Содержание к диссертации
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 2
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава 1. Обзор литературы 11
Этиология и патогенез ПКР 11
Современные методы терапии ПКР 12
Противоопухолевая резистентность ор- 15 ганизма: роль иммунокомпетентных клеток и цитокинов
Особенности структурной организации и 17
механизм действия интерферонов
Интерфероны как лекарственные средст- 23 ва
Функциональная значимость респиратор- 25
ного взрыва нейтрофильных гранулоци-
тов
Глава 2. Объекты и методы исследования 29
Объект исследования 29
Методы исследования 29
Исследование состояния клеточного и 29 гуморального иммунитета
Хемилюминесцентный анализ функцио- 31 нальной активности нейтрофильных гра-нулоцитов и определение влияния различных доз ИФН-а2а на реактивность нейтрофилов крови
Определение сывороточного ИФН, и 33 уровня продукции спонтанного и стимулированного ИФН-а и ИФН-у мононук-леарами периферической крови
2.3.4. Статистические методы исследования 36
Глава 3. Состояние клеточного и гуморального им- 38
мунитета и особенности функциональной
активности иммунокомпетентных клеток у
больных ПКР
Динамика изменений параметров иммунно- 38 го статуса у больных ПКР до и после оперативного лечения
Динамика изменений функциональной ак- 43 тивности нейтрофильных гранулоцитов
крови больных ПКР до и после хирургического лечения
Особенности ИФН статуса больных ПКР 48 до и после хирургического лечения
Взаимосвязь параметров иммунного стату- 53 са и хемилюминесцентной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической
крови.
Глава 4. Клеточная чувствительность к интерферону у 62
больных почечноклеточным раком
4.1 Влияние реаферона in vitro на хемилюми- 62
несцентный ответ нейтрофильных грану
лоцитов обследуемых лиц
4.2. Изменение клеточной чувствительности к 72
реаферону после 1-го курса интерфероно-
терапии
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 90
ВЫВОДЫ 99
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 101
Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ: Широко известно, что иммунная сис
тема играет центральную роль в механизмах противоопухолевой защиты ор
ганизма [8,9]. Иммунокомпетентные клетки продуцируют ряд цитокинов, ко
торые являются регуляторами межклеточных взаимодействий [2,12,21,30,32].
Кроме того, некоторые популяции клеток иммунной системы способны к ци-
тотоксическому действию на опухолевые клетки [8,36,49,52,176]. Однако
снижение уровня функциональной активности иммунной системы, а также
особенности опухолевых клеток позволяют им не только преодолевать им
мунологический барьер, но и оказывать иммуносупрессивное воздействие на
организм, а в некоторых случаях использовать медиаторы иммунной системы
для собственной прогрессии. В таких случаях могут развиваться онкологиче
ские заболевания [10,19,25,162].
і Одной из актуальных проблем современной онкоурологии является
высокий уровень заболеваемости почечноклеточным раком (ПКР), на долю
которого приходится около 97% всех опухолей почек [29]. Ведущая роль в лечении ПКР, безусловно, принадлежит хирургическому методу [103,110,115,153,154]. Однако, более целесообразна комбинированная модель терапии, включающая в себя наряду с хирургическим лечением иммунотерапию препаратами интерферона, среди которых широкое распространение получил рекомбинантный интерферон-ос2а [74,142,43,147]. Данный препарат кроме противовирусного и антипролиферативного действия, обладает ярко выраженными иммуномодулирующими свойствами: стимулирует активность естественных киллерных клеток, процессы фагоцитоза и цитотоксичность нейтрофильных гранулоцитов [26,104,105,152,157]. В то же время необоснованное или несвоевременное применение препаратов интерферона может снизить эффективность терапии или даже оказать негативное воздействие на организм в целом [14,118].
Важную роль в механизмах противоопухолевой защиты играют ней-
* трофильные гранулоцити. Хорошо известно, что модуляторами функцио-
нальной активности нейтрофильных гранулоцитов являются не только вещества микробного происхождения, иммунные комплексы, медиаторы клеток крови и ткани, но и фармакологические препараты [1,59,69,70,73]. Кроме того, нейтрофильные гранулоциты характеризуются высокой мобилизационной активностью и способностью к быстрому и точному отражению изменений гомеостаза [34,36,60,61,78]. Это делает возможным оценить прямое и опосредованное действие фармакологических препаратов на функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов, что позволит определить чувствительность клеток к данному препарату и, в дальнейшем, судить об эффективности терапии.
Не подлежит сомнению, что изучение состояния иммунной системы, а также модуляции функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов интерфероном in vitro на фоне онкогенеза является одной из актуальных проблем современной биологии и медицины. Кроме того, изучая состояние иммунной системы и клеточную чувствительность к интерферону у больных ПКР, можно не только охарактеризовать патогенез ПКР, но и получить экспериментальное обоснование терапии данным препаратом, а также определить его оптимальную лечебную дозу и объективно оценивать эффективность интерферонотерапии.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ; Изучить фенотипические и функциональные особенности иммунокомпетентных клеток и клеточную чувствительность нейтрофильных гранулоцитов к интерферону in vitro у больных ПКР до и в динамике после хирургического лечения.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие ЗАДАЧИ:
1. Изучить особенности клеточного и гуморального иммунитета у
больных ПКР до хирургического вмешательства и через 14 дней после удаления опухоли.
2. Исследовать параметры спонтанной и зимозан-индуцированноЙ хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных ПКР в период до хирургического лечения и в динамике после оперативного вмешательства.
Оценить показатели сывороточного ИФН, а также уровни спонтанной и стимулированной выработки ИНФ-а и ИФН-у мононуклеарами периферической крови больных ПКР до и через 14 дней после оперативного лечения.
Изучить влияние различных доз рекомбинантного интерферона-сс2а in vitro на функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов крови больных ПКР в период до и в динамике после хирургического лечения.
Определить хемилюминесцентную активность нейтрофильных гранулоцитов при воздействии различных доз рекомбинантного интерферо-на-а2а in vitro после 1-го курса реаферонотерапии у больных ПКР.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА: Впервые на современном методическом уров
не проведено комплексное исследование клеточного и гуморального имму
нитета, а также функционального состояния иммунокомпетентных клеток у
больных ПКР.
* Впервые выявлены особенности ИФН статуса у больных ПКР в период
до и после оперативного вмешательства. Результаты проведенного исследо-вания показали повышенный уровень общего сывороточного ИФН на фоне сниженной продукции мононуклеарами периферической крови ИФН-а у больных ПКР как до, так и через 14 дней после хирургического лечения. При этом спонтанная продукция ИФН-у мононуклеарами периферической крови у больных ПКР до и после хирургического лечения значительно превышает контрольные показатели. В то время как стимулированная продукция ИФН этого типа снижена в дооперационном периоде и восстанавливается через 14 дней после хирургического лечения.
Впервые изучена функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов крови больных ПКР до и в динамике после хирургического лечения, что позволило обнаружить повышенный уровень кислородзависимого метаболизма и сниженные компенсаторные возможности данной клеточной популяции.
Впервые установлено, что клеточную чувствительность к препаратам интерферона in vitro можно определять с помощью хемилюминесцентного анализа функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов.
Определено оптимальное время для начала интерферонотерапии у больных ПКР - через 1,5 месяца после операции. Поскольку в этот период наиболее широк диапазон клеточной чувствительности к интерферону in vitro.
Доказано, что изменение параметров хемилюминесценции нейтрофи-лов крови в ответ на различные дозы реаферона in vitro носит индивидуальный характер.
Впервые установлено, что после 1-го курса интерферонотерапии клеточная чувствительность изменяется у 85% пациентов с ПКР, что указывает на необходимость оценки индивидуальной чувствительности не только до начала лечения, но и перед рециклом.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ: Проведенные исследования установили возможность с помощью хемилюминесцентного (ХЛ) анализа реактивности нейтрофильных гранулоцитов крови до начала интерферонотерапии определять индивидуальную чувствительность к препарату, а также осуществлять подбор оптимальной дозы. Это дает возможность корригировать дозу препарата в процессе интерферонотерапии, что позволит оптимизировать схему лечения и повысить клиническую эффективность иммунотерапии.
По результатам исследования получены 2 приоритетные справки на изобретения.
Результаты проведенных исследований внедрены в практическую работу Красноярского краевого онкологического центра, клиники ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, Красноярского краевого центра по профилактике и борьбе со СПИД и другими инфекционными заболеваниями.
Основные положения диссертации используются в учебном процессе на кафедре биохимии и физиологии человека и животных Красноярского го-
сударственного университета и кафедре клинической иммунологии Красноярской государственной медицинской академии.
Работа поддержана ККФН (конкурсный грант 1IF0164C, 2002-2003гг.).
ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:
Иммунные нарушения у больных ПКР характеризуются изменением фенотипического спектра лимфоцитов и параметров интерферонового статуса, а также изменением функциональной активности нейтрофильных грану-лоцитов периферической крови.
Хемилюминесцентный анализ реактивности нейтрофильных грану-лоцитов при воздействии реаферона in vitro позволяет объективно оценить индивидуальную клеточную чувствительность к данному препарату у больных ПКР.
После 1-го курса реаферонотерапии чувствительность нейтрофильных гранулоцитов больных ПКР к воздействию данного препарата in vitro изменяется в 85% случаев, что необходимо учитывать для повышения клинической эффективности иммунотерапии в каждом конкретном случае.
АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ: Основные положения доложены и обсуждены на международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Молодая наука — XXI веку» (Иваново, 2001), на V научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001» (Санкт-Петербург, 2001), на научно-практической конференции «Актуальные вопросы урологии» (Кемерово, 2002), на итоговой научно-практической конференции НИИ Медицинских проблем Севера СО РАМН «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» (Красноярск, 2002), на XI международном симпозиуме «Гомеостаз и экстремальные состояния организма» (Красноярск, 2003), на VII Всероссийском научном форуме с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2003), на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Метаболические механизмы иммунореактивности» (Красноярск, 2004), на III конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные
науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2004), на межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы онкорадиоло-гии» (Красноярск, 2004), на Объединенном иммунологическом форуме (III Съезд иммунологов России и VI Национальный конгресс РААКИ) (Екатеринбург, 2004), на заседании Красноярского регионального отделения РААКИ (Красноярск, 2004).
ПУБЛИКАЦИИ: Основные положения диссертации опубликованы в 23 печатных работах,
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ: Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, 2 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 8 рисунками, список литературы включает 176 библиографических изданий (97 отечественных и 89 иностранных).
