисления липидов на фоне комбинированной терапии 93
6.2. Энтеропротективная активность сочетанного применения лазерной и антиоксидантной терапии при эндотоксикозе перитонеального генеза 98
6.3. Липидный спектр тканей тонкой кишки на фоне комбинированного использования лазерной и антиоксидантной терапии 103
Обсуждение 109
Выводы 125
Практические рекомендации 126
Список литературы 127
- Место синдрома энтеральной недостаточности в патогенезе эндогенной интоксикации при перитоните
- Показатели эндогенной интоксикации и интенсивности процессов перекисного окисления липидов в плазме крови при перитоните
- Эффективность лазерного излучения в коррекции синдрома эндогенной интоксикации при перитоните
- Влияние эмоксипина на ряд показателей эндотоксикоза и липопероксидации в плазме крови при остром перитоните
Введение к работе
Актуальность проблемы. В последнее десятилетие в отечественной и зарубежной медицине большое внимание уделяется синдрому эндогенной интоксикации, который признается универсальным звеном патогенеза при самых различных нозологиях как хирургического, так и терапевтического профиля и нередко выступает одним из главных факторов, определяющих тяжесть течения заболевания, а в ряде случаев - и его исход (Макарова Н.П., Коничева И.Н., 1995; Рябов Г.А. и др., 2002; Оруджев А.Г. и др., 2003; Власов А.П. и др., 2004).
Прогрессированию эндогенной интоксикации при перитоните в значительной мере способствует развитие синдрома энтеральной недостаточности, который включает в себя комплексное нарушение всех функций кишечника, связанное с воспалительным процессом в брюшной полости и операционным вмешательством (Васильев И.Т., 1994; Гельфанд Б.Р. и др., 1997; Власов А.П. и др., 2000; Теплий В.В., 2004). Несмотря на постоянное совершенствование существующих и разработку новых методов интенсивной терапии, летальность при перитоните, особенно при тяжелых формах, по данным разных авторов остается высокой (Марочков А.В. и др., 1995; Беляевский А.Д. и др., 1998; Плешаков В.П., 1999; Осочук С.С., 2002; Костюченко К.В., 2004).
В настоящее время одними из наиболее перспективных направлений в современной медицине являются воздействие на ткани и органы человека низкоинтенсивным лазерным излучением и применение антиоксидантов (Гейниц А.В. и др., 2003; Клебанов Г.И. и др., 2001, 2003; Пашков Б.А., 2003; Кузнецов Н.А. и др., 2005). Многочисленными экспериментальными исследованиями и клиническими наблюдениями доказан ряд положительных эффектов указанных агентов на уровне целостного организма и отдельных функциональных систем, что предоставляет возможность использовать данные методы в комплексной терапии острого перитонита с целью снижения выраженности эн-дотоксикоза и восстановления функций кишечника в послеоперационном периоде (Волотоская А.В. и др., 2003; Москвин СВ., 2003; Филимонов P.M., Му-саева О.М., 2003; Магомедов М.А., 2004).
Однако до настоящего времени максимальное использование всего потенциала лазерной и антиоксидантной терапии затрудняется недостаточно полным представлением о молекулярно-клеточных механизмах реализации их лечебного воздействия на живой организм (Клебанов Г.И. и др., 2000; Корепанов В.И., 2000). При этом установленная для данных методов активность благоприятной направленности в отношении большого числа различных функциональных систем организма позволяет предполагать, что реализация присущих указанным агентам положительных эффектов осуществляется через какой-либо широко представленный во всех органах и тканях метаболический процесс или структурный элемент, в качестве которого, вероятно, может выступать липидный матрикс клеточной мембраны.
В доступных для изучения литературных источниках мы не обнаружили публикаций, посвященных рассмотрению патогенетических основ влияния низкоинтенсивного лазерного излучения и антиоксидантов на функциональное состояние кишечника в раннем послеоперационном периоде при остром перитоните. Экспериментальные исследования в данном направлении могут способствовать повышению эффективности комплексного лечения заболеваний, сопровождающихся развитием эндогенной интоксикации и энтеральной недостаточности в рамках абдоминальной хирургической патологии.
Цель исследования
Изучить на модели перитонита влияние лазерной и/или антиоксидантной терапии на некоторые показатели функционального состояния кишечника.
Основные задачи
На основе показателей микроциркуляции, трофики, метаболизма тканей оценить в динамике острого гнойно-фибринозного перитонита функциональное состояние кишечника.
Исследовать качественный и количественный состав липидов, интенсивность процессов перекисного окисления липидов, состояние антиоксидантной защиты, активность фосфолипазы А2 в тканевых структурах кишечника при экспериментальном перитоните.
3. Оценить эффективность лазерной терапии в коррекции нарушений
функционального состояния кишечника при перитоните.
Изучить влияние антиоксидантной терапии (на примере эмоксипина) в коррекции энтерального синдрома при остром перитоните.
Выявить влияние комбинированной лазерной и антиоксидантной терапии на функциональное состояние кишечника при остром перитоните.
Научная новизна
В теоретическом отношении полученные фактические данные расширяют имеющиеся представления о механизмах реализации положительных эффектов лазерной и антиоксидантной терапии при остром перитоните.
Показано, что при внутрисосудистом облучении крови гелий-неоновым лазерным лучом дозой 0,1 Дж/см коррекция энтеральной недостаточности при тяжелых формах острого перитонита происходит недостаточно быстро.
Экспериментальными исследованиями выявлено, что антиоксидантная терапия при остром перитоните приводит к сравнительно быстрой регрессии функциональных изменений кишечника.
Установлено, что комбинированная терапия, включающая внутрисосуди-стое гелий-неоновое лазерное облучение крови и биоантиоксидант, обладает наибольшей энтеропротекторной активностью. Восстановление микроциркуляции и трофики тканей кишечника наблюдается уже в первые трое суток комплексной терапии.
Комбинированное использование лазерной и антиоксидантной терапии позволяет на ранних сроках послеоперационного лечения снизить выраженность эндогенной интоксикации, интенсивность процессов перекисного окисления липидов, фосфолипазную активность и улучшить липидный обмен в тканях тонкой кишки.
Доказано, что эффективность влияния исследованных агентов на функциональное состояние кишечника находится в корреляционной зависимости от их способности корригировать мембранодестабилизирующие явления в клеточных структурах органа.
8 Практическая ценность работы
Комплексное применение внутрисосудистого гелий-неонового лазерного облучения крови и антиоксидантной терапии обладает более ранней и выраженной энтеропротекторной активностью в коррекции энтеральной недостаточности при остром перитоните по сравнению с раздельным использованием указанных агентов.
Полученные данные могут служить теоретической и экспериментальной основой для дальнейшего совершенствования патогенетической терапии острого перитонита.
Положения, выносимые на защиту
При тяжелой форме острого перитонита эффективность применения гелий-неонового лазерного облучения крови или антиоксидантной терапии с целью коррекции энтеральной недостаточности ограничена.
Комбинированная терапия острого перитонита, включающая внутрисо-судистое гелий-неоновое лазерное облучение крови и биоантиоксидант, обладает наибольшей энтеропротекторной активностью.
Эффективность влияния исследованных агентов на функциональное состояние кишечника находится в корреляционной зависимости от их способности корригировать мембранодестабилизирующие явления в клеточных структурах органа.
Внедрение в практику
Результаты данного экспериментального исследования используются в учебном процессе на кафедре факультетской хирургии медицинского факультета Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева.
Апробация работы
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2004), Всероссийской научно-практической конференции «Общество, здоровье, лекарство», посвященной памяти проф. Я.В. Костина (Саранск, 2005), научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мор-
9 довского государственного университета «Медицинские проблемы жизнедеятельности организма в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2005), Международной научно-практической конференции «Студенческая медицинская наука XXI века» (Витебск, 2006), Огаревских чтениях - научно-практической конференции Мордовского государственного университета (Саранск, 2004 -2006).
Публикации. По материалам проведенного экспериментального исследования опубликовано 8 печатных работ, в том числе 1 статья в журнале, рецензируемом ВАК.
Место синдрома энтеральной недостаточности в патогенезе эндогенной интоксикации при перитоните
Несмотря на выдающиеся успехи современной медицины, перитонит остается наиболее тяжелой и грозной патологией брюшной полости, вопросы адекватного лечение которой окончательно не решены (Ханевич М.Д., и др., 2000; Осочук С.С., Коневалова Н.Ю., 2004; Петров В.П. и др., 2006). Новые методы интенсивной терапии позволяют достаточно эффективно бороться с патологическим процессом в брюшной полости, но летальность при этом, по данным разных авторов, остается высокой и варьирует в зависимости от распространенности патологического процесса в диапазоне от 9% до 67%, а в ряде случаев приближается к 100% (Давыдов Ю.А. и др., 1991; Гельфанд Б.Р. и др., 1992; Марочков А.В. и др., 1995; Беляевский А.Д. и др., 1998; Плешаков В.П., 1999; Осочук С.С., 2002; Костюченко К.В., 2004; Малков И.С. и др., 2007). В патогенезе перитонита в последние годы ведущая роль отводится синдрому эндогенной интоксикации, ответственной за возникновение метаболических нарушений при большинстве хирургических заболеваний брюшной полости (Ерюхин И.А., Шашков Б.В., 1995; Алиев С.А. и др., 2003; Власов А.П. и др., 2000, 2004; Петросян Э.А. и др., 2005; Ohmann С. et al., 1997).
Синдром эндогенной интоксикации представляет собой сложный полиэтиологический многофазный патологический процесс, характеризующийся накоплением в органах, тканях и биологических жидкостях организма промежуточных или конечных продуктов нормального или извращенного обмена веществ, а также продуктов клеточного реагирования (эндогенных токсических субстанций) выше физиологической нормы вследствие активации катаболиче-ских процессов на фоне недостаточности механизмов естественной детоксика-ции, постепенно прогрессирующий от стадии скрытого эндотоксикоза до развития полиорганной недостаточности, обусловленной возникновением дисбаланса всех систем регуляции гомеостаза и обменных процессов от клеточного до организменного уровня (Глумов В.Я. и др., 1994; Васильев И.Т., 1995; Макарова Н.П., Коничева И.Н., 1995; Ливанов Г.А. и др., 2003; Юдакова О.В., Григорьев Е.В., 2004).
Проблеме эндотоксикоза в последнее время посвящено большое количество экспериментальных исследований, клинических наблюдений и публикаций в отечественной и зарубежной научной литературе (Макарова Н.П., Коничева И.Н., 1995). Это связано с тем, что синдром эндогенной интоксикации является универсальным звеном патогенеза и главным фактором, определяющим тяжесть течения самых различных заболеваний (Мороз В.В. и др., 2000; Рябов Г.А. и др., 2002; Матвеев СБ. и др., 2003; Оруджев А.Г. и др., 2003; Small N. et al., 1995). Этиологические факторы и начальные патогенетические звенья данного синдрома крайне разнообразны, поэтому эндотоксикоз развивается при всевозможных заболеваниях, особенно, если одним из главных компонентов его выступает воспалительно-деструктивный процесс (Чаленко В.В., Кутушев Ф.Х., 1990; Тихомирова Н.И. и др., 2002; Werdan К., Pilz G., 1996).
Но, несмотря на активное изучение данного синдрома, вопросы патогенеза и стадийности его развития раскрыты в недостаточной мере. В последнее время в зарубежной литературе получила распространение новая концепция сущности рассматриваемого синдрома, согласно которой формирование синдрома эндогенной интоксикации представляется как возникновение системного воспалительного ответа (systemic inflammatory response syndrome - SIRS), являющегося исходом таких патологических процессов, как воспалительная тканевая деструкция и выраженная гипоксия тканей (Авдеева М.Г., Шубич М.Г., 2003; Bone R.S., 1995). Аналогичное представление сложилось и в отечественной медицинской литературе: синдром эндогенной интоксикации рассматривается как стадийный патологический процесс, имеющий полиэтиологическую природу на начальных этапах своего формирования, однако по мере прогресси-рования патогенетические механизмы приобретают однотипный и универсальный характер (Макарова Н.П., Коничева И.Н., 1995; Шано В.П. и др., 1998; Денисова О.В., Волкова И.А., 1999), приводящие в конечном итоге к развитию синдрома полиорганной недостаточности (Онищенко Н.А. и др., 2001; Алиев С.А. и др., 2003; Левит Д.А., Лейдерман И.Н., 2006).
В прогрессировании эндогенной интоксикации при перитоните значительную роль играет кишечник. Патологические изменения, происходящие в нем, связанные как с воспалительным процессом в брюшной полости, так и операционным вмешательством, приводят к развитию синдрома энтеральной недостаточности, который включает в себя комплексное нарушение всех функций кишечника: моторной, секреторной, всасывательной (Гельфанд Б.Р. и др., 1997; Теплий В.В., 2004). При этом частота возникновения данного синдрома при перитоните достаточно высока и составляет 45-85% (Васильев И.Т., 1994; Снигоренко А.С, Шевченко В.П., 2000).
Основными составляющими синдрома энтеральной недостаточности, которые способствуют прогрессированию эндогенной интоксикации, являются парез кишечника и повышение внутрикишечного давления, воспалительные изменения стенки тонкой кишки с нарушением в ней микроциркуляции, трофики, угнетением местного иммунитета и накоплением медиаторов воспаления, повышение проницаемости кишечной стенки на фоне изменения структуры микробной экосистемы и транслокации бактерий из просвета кишечника (Гельфанд Б.Р. и др., 1997; Чернов В.Н. и др., 1998; Теплий В.В., 2004; Fades P.L. et al., 1998; Aminori B.J., 2003).
С развитием паралитических нарушений кишечник наряду с брюшной полостью становится мощным дополнительным источником интоксикации, способствует ее прогрессированию, утяжелению состояния больного, нарастанию полиорганной недостаточности (Давыдов Ю.А. и др., 1991; Макарова Н.П., Коничева И.Н., 1995; Гельфанд Б.Р. и др., 1997). Нарушение моторной функции кишечника приводит к задержке продвижения кишечного содержимого, увеличению внутрикишечного давления, дисбалансу микрофлоры, в том числе к активации условно-патогенных штаммов, накоплению токсических соединений как микробного, так и ферментативного происхождения, что обусловлено ускорением бродильных и гнилостных процессов (Савельев B.C. и др., 1993; Хрупкий В.И., Алексеев С.А., 2004; Nieuwenhuijs V.B. et al., 1998).
Показатели эндогенной интоксикации и интенсивности процессов перекисного окисления липидов в плазме крови при перитоните
Образцы тканей тонкой кишки массой 200 мг гомогенизировали и ресус пензировали в стеклянных центрифужных пробирках при добавлении не менее 20 объемов хлороформно - метанольной смеси 2:1 по объему. Пробирки с плотно закрытыми пробками выдерживали на холоде в течение 1-1,5 часов для полной солюбилизации (Хиггинс Дж.М., 1990). Центрифугированием удаляли белок, а супернатант переносили в стеклянные центрифужные пробирки. С целью более полной экстракции липидов к осадку снова приливали хлороформно - метанольную смесь, центрифугировали и объединяли супернатанты. К полученному экстракту для удаления водорастворимых примесей добавляли 0,05 моль хлорида кальция (1:5 по объему) и тщательно перемешивали. Для разделения на две фазы эмульсию оставляли на ночь в холодильнике или центрифугировали. Из нижней хлороформной фазы получали препарат суммарных липидов, тогда как верхнюю фазу, представляющую собой смесь хлороформа, метанола и воды в соотношении 3:42:47, отбрасывали.
Для фракционирования суммарных липидов использовали метод тонкослойной хроматографии на силикагелевых пластинах. Разделение полярных фосфолипидов проводилось на хроматографических пластинах фирмы Merk на стеклянной основе, а нейтральных липидов — на силикагелевых пластинах для обращеннофазной тонкослойной хроматографии (Россия). Для удаления связанной воды и повышения разделительной способности силикагеля до начала фракционирования хроматографические пластины нагревали при температуре 120 С в течение 30-60 минут. Разделение липидов проводилось в прямоугольных хроматографических камерах, которые выстилались изнутри фильтровальной бумагой для лучшего насыщения внутреннего объема камеры парами растворителей.
Полученные образцы суммарных препаратов липидов растворяли в хлороформно - метанольной смеси (2:1 по объему) и наносили с помощью микрошприца фирмы «Hamilton» на расстоянии 1-1,5 см от краев пластины. При препаративном фракционировании раствор 2 мг липидов наносился в виде прямоугольной полосы, при аналитическом разделении нагрузка липидов на одну точку составляла 100-200 мкг.
Разделение фосфолипидов проводилось одномерно в системе растворителей хлороформ - метанол - ледяная уксусная кислота - вода, взятых в соотношении 60:50:1:4 по объему.
Для фракционирования нейтральных липидов хроматографические сили-кагелевые пластины элюировали в системе растворителей гескан - диэтиловый эфир - уксусная кислота, взятых в соотношении 90:10:1 по объему. Для обнаружения липидов на хроматограммах использовали 10% раствор фосфорномо-либденовой кислоты в этаноле. Пластины опрыскивали указанным раствором и нагревали при температуре 90 С в течение 10 минут, при этом происходило окрашивание липидных пятен в темно-синий цвет на желто-зеленом фоне.
Идентификация липидов на хроматограммах проводилась с использованием специфических реагентов и свидетелей, дающих цветные реакции. Для выявления фосфолипидов применяли универсальный реагент (Vaskovsky V.E. et al., 1975), приготовляемый из исходного реагента, который получали путем добавления к 10 г натрия молибденовокислого в 60 мл 4 н НС1 солянокислого гидразина в 14 мл 4 н НС1 с последующим нагреванием полученной смеси в течение 20 минут на водяной бане. После этого смесь охлаждали, приливали 14 мл концентрированной серной кислоты и доводили общий объем до 100 мл дистиллированной водой. Хроматографические пластины опрыскивали универсальным реагентом, содержащим один объем исходного реагента и семь объемов 7 н серной кислоты. При этом фосфолипиды окрашивались в сине-голубой цвет. Аминосодержащие фосфолипиды (ФЭА, ФС) обнаруживали путем опрыскивания хроматографических пластин 0,15% раствором нингидрина в ацетоне (нингидриновый реактив) при температуре 100 С (в парах кипящей воды). После такой обработки пластин аминосодержащие фосфолипиды окрашиваются в красно-фиолетовый цвет.
Идентификацию холинсодержащих фосфолипидов проводили с использованием реагента Драгендорфа (Marinetti Р., 1976), который готовили перед употреблением, смешивая 20 мл раствора-1, содержащего 1,72 г основного висмута азотнокислого в 100 мл 20% ледяной уксусной кислоты и 5 мл раствора-2, состоящего из растворенного в 25 мл воды 10 г йодистого калия. После опрыскивания хроматограмм холинсодержащие фосфолипиды окрашиваются в оранжевый цвет. ФИ обнаруживали с помощью реагента Шиффа (Кейтс М., 1975) и аммонийного нитрата, который получали путем смешивания 0,1 н азотнокислого серебра и 1 н аммиака в равных объемах. После опрыскавания реагентом хроматографические пластины нагревали при температуре ПО С. При этом ФИ окрашиваются в коричневый цвет.
Использовали денситометрический метод количественного определения липидов непосредственно на хроматограммах с предварительным их проявлением 5% фосфорнованилиновой кислотой в этаноле. Молекулярный анализ липидов на хроматограммах осуществляли на денситометре Model GS-670 (ВЮ-RAD, США) с соответствующим программным обеспечением (Phosphor Analyst/PS Software). Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики, достоверность различий оценивали с использованием критерия t Стьюдента. Вычисляли среднюю арифметическую выборочной совокупности (М), ошибку средней арифметической (т). В каждой серии определяли достоверность различия по отношению к исходному и контрольному значению. Оценка взаимосвязи осуществлялась посредством расчета коэффициента корреляции. Обработку полученных экспериментальных данных, а также подготовку текстовых, графических и иллюстративных материалов производили на CPU 1700 MHz «Celeron» с помощью офисного пакета программ «Microsoft Office ХР».
Эффективность лазерного излучения в коррекции синдрома эндогенной интоксикации при перитоните
При остром перитоните нами оценивались некоторые показатели эндогенной интоксикации, интенсивности ПОЛ, а также активности ФЛА2, каталазы и СОД в плазме крови на фоне проведения ежедневных сеансов лазеротерапии. Результаты оценивали по отношению к исходным данным и контрольной (I) группе (табл. 7).
ОКА в плазме крови на фоне лазерной терапии была ниже первоначальных значений на 17,2, 16,1 и 14,5 % соответственно (р 0,05) контрольным срокам послеоперационного наблюдения. При сравнении с контролем изменения показателя в опытной группе оставались статистически не значимыми. ЭКА после первого сеанса лазерной терапии была снижена относительно исходных данных на 77,5 % (р 0,05), после третьего сеанса - на 71,0 % (р 0,05), после пятого сеанса - на 52,3 % (р 0,05). К 3-м суткам после операции значения ЭКА стали выше контрольных цифр на 22,2 % (р 0,05), в конце наблюдения (5-е сутки) - на 37,2 % (р 0,05). На 1-е сутки наблюдения различия между значениями первой и второй группы были не достоверны.
Схожая динамика прослеживалась при оценке РСА. Отмечалось наибольшее его снижение по сравнению с исходными значениями в 1-е сутки послеоперационного периода на 72,1 % (р 0,05). На последующих этапах эта расчетная величина имела тенденцию к восстановлению, но оставалась ниже нормы на 64,7 % (р 0,05) на 3-й сутки и на 42,7 % (р 0,05) на 5-е сутки наблюдения. Достоверное повышение на 39,3 % (р 0,05) РСА относительно контроля было зафиксировано только на 5-е сутки послеоперационного периода (рис. 7).
Установлено, что ИТ был ниже контрольных измерений только на 5-е сутки после начала лазерной терапии на 36,1 % (р 0,05). Относительно нормы данный показатель повышался на 836,2 % (р 0,05) на 1-е сутки, на 589,4 % (р 0,05) на 3-й сутки и на 246,8 % (р 0,05) на конечном этапе наблюдения.
Оценка уровня МСМ 254 нм в плазме крови при условии воздействия внутрисосудистого лазерного облучения показала его нарастание относительно исходных данных в 1-е сутки послеоперационного периода на 248,4 % (р 0,05), на 3-й сутки - на 193,6 % (р 0,05), на 5-е сутки - на 132,3 % (р 0,05). Достоверное понижение указанного показателя по сравнению с контролем на 15,3 % (р 0,05) было получено на конечном этапе эксперимента. На ранних сроках наблюдения снижение было статистически не значимым.
Содержание МСМ длинноволновой фракции (А,=280 нм) в плазме крови было ниже аналогичных по срокам регистрации цифр контрольной группы после трех сеансов лазерной терапии на 19,1 % (р 0,05), а после пяти сеансов - на 19,8 % (р 0,05). Однократное лазерное облучение крови не позволило достоверно уменьшить количество токсических субстанций. Уровень МСМ 280 нм оставался повышенным в сравнении с нормой на 212,8, 138,5 и 97,4 % соответственно (р 0,05) контрольным сроками послеоперационного наблюдения.
Исследуя интенсивность ПОЛ при эндотоксикозе перитонеального генеза на фоне использования низкоинтенсивного лазерного облучения крови, было обнаружено достоверное снижение содержания ДК в плазме крови относительно контрольной группы только к концу наблюдения за животными на 13,7% (р 0,05). На начальных сроках эксперимента значения данного показателя оставались сравнимы с контролем (табл. 8). рность изменений относительно контрольных данных при р 0,05.
Установлено, что уровень ДК на 1-е сутки наблюдения по сравнению с исходными данными был выше на 227,9 % (р 0,05), на 3-й сутки - на 157,0 % (р 0,05), на 5-е сутки - на 83,5 % (р 0,05).
Содержание ТК в плазме крови на всем протяжении эксперимента было выше исхода на 207,4, 133,3 и 88,9 % соответственно (р 0,05) 1-м, 3-м и 5-м суткам послеоперационного периода. Концентрация ТК в плазме крови у животных опытной группы снижалась относительно контроля на 20,3 % (р 0,05) после трехкратного и на 21,5 % (р 0,05) после пятикратного применения лазерного облучения. Первая процедура лазерного облучения крови не приводила к достоверному снижению показателя относительно контрольных цифр (рис. 8).
Подобная динамика имела место для еще одного продукта ПОЛ - МДА, уровень которого в плазме крови животных второй группы превышал исходные данные на первом этапе исследования (1-е сутки) на 272,3 % (р 0,05), к середине эксперимента (3-й сутки) на 196,8 % (р 0,05), на конечном этапе - на 97,8 % (р 0,05). По отношению к контрольной группе отмечено статистически не значимое снижение этого показателя на 1-е сутки наблюдения и достоверное - на 3-й сутки на 16,4 % (р 0,05), на 5-е сутки на 18,6 % (р 0,05).
Активность ФЛА2 во второй экспериментальной группе животных была выше нормальных значений на 1-е сутки послеоперационного периода на 1329,3 % (р 0,05), на 3-й сутки - на 709,8 % (р 0,05), на 5-е сутки - на 158,5 % (р 0,05). Относительно контроля нами зафиксировано снижение этого показателя в опытной группе на 18,0 и 26,4 % соответственно (р 0,05) после 3-х и 5-ти сеансов лазерного облучения. На ранних этапах наблюдения (1-е сутки) изменение активности фермента было не достоверно. Ферментативная способность каталазы была ниже исхода во второй группе животных на 1-е сутки после санации брюшной полости на 56,9 % (р 0,05), на 3-й сутки - на 62,0 % (р 0,05) и на 5-е сутки - на 44,7 % (р 0,05). В сравнении с группой контроля активность данного фермента в опытной группе до конечного этапа наблюдения отличалась статистически не значимо.
Активность СОД после однократного лазерного облучения крови была ниже первоначальных цифр на 74,2 % (р 0,05), после трехкратного - на 64,7 % (р 0,05), после пятикратного - на 44,4 % (р 0,05). Значимые отличия по отношению к контролю были зафиксированы после пяти процедур лазерного облучения крови, когда активность фермента превысила значения первой группы на 45,7 % (р 0,05). На более ранних этапах значения показателя в опытной группе имели не достоверные отклонения от контрольных измерений.
Таким образом, результаты исследований показали, что включение в комплексную терапию острого гнойно-фибринозного перитонита внутрисосу-дистого лазерного облучения крови в дозе 0,1 Дж/см приводит к достоверному снижению выраженности эндогенной интоксикации и процессов липоперокси-дации по сравнению с контролем по большинству оцениваемых показателей в плазме крови лишь к конечному этапу наблюдения (5-е сутки). Некоторые показатели имели статистически значимые отличия по отношению к контрольной группе на 3-й сутки. Но следует отметить, что все определяемые показатели опытной группы оставались достоверно измененными в сравнении с нормой на протяжении всего эксперимента.
Влияние эмоксипина на ряд показателей эндотоксикоза и липопероксидации в плазме крови при остром перитоните
В настоящее время не вызывает сомнения тот факт, что синдром эндогенной интоксикации является одним из важнейших и определяющих звеньев патогенеза самых различных нозологии (Чаленко В.В., Кутушев Ф.Х., 1990; Рябов ГЛ. и др., 2002; Матвеев СБ. и др., 2003). В развитии и поддержании эн-дотоксикоза значительная роль отводится процессам ПОЛ, которые при заболевании трансформируются из физиологического механизма динамического поддержания гомеостаза клетки в мощный источник повреждения биомембран и функционально активных биомолекул (Владимиров Ю.А. и др., 2003; Келина Н.Ю. и др., 2004). Возникающие патологические изменения метаболизма не могут не отразиться на структурной организации клеточного и молекулярного уровней, а наличие факта патологической структурной перестройки влечет за собой изменение и нарушение нормальной функциональной активности того или иного элемента живого организма. Использование патогенетической терапии с целью разрыва сформировавшихся «порочных кругов» патогенеза и коррекции структурных перестроек представляется перспективным способом лечения и кратчайшим путем к нормализации нарушенного баланса в организме. В последние годы применение лазерной и антиоксидантной терапии получило широкое распространение практически во всех клинических отраслях современной медицины, причем полученные результаты позволяют надеяться на дальнейшее развитие и совершенствование данных направлений (Клебанов Г.И. и др., 2001, 2003; Пашков Б.А., 2003). В свете вышеизложенного целью нашей работы явилось изучение влияния лазерной и/или антиоксидантной терапии на некоторые показатели функционального состояния кишечника при экспериментальном перитоните. В заключительной главе диссертационного исследования для обсуждения нами вынесены следующие вопросы. 1. Функциональное состояние кишечника в динамике экспериментального острого гнойно-фибринозного перитонита на основе ряда показателей микроциркуляции, трофики и метаболизма в тканевых структурах органа. 2. Энтеропротекторная активность лазерной терапии при остром экспериментальном перитоните. 3. Эффективность применения антиоксиданта эмоксипина в коррекции энтерального синдрома при перитоните. 4. Воздействие комбинированной лазерной и антиоксидантной терапии на функциональное состояние кишечника в условиях острого экспериментального перитонита. В процессе исследования животные были разделены на четыре группы по виду проводимой послеоперационной терапии: I группа - традиционная (антибактериальная и инфузионная); II группа - традиционная и лазерная (внутрисо-судистое лазерное облучения крови гелий-неоновым лазером в дозе 0,1 Дж/см ) терапия; III группа - традиционная и антиоксидантная (эмоксипин в дозе 10 мг/кг внутривенно ежедневно однократно) терапия; IV группа - традиционная и комбинированная терапия (лазерное воздействие и введение эмоксипина в указанных выше дозах). Во всех группах изучался в динамике развития острого экспериментального перитонита ряд показателей, характеризующих выраженность эндогенной интоксикации, интенсивность ПОЛ, состояние антиоксидантной системы, активность фосфолипазы Аг, а также качественный и количественный состав липидов в тканях тонкой кишки. Учитывая, что наиболее быстрые и выраженные функциональные и метаболические изменения с участием компенсаторного резерва самого организма, направленные на восстановление имеющихся патологических сдвигов и определяющих дальнейшее течение и исход заболевания, происходят на ранних сроках послеоперационного лечения, регистрация оцениваемых нами показателей проводилась на 1-е, 3-й и 5-е сутки после санации брюшной полости.
Анализ экспериментальных данных, полученных в контрольной группе, показал, что в условиях выбранной модели перитонита самые значительные отклонения от исходных данных по большинству оцениваемых показателей, характеризующих выраженность эндогенной интоксикации, были получены на 1-е сутки послеоперационного периода, когда на фоне снижения ЭКА в 4,8 и PCA в 3,8 раза относительно нормы значение ИТ превышало первоначальные цифры в 10,0 раз, содержание МСМ 254 нм и МСМ 280 нм в плазме крови - в 3,9 и 3,4 раза соответственно. ОКА снижалась (на 21,3 %, р 0,05) до 3-х суток наблюдения. Такое существенное изменение названных показателей свидетельствует о том, что при остром экспериментальном перитоните развивается выраженный синдром эндогенной интоксикации, причем в его формировании в равной мере принимают участие как гидрофобный, так и гидрофильный компоненты токсичности. На более поздних сроках наблюдения (3-й и 5-е сутки) на фоне проведения антибактериальной и инфузионной терапии была зарегистрирована определенная тенденция к восстановлению первоначальных значений оцениваемых показателей, однако обращала на себя внимание замедленность процессов нормализации.
Схожая динамика была получена нами и при оценке интенсивности ПОЛ. На фоне значительного увеличения содержания продуктов ПОЛ (ДК, ТК, МДА) как в плазме крови, так и в тканях тонкой кишки регистрировалось угнетение ферментного звена антиоксидантной системы, что выражалось в снижении активности СОД и каталазы. Несомненно, что между развитием эндогенной интоксикации и ПОЛ существует тесная патогенетическая связь, способствующая их взаимному усилению и поддержанию, реализующаяся посредством формирования на основе нарушенного обмена веществ целого ряда «порочных кругов». В данном случае очевиден факт дисбаланса со значительным преобладанием процессов ПОЛ над контролирующей функцией системы антиоксидантной защиты.
Известно, что гипоксия и сопутствующая ей инициация ПОЛ выступает одним из механизмов активации ФЛА2 (Владимиров Ю.А., 1987, 2002; Александрова А.Е., 2005; Chilton F.H., 1996). Оценка активности данного фермента показала, что в условиях экспериментального перитонита отмечается значительное ее нарастание. Данный показатель максимально превышал исходные цифры максимально на 1-е сутки наблюдения: в плазмы крови - в 15,5 раза, а в тканях тонкой кишки - в 2,4 раза. Активация ФЛА2 и интенсификация ПОЛ выступают как взаимодополняющие факторы повреждения биомембран. Так ФЛАг, осуществляя гидролиз фосфолипидов биомембран, способствует изменению пространственной структуры липидного бислоя и повышению его доступности для агрессии со стороны свободных радикалов, которые осуществляют перекисную модификацию мембранных липидов (Бурлакова Е.Б. и др., 1992; Дубинина Е.Е., 2001). Подобные метаболические изменения, выражающиеся в чрезмерной активации ПОЛ и ФЛАг, получают структурное закрепление на молекулярном уровне в виде модификации липидного матрикса клеточных мембран.
