Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 .Введение 9
1.2. Гены белков метаболизма и транспорта липидов . 9
1.2.1 .Ген аполипопротеин Е. 11
1.2.2.Ген липопротеинлипазы. 14
1.2.3 . Ген белка переносчика эстерифицированного холестерина . 17
1.3. Гены белков свертывающей системы крови. 18
1.3.1 .Ген коагуляционного фактора II 19
1.3.2. Ген фактора V.Лейденовская мутация 22
1.3.3.Ген метилентетрагидрофолатредуктазы 24
1.3.4.Ген ингибитора активатора плазминогена 27
1.4. Ген ангиотензинпревращающего фермента 28
1.5. Ген синтазы окиси азота 30
1.6. Заключение 31
Глава 2. Материал и методы исследования 33
2.1. Объект исследования 33
2.2.Критерии включения в исследование 33
2.3. Критерии исключения из исследования 33
2.4. Методы клинического исследования 33
2.5. Методы генетического исследования 38
2.6. Статистический анализ 43
Глава 3. Результаты клинического обследования 45
3.1. Распределение больных по группам 45
3.2. Факторы риска ИБС 46
Глава 4. Результаты генетического исследования 53
4.1. Анализ ассоциаций полиморфного маркера гена АРОЕ с ИБС 53
4.2. Анализ ассоциаций полиморфного маркера S447 LPL с ИБС 55
4.3. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров TaqlB и I405A гена СЕТР 56
4.4. Анализ ассоциаций генов метаболизма и транспорта липидов с факторами ИБС: курение, ожирение, отягощенная наследственность 58
4.6. Анализ ассоциаций G/T полиморфизма гена эндотелиальной синтазы оксида азота с ишемической болезнью сердца 62
4.6. Анализ ассоциаций полиморфного маркера гена eNOS и факторов риска ИБС (курение, ожирение, отягощенная наследственность). 63
4.7. Анализ ассоциаций I/D полиморфизма гена ангиотензин- превращающего фермента с ИБС .- 64
4.8. Гены-кандидаты белков свертывающей системы крови и анализ ассоциаций полиморфных вариантов с ИБС. 66
Глава 5. Обсуждение 70
Выводы 80
Практически рекомендации 81
Список литературы
- Гены белков метаболизма и транспорта липидов
- Ген белка переносчика эстерифицированного холестерина
- Распределение больных по группам
- Анализ ассоциаций полиморфного маркера гена АРОЕ с ИБС
Введение к работе
Одним, из основных направлений в здравоохранении является разработка эффективных мер профилактики заболеваний, на долю которых приходится наиболее высокий процент инвалидизации и смертности среди населения большинства высокоразвитых стран [Оганов< Р.Г, 1999;Оганов Р.Г.,2000].
В первую очередь к ним относятся ишемическая болезнь сердца' (ИБС).
В общей структуре смертности от ИБС лица моложе-65 лет составляют 25% среди мужчин и 9% среди женщин.
По* эпидемиологическим данным, до* 50% всех случаев ранней ИБС в популяции, приходится^ на 2-6% семей с положительным семейным анамнезом, преждевременной* ИБС. Наличие ранней ИБС у одного родственника первой, степени родства увеличивает риск развития- ИБС у мужчин 20-39'лет в4 раза, а у двух и более родственников'В< 12 раз [National Cholesterol Education Program, 1994; Hunt S.С, 1986].
Давно известно, что факторами риска (ФР)> развития * ИБС являются курение, ожирение, артериальная* гипертензия^ (АГ), гиперхолестеринемия* (ГХС), малоподвижный образ жизни, сахарный диабет (СД). В то же время в последнее время появились работы, свидетельствующие, что наряду с факторами внешней. среды существует также генетическая предрасположенность к этому заболеванию.
За последнее десятилетие был обнаружен целый ряд мутаций, приводящих к раннему развитию ИБС и-ИМ. На сегодняшний день* описано * более 700 различных мутаций гена рецептора липопротеина' низкой» плотности (РЛПНП), изменяющих аминокислотную- структуру белка, в результате которых нарушается взаимодействие этого рецептора с ЛПНП и<> липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) [Hobbs Н.НД992; Мандельштам М.Ю, 2002]. Это- является причиной семейной гиперхолестеринемии, что приводит к раннему развитию ИБС и ИМ.
Мутация гена аполипопротеина В (АРОВ) 3500Arg—>Gln приводит к замене аминокислоты аргинин на глутаминовую кислоту вблизи от центра связывания с РЛПНП. Это также нарушает взаимодействие рецептора с
, ЛПНП- и приводит к такой же клинической картине что и мутации гена РЛПНП: ГХС и раннему развитию ИБС и ИМ [Hixson J.E, 1992]. Однако, эти мутации крайне редки: они встречаются с частотой не более чем 1 случай-на 500-700 человек и поэтому не могут объяснить генетические основы-этих
' заболеваний.
В ходе расшифровки генома человека были выявлены многочисленные полиморфные варианты дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), когда у разных людей в определенном положении находятся' разные нуклеотиды. Такие изменения» также являются? мутациями, однако, поскольку они расположены в участках, некодирующих белки, либо они не нарушают аминокислотную структуру белков, их принято называть, однонуклеотидными полиморфизмами или SNP. На сегодняшний- день в геноме человека обнаружено более 1 000 000 SNP [bander ES,2001]J Отличающиеся варианты ДНК по определенному положению называют аллелями. Для сравнительного анализа проводят типирование SNP, у которых частота реже встречающегося аллеля превышает 5%. Хотя SNP'h не меняют аминокислотную структуру белков, они могут изменять-, регуляторные участки генов* и, таким образом, определять количество соответствующего белка, либо могут оказаться сцепленными с другими» функционально-значимыми мутациями, которые пока остаются^ неизвестными.
Для выявления молекулярно-генетических факторов, определяющих предрасположенность к ИБС, анализируют SNP, расположенные внутри* и/или вблизи генов, с потенциально наибольшим вкладом в патогенез, заболевания:
Заболеваемость и смертность от ИБС характеризуется этнографической неоднородностью. Было показано, что на формирование
наследственной предрасположенности к развитию заболевания оказывает влияние генетический фон популяции. Поэтому необходимо исследовать полиморфизмы ДНК кандидатных генов для каждой, отдельно взятой популяции.
Цель исследования:
Изучить у больных ишемической болезнью сердца ДНК-полиморфизмы - некоторых генов-кандидатов с целью оценить их роль в качестве маркеров развития заболевания:
Задачи исследования:
- Г. Исследовать распределение частот генотипов полиморфных
маркеров генов-кандидатов ИБС: гена аполипопротеинаЕ (АРОЕ), гена
липопротеинлипазы' (LPL) , гена белка переносчика эстерифицированного
холестерина (СЕТР), гена синтазы окиси азота (eNOS), гена
метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), гена фактора 5 (F5), гена
протромбина (F2), гена ингибитора активатора плазминогена (PAI-1), гена
ангиотензинпревращающего фермента (AGE), у русских' мужчин,
проживающих в Москве и Подмосковье, страдающих ИБС и в^контрольной! :
группе; ;-
Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов-кандидатов ИБС с содержанием липидов в сыворотке крови (общий холестерин (ОХС), липопротеинов высокой платности (ЛПВП), ХС ЛПНП, ТГ);
Провести анализ ассоциаций полиморфных вариантов1 генов-кандидатов ИБС с показателями свертывающей системы крови (фибриногену протромбиновый индекс (ПИ), активированное частичное трмбопластиновое время (АЧТВ));
Провести анализ ассоциаций полиморфных маркеров > генов-кандидатов ИБС с факторами риска заболевания (курение, ожирение, отягощенная наследственность).
Научная новизна: У русских мужчин, проживающих в Москве и Подмосковье, с помощью современных методов исследования, охарактеризованы частоты генотипов полиморфных вариантов генов-кандидатов одновременно нескольких систем: системы метаболизма и транспорта липидов, свертывающей системы крови, ренин-ангиотензин-альдостероновой системы, синтазы окиси азота. Проведен анализ ассоциаций полиморфных вариантов изучаемых генов-кандидатов с риском развития ИБС, а также с показателями липидного спектра и свертывающей системы крови. Результаты настоящего исследования могут служить отправными данными для дальнейшего изучения и поиска генетических факторов риска ИБС.
Практическая значимость работы.
Анализ ассоциаций полиморфных маркеров генов-кандидатов' ИБС может быть использован для выявления лиц, угрожающих по развитию данного заболевания и последующего проведения донозологической профилактики.
Данные об ассоциациях полиморфных маркеров генов-кандидатов ИБС можно рекомендовать в практике медико-генетического консультирования для определения риска развития сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений;
3. Информация об ассоциациях полиморфных вариантов генов-
кандидатов ИБС может быть использована в области генетической
эпидемиологии, а также в популяционной генетике.
Гены белков метаболизма и транспорта липидов
Известно, что липиды выполняют в организме многие структурные и метаболические функции. Холестерин и фософолипиды составляют основу клеточных мембран, жирные кислоты являются важнейшим источником энергии, особенно для мышечных тканей; холестерин является предшественником стероидных гормонов, некоторых витаминов и ряда других биологически активных веществ [Климов А.Н., 1995]. Липиды переносятся между тканями и органами в составе особых белковых-липидных комплексов-липопротеинов, так как нерастворимость в воде исключает их транспорт в плазме в свободном виде. Выделяют четыре класса липопротеинов: хиломикроны (ХМ), липопротеины, высокой плотности (ЛПВП), липопротеины низкой . плотности (ЛПНП), липопротеины очень низкой плотности.
Основными компонентами ХМ и ЛПОНП являются триглицериды (ТГ), ЛПНП-холестерин, ЛПВП-фосфолипиды. На долю апобелков приходится от 1% в хиломикронах и до 60% в некоторых ЛПВП. Некоторые апобелки являются постоянной частью липопротеинов, в то время; как;другие могут переносится на другие л ипопротеины- [Климов А.Щ 1995; Ганелина ШЕ.,2004] Известно;, что липиды выполняют в организме многие структурные и метаболические функции. Холестерин и фософолипиды : составляют основу клеточных мембран, жирные кислоты являются; важнейшим: источником энергии, особенно для: мышечных: тканей;: холестерин является- предшественником стероидных гормонов; некоторых витаминов и: ряда: других биологически: активных веществ. Липиды обеспечивают теплоизоляцию; скапливаясь в, подкожно-жировой; ткани .и; вокруг определенных органов;[Климов;А.Н», 1995] ЛипидныЙ!обмен или. катаболизм: липи ДОБІ включает в; себя; транспорт липидов; поглощения, и внутриклеточную утилизацию,, синтез; липидов- de novo; деградацию; и экспрессию.
Процессы; метаболизма; липидов; требуют ряда? белков! с различными; функциями. Эти белки; с: их генами также являются компонентами ; системы метаболизма; липидов. ЛПНИ: переносят 60-70% всего» ХЄ крови; онш содержат один апобелок, апоВй00: ЛИВИ! переносят 20-30%t всего; XG и; содержат апобелкш Alt и АШЛП0НИ богаты TF и переносят 1.0=.15% всего?.. XG . В их состав входят апобелки С (GI, ЄН; СШ) шАРОЕ. Четвертый класс: липидов; хил омикроны?, также богаты TF. Они синтезируются- в; тонком кишечнике из; пищевых жиров появляются в крови после употребления жиросодержащейпищи; Хиломикроны содержат апобелокano капиллярах мышечных и жировых; тканей: TF из ЛП0НН гидролизуются ферментом ЛИЛ;, что приводит к появлению вначале:ЛИПП; а затем: ЛІШИ. ЛИНИ циркулируют в; кровеносном русле: и посредством апоВЮО связываютсяа с BZE (ЛПНП)г рецепторами? на поверхности: гепатоцитов: ЛПНИ: попадают в гепатоциты и; связываясь- с рецепторами подвергаются деградации в лизосомах. Из холестериновых остатков формируются клеточный холестериновый пул. Повышение в гепатоцитах уровня ХС угнетает транскрипцию генов В/Е (ЛПНП)-рецепторов и ЛПНП остаются в плазме: Снижение уровня ХС в гепатоцитах стимулирует транскрипциютенов В/Е (ЛПНП) рецепторов.
Хиломикроны, секретируемые энтероцитами, как и ЛПОНП, секретируемые печенью подвергаются действию ЛПЛ, которые гидролизуют ТГ. Но этот процесс не приводит к формированию ЛПНП и остатки ХМ удаляются из кровеносного русла печенью.
Человеческий АРОЕ является- генетически полиморфным белком, который входит в состав хиломикронов и ЛПОНП, инициируя их захват и удаление через взаимодействие со специфическим рецептором на поверхности клеток печени. АРОЕ участвует в. активации некоторых липолитических ферментов (липазы печени, липазы липопротеинов и. лецитин-холестерин ацилтрансферазы). АРОЕ из всех апобелков является; единственным белком, синтез которого осуществляется многими дифференцированными клетками (макрофагами, клетками печени, почек, нервной-системы [Климов А.Н., 1995]. Примером изменения взаимодействия мутантного1 АРОЕ с рецепторами на поверхности клеток печени может служить механизм нарушения лйпидного обмена из-за изменения структуры, молекулы липопротеина.
Эффективность взаимодействия АРОЕ с рецепторами- определяется уникальным строением белковой молекулы. Выделяют три изоформы АРОЕ: Е2, ЕЗ; Е4, которые определяются аллельным полиморфизмом гена АРОЕ, обусловленным парной комбинацией аллелей Е2, ЕЗ или Е4 (таблица №1) [Zannis V.I.,1981] Частота выявления аллелей гена АРОЕ в Фремингемскомі исследовании среди 2457 здоровых субъектов составила: Е2-8%, ЕЗ-78%, Е4-14% [Schaefer E.L., 1994]. Было установлено, что аллель ЕЗ является.самым-часто встречающимся во всей популяции людей и его частота всегда отрицательно коррелирует с частотой аллеля Е4 [Schaefer EX., 1999].
Ген белка переносчика эстерифицированного холестерина
СЕТР является специфическим белком, который переносит липиды плазмы и катализирует реакцию обмена эстерифицированного холестерина (ЭХС) и ТГ между липопротеинами [Lagrost L.,1994]. В результате такого обмена определенная масса ТГ переносится из ЛПОНП к ЛПНП и ЛПВП, а эквивалентная масса ЭХС перемещается из ЛПНП и ЛПВП к ЛПОНП. Скорость переноса ЭХС зависит от целого ряда факторов и одним из главных факторов является липидный состав акцептора. Стимулирующее влияние на этот процесс оказывают содержащиеся в липопротеинах неэстерифицированные желчные кислоты [Lagrost L,1992].
СЕТР в своем составе имеет 476 аминокислот и 4 локуса гликозилирования. Гидрофобность СЕТР превосходит таковую всех известных аполипопротеинов. Было установлено, что связывающая с липидами область находится в С-концевой части молекулы [Swenson Th.L,1989]. Однако для проявления транспортной активности белка необходимо участие всей молекулы, поскольку мутации на участках удаленных от С-конца, заметно снижали ее [Wang S,1991].
Описаны следующие полиморфные маркеры гена СЕТР: TaqlB, С-629А, I405V. Наличие полиморфизма гена СЕТР ассоциируется с уровнем липопротеинов, в частности с концентрацией ЛПВП. Полиморфизм гена СЕТР в первую очередь относится к полиморфному маркеру TaqlB. Люди с аллелем В1 имеют большую концентрацию СЕТР и сниженную концентрацию ЛПВП. Уровень СЕТР повышен у лиц с двумя копиями аллеля В1 (В1В1) и снижен у лиц с генотипами В2В2. J. Kuivenchoven и соавторы [Kuivenchoven J.A.,1998] наблюдали зависимость ассоциации полиморфизма TaqlB гена СЕТР с прогрессированием коронарного атеросклероза; носители генотипа В1В1 имели большие концентрации СЕТР, низкие концентрации ЛПВП и у них отмечалось раннее развитие коронарного атеросклероза. Также было показано, что активность СЕТР снижена и у мужчин и у женщин, имеющих аллель В2. Концентрация ЛПВИ у мужчин и у женщин была низкой в группе с генотипом В1В1 [Ordovas J.M,2000].
В исследовании WOSCOPS также была найдена ассоциация между генотипом В2В2"и сердечно-сосудистыми эпизодами. У гомозигот с аллелем В2В2 были отмечены повышение уровня ХС ЛПВП и снижение сердечнососудистых случаев на 30% по сравнению с гомозиготами по ВІВ 1 [Freeman D.G.,2000]. Исследования японской популяции подтвердили результаты J. Kuivenchoven, описавшего случаи семейной наследственной-недостаточности. СЕТР. Дефицит СЕТР является потенциально антиатерогенным и может быть ассоциирован с увеличением продолжительности жизни [Inazu A., Brown M.LJ990; Inazu A.Jiang X.C.J 994]. Однако, существуют исследования, которые- показывают, что у субъектов с низкой концентрацией GETP и высокой концентрацией ЛПВП повышен риск развития ИБС [Agerholm-Laursen В., 2000; Bruce С., 1998; Tenkanen Н.,2001].
Известен также другой полиморфный маркер гена СЕТР, который локализуется в интроне и представляет собой функциональную мутацию-С-629А. Данный, полиморфный маркер находится в неустойчивом сцеплении с функциональным полиморфизмом в промоторной области гена, и СЕТР и очень важен для активности транскрипции [Dachet С.,2000].
Г.З.Гены свертывающей системы крови
Свертывание крови, в основе которого лежит превращение-фибриногена в фибрин, происходит в результате цепи последовательных превращений более чем 10 различных белков, составляющих в совокупности систему свертывания крови. Особенность процесса состоит в том, что он включает в себя? процессы активации проферментов. В этом каскаде ферментативных реакций активированная форма одного фактора свертывания катализирует активацию следующего. В силу каталитической природы процесса факторы, действующие на начальных этапах, требуются в очень малых количествах. Их эффект увеличивается многократно благодаря большому количеству последующих этапов, что обеспечивает в итоге быструю ответную реакцию на повреждение сосуда.
Существует два пути, по которым может развиваться процесс свертывания крови: 1) внутренний путь активации свертывания крови , 2) внешний путь активации свертывания крови . Рисунок № 1. Свертывающая системы крови внешний механизм са т/фс альтернативмыи механизм фибриноген внутренний механизм калликреин- т прекалликреин
Нарушение функции системы гемостаза, ведущие к повышению внутрисосудистого свертывания крови и тробмообразованию, является одним из важнейших звеньев патогенеза ИБС. Именно поэтому изучение генов факторов свертывающей системы крови представляет огромный интерес.
Наиболее часто упоминаются ген протромбина (F2), ген фактора V(F5), ген метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), ген ингибитора активатора плазминогена(РА1-1).
Ген коагуляционного фактора II (F2)
Протромбин является предшественником тромбина, ключевого фермента гемостаза с про- и антикоагулянтным, а также антифибринолитическим эффектом. К основным функциям протромбина можно, отнести следующие:: расщепление фибриногена до фибрина и фибринопептидов А+В; активация? факторов VIIIc, V, XIII,. имеющих прокоагулянтный эффект; активация протеина Є, который инактивирует Va и Villa факторы; и тормозит свертывание; усиление- агрегации тромбоцитов: [ЗубаировД.М(, 1978].
Вь 1983 году была клонирована- кДНК. протромбина. - коагуляционного фактора: 1 человека. Клонированная кДНК человека длиной; 2005 пар оснований содержала информацию для : кодирования? 36і аминокислот лидерной последовательности, 579 аминокислот зрелого- пептида ш У некодирующую область, из 97 пар оснований и поли-А конца из. 27 нуклеотидов.
Распределение больных по группам
Фактор риска - это любая склонность или характерная черта, которая может использоваться для прогнозирования вероятности развития данного заболевания у индивидуумов [BaesslerR.,2001]. Фактор риска может быть причинным агентом, но не обязательно единственным [Danesh J, 2000]. Эпидемиологическое популяционное исследование, проведенное в, Санкт-Петербурге показало, что лишь 9,6% лиц из исследуемой популяции не имеют ни одного ФР ИБС, 47,9% - один- ФР, 34,4%) - два ФР, 8,0%) -три ведущих ФР ИБС [Константинов В.О.,1994]. Факторы риска атеросклероза и ИБС подразделяются следующим образом: - не поддающиеся изменению - пол, возраст, наследственность - корригируемые - АД, курение, несбалансированное питание, ожирение, недостаточная физическая активность - потенциально или частично корригируемые - дислипоротеидемия, СД, психо-эмоциональное напряжение [Ганелина И.Е., 2004; Thompson G., Wilson Р., 1994; Yusuf S.et al 2004].
Действие любого ФР резко усиливается при их комбинации между собой, т.е.патологическое влияние двух умеренно выраженных ФР может оказаться сильнее, чем отрицательное действие одного из этих факторов, даже если в количественном отношении этот единственный ФР выражен незначительно [ Константинов О.В, 1997]
В нашем исследовании проведено сравнение обследуемых групп больных по таким показателям, как возраст, ИМТ, курение, семейная история ИБС.
Ожирение: Согласно многочисленным эпидемиологическим исследованиям, а также данным американских страховых компаний, лица с повышенной массой тела в среднем живут меньше и умирают от сердечнососудистых катастроф чаще, чем лица с нормальным весом [Аметов А., Демидова Т., Целиковская А., 200 Г; Dorn J.M.,1997]. Признание всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) ожирения неинфекционной эпидемией XXI века требует активного внимания к этой проблеме.
Для каждого пациента рассчитывали индекс массы тела (ИМТ), который сегодня получил наибольшее распространение в научных исследованиях и клинической практике. Для того, чтобы оценить выраженность ожирения, мы вычисляли индекс Кетле по формуле: индекс Кетле= Вес(кг)/рост(м2).Согласно классификации ВОЗ, по индексу Кетле можно определить весовую категорию пациента: недостаточная масса тела -менее 18,5 кг/кв. м, нормальная - 18,5-24,9 кг/кв. м, избыточная - 25-29,9 кг/кв. м," далее - ожирение. Ожирение I степени - 30,0-34,9 кг/кв. м, II степени - 35,0-39,9 кг/кв. м, III степени - 40 кг/кв. м и более.
Курение: Прямая корреляционная зависимость между курением и распространенностью ИБС обнаружена во многих странах мира. Установлен положительный эффект прекращения курения на частоту возникновения ИБС. Согласно эпидемиологическим данным, у постоянно курящих по сравнению с некурящими риск смерти от ИБС на 70% выше и в -4 раза превышает риск нефатальной ИБС. Механизм влияния курения на развитие коронарного атеросклероза за последние десятилетие подвергался интенсивному изучению, особенно связи с данными о роли дисфункции эндотелия в патогенезе ИБС [McBride РЕ, 1992]. Кроме никотина и окиси углерода компоненты табака оказывают токсическое влияние на сосудистый эндотелий. Через специфические никотиновые рецепторы и периферические хеморецепторы стимулируются ганглии симпатической нервной системы (СНС) с усилением выхода катехоламинов из окончаний сосудистых нервов. Активация СНС непосредственно влияет на сердечную деятельность, увеличивая потребность миокарда в кислороде. Курение увеличивает способность эндотелия адгезировать моноциты и лейкоциты, участвующие в процессах атерогенеза [Ганелина И.Е., 2004; McBride РЕ, 1992]. Известна роль курения в нарушении липидного обмена, развитии спазма коронарных сосудов, а также в нарушениях системы свертывания крови и тромбообразования. Курение усиливает тромбогенные свойства крови и может быть непосредственной причиной развития тромбоза в различных сосудистых областях, в том числе в коронарных сосудах [Law М., 1995; Zevin S.et al., 2001]. Действие никотина на коронарные артерии сложно и связано с влиянием на уровень системного артериального давления, на внутрисердечную гемодинамику-учащение сердцебиения, увеличение ударного объема, увеличение работы левого желудочка, налипидный обмен, углеводный обмен; обмен катехоламинов, свертываемость» крови [Keil U.,2000]. Выделяемы при выкуривании сигарет угарный газ (СО) оказывает отрицательное влияние на состояние сосудистой стенки и эндотелия. ЛПНП при этом становятся более чувствительными к последующей окислительной модификации, оказывают токсическое влияние на клетки эндотелия, увеличивают пролиферацию гладкомышечных клеток, тромбоксана А2 и фибриногена, нарушают фибринолитическую активность крови. Курение снижает уровень ХСЛПВП на 12 %, влияет на метаболизм миокарда. Смертность мужчищ выкуривающих 10 сигарет вдень, на 18% больше, а. женщин на 31% больше, чем у некурящих [Keil U.,2000].
Анализ ассоциаций полиморфного маркера гена АРОЕ с ИБС
FeH эндотелиальный NO-синтетазы расположен на хромосоме 7q35-36; Нами был изучен полиморфизм; E298D мононуклеотидная замена в экзоне 7, приводящая к аминокислотной- замене глутаминовои кислоты на-аспарагиновую кислоту.
Изучение полиморфного маркера гена eNOS показало; что при сравнении основной группы (группа больных ИБС) с контрольной группой (здоровые лица) прослеживаются различия по частотам- генотипов. В основной группе достоверно чаще встречается генотип eNOS Т/Т (р=0,02), при этом относительный риск развития;ИБС повышен в;2,5 раза (ОР=2,29; 95%ДИ [ 1,13-4,34]: Генотип eNOS G/T встречается также значительно чаще в основной группе, чем в контрольной группе (р=0,02;ОР=1,13, 95%ДИ [0,24-1,38]. Генотип eNOS G/G чаще: встречается В: контрольной группе, пршэтом снижени относительный риск развития ИБС (р=0;05, ОР 0,20; 95% ДИ [0,18-0-48] Данные представлены в таблице №191
При сравнении распределения частоты генотипов между больными перенесшими инфаркт миокарда и больными, без инфаркта миокарда, оказалось, что генотип GT достоверно чаще встречался у больных ИМ (49,4% против 28;6 % соответственно; р=0,01), по сравнению с группой больных без ИМ. Данные представлены в таблице № 20.
Таким образом, генотип GT и ТТ достоверно чаще встречаются в основной группе; генотип GT достоверно чаще встречается в группе пациентов, перенесших ИМ.
В ходе нашего исследования, оказалось, что-среди всех курящих мужчин, вошедших в исследование, достоверно чаще встречается генотип eNOS Т/Т при сравнении с распределением генотипов у некурящих мужчин. Данные представлены в таблице № 21. Таблица № 21. Сравнение частот распределения аллелей гена eNOS у курящих и некурящих мужчин
При анализе ассоциаций генотипов гена eNOS с курением среди курящих и некурящих пациентов основной группы, оказалось также, что» у лиц, страдающих ИБС достоверно чаще встречается генотип eNOS Т/Т (38,9% против 11,6% соответственно; р=0,03). Данные представлены в таблице № 22.
Таким образом, можно предположить , что сочетание такого фактора риска как курение и наличие генотипа Т/Т гена eNOS может увеличивать риск развития ИБС.
Для других факторов риска (отягощенная.наследственность, ожирение) статистически значимых различий по частоте встречаемости генотипов полиморфного маркера гена eNOS получено не было (р 0,05).
Огромную роль в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний играют изменения гемодинамики и кровяного давления. В связи с этим значительный интерес представляет изучение ассоциации между развитием сердечно -сосудистыхзаболеваниши вариантами генов, кодирующих белки и принимающих участие в регуляции кровяного; давления- и сосудистого тонуса [Kurtz Т., 1992]. В- первую очередь к таким: белкам-: можно- отнести белки; ренинангиотензиновош системы.. Ключевым; белком; данной; системы является; ангиотензинпревращающий фермент. В? гене. АИФ был выявлен? инсерционно-делеционныйг полиморфизм; связанный, с; инсерцией или делециейїАІиповторафазмером 287 п.н;.вшнтроне?16шена АПФ«[ІІіа . 1990]: Распределение частот генотипов I/D полиморфизма ; интроне: 16 гена; AGE представлены в таблице .№-23; ,
Как видно из: таблицы №!23, межгрупповых различийшо генотипам DD-.. JD). ГО в исследуемых группах; получено? не; было (р 0,05). При разделении; основной; группы на; подгруппы в? зависимости от. перенесенного? ИЩ были получены также статистически недостоверные различия.
При анализе ассоциаций полиморфного маркера гена АСЕ и факторов риска ИБС (курение, ожирение, отягощенная наследственность) мы не получили статистически достоверных значений (р 0,05). Таким образом, в исследуемых нами группах не было выявлено ассоциации гена АСЕ с развитием ИБС и факторами риска ИБС.
Гены-кандидаты белков свертывающей системы крови и анализ ассоциаций полиморфных вариантов с ИБС.
Нарушения функции системы гемостаза, ведущие к повышению внутрисосудистого свертывания крови и тробмообразованию, является одним из важнейших звеньев патогенеза ИБС. В связи с этим, особый интерес представляет изучение генов-кандидатов белков свертывающей системы крови.
В нашей работе исследовались следующие гены-кандидаты белков свертывающей системы крови: ген метилентетрагидрофолатредуктазы, (С-677-Т), гена фактора V (G-1691-А), гена коагуляционного фактора II (G-20210-А), гена ингибитора активатора плазминогена (PAI-1 5G/4G).
При определении частоты встречаемости полиморфных вариантов генов белков свертывающей системы крови в основной группе и контрольной группе были получены результаты, представленные в таблице №25.
Из нее следует, что генотип AG гена F5 встречался наиболее чаще в группе больных ИБС (3,3% в сравнении с 1,5% в контрольной группе, р=0,20), однако данный результат нельзя оценить как достоверный. Несколько выше оказался генотип MTHFR (ТТ) (9,2% в основной группе против 8,3% в контрольной группе; р=0,40).Однако результат является недостоверным. Генотип PAI (4GX5G) достоверно чаще встречался в группе больных ИБС (50,0%) у больных ИБС против 38,3% в контрольной группе, р=0,03). При этом относительный риск составил 1,21 [1,11-14,23].
