Введение к работе
Актуальность проблемы. Арсенал современных химиотерапев-тических средств позволяет получитьремиссии в подавляющем большинстве случаев острых лейкозов (ОЛ) у детей. Опираясь на клинико-гематологическое оформление заболевания и особенности иммунопатологических вариантов и субвариантов ОЛ, гематологи имеют возможность выбрать наиболее рациональные программы лечения, добиваясь полноты клинико-гематологических ремиссий в 90-95Н случаев при острой лимфобластном лейкозе /stockley R. (1983), Chessells J. (1987),Румянцев А.Г.(1983),
Маякова С.А. (1986) и др. /. Показана возможность полного излечения отдельных больных острыми лейкозами.
Традиционные иммуноцитологические методы позволяют с этих позиций выделить 3 варианта острого лимфобластного лейкоза (ОМ) в зависимости от Т- и В-принадлежноста клеточного субстрата: Т-ОЛЛ, В-ОЛЛ, ниТ ниВ-ОЛЛ. С помощью моноклональных антител (МКА)и ксеногеннах антисывороток (НА) / Foon к.
(1982), , Барышников А.В.(1984)/ выделены субварианты ОЛЛ: 0-ОЛЛ, 1а-0ЛЛ, сОЛЛ, пре-В-ОЛЛ, субварианты Т-ОЛЛ, которые отличаются по клиническому оформлению заболевания и гистогенети-ческой зрелости клеточного фенотипа / Spior С. (1984), Барышников А.Ю. (1987)/. Однако и результаты современного им-мунофенотипирования не могут полностью удовлетворить гематологов при оценке каждого отдельного случая для выбора наиболее рациональной и патогенетически оправданной терапии.
Не вызывает сомнения, что клинические параметры и прогноз заболевания непосредственно зависят от биологических свойств опухолевых клеток, хотя многочисленные исследования ультратонкого строения злокачественных клеток практически не выявили специфических особенностей, характерных только для опухолевых клеток / Поликар,Бесси (1970),Науменко О.И.(1980), Бутенко З.А.(1984),Добрева А.(1987), Engene т. (1980) /.
В последние годы перспективным в качестве определения степени злокачественности клеточного субстрата при солидных опухолях зарекомендовал себя метод выявления активности яд-рышковых организаторов (ЯОР) с помощью реакции серебрения/ Egan м. (1988), Crocker J. (1987, 1988), Ыамаев Н.НДІ980, 1984,1988), Погорелов В.М. (1986) /.
Ш считали актуальным провести комплексное иммуноцитоло-гическое исследование- субстрата опухоли при ОЛЛ у детей, с
акцентом на анализ состояния ядрышкового аппарата в лейкозных клетках, как ключевого звена в определении рибосомного синтеза. В комплексе цитологических методов наибольшее внимание было уделено алектронно-микроскопическим исследованиям с использованием полуколичественной ыорфометрии и определению активности ЯОР с помощью метода импрегнации серебром.
Полное комплексное изучение клеток опухолевого субстрата и связи его биологических свойств с клиническими параметрами заболевания, дсшто позволить точно диагностировать клеточные варианты заболевания, более аргументировано прогнозировать течение острых лейкозов и индивидуализировать терапию.
Рель исследования, изучить особенности субмикроскопического строения клеточного субстрата опухоли различных иммунопатологических вариантов ОМ у детей и оценить диагностические возможности анализа ультраструктуры лейкозных клеток и активности ядрышковых организаторов при острых лейкозах у детей.
Задачи исследования.
-
Выявить особенности ультратонкого строения блестках клеток костного мозга и периферической крови у детей с различными ишыуноцитологическшш субвариантами ОЛЛ, провести морфометрическое исследование субстрата опухоли на ультраструктурном уровне.
-
Провести анализ активности рибосомного синтеза властных клеток при различных вариантах ОД у детей с помощью реакции серебрения ядршшюбразующпх районов (ЯОР).
-
Проанализировать данные имцунофеноташирования с помощью ЫКА и КА в связи с особенностями ультратонкого строения лейкозных клеток и морфофункциовальными особенностями ядрыш-кового аппарата бластшх клеток при ОД у детей.
-
Оценить диагностическую значимость ультратонкого строения лейкозных клеток а активности рибосомного синтеза в них при ОЛ у детей.
Положения, выдвигаемые на защиту;
-
Исследование ультраструктурі субстрата опухоли -необходимый метод для постанавки диагноза редко встречающихся форм острых лейкозов ( плазмоклеточный вариант Б-ОЛЛ).
-
Экспрессия сОДД-антигена на поверхности лейкозных клеток сочетается с особенностями их субмзкроскопического
строения при ОДІ у детей, что имеет диагностическую важность.
3. Активность ядрышковых организаторов - новей индикатор клеточной активности и независимый прогностический признак при ОЛ у детей.
Научная новизна. В работе впервые в отечественной практике дана комплексная оценка ультраструктурных особенностей клеток опухоли при различных иммунопатологических субвариантах ОЛЛ, выделенных с помощью ША и КА. Впервые дана характеристика ЯОР в пуле костномозговых п циркулирующих клеток при 01 у детей с. различными иммунопатологическими вариантами и субвариантами заболевания.
Детально охарактеризован сОЛЛ, включающий более 50% случаев ОЛЛ у детей и являющийся клинически одним из самых благоприятных субвариантов. Шявлены ультраструктурные маркеры лейкозных клеток, зкспрессирующих сОЛЛ-антиген, и нарушения клеточного метаболизма при этом субварианте заболевания.
Научно-практическая ценность. Результаты проведенного исследования имеют научное и практическое значение. Выявление биологических особенностей клеточного состава опухоли внесли свой вклад в понимание оценок полнморфности течения и прогноза острых лейкозов у детей.
Установлено, что группа оптимального прогноза ОЛЛ у де
тей представлена случаями сОЛЛ, в субстрате опухоли которых
более 35 % лейкозных клеток костного мозга содержат гигант
ские вторичные фагосомы и более 20% клеток содержат крупно- t
гранулярную ІШК-реакпию. В циркуляции в этих случаях выяв
ляется более 20% зрелых Т-лнмфоцитов с фенотипом Et НЭ*.
Установлено, что низкие показатели активности ЯОР, сравнимые с показателями нормальных лимфоцитов, являются независимым фактором благоприятного прогноза заболевания. Гипергранулярный характер отложения продукта реакции серебрения в более 10% клеток крупного размера, напротив могно считать фактором неблагоприятного прогноза.
Показана диагностическая значимость исследования суб- ' микроскопического строения лейкозных клеток опухоли при постановке диагноза различных клеточных вариантов ОЛЛ у детей, что влечет за собой индивидуализацию в лечении больных.
Внедрение в практику. Комплексная, не применявшаяся ранее цитологическая оценка субстрата опухоли и пула лимфоид-
ных клеток периферической крови здоровых детей внедрена в практику при анализе диагностических пункций в гематологическом отделении №14 и в отделении 1Р8 для детей раннего возраста ДКБ Ш- г. Москвы..
Апробация работы. Основные положения диссертации обсуждались на Всесоюзной научной конференции " Актуальные вопросы диагностики заболеваний системы крови" (Сухуми,1988), на Всесоюзном совещании "Клеточные и молекулярные механизмы канцерогенеза и антиканцерогенеза" (Ленинград,1988), на П Всесоюзной конференции по детской гематологии (Душанбе,1988), на конференции "Актуальные вопросы гематологии и трансфузиолопш в педиатрии" (Кемерово,1989).
Публикация результатов исследования; По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 180 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, изложения результатов Собственных исследований, обсуждения подученных данных, выводов и практических рекомендаций. Библиографический указатель включает 52 отечественных и 152 зарубежных источников литературы. Диссертация иллюстрирована 5 0 элежронограммами, і о рисунками, 15 таблицами.
